水稻愈伤组织的诱导实验报告
植物愈伤组织诱导实验
实验一植物愈伤组织诱导实验一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理。
2、培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
超净工作台原理：本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速）→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境三、仪器试剂培养皿及培养架、光照培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、解剖刀、弯头镊子、剪子、100ml烧杯、培养皿（或不锈钢浅盘）、封口膜、棉线、橡皮筋、次氯酸钠（或HgCl2）、MS 培养基全部试剂、植物激素及生长调节物质、无水乙醇、工业酒精、胡萝卜四、实验步骤（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用自来水冲洗后,用酒精棉擦拭欲取材部位表面, 或于70%酒精中浸沾数秒钟。
（3）将材料放入已灭菌的100ml烧杯（或试剂瓶）中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散，以绿豆为材料时，将绿豆纵切或横切，去皮后分别接种。
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究
- 1 - 水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究 以《水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究》为标题，本文旨在展示水稻愈伤组织液体增殖技术在其他作物上的可行性。随着日益增长的消费需求，农业技术的研发和进步已成为现今一个不容忽视的话题。水稻作为世界上最古老的粮食作物之一，其营养丰富，在全球的消费中占据重要的地位。在过去几十年里，水稻品种的遗传改良已经取得了巨大成功，使水稻成为全球粮食种植最受欢迎的作物之一。 但是，现有的水稻品种仍然受到传统育种技术的限制，因此，研究者们开始寻求新的技术来改善水稻的产量和质量。其中最重要的技术之一就是水稻愈伤组织液体增殖技术，它可以大大提高水稻的发芽率，更快地产生株系和新品种，从而更有效地满足现代人们的消费需求。 在本文中，我们将介绍水稻愈伤组织液体增殖技术的过程和方法，并详细介绍它在水稻发芽率，育种和遗传改良中的作用。首先，我们将简要介绍水稻愈伤组织液体增殖技术的基本原理，以及它在产量和品质的改善方面的价值。其次，我们将对水稻愈伤组织液体增殖育种技术的实验和应用进行深入的研究和分析，并详细描述了这项技术的实际效果。最后，本文将考虑水稻愈伤组织液体增殖技术在未来水稻种植中的可能性和潜力，以满足日益增长的消费需求。 总之，本文主要介绍了水稻愈伤组织液体增殖技术的基本原理，并介绍了它在水稻育种和遗传改良中的有效性和实际应用。未来的研究将主要集中在评估水稻愈伤组织液体增殖技术在种植技术中的可 - 2 -
行性，以及它是否能够满足消费者对营养价值和品质的不断提高的要求。 随着科技的进步，水稻愈伤组织液体增殖技术已经取得了令人瞩目的成果。它既可以改善水稻育种和遗传改良，提高水稻发芽率，又能够促进水稻种植的可行性，从而更有效地满足生产者和消费者的需求。希望本文能够为水稻愈伤组织液体增殖技术的研究和应用提供一些有益的指导，并促进水稻种子品质和产量的提高，为我们的消费者提供更高质量的口感体验。
叠氮化钠及甲氧咪草烟对水稻幼胚愈伤组织成活、丛生芽分化及生根的影响
叠氮化钠及甲氧咪草烟对水稻幼胚愈伤组织成活、丛生芽分化及生根的影响目录一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21.1 研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31.2 研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42.1 材料来源与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 2.2 实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62.3 主要试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7三、叠氮化钠对水稻幼胚愈伤组织的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．93.1 叠氮化钠处理对愈伤组织成活率的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10 3.2 叠氮化钠处理对愈伤组织生长速度的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．113.3 叠氮化钠处理对愈伤组织生理特性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．