细胞增殖实验
MTT细胞增殖实验
MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以经溶剂溶解后用酶标仪在570nm 处进行测定。
在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值间接反映活细胞的数目。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
MTT法的实验操作步骤看似简单，但在学习的过程中才发现，要想得到可信而漂亮的检测结果并不是那么容易。
在不断的摸索和老师的指导下，终于得到了满意的结果。
在这里，我对该实验具体操作中遇到的问题进行了归纳总结。
影响因素及解决办法：一、影响复孔重复性的因素：MTT法通常是在96孔板中种上细胞，然后分不同的组给药，设置对照组，以检测药物对细胞的增殖影响。
设复孔的目的是对实验结果可信度的一个有效监测办法。
因为复孔间的差异越小，说明操作越精确。
结果的可信度也越高。
那么是哪些因素影响复孔的重复性呢？首先，应该是孔间细胞是否均匀，只有在每孔的细胞数量尽可能一致的情况下才能建立起后续试验的可信基础。
保证细胞种得均匀主要靠熟练的操作，细节上是在种板的过程中，每种5到6个孔需将细胞悬液吹打几次，因为细胞在重力作用下有下沉的趋势。
一般我们是设3 ~6个复孔，竖行排列，这样方便种板和计算。
可能的情况下，多些复孔检测作用会好些。
其次，是“边际效应”，96孔板放在37℃孵箱中孵育细胞的过程中，周边孔内液体容易挥发，测定数据与中心孔有较大出入，所以周边一圈通常不种细胞而只加PBS,另外得注意保持培养箱的湿度条件。
细胞增殖实验(MTT法)的步骤及方法
细胞增殖实验（MTT法）的步骤及方法一、技术简介细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。
单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。
多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。
必须强调指出，通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。
可见，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。
真核细胞的分裂方式有三种，即有丝分裂、无丝分裂和减数分裂。
MTT是3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide的简称。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
然后采用二甲基亚砜（DMSO）溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570 nm波长处测定其光吸收值，反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
二、实验流程（以贴壁细胞为例）1. 收集对数期细胞，调整浓度。
2. 将细胞种植于96孔板中，待细胞贴壁后（约4-12 h）加药。
3. 5% CO2，37 o C孵育一定时间。
4. 每孔中加入200 μL MTT溶液（配制成5 mg/ml），培养4 h。
5. 吸去孔内的培养液，加入150 μL DMSO，可继续孵育4 h，使结晶物充分溶解。
6. 取出96孔板，将其置于酶联免疫检测仪上，震荡15 s，然后在570 nm下测量吸光值。
7. 结果统计分析。
MMT细胞增殖检测
细胞增殖检测技术--MTT法一、基本原理MTT法检测细胞增殖原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
Formazan经二甲基亚砜（DMSO）溶解后用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
根据测得的吸光度值（OD 值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。
二、操作步骤（1）接种96孔板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200 μL，37℃、5％CO2培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）（2）加入20μl储液浓度为4 mg／ml，，终浓度为100μg/ml 培养4h。
（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（200μL／孔），将培养板置于微孔板振荡器上振荡10 min，使结晶物溶解。
（4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长570 nm）。
三、注意事项：1. MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5 mg/ml于-20℃长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
2. MTT有致癌性，用时注意安全。
