VC测定方法

实验21 2，6一二氯酚靛酚滴定法测定维生素C

一、目的

1．学习并掌握定量测定维生素C 的原理和方法。

2．掌握微量滴定法的基本操作技术。

二、原理

维生素C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid ）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。

维生素C 是具有L 系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。

维生素C （抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2，6一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。

还原型抗坏血酸 氧化型染料 脱氢抗坏血酸 还原型染料

（粉红色） （无色）

氧化型2，6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶淀中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。

三、材料、试剂与器具

（一）新鲜的蔬菜、水果

（二）试剂

1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释

至500毫升，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。

2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。

3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。

4、0.01% 2,6 一二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6一二氯酚靛于300毫升含有104克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。（三）器具

1、锥形瓶（50~100毫升）

O Cl Cl ‖ ∣∣ ‖ O Cl

2、移液管（1毫升，10毫升）

3、容量瓶（100毫升）

4、微量滴定管（3毫升或5毫升）

四、操作步骤

（一）提取

水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几毫升滤液，如滤液色深可用白陶土脱色。

（二）滴定

1、标定2，6一二氯酚靛酚溶液的浓度：

量取标准维生素C 溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml 锥形瓶中，同时量取10ml 草酸加入另一个50ml 锥形瓶中作空白对照，用已标定的2，6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6一二氯酚靛酚所能氧给维生素C 的毫克数（K ）。

2、样品的测定：

取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml ，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 10。

（三）结果计算

根据实验数据计算出每100g 样品的维生素C 含量：

维生素C （mg/100g 样品）=123()V V K V

W V -⨯⨯⨯×100

式中： V 1为滴定样品液所用去染料体积（ml ）;

V 2为滴定空白所用去染料体积（ml ）;

V 3为样品测定时所用滤液体积（10ml ）;

为样品提取液的总体积；

K 为1毫升染料能氧化维生素C 的量（mg ）;

W 为称取样品重量(g )。

五、注意事项

1．滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能特将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C 弱。

2．滴定所用染料要在1~4ml 之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。

3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe 2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe 2+不会很快与染料起作用。

4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。

5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C 的生理作用，但不能将2，6一二氯酚靛酚还原脱色。

6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土AI （OH ）3乳液进行脱色过滤后再滴定。

（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。

六、实验报告

七、保留每次测定的有效数据，计算样品维生素C 的含量并讨论分析结果的准确性，科学

性。

七、思考题

1、要测得准确的维生素C值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？

2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什幺不能暴露在光下？

3、试简述维生素C的生理意义。

富含维生素c的水果有鲜枣、猕猴桃、山楂、柚子、草莓、柑橘等，而平时常吃的苹果、梨、桃、杏、香蕉、葡萄等水果的维生素c含量甚低。富含胡萝卜素的水果芒果是含胡萝卜素最多的水果。柑橘、黄杏、菠萝等黄色水果中也含有少量胡萝卜素。