12四、甲氧咪草烟对水稻幼胚愈伤组织的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．124.1 甲氧咪草烟处理对愈伤组织成活率的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．13 4.2 甲氧咪草烟处理对愈伤组织生长速度的影响．．．．．．．．．．．．．．．．144.3 甲氧咪草烟处理对愈伤组织生理特性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．15五、叠氮化钠与甲氧咪草烟的交互作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．165.1 叠氮化钠与甲氧咪草烟联合处理对愈伤组织成活率的影响．．．．175.2 叠氮化钠与甲氧咪草烟联合处理对愈伤组织生长速度的影响．．185.3 叠氮化钠与甲氧咪草烟联合处理对愈伤组织生理特性的影响．．19六、结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．206.1 叠氮化钠对愈伤组织的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．216.2 甲氧咪草烟对愈伤组织的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．226.3 叠氮化钠与甲氧咪草烟的交互作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22七、讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．237.1 叠氮化钠的作用机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．257.2 甲氧咪草烟的作用机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．267.3 叠氮化钠与甲氧咪草烟的交互作用机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26八、结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．288.1 主要研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．288.2 研究不足与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29一、内容综述在植物生物技术领域，研究植物组织培养技术是实现植物遗传改良和快速繁殖的重要手段。
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究水稻作为全球最重要的粮食作物之一，在提高粮食产量和提高粮食质量等方面发挥着重要作用。
其中，水稻愈伤组织增殖培养技术是提高水稻品质和产量的重要手段。
本文旨在以水稻愈伤组织液体增殖培养技术为研究对象，探讨其发展状况和应用前景。
水稻愈伤组织增殖培养技术是一种细胞分子生物学方法，是农艺学中植物传粉、植物驯化、植物色素调控、植物基因转移、植物基因组学等方面的重要技术。
水稻愈伤组织增殖培养技术将细胞分离、孢子分级、水稻愈伤组织液体增殖等整合到一起，可以为水稻的基因育种提供可靠的技术支持，实现植物的繁殖效果。
水稻愈伤组织增殖培养技术是基于水稻新品种建立过程中愈伤组织增殖培养技术发展出来的，在水稻品种建设中发挥着不可替代的作用。
水稻愈伤组织增殖培养技术可以有效地在短时间内增加水稻植株的多样性，保证新基因的保留，并且可以有效地实现水稻植株的生长，改善品质和产量等特性。
除此之外，水稻愈伤组织增殖培养技术还可以用于研究与水稻用途有关的诸如产量和品质、耐季节性和病抗性等性状。
水稻愈伤组织增殖培养技术可以有效实现基因突变，还可以用于研究特定基因在植物发育、形态、营养及生理作用上的影响，为研究调控水稻心叶色素的机理提供有力的技术平台。
水稻愈伤组织增殖培养技术的发展为水稻品种改良和新品种选育提供了可靠的技术支撑，有助于改善水稻的品质和效率，提高生产效率和粮食质量，有利于改善水稻的稳定性和耐旱性，促进水稻高产栽培。
今天，随着转基因技术等新技术的出现，水稻愈伤组织增殖培养技术可以与其他技术相结合，形成更加完善的水稻品种建设新体系，更加有效的推动水稻品种改良。
比如，水稻愈伤组织增殖培养技术可以与微小叶色素叶弁转化技术相结合，实现调控水稻叶色素含量，改善水稻品质，提高水稻产量。
总之，水稻愈伤组织增殖培养技术是水稻品种改良和新品种选育的重要技术，为优化水稻品种构建贡献了重要力量，在今后水稻育种工作中具有重要作用。
水稻组培及农杆菌侵染的具体注意事项
水稻愈伤组织培养与植株再生(2) (2007-05-14 15:02:48)转载▼二、水稻愈伤组织培养（一）实验室的建立组织培养的实验室建立可以按照以下的草图进行规划，图例可以按照表1：图2.植物生物技术实验室平面设计图4.水稻愈伤组织的分化挑选生长良好、结构致密的愈伤组织，先转到分化培养基上，26℃±2℃黑暗条件下培养2周。