3. 在进行MTT比色法细胞活力检测实验前，需要掌握细胞的贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定实验中每孔的接种细胞数和培养时间。
这样，才能保证形成酌量的MTT结晶，与细胞数量呈线性关系。
4. 设空白对照。
与实验孔平行设不加细胞只加培养液的空白孔。
其它实验步骤保持一致，以空白孔调零。
MTT: AMRESCO 公司货号 0793-5G配置方法现用现配溶解于双无培养基中，酶标仪 Thermo 公司 Multiskan FC 型酶标仪5. 避免血清干扰。
淋巴细胞增殖实验报告
淋巴细胞增殖实验报告一、实验目的本实验旨在通过体外培养淋巴细胞，观察不同刺激条件下淋巴细胞增殖的情况，探讨淋巴细胞增殖与免疫应答的关系，为进一步研究免疫调节机制提供实验依据。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种小鼠，体重20-25g，雌雄不限。
2. 试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、淋巴细胞分离液、植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、ELISA试剂盒等。
3. 仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、酶标仪、流式细胞仪等。
三、实验方法1. 淋巴细胞分离：取小鼠颈椎脱臼处死，无菌操作下取出脾脏，加入胰蛋白酶消化，离心洗涤，再用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞。
2. 淋巴细胞培养：将分离得到的淋巴细胞用RPMI-1640培养基重悬，调整细胞密度为1×10^6个/mL，加入PHA或ConA作为刺激剂，分别设置无刺激组、PHA刺激组、ConA刺激组等。
3. 细胞增殖观察：将培养的淋巴细胞置于CO2培养箱中培养，分别在24h、48h、72h、96h和120h取样，用倒置显微镜观察细胞形态变化，并计算细胞数量。
4. ELISA检测：取培养上清液，按照ELISA试剂盒说明书检测细胞因子（如IL-2、IFN-γ等）含量。
5. 流式细胞术检测：取培养的淋巴细胞，用荧光标记的抗体检测T细胞亚群（如CD4+、CD8+等）和细胞周期分布。
四、实验结果1. 细胞形态观察：随着培养时间的延长，淋巴细胞在PHA或ConA刺激下逐渐转变为淋巴母细胞，细胞体积增大，核仁明显，细胞浆内出现空泡。
2. 细胞增殖：在PHA或ConA刺激下，淋巴细胞数量显著增加，且呈时间依赖性。
3. 细胞因子检测：ELISA结果显示，在PHA或ConA刺激下，培养上清液中IL-2、IFN-γ等细胞因子含量显著升高。
4. 流式细胞术检测：流式细胞术结果显示，在PHA或ConA刺激下，T细胞亚群CD4+和CD8+的比例发生改变，且细胞周期分布发生变化。
细胞增殖-毒性实验步骤
细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂[细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1）倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=（2～3）:1]中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS细胞培养液1～2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100μL（约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72小时（37℃，5%CO2），使细胞贴壁；10）向培养板中加入10μL不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
CFSE细胞增殖实验
准备：1.20ml 预冷5%FBS(HI)-PBS2.50ml 预冷MACS buffer3.70um滤网4.2.5ml RBC lysis5.LS column6.50ml 37度预热PBS7.50ml 37度预热complete culture medium(RPMI 1640 +10% HeatInactivated FBS+10 mM HEPES+1 mM penicilline streptomycin+ 50 mM 2-mercaptoethanol)（一）CD3抗体包被取96孔板每孔加入100ul 10ug/ml anti-CD3抗体（PBS）密封4度过夜。
（二）淋巴细胞获取1.小鼠的脾脏结摘取于10ml 冷5%FBS-PBS中。
2.于70um滤网研磨滤过，500g 4度5min离心后弃上清。
3.2.5ml RBC lysis裂红5 min，10ml 冷5% PBS终止。
4.500g 4度5min 离心后弃上清，10ml MACS buffer重悬，计数。
留取105个细胞进行FACS。
