第五章种子制备min改后优秀课件

母斜面
孢子悬浮液
种子罐
子斜面 孢子悬浮液
霉菌孢子的制备
1.培养基与培养条件
（1）多数采用大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品，来 源丰富 ，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大 。制备大 （小）米培养基，严格控制含水量，使其不粘不散。
（2）25℃～28℃，培养时间随菌种而不同，一般为4～
14百度文库。为了使通气均匀，要注意翻动。
（1）传统敞口上面发酵：top fermentations ‘middle skimmings’ ，treatments （2）锥形罐发酵 酵母活力不高，罐底环境，低温，厌氧保存 Sterols 甾醇 与氧 ，麦汁通风，酵母通风 （3）Active dry yeast (ADY) ,
2.面包酵母
Reed and Nagodawithana (1991b)，eight stages, first three being aseptic，the last three stages are fed-batch.
第五章种子制备min改后
概念
种子制备就是将保存在沙土管、冷冻干燥 管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜 面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐 级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种 的过程。这些纯种培养物称为种子。
第一节 概述
一、种子扩大培养的目的
1.为每次发酵罐的投料提供一定数量代谢旺 盛的种子。
放线菌孢子的制备
1.培养基与培养条件
（1）琼脂，和其他营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋 白胨、牛肉膏和一些无机盐等，碳源和氮源不要 太丰富，碳氮比例大一些为好，干燥和限制营养 可直接或间接诱导孢子的形成。
（2）多为28℃，部分为30℃或37℃。一般在4～7d， 也有的为14d左右。
2.流程
砂土管 冷冻管
孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月
二、生产车间阶段
1、培养物的选择原则
最终一般都是获得一定数量的菌丝体。
菌丝体比孢子要有利： (1)缩短发酵时间 (2)有利于获得好的发酵结果
2、培养基选择的原则
目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基 的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和 菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。
第二节 工业发酵种子的制备
一、实验室种子制备 二、生产车间种子制备
一、实验室种子制备
1. 培养物选择的原则 目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特 点最终的培养物可分为两类：
1.不产孢子和芽胞的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体
2.产孢子的 ——获得一定数量和质量的孢子 ——获得一定数量和质量的菌体
细菌和酵母 保藏斜面 → 活化斜面
产孢子 保藏 → 母斜面 → 子斜面
目的：使菌种的传代次数尽可能的少。
孢子培养过程
母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去除变异 株。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。
子瓶: 大量繁殖，得到大量孢子。 接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落。
②接种时密一点，得到大量的孢子。
2.流程
菌悬液
大（小）米培养基
“亲米”
砂土管 冷冻管
琼脂斜面
大（小）米培养基 孢子悬浮液
“生产米” 种子罐
细菌孢子的制备
1.培养基与培养条件
（1）采用碳源限量而氮源丰富的配方。牛肉膏、蛋 白胨是常用的有机氮源。
（2）细菌培养温度大多数为37℃，少数为28℃。 细菌菌体培养时间一般为1～2d，产芽孢的细菌则 需培养5～10d。
2.流程
冷冻管 砂土管
斜面F1（第1代） 斜面F2（第2代）
Fn（n代 )
种子罐
2、培养基选择的原则
培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢 子培养基应该是有利于孢子的生长。
在原料方面，实验室种子培养阶段，规模 一般比较小，因此为了保证培养基的质量， 培养基的原料一般都比较精细。
3、起始接种物的传代问题
实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见
设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这 些培养过程称为实验室阶段的种子培养。
生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车
间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。
酵母菌种子的制备
1. 啤酒 crop ，pitch
细菌种子制备-丙酮丁醇梭菌种子制备
棒酸clavulanic acid生产菌Streptomyces clauuligerus
（棒酸链霉菌）种子制备
菌 丝 体 种 子 制 备
固化培养基（琼脂培养基）产孢
固体培养基产孢
• 谷类作物
大麦，玉米，大米，小米，麦麸等 比表面积大，孢子量多，湿度控制
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2.摇瓶菌丝进罐法
① 将固体培养基上繁殖的孢子接入摇瓶液体培养 基中，使其生长繁殖成菌丝，再将摇瓶菌丝接 入种子罐扩大培养；
② 优点： 节省砂土管或冷冻管的用量，缩短菌 种在种子罐内的生长时间。
③ 缺点：菌丝不易保存，批次更换频繁，批与批 之间的种子质量有差异，容易造成生产上的波 动；由于菌丝制备工艺时间长，增加了杂菌污 染的机会。
持续、稳定、高产。
生产菌种质量的检测标准
1.无菌试验及显微镜镜检观察有无杂菌 2.生化测定。糖、氮、pH、菌体浓度等代谢指
标是否合格。 3.菌丝形态，菌丝浓度，培养液外观（色泽、
气味、浑浊度、 颗粒等）。 4.产物指标，酶活等。
三、种子扩大培养的工艺流程
沙土孢子（冷冻干燥孢子）→斜面孢子→摇瓶液体培养（茄子瓶斜面培养或固 体培养基培养）→种子罐培养→发酵罐发酵
金霉素链霉菌种子制备
浸没培养产孢
沙
No
加 霉
素
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种 子 制
备
四、种子扩大培养的方法
1.孢子进罐法：
以孢子形式的种子直接进罐的方法 – 先在固体培养基上生长繁殖成大量孢子，将孢
子直接接入种子罐扩大培养。 – 优点：一次可以制备较大量的孢子，易于保存。
既可以节省大量的人力、物力和时间，又可减 少杂菌污染的机会。 – 缺点：砂土管或冷冻管的用量大。
2.缩短发酵时间，提高发酵罐利用率，同时 也减少染菌机会
二、优质种子必须具备的条件
①菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速 生长，迟缓期短；
②生理性状稳定，以得到稳定的菌体生长过程； ③具有适宜的菌体总量及浓度，满足大容量发酵的
要求； ④无杂菌污染， ⑤保持稳定的生产能力，使最终产物的生物合成量