然后转至26℃±2℃光照条件下培养，光强为400μmol/m2·s,每日光照16h，培养30～50 d，诱导不定芽，将产生绿芽的组织转至以1/2MS为基本培养基的无激素的壮苗培养基中，26℃±2℃光照条件下培养，使其生根长成完整植株[12]。
三、讨论水稻胚性愈伤的诱导是水稻遗传转化中的重要环节，胚性愈伤的状态直接影响着遗传转化频率，所以提高良好生长状态的胚性愈伤的数量是提高转化频率的关键[13]。
为了提高水稻愈伤的出苗率，有采用干燥处理，辐射处理，添加铜[14-15]、银元素，添加脯氨酸，添加MET(多效唑)和添加活性碳等方法。
[16]理论上愈伤组织是可以无限制继代，但愈伤组织继代次数增加，形态发生能力逐渐丧失。
原因是遗传因素即继代培养中通常出现染色体紊乱。
水稻成熟胚愈伤组织的诱导和再生是组织培养中的两个关键问题，它们涉及到外植体的脱分化过程和愈伤组织的再分化过程[17]。
影响水稻胚性愈伤组织形成和植株再生能力的因素包括基因型、外源激素、渗透压、外植体来源、固化剂、培养基其它成份以及温度、光周期和继代时间等多个方面，其中材料的基因型和外源激素的种类、浓度和配比是最主要的因素[18]。
植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。
光照是离体培养中比较复杂的调节因子,光照时间,强度以及光质对器官分化均有影响。
因为光照容易引起愈伤组织的老化坏死,所以对后续实验有很大的影响[19]。
认为除选择了合适的培养条件外，也与我们使用的是无菌苗作材料很有关系。
水稻遗传转化实验报告
一、实验目的本实验旨在探究农杆菌介导法在水稻遗传转化中的应用效果，通过构建基因表达载体，将目的基因导入水稻细胞中，从而实现基因功能的验证和水稻性状的改良。
二、实验材料1. 实验材料：水稻品种为南桂占，农杆菌菌株为Agrobacterium tumefaciens EHA105，目的基因（GFP基因）载体为pBI121。
2. 试剂：农杆菌转化培养基、抗生素、潮霉素、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒等。
3. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。
三、实验方法1. 目的基因的克隆：将GFP基因从质粒载体pBI121中切出，插入到农杆菌载体pBin19中，构建重组载体pBin19-GFP。
2. 农杆菌的活化：将农杆菌菌株EHA105接种于YEB培养基中，在28℃条件下培养过夜。
3. 农杆菌转化：将活化后的农杆菌与重组载体pBin19-GFP混合，用涂布法将混合液涂布于农杆菌转化培养基上，28℃条件下培养2-3天。
4. 水稻叶片的消毒：将水稻叶片用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水冲洗3次，然后用无菌滤纸吸干水分。
5. 农杆菌侵染：将农杆菌转化菌液滴加到水稻叶片上，用无菌滤纸轻轻擦拭叶片，使农杆菌均匀分布在叶片表面。
6. 愈伤组织诱导：将侵染后的水稻叶片放入农杆菌转化培养基中，28℃条件下培养5-7天，诱导愈伤组织形成。
7. 抗性筛选：将愈伤组织转入含有潮霉素的筛选培养基中，28℃条件下培养3-4周，筛选出转化成功的愈伤组织。
8. 转化植株再生：将筛选出的转化愈伤组织转入再生培养基中，28℃条件下培养2-3周，诱导再生植株。
9. 抗性鉴定：将再生植株种植于田间，对植株进行潮霉素筛选，筛选出抗潮霉素植株。
10. PCR检测：对筛选出的抗潮霉素植株进行PCR检测，验证GFP基因是否成功导入水稻基因组。
四、实验结果1. 目的基因的克隆：成功构建了重组载体pBin19-GFP。
2. 农杆菌转化：农杆菌转化效率较高，大部分叶片出现愈伤组织。
水稻成熟胚的组织培养
水稻成熟胚的组织培养
1 试验方法：
(1) 选取供试水稻品种中饱满成熟种子，将经手工去壳后的糙米，用75 %的酒精消毒1分钟, 再用无菌水冲洗一次（3-5次）; 再将各外植体材料分别用0．1 %的升汞灭菌10 min , 用无菌水冲4～5次。
(2) 将上述经过消毒的各外植体材料, 分别放在加有3 张无菌滤纸的无菌培养皿中, 在超净工作台上吹干, 然后, 分别接种至相应诱导培养基, 并置于温室26 ℃暗培养箱中进行培养（26～28 ℃,24h 黑暗条件下）, 每品种分别接种100 粒成熟胚，分5 个培养皿接种, 每个培养皿接种20 粒成熟胚, 10 d 后分别统计各不同水稻品种的出愈率。
(3) 将各水稻品种外植体材料在诱导培养基上培养10 d 后, 选取诱导成功的愈伤组织, 无需进行预分化培养的愈伤组织将直接转入到分化培养基中进行分化培养（26～28 ℃,14h 光照培养,光强1000～1500lx ), 需进行预分化培养的愈伤组织, 置于室温26 ℃的暗培养箱中进行预分化培养15 d 后,然后转入到分化培养基中进行分化培养, 25～30 d后分别统计各不同水稻品种的出苗率. 预分化培养时, 每个培养皿接种17 块愈伤组织. 分化培养时,每个三角瓶接种12 块愈伤组织, 每种处理方式接种5 瓶.分化期间光照强度为2000 Lx , 光照时间为每天14 h.