（三）磁珠分选naïve CD8a+ T细胞1.Centrifuge cell suspension at 300×g for 10 minutes. Aspirate supernatant completely. 2.Resuspend cell pellet in 400 μL of MACS buffer per 108 total cells. 3.Add 100 μL of Naive CD8a+ T Cell Biotin-Antibody Cocktail per 108 total cells. 4.Mix well and incubate for 5 minutes in the refr igerator (2−8 °C). 5.Add 200 μL of MACS buffer per 108 total cells. 6.Add 200 μL of Anti-Biotin MicroBeads per 108total cells. Add 100 μL of CD44 MicroBeads per 108 total cells.7.Mix well and incubate for an additional 10 minutes in the refrigerator (2−8 °C).8.Wash cells by adding 10ml of MACS buffer per 108 cells and centrifuge at 300×g for 10 minutes. Aspirate supernatant completely.9.Resuspend up to 108cells in 500 μL of MACS buffer.10.Place LS column in the magnetic field of a suitable MACS Separator.11.Prepare column by rinsing with 3 mL of MACS buffer. 12.Apply cell suspension onto the column. Collect flow-throughcontaining unlabeled cells, representing the enriched naive CD8a+ T cell fraction. 13.Wash column with 3 mL of MACS buffer. Collect unlabeled cells thatpass through, representing the enriched naive CD8a+ T cells, andcombine with the flow-through from step 3. 14.Determine cell number. 留取105个细胞进行FACS。
细胞生物学实验常用细胞增殖率解释标准
细胞生物学实验常用细胞增殖率解释标准细胞增殖率是细胞生物学实验中常用的参数之一，用于评估细胞的生长与增殖情况。
细胞增殖率的解释与计算方法有多种标准，下面介绍几种常用的解释标准。
1. 常规细胞增殖率解释标准常规细胞增殖率是根据细胞数量的变化来计算的。
它通常以初始细胞数为基准，计算出一定时间后的细胞数，并将其与初始细胞数进行比较。
常见的计算公式如下：增殖率 = (终点细胞数 - 初始细胞数) / 初始细胞数常规细胞增殖率可以直观地反映细胞的增长速度，但它并不能提供关于细胞生长状态的更详细信息。
2. 倍增时间解释标准倍增时间是指细胞数量翻倍所需的时间。
细胞倍增时间的计算需要知道初始细胞数和终点细胞数，计算公式如下：倍增时间 = 时间间隔 / log(终点细胞数 / 初始细胞数)倍增时间可以反映细胞的增殖速度，而且与细胞增殖率有密切的关系。
3. 细胞周期解释标准细胞周期是指细胞从一个细胞周期开始，到下一个细胞周期开始的时间间隔。
细胞周期的计算需要知道细胞处于哪个特定阶段，并测量细胞进入下一阶段所需的时间。
细胞周期可以提供更详细的信息，包括细胞增殖、分裂、生长以及细胞周期偏移等。
4. 其他细胞增殖率解释标准除了上述常用的解释标准，还有其他一些方法可以评估细胞的增殖率，例如细胞增殖曲线的斜率、细胞倍增指数（population doubling level, PDL）等。
综上所述，细胞生物学实验中常用的细胞增殖率解释标准包括常规细胞增殖率、倍增时间、细胞周期等。
根据实验的需要，选择合适的解释标准能够更准确地评估细胞的生长与增殖情况。
注意：本文档内容仅供参考，具体解释标准应根据实验需求和实验条件进行确定。
内皮细胞增殖实验步骤
一、脐带内皮细胞的分离1. 脐带收集用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有4 ℃Cord Buffer 的饭盒内。
脐带在4 ℃放置不应超过24 小时。
2. 脐带内皮细胞分离（1）带无菌手套，取出脐带，在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后，用无菌剪刀将两端脐带剪除。
（2）在脐带一端找到静脉，插入脐带静脉插管，用2 根粗丝线扎牢，用Cord Buffer 抽吸有的30 ml注射器冲洗静脉腔，至将脐血洗净。
（3）赶出静脉腔内残余液体，将脐带另一端用止血钳夹闭，用10 ml注射器连接针头，注入37 ℃预热的0.1 ％胶原酶约6-8 ml，放入37 ℃Cord Buffer中保温6-10 min。
