《动物病毒学实验》课件：实验一 病毒在鸡胚中的培养
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2.在气室接近胚体处用碘酊和酒精依次消毒
3.用钢锥穿一小孔（右图哪种接种方式较好？）
4.将注射器针头经小孔沿卵长轴方向插入0.51.0cm，注入0.1-0.2ml接种物（插入部位的选择，
胚体、对面还是两侧？如果注射器打不起去说明什么？）
5.用石蜡封孔，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并 检卵一次，24h内死亡者废弃
4.用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔 垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。
5.用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育， 每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二：
1.2.同方法一
3. 将卵横放在卵座上，胚胎位置 向下。在卵长径的1/2处用碘 酊和酒精消毒。
4. 用钢锥打一小孔，将针头刺入约 1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml
动物病毒学实验
病毒学实验要求
➢ 做好生物防护
1. 白大褂+手套+口罩 2. 所有实验废弃物集中处理，不能随意丢弃
➢ 无菌操作
1. 实验过程尽量不要说话，以免唾液污染实验材料 2. 酒精灯使用：长时间不使用请熄灭酒精灯，长头发女生
或男生请扎辫子
实验一 鸡胚接种
病毒培养的宿主系统： ✓ 本动物 ✓ 实验动物：家兔、小
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
六、孵育
➢温度：37.5-38.5℃ ➢相对湿度：50%-60% ➢新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后 ➢翻卵：从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
七、检卵
➢自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。 ➢孵育4-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及
发育情况。
✓ 未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不 见血管和鸡胚痕迹
（一）优点
➢组织分化程度低，病毒易于增殖 ➢可选择不同的日龄和接种途径 ➢感染病毒的组织和液体中含大量病毒 ➢容易采集和处理 ➢来源充足 ➢设备和操作简便易行
（二）缺点
➢胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊
髓炎病毒 ➢母源抗体 ➢许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针
十、接种途径
方法二：（要造人工气室）
1.在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部 位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约34mm的烤焦圈。
2.用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵 壳，造成卵窗。
3.在气室中央钻一小孔。
4.用针尖挑破卵窗中心的壳膜， 切勿损伤其下的绒毛尿囊 膜，滴加生理盐水于刺破 处。
5.用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成 气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而 形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐 水迅速渗入
✓ 活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影， 较 大 鸡 胚 还 可 见 到 胚 动 ， 但 孵 育 14 、 15天以后胚动不明显，甚至无胚动。
✓ 死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。
八、接种前处理
➢用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室 和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。
➢对鸡胚进行消毒。
九、鸡胚用于病毒培养的优缺点
白鼠、大白鼠、豚鼠 ✓ 鸡胚 ✓ 组织细胞
✓ 怎么辨别公鸡母鸡？ ✓ 什么是鸡胚？（受精 还是未受精） ✓ 鸡胚如何生产？ ✓ 如何判断鸡胚是活的？
是否有血丝？
一、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易 于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的 组织和液体中含大量病毒。
二、实验目的
6.用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
7.用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中， 周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用 石蜡密封。
8.胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病
毒、新城疫病毒的分离和增殖。
1.选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死 胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料 1. 绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2. 尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 3. 卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4. 羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。
➢尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透 明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液 中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13 天后，尿囊液开始变混浊。
➢羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水，胎体浸泡于其中 ➢卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 ➢卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
四、材料
1. 鸡胚 10日龄
2. 病毒 鸡新城疫病毒（NHale Waihona Puke BaiduV）
3. 酒精棉球、碘酊棉球
4. 照蛋灯
5. 打孔器
6. 石蜡
7. 注射器
8. 蛋座
产畸形蛋
小肠出血
腺胃乳头出血 十二指肠出血性溃疡
五、受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
5. 用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内 继续孵育，24h内死亡者废弃
（二）绒毛尿囊膜接种 主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。
方法一： 1. 取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒 2. 在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口 3. 用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜 4. 滴入接种物 5. 用胶布或透明胶纸封闭切口
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚 接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜 ➢气室 ➢绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 ➢羊膜与羊膜腔 ➢卵黄 ➢卵白
➢卵壳 上有细孔，进行气体交换 ➢壳膜 使气体分子和液体分子在内外两方
面进行交换。
➢气室 呼吸和调节压力 ➢绒毛尿囊膜 起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换
1. 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种 卵黄囊接种 眼球接种 羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒 脑内接种 狂犬病毒 静脉接种 蓝舌病毒
（一）卵黄囊接种法
主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次 氏体等的分离和增殖。 方法一： 1.取6-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和
胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大头向上) 2.用碘酊和酒精消毒气室端 3.用钢锥在气室中央锥一小孔
3.用钢锥穿一小孔（右图哪种接种方式较好？）
4.将注射器针头经小孔沿卵长轴方向插入0.51.0cm，注入0.1-0.2ml接种物（插入部位的选择，
胚体、对面还是两侧？如果注射器打不起去说明什么？）
5.用石蜡封孔，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并 检卵一次，24h内死亡者废弃
4.用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔 垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。
5.用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育， 每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二：
1.2.同方法一
3. 将卵横放在卵座上，胚胎位置 向下。在卵长径的1/2处用碘 酊和酒精消毒。
4. 用钢锥打一小孔，将针头刺入约 1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml
动物病毒学实验
病毒学实验要求
➢ 做好生物防护
1. 白大褂+手套+口罩 2. 所有实验废弃物集中处理，不能随意丢弃
➢ 无菌操作
1. 实验过程尽量不要说话，以免唾液污染实验材料 2. 酒精灯使用：长时间不使用请熄灭酒精灯，长头发女生
或男生请扎辫子
实验一 鸡胚接种
病毒培养的宿主系统： ✓ 本动物 ✓ 实验动物：家兔、小
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
六、孵育
➢温度：37.5-38.5℃ ➢相对湿度：50%-60% ➢新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后 ➢翻卵：从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
七、检卵
➢自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。 ➢孵育4-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及
发育情况。
✓ 未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不 见血管和鸡胚痕迹
（一）优点
➢组织分化程度低，病毒易于增殖 ➢可选择不同的日龄和接种途径 ➢感染病毒的组织和液体中含大量病毒 ➢容易采集和处理 ➢来源充足 ➢设备和操作简便易行
（二）缺点
➢胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊
髓炎病毒 ➢母源抗体 ➢许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针
十、接种途径
方法二：（要造人工气室）
1.在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部 位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约34mm的烤焦圈。
2.用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵 壳，造成卵窗。
3.在气室中央钻一小孔。
4.用针尖挑破卵窗中心的壳膜， 切勿损伤其下的绒毛尿囊 膜，滴加生理盐水于刺破 处。
5.用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成 气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而 形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐 水迅速渗入
✓ 活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影， 较 大 鸡 胚 还 可 见 到 胚 动 ， 但 孵 育 14 、 15天以后胚动不明显，甚至无胚动。
✓ 死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。
八、接种前处理
➢用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室 和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。
➢对鸡胚进行消毒。
九、鸡胚用于病毒培养的优缺点
白鼠、大白鼠、豚鼠 ✓ 鸡胚 ✓ 组织细胞
✓ 怎么辨别公鸡母鸡？ ✓ 什么是鸡胚？（受精 还是未受精） ✓ 鸡胚如何生产？ ✓ 如何判断鸡胚是活的？
是否有血丝？
一、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易 于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的 组织和液体中含大量病毒。
二、实验目的
6.用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
7.用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中， 周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用 石蜡密封。
8.胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病
毒、新城疫病毒的分离和增殖。
1.选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死 胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料 1. 绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2. 尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 3. 卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4. 羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。
➢尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透 明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液 中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13 天后，尿囊液开始变混浊。
➢羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水，胎体浸泡于其中 ➢卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 ➢卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
四、材料
1. 鸡胚 10日龄
2. 病毒 鸡新城疫病毒（NHale Waihona Puke BaiduV）
3. 酒精棉球、碘酊棉球
4. 照蛋灯
5. 打孔器
6. 石蜡
7. 注射器
8. 蛋座
产畸形蛋
小肠出血
腺胃乳头出血 十二指肠出血性溃疡
五、受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
5. 用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内 继续孵育，24h内死亡者废弃
（二）绒毛尿囊膜接种 主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。
方法一： 1. 取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒 2. 在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口 3. 用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜 4. 滴入接种物 5. 用胶布或透明胶纸封闭切口
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚 接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜 ➢气室 ➢绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 ➢羊膜与羊膜腔 ➢卵黄 ➢卵白
➢卵壳 上有细孔，进行气体交换 ➢壳膜 使气体分子和液体分子在内外两方
面进行交换。
➢气室 呼吸和调节压力 ➢绒毛尿囊膜 起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换
1. 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种 卵黄囊接种 眼球接种 羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒 脑内接种 狂犬病毒 静脉接种 蓝舌病毒
（一）卵黄囊接种法
主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次 氏体等的分离和增殖。 方法一： 1.取6-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和
胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大头向上) 2.用碘酊和酒精消毒气室端 3.用钢锥在气室中央锥一小孔