2 培养基的选择：
诱导愈伤组织培养基：MS培养基
3 数据处理:
出愈率( %) = (产生愈伤组织的种胚数/ 接种的种胚数) ×100 %;
褐化率( %) = (褐化的愈伤组织块数/ 转移的愈伤组织块数) ×100 %; 绿苗分化率( %) = (分化绿苗的愈伤组织块数/ 转移的愈伤组织块数) ×100 %.。
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究林艺【摘要】以MS培养基为基本培养基,采用液体培养的方式,通过调节2,4-D,6-BA 及蔗糖浓度,对粳稻南农4007愈伤组织的增殖进行了初步研究.结果表明:2,4-D浓度在0.0～4.0mg/L时对水稻愈伤组织的增殖和生长有一定的影响, 6-BA浓度在0.2～3.2mg/L、蔗糖浓度在10～50g/L时对愈伤组织增殖生长差异不显著,但当2,4-D为2.0mg/L、6-BA为0.8mg/L,蔗糖为20g/L时,其愈伤组织不论从生长状态,还是增殖速度上都较好且褐化程度相对较轻.适合粳稻南农4007愈伤组织液体增殖培养的基本配方为MS+NAA0.5mg/L+2,4-D2.0mg/L+水解络蛋白1g/L+蔗糖20g/L+6-BA0.8mg/L.【期刊名称】《安徽农学通报》【年(卷),期】2010(016)011【总页数】4页(P60-62,88)【关键词】水稻;愈伤组织;增殖;液体培养【作者】林艺【作者单位】宿州市农业科学研究所科技管理科,安徽宿州,234000【正文语种】中文【中图分类】S511水稻是生长于沼泽地带由普通野生稻逐渐驯化演变的一种栽培稻，栽培稻属禾本科稻属植物，全球目前稻属植物有20多个种[1]。
水稻是我国乃至全世界的主要粮食作物之一，特别是许多发展中国家人民赖以生存的重要作物[2]。
为了创造新的种质资源，组织培养及基因工程技术被广泛用于水稻育种研究，并取得显著成果[3]。
1965年，Nishi等[4]用稻根的愈伤组织分化出水稻植株，以后又有很多学者进行了相关研究[5－6]。
现代生物技术育种的过程中，愈伤组织经常作为外源基因的受体，因此愈伤组织质量的好坏及其分化植株能力的高低，直接影响着水稻基因工程的进展，也影响着水稻种质资源的创新。
组织培养这一现代生物技术手段，大体包括两大培养方式即固体培养及液体培养，在科研及工厂化生产上根据其需要及研究成本来选择不同的培养方式。
水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生
水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生新疆农业科学2007,44(6):889—891XinjiangAgriculturalSciences水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生危晓薇,王冬梅,祖木热木?吐尔逊(新疆农科院核生所,鸟鲁木齐830091)摘要:利用水稻成熟胚为外植体,接种在NB培养基上,分别附加不同的外源激素,以诱导愈伤组织并促其分化,最终获得水稻再生植株.结果表明:2,4一D对愈伤组织诱导起决定性作用,当它与低浓度的6一BA配比时更有利于前期愈伤组织的诱导,而高浓度的6一BA则有利于后期芽丛的分化.关键词:水稻;成熟胚;愈伤组织;再生植株中图分类号:$511文献标识码:A文章编号:1001—4330(2O0r7)o6—889—03 CallusInductionandPlantRegenerationofMatureEmbryosinRiceWEIXiao—wei,W ANGDong—mei,Zhumuremu?Tuerxun (InstituteofNuclearandBiologicalTechnologies,XinjiangAcademyofAgriculturalScienc es,Urumqi830091,China)Abstract:ThematureembryoswerecultivatedonNBmediawithdifferenthormones,byusin gthematureembryosinriceasexplants,andregenerationplantswereobtainedsuccessfully.Theresultssh owedthat2,4一DWasimportantfactorincallusinduction.Whenitisproportionaltolowconcentration6一BA,itisusefultocallusinduction,andwhenithasproportionalhighconcentration6一BA,itisnecessarytodi Ⅱ.eI℃ntiategreenbud.Keywords:rice;matureembryos;callusinduction;regenerationplant水稻体细胞组织培养作为水稻基因工程的基础技术,在水稻遗传改良中具有重要的作用.