细菌的接种与培养方法操作规程

细菌的接种与培养方法操作规程

一、细菌的接种

根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。

l、平板画线分离法

（1）、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板l/5处密集涂布，然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。

（2）、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5)，再在二、三区依次连续画线，每画线一区均将接种针灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1～2次。以获得单个菌落。

2、斜面接种法

该法主要用于单个菌落的纯培养。用灭菌接种针取菌少许，从培养基斜面底部向上划一直线，然后从底部向上作连续曲线画线。一直画到斜面顶端。

3、液体接种法

多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻

研磨，使细菌混合于液体中。

4、穿刺接种法

主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。用接种针取菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。

5、倾注平板法

临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。

6、涂布接种法

常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的棉签反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。

二、细菌培养方法

根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。

1、需氧培养法

本法是临床细菌室常用的培养方法，即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。置于35℃温箱中孵育18～24小时。

2、二氧化碳培养法

本室用CO2孵箱将已接种好的培养基置于CO2孵箱内培养。

三、分离及纯化法

3.1、分离是指从原材料或多种细菌的混合培养物中将各种细菌彼此独立地分离开，以得到纯的单一菌株，技术步骤如下：

作纯培养分离时，一般只用一只完整的琼脂平板。涂划多采用分区划线法，在一只平板中可划3～5个区。划法有两种：

3.1.1、从临床标本分离细菌所含菌数相对较少时，可用接种环取标本涂布在平板一角边缘，然后从此区开始划线至1／3平板，为第一区，再在2、3区依次划线，每划完一个区域均将接种环灭菌一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线均接触上一区域的接种线1～2次，使菌量逐渐减少以获得单个菌落。

3.1.2、快速划线分离法：采用快速划线使一接种环标本能分离出单个菌落，这与标本的菌量及操作者的技能有很大关系。

3.2、纯化是指欲获得大量纯培养物的方法，所用平板大小可根据需要的菌量而定。方法是将一单个菌落或将相同的菌落作大量密集涂划于平板上而获得大量纯的培养物。