Waters_e2695_Alliance_HPLC操作手册

1.0Review and Approval

审核与批准

Written By: ________________________________ Date: ____________________

起草人日期

Approved By: ________________________________ Date: ____________________

批准人 Department Head or Designee 日期

部门负责人或指定人员

Approved By:________________________________ Date: ____________________

批准人 Quality Assurance 日期

质量保证部

2.0Purpose

目的

2.1本标准规定了的Waters e2695型液相色谱仪的使用、维护保养和校验。

3.0Scope

范围

3.1本标准适用于位于XXXXXXXQC实验室的的使用、维护保养及校验。

4.0Responsibilities

职责

4.1QC人员对系统的维护以及本规程的使用负责。

5.0References/Associated Documents

参考文件/相关文件

5.1Waters e2695操作员指南

5.2Waters2998操作员指南

5.3Waters2489操作员指南

5.4Empower工作站使用手册

6.0Definitions

定义

N/A

7.0Procedure

规程

7.1设备

7.1.1四元泵，Waters e2695

7.1.2控温自动进样器

7.1.3紫外可见光检测器，Waters2489

7.1.4二级阵列管检测器，Waters2998

7.1.5柱温箱

7.1.6溶剂脱气机

7.1.7装有Empower工作站的电脑

7.2维护

7.2.1灌装及清洗系统

7.2.1.1当真空脱气机第一次使用或当真空管是空的，或当改变溶

剂，且当前溶剂与真空管中溶剂不相溶时，应当灌装清洗系统

7.2.1.2如果使用易挥发的混合溶剂或改变溶剂时，若系统长时间关

机（比如，隔夜）灌装系统推荐将泵的流速控制在高水平（3-

5ml/min）。

7.2.1.3使用注射器灌装系统（干灌装）：点击仪器面板上

“Menu/status”按钮，选择“Direct Function”,然后点击“dry prime”选择欲灌装的

通道并逆时针方向旋开灌装/排放阀，将专用注射器插入灌装/排放阀入口

内，拉动注射器活塞吸入大约10毫升灌装液或直到管路中不在有气泡为

止。灌装完成后顺时针方向拧紧灌装/排放阀。

7.2.1.4首次灌装系统时，使用干灌装并使用异丙醇、甲醇、乙醇作

为灌装溶剂。

7.2.1.5置换管路中的流动相，使用湿灌装：点击仪器面板

“Menu/status”按钮，选择“Direct Function”,然后点击“wet prime”选择欲灌装的

通道。

7.2.1.6如果当前管路中溶剂是有机的或水而当前流动相也为有机溶

剂或为水，在能互相溶解的情况下，用流动相作为灌装溶剂。

7.2.1.7如果当前管路中溶剂是有机的或水而当前流动相也为有机溶

剂或为水，但不能互相溶解的情况下，使用异丙醇灌装系统。

7.2.1.8如果管路中溶剂为有机的而当前流动相为缓冲盐或管路中为

缓冲盐而流动相为有机溶剂时，使用10%异丙醇、甲醇、乙醇灌装系统。

7.3优化泵的性能

7.3.1总是把存放溶剂瓶的溶剂瓶架放在泵的顶部（或在相对于泵

较高的位置）。

7.3.2当使用盐溶液的时候，常需要用水冲洗所有流路。这样就可以将阀门端口

的沉淀的盐冲洗掉。在运行泵之前，用至少两倍体积（30ml）的水冲洗真空脱气机，特别是当泵关闭较长时间时或者通道中使用易挥发混合溶剂时。

7.3.3当基线长时间不能处于稳定状态时，通常情况下应考虑溶剂进口过滤器是

否堵塞。当溶剂过滤器堵塞时，应将其从溶剂瓶中取出并将其放入30%硝酸溶液中超声清洗30min。在将其重新装入溶剂瓶之前，必须用MillQ水对其进行彻底的清洗。长期处于水或缓冲液中的过滤器常因为溶剂中藻类等微生物的生长，造成过滤器的堵塞。因此建议在使用完此类流动相后，用50%乙腈清洗溶剂过滤器。

7.3.4当使用缓冲溶液时，在关闭系统前必须将通道中的溶剂置换成50%乙腈，

以防止藻类等微生物的生长。

7.4使用Empower色谱工作站

7.4.1双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。输

入用户名与密码，点击“OK”进入Empower工作站。

7.4.1.1输入正确的用户名与密码后，点击“Advanced”，在出现的对话框

中选择你需要的用户类型和操作界面。可选的用户类型和操作界面取决于你的用户权限。下面以“QuickStart Interface”界面为操作界面制定本SOP。

7.4.2在出现的对话框中的左侧选择需要的“Project”；在右侧选择需要的系统，点击“OK”。“”

7.4.3创建分析方法

7.4.3.1创建仪器方法：在出现的操作视窗中点击“Instrument”进入仪器方法设置窗口。

7.4.3.1.1设置输液系统参数：点击“W2690/5”图标进入输液

系统设置，根据需要设置相关参数。如在“General”中设置

“Stroke Volume”为“100ul（flow rate ＜＝10.000ml/min”表示泵

每分钟的最大泵液量为10.000ml。需要注意的是，分析方法中需

要的流速“Total Flow”必须小于设置的“Stroke Volume”，在

“Need wash time”对应的下拉菜单中选择“Double”表示采用相对

于仪器默认洗针体积的双倍来清洗自动进样针；在“Flow”选项

下设置仪器的最高压力（通常选择默认的4000psi），最低压力，