因此,建立一个高效再生体系是实现基因转化的先决条件.1965年,Amemiya等开始水稻组织培养,几十年来,研究者先后从水稻各部位诱导出愈伤组织和再生植株.虽然,幼穗,幼胚,花粉粒,花药愈伤组织诱导率高,愈伤组织质量好而受到青睐被广泛用于水稻的遗传转化,品种培育中.但上述材料多受季节限制,取材不便,阻碍了水稻组织培养的进一步发展.实验利用水稻成熟种胚作为外植体[1'引,通过不同培养基,不同激素类型及浓度对水稻成熟种胚愈伤组织诱导,分化进行了相关研究L2,4,5】,为提高水稻成熟种胚愈伤组织的质量和高效再生频率提供有效依据.1材料与方法1.1材料供试材料为早锦1号,秋田小町[6~8]两个水稻品种.1.2方法1.2.1愈伤组织诱导培养基基本培养基为N6大量元素,B5微量元素及有机成分,辅加水解乳蛋白300mg/L,谷氨酰胺250mg/L,蔗糖3Og/L,pH5.8.表11.2.2愈伤组织分化培养基以N6培养基为基本培养基,辅以水解乳蛋白O.5—1.0g/L,6一BA0.5—3.5mg/L,NAA1.0mg/L,硫酸铜1.5mg/L,蔗糖30g/L,pH5.8.1.2.3生根培养基以MS为基本培养基,蔗糖3Og/L,pH5.8.收稿日期:2007—08—29基金项目:新疆农作物生物技术重点实验室作者简介:危晓薇(1956一),女,湖南人,副研究员,研究方向为基因工程890?新疆农业科学44卷表1添加不同激素的诱导培养基Table1InductivesubsWatmnaddedwititdifferenthormones1.2.4外植体消毒以及培养方法选择饱满成熟的种子,手工剥去颖壳.在超净工作台上,用70%的乙醇浸泡种子30s.0.1%的Hl2溶液表面消毒8～10min,无菌水漂洗3～4次,浸泡过夜.用镊子,解剖刀取出灭菌种子的成熟胚,将其接种于愈伤组织诱导培养基中,26～28~C暗培养.诱导培养7d后,将初始愈伤组织从萌发的种胚上剥离后转到新鲜诱导培养基上,继续培养30d,统计出愈情况.经继代生长60d左右,挑选生长旺盛,自然分散,质地紧密,呈淡黄色颗粒状的愈伤组织接种于分化培养基上,26～28~C光照培养(14h光/10h暗,1500～20001)()诱导芽的分化.绿芽分化后,把绿芽转人生根培养基中,直至成为完整小植株.2结果与分析2.1不同培养基及激素种类与浓度对愈伤组织诱导分化的影响比较Ms,N6,B5三种培养基的无机盐及有机成分,发现用N6培养基的无机盐,B5有成分和微量元素对诱导水稻成熟种胚愈伤组织较适宜.比较6一BA,2,4一D,KT等激素,发现分裂素6一BA0.2—3.5mg/L与生长素,NAA,2,4一D2mg/L进行配比有利于愈伤组织诱导和芽分化.另外,在培养基中适当加入水解乳蛋白,谷氨酰胺和硫酸铜对愈伤组织的诱导和芽丛分化都有一定促进作用.表2表2不同激素浓度配比对愈伤组织诱导的影响(以秋田小町为例)Table2Effectofdifferenthormoneconcentrationoncallusinduction (TakingAkitakaomaqiasanexample)2.2愈伤组织的获得和芽的分化按上述条件和方法进行愈伤组织的诱导,接种7d后即可看到种胚上有初始愈伤出现.15d后愈伤组织形成.继代40d后两个供试材料都诱导出大量的愈伤组织.其中,在2,4一D2mg/L,6一BA0.5mg/L组合中诱导的愈伤质地较硬,淡黄色颗粒状,分散性好.实验表明,这类愈伤组织通过在分化培养基上继代培养30d左右就可以观察到绿芽点的出现,继代培养30～40d就可见小苗生长.图1～32.3再生植株的获得一将生长长度1cm左右的芽丛切下后,接种在生根培养基中,20d左右逐渐生根,30d 后形成根系,此时,地上部分生长迅速,获得完整再生小植株.图4.6期危晓薇等:水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生?89l?