（4）吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液，加入预加有20 ml Cord Buffer的离心管中，冲洗静脉腔，一并加入离心管中。
（5）离心，1500 rpm，10 min弃上清，用5～7 ml 20 ％FCS，RPMT 1640重悬细胞，转入培养瓶，放5 ％CO孵箱。
二、牛下丘脑内皮细胞生长因子粗提物的制备1. 取新鲜牛下丘脑，加1.5倍体积的冰生理盐水用组织匀浆机匀浆，每次0.5 min，共6次。
2. 在4 ℃条件下用震荡器机械震荡约1.5 h。
3. 离心，10000 g，40 min，收取上清液。
4. 按0.5 ％加硫酸链霉素，4 ℃过夜。
5. 离心，20000 g，40 min，收取上清液。
6. 用紫外分光光度测280 nm，260 nm OD值按公式计算蛋白含量。
7. 过滤，分装，-20 ℃保存备用。
三、内皮细胞的培养与鉴定1. 培养瓶包被明胶培养瓶（25 cm）中加入0.2 ％明胶3 ml，使其铺满瓶底，放4 ℃备用。
用前弃去明胶溶液。
2. 原代培养将从脐带静脉中收集到的内皮细胞移入包被明胶的培养瓶（25 cm），加5～7 ml 20 ％小牛血清199培养基，按终浓度分别为20 μg/ml和100 μg/ml加入内皮细胞生长因子粗提物和肝素。
细胞克隆增值实验报告(3篇)
第1篇实验名称：细胞克隆增值实验实验目的：1. 熟悉细胞克隆的基本原理和操作步骤。
2. 观察细胞克隆的生长过程，了解细胞增值规律。
3. 掌握细胞克隆计数方法，评估细胞增殖能力。
实验时间：2021年X月X日实验地点：实验室实验材料：1. 细胞株：小鼠胚胎成纤维细胞（C3H10T1/2）2. 细胞培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清）3. 0.25%胰蛋白酶4. 100mL培养瓶5. 移液器6. 细胞计数板7. 显微镜8. 计算器实验方法：1. 取小鼠胚胎成纤维细胞，接种于100mL培养瓶中，放入培养箱中培养。
2. 待细胞长至约80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞。
3. 将消化后的细胞计数，按照1×10^4细胞/孔的密度接种于96孔细胞培养板中。
4. 将细胞培养板放入培养箱中，每隔24小时观察细胞生长情况，记录细胞生长曲线。
5. 当细胞长至约80%融合时，进行细胞克隆计数。
实验结果：1. 细胞生长曲线：在实验过程中，细胞生长速度较快，约24小时后细胞开始出现克隆生长现象。
在第3天，细胞克隆数量达到最高，随后逐渐减少。
2. 细胞克隆计数：在显微镜下观察，每个克隆直径约为100-200μm。
根据细胞计数板上的网格，每个克隆计数约为20-40个细胞。
在实验过程中，细胞克隆数量随时间逐渐增加，但增长速度逐渐减慢。
实验分析：1. 本实验成功观察到了细胞克隆的生长过程，并掌握了细胞克隆计数方法。
2. 实验结果表明，小鼠胚胎成纤维细胞具有较强的增殖能力，克隆数量随时间逐渐增加。
3. 细胞增殖速度与细胞种类、培养条件等因素有关。
在本实验中，细胞增殖速度较快，可能与DMEM培养基和胎牛血清的营养成分有关。
实验结论：1. 细胞克隆增值实验成功，验证了小鼠胚胎成纤维细胞具有较强的增殖能力。
2. 通过观察细胞克隆生长过程，掌握了细胞克隆计数方法，为后续实验研究提供了基础。
实验注意事项：1. 实验过程中，注意无菌操作，防止细胞污染。
pbmc增殖实验原理
pbmc增殖实验原理
PBMC增殖实验是一种常用的细胞生物学实验，用于研究外周血
单个核细胞（PBMC）的增殖能力。
PBMC是一种混合细胞群，包括淋
巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞等。
进行PBMC增殖实验的原理主
要包括以下几个方面：
1. PBMC分离和培养，首先，从外周血中分离PBMC，通常采用
密度梯度离心法。
然后将PBMC进行培养，提供适当的营养物质和生
长因子，以促进其生长和增殖。
2. 刺激因子的作用，在培养PBMC的过程中，可以加入不同的
刺激因子，如激活剂、抗原或药物等，以模拟体内的免疫应答过程。
这些刺激因子可以激活PBMC，促进其增殖和分化。
3. 测定增殖活性，通过不同的方法来测定PBMC的增殖活性，
常用的方法包括MTT法、放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些
方法可以定量或定性地评估PBMC的增殖能力。
4. 数据分析和解释，最后，对实验结果进行数据分析和解释，
比较不同条件下PBMC的增殖活性，探讨刺激因子对PBMC增殖的影
响，从而揭示PBMC在免疫应答中的作用和调控机制。
总的来说，PBMC增殖实验的原理是通过培养PBMC并加入刺激因子，测定其增殖活性，从而研究PBMC在免疫应答中的生物学特性和调控机制。
这种实验方法在免疫学和临床医学研究中具有重要的应用价值。
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细胞增殖检测方法细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。
目前细胞增殖检测主要分为五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。