图1秋田小町的初始愈伤组织Fig.1Imtialcallusof.4ddmlmomaqi图3秋田小町的绿色丛芽Fig.3GreenclumpingbudsofAkitakaomaqi3小结图2秋田小町的大量胚状体组织Fig.2GreatnumberofembryoidofAkitakaomaqi图4秋田小町的完整植株Fig.4WholeplantofAldta~omaqi3.1水稻由于其基因组小,通过组织培养易获得再生植株等特点而在基因克隆,基因功能验证以及遗传转化等研究方面成为模式植物.在实验中,选取了两个水稻品种,查阅国内大量水稻遗传转化的相关文章,对培养基做了适当调节,早锦1号和秋田小町均获得再生植株.在水稻组织培养过程中,发现外源激素是愈伤组织诱导和绿苗分化的关键因素,尤其是2,4一D和6一BA的适宜配比对水稻成熟胚愈伤组织诱导起着决定性作用.3.2新疆水稻种植面积少,主要集中在阿克苏和米泉等地.实验所用秋田小町是新疆当前水稻生产上的主栽品种之一,种植面积约占全疆水稻总面积的1/3.通过组织培养,已经得到了秋ftt4,町的再生植株,现正在对新疆其它水稻栽培品种进行再生植株的培养,这为新疆水稻的遗传转化,功能基因验证等研究贮备了前期条件.参考文献:[1]郑贵朝,胡事君.提高水稻愈伤组织植株再生能力几种方法的评价[J].杂交水稻,2005,2o(2):54—57.【2]李玉静,陈彦龙.2,4一D和6一BA对水稻愈伤组织培养力的影响[J].河北师范大学(自然科学版),2005,29(4):395—403.[3]周玲艳,秦华明.提高水稻愈伤组织再生频率的研究[J].种子,2006,25(7):28—31.[4]陈兴春,牛蓓.水稻愈伤组织分化与不同激素配比关系的研究[J].四川大学(自然科学版),2006,43(1):222—227.[5]姜华,陈静.ABA对水稻愈伤组织,不定胚发育及其植株再生的影响[J].作物,2006,32(9):1379—1383.[6]梁乃亭,魏玉波.优质水稻秋田町及其栽培技术[J].新疆农业科学1997,(2):51—52.[7]魏玉波,布哈丽且木,粱乃亭.新疆水稻优质栽培技术[J].新疆农业科学,2002,39(5):307—309.[8]魏玉波,梁乃亭,布哈丽且木,等.优质水稻品种39及栽培技术[J].新疆农业科学.2004.41(6):448—449.。
植物愈伤组织诱导实验
中国海洋大学实验报告姓名：马宁专业年级：生命基地班2009级学号： 040212009020 课程：细胞工程实验题目：植物愈伤组织诱导实验一.实验目的掌握植物愈伤组织诱导的原理和方法。
二.实验原理1、植物组织培养：无菌条件下，培养植物的组织、器官以至单个细胞，使其分裂、增殖和分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，脱分化形成愈伤组织，愈伤组织又再分化根和芽等组织和器官。
2、植物激素控制器官分化理论。
3、超净工作台工作原理本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速）→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境。
三.主要仪器试剂每人：培养瓶（内含培养基）1个、100mL去离子水1瓶、100mL空试剂瓶1个；两人：超净台胡萝卜无菌器皿、用具的准备：用酒精擦拭盘子、解剖刀及镊子，灼烧后冷却。
四.实验操作步骤植物愈伤组织诱导（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用自来水冲洗后，用流水冲洗片刻后洗净，切段（5cm左右）。
先在70%酒精中浸泡数秒。
（3）将材料放入已灭菌的100 ml烧杯中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10-15分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中或灭菌过的培养皿中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层部分，切成0.5cm3的小块。
弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。
（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。
（8）在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。
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水稻愈伤组织的诱导实
验报告
标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]
水稻愈伤组织的诱导
一、实验目的
1、掌握外植体的消毒方法和接种技术；
2、了解愈伤组织诱导的过程。
二、实验原理
以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养时，在一定的诱导培养条件下都能
诱导形成愈伤组织。愈伤再经分化培养，通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生
成植株。
外植体源自自然环境均为带菌状态，在接种前都必须进行消毒。对于难消毒的材料，
有时要几种消毒剂配合使用；对于多茸毛表面粗糙不平的材料，要加展着剂（吐温20）
以增强消毒效果。
三、实验材料与用具
1、材料：水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）；
2、试剂：75%酒精，2% NaCLO，无菌水(每组1瓶400mL)；
3、培养基：诱导培养基：NB+2,4-D 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L（）；
4、仪器设备：培养室、超净工作台、培养皿（￠9cm）2个、枪形镊、量筒（100mL）
2个、三角瓶（50mL、无菌）2个、废液缸、保鲜膜、标签纸。
四、实验步骤
1、接种室、培养基及用具表面消毒
用75%酒精棉球试擦超净工作台、镊子，将培养基及用具放工作台，打开紫外灯，照
射20分钟以表面消毒。之后关紫外灯，打开工作台风机，通风30分钟后可进行无菌操
作。
2、种子去壳
选取饱满、无霉变、成熟的水稻种子，手工脱去谷壳（注意保持胚完整），每人准
备30粒去壳种子，并按照分组放到三角瓶中。
3、操作者双手的清洗与消毒
在进入无菌室之前，各操作者先用自来水清洗干净双手并晾干，然后进入无菌室，
坐在超净台前位子上后，用含75%酒精的酒精喷壶喷洒双手对双手进行消毒，在超净台
风口待双手酒精风干后进入超净工作台。（注意：酒精喷壶喷洒双手时切记不要把酒精
喷到超净台的有机玻璃板上！）
4、超净台面的表面消毒（以下工作在超净工作台内进行）
用枪形镊子从含75%酒精棉球的容器中取一团棉球，仔细把整个超净台面擦试一
遍，尽量降低超净台面的带菌量，并将废棉球丢到废液缸中，然后点亮超净台里面放置
的酒精灯。
5、外植体消毒（分组操作，每组由一位代表操作完成外植体的消毒工作）
将脱谷壳米粒转到一50mL无菌三角瓶→加适量无菌水洗一次（以没过种子为准，下
同）→弃水，倒入75%酒精适量，摇动搅拌，放置30秒（过程中适当轻摇动混匀）→弃
酒精→加适量无菌水洗一次→弃水→倒入适量2% NaCLO，不时摇动搅拌，共处理30分
钟→弃NaCLO→用无菌水洗3次，每次停留1分钟→倒去无菌水，将种子从三角瓶转到
带无菌滤纸的无菌培养皿中吸干。
6、接种与观察
将吸干的消毒种子用无菌的镊子接入培养基并均匀放置，每皿接10粒，每人共接种
2皿。接种完成后，将培养皿盖上并用保鲜膜封口，然后将接种有材料的培养皿移出超
净台，贴上标签写明日期、接种人，按照班级统一放入一篮子，再将篮子放入培养室进
行25℃暗培养。注意每隔2-3天前来观察一次实验现象，1周后调查计算污染率，14天
后调查计算愈伤组织诱导率。
五、实验结果
本次实验我组未出现被污染的种子，污染率均为0 。说明实验过程中，我组成员操作
规范，保证所接种的种子均不受到污染。
最后，我组的2个培养皿分别可以诱导出7和8株水稻苗，诱导率分别为70%和
80% 。
六、 讨论与分析
1、 本实验出现污染的原因分析。
×100%
形成愈伤组织的种子数
污染率(%)=
×100%
污染的种子数
接种的总种子
诱导率
接种的总种子数
1） 外植体消毒不彻底，表面有较多微生物残留；
2） 实验用具如镊子等消毒不彻底，在操作过程中把微生物带到种子上，污染种
子；
3） 实验前，超净工作台没有充分消毒，台内（主要是空气中）还残留有较多微
生物；
4） 培养皿密封措施做得不好，致使培养期间有微生物进入到培养皿中，并生长
繁殖。
2、 降低实验中的污染率的方法。
1） 外植体、实验用具、超净工作台均需彻底消毒；
2） 做好密封措施；
3） 操作时勿离酒精灯太远；
4） 尽量缩短操作时间；
5） 定时更换消毒液（75%酒精、2% NaCLO）。
3、 分析与愈伤组织诱导形成有关的因素。
1） 外植体的状态（分化的程度）；
2） 诱导培养的环境（光线、水分、温度等）；
3） 植物激素的作用。