在这些方法中作何选择，主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。
1.DNA合成检测这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。
该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。
该方法耗时长，而且有个明显的弊端就，即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。
不过，可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。
但这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。
该方法的优点就是不再需要放射性物质。
BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。
2.代谢活性检测检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。
在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。
可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。
四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。
MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。
因此，MTT主要作为终点检测方法。
其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒。
它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。
其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子；WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色；Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。
四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。
它们适用的检测仪器包括：标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。
3.活细胞数量最直接的增殖指标是活细胞数量的变化。
但细胞直接计数法操作繁琐费时，所需细胞量较多，不推荐使用。
4.增殖标志检测有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增殖细胞缺乏这些抗原，因此可以通过特异性的单抗来对细胞增殖进行检测。
例如，在人体细胞中，Ki-67抗体识别同名蛋白，在细胞周期S期、G2期和M期（增殖期）表达，而在G0期和G1期(非增殖期)不表达。
用针对Ki-67蛋白的单抗就可以检测细胞的增殖情况。
由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。
不过这一方法颇受肿瘤研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。
其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括：增殖细胞核抗原PCNA、拓扑异构酶IIB，以及磷酸化组蛋白H3等。
5.ATP检测细胞内的ATP含量受到了严格调控，检测ATP也可以得到细胞增殖的信息。
死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP 浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。
利用荧光素酶luciferase及其底物荧光素luciferin的ATP检测以生物发光为基础，能够提供非常灵敏的结果。
如果有ATP存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。
这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。
选择策略怎样选择最适合的检测方法，主要依赖于使用的细胞类型和具体研究方案，还取决于实验者在细胞增殖中期望得到的信息。
假如希望了解细胞增殖中的代谢活性变化，可以使用四唑盐和比色法检测；如果关注重点在于对DNA合成的改变，可以选择用BrdU或EdU标记，再通过比色法、化学发光或荧光检测进行分析；若研究的是单个细胞，也可以用BrdU或EdU标记来检测DNA合成，将其与荧光标记的相应抗体结合，就可以通过流式细胞仪来进行流式分选。
应该注意，测定细胞增殖很多时候单一方法都是有缺陷的，四唑盐—MTT 法不够精确；最直接的指标是活细胞数量的变化，结果比较准确，但细胞直接计数法所需细胞量较多，操作繁琐费时；而3H掺入法麻烦且不安全。
所以，建议最好用两种以上的方法进行测定，这样做主要是可以有一个用于辅助修正的数据。
EdU实验流程一、实验原理EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo 荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
二、材料及准备工作☆试剂盒需4˚C储存，荧光试剂请避光，勿冻存，可稳定储存一年溶液配制1.PBS (pH 7.2~7.6)PBS缓冲液10xNaCl 80 gKCl 2 gNa2HPO4·12H2O 36.151 g(Or Na2HPO4 14.4 gK2HPO4 2.4 g蒸馏水至1000 mL 调pH值至7.42.渗透剂(含0.5% Triton X-100的PBS)3.甘氨酸溶液(2 mg/mL)（去离子水配配制，现用现配）4.细胞固定液(即含4%多聚甲醛的PBS)多聚甲醛 4 g1x PBS定容至100ml，磁力搅拌器加热搅拌，温度控制在60℃以下。
如仍不溶，滴加NaOH (1N或0.1N），调PH值至7.4。
5.1% BSA的PBS6.甲醇7.无水乙醇三、操作步骤及注意事项A流式检测1.1 取对数生长期的细胞，105细胞接种于6孔板或培养皿中，培养箱中培养过夜；1.2 可以根据实验需要进行各种药物处理。
2.1 用细胞培养液以1:1000的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50 µM EdU 培养基；2.2 每孔加入500 µL 50µM EdU培养基孵育2h。
（☆此步务必在超净台内完成）3.1 用0.25％胰酶进行消化，转至离心管，用1×PBS吸打后，1000rpm×5min，弃上清；3.2 用含1%BSA的PBS吸打后，1000rpm×5min，弃上清；3.3 4%多聚甲醛的PBS固定15min，1000rpm×5min，弃上清；3.4 用含1%BSA的PBS吸打后，1000rpm×5min，弃上清；3.5 300 µL PBS吹散细胞，加入700 µL 无水乙醇(制成70%乙醇PBS液)，边加边震荡混匀，4℃固定24h以上；3.6 1000rpm×5min，弃上清。
4.1 按下列顺序配置适量1× Apollo®反应液（☆现用现配，30分钟用完，以免破坏正常的反应体系）：4.2 加入500 µL的1×Apollo®染色反应液，重悬细胞，避光室温孵育30 min，1000rpm×5 min；4.3 加入500 µL 0.5% TritonX-100的PBS吸打，1000rpm×5min，重复2次；4.4 每孔每次加入100 µL 甲醇冲洗1次，每次5min；PBS 100µL脱色摇床5min。
5.1 用去离子水按100:1稀释试剂F，制备适量1×Hoechst33342反应液，避光保存；5.2 弃上清，加入500 µL 1× Hoechst 33342反应液，避光室温孵育30min，1000rpm×5min；5.3 加入500 µL PBS吸打，1000rpm×5min，重复2次，洗脱Hoechst 33342反应液。
6.1 1000rpm×5min收集细胞，300 µL PBS吹散细胞，自备300目尼龙滤膜过滤（若吹打成单细胞悬液，可不过网）；转至流式管进行流式细胞仪分析，荧光通道依据实验仪器而设定。
B荧光显微镜检测1.1 取对数生长期的细胞，4×103~1×105细胞接种于96孔板中（☆细胞接种密度，没有严格要求，只要不影响显微镜下观察即可），培养箱中培养过夜；1.2 可以根据实验需要进行各种药物处理。
2.1 用细胞培养液以1:1000的比例稀释EdU溶液（试剂A），制备适量50µM EdU 培养基；2.2 每孔加入100 µL 50µM EdU培养基孵育2h。
（☆此步务必在超净台内完成）;2.3弃培养液，100 µL PBS清洗细胞2次，脱色摇床上，每次5min。
3.1 每孔加入100 µL 4% 多聚甲醛的PBS，室温脱色摇床孵育30 min；3.2 2 mg/mL 甘氨酸脱色摇床孵育5 min；（☆可在多聚甲醛固定时配置，现用现配。
目的：中和多聚甲醛）3.3 每孔加入100 µL PBS脱色摇床孵育每次5 min；3.4 每孔加入100 µL 0.5% TritonX-100的PBS，脱色摇床孵育10 min；3.5 每孔加入100 µL PBS脱色摇床孵育1次，10 min。
4.1 按下列顺序配置适量1×Apollo®反应液（☆现用现配，30分钟用完，以免破坏正常的反应体系）：4.2 每孔加入100 µL的1×Apollo®染色反应液，避光，室温脱色摇床孵育30 min；4.3 每孔每次加入100 µL渗透剂（0.5% TritonX-100的PBS）脱色摇床孵育2次，每次10min；4.4 每孔每次加入100 µL 甲醇冲洗1次，每次5min；PBS 100 µL脱色摇床5min。
5.1 用去离子水按100：1稀释试剂F，制备适量1×Hoechst33342反应液，避光保存；5.2 每孔加入100 µL 1×Hoechst 33342反应液，避光，室温脱色摇床孵育30 min；5.3 每孔每次加入100 µL PBS脱色摇床孵育2次，每次5min，洗脱Hoechst 33342反应液。
6.1建议染色完成后，立即进行观测，因易淬灭，曝光时间建议＜30ms；如果条件限制，请避光4℃湿润保存待测，但不要超过3天。
☆特别注意1、Apollo染色反应液一定要现用现配，按顺序加样，小心称量试剂E，注意避光。