植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力

生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根 所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、 苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。 所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系 活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套；
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三 角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放 1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显 地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h=
四氮唑还wk.baidu.com量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频 保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配
现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
实验4
氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系 活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无 色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水 的三苯基甲替（TTF），如下式：
根系活力测定：把根取出，吸干水分后与乙酸乙 酯3～4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出 TTF。把红色提出液过滤后移入10ml刻度试 管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆 移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml， 用分光光度计在485nm下比色，以空白作参 比读出光密度，查标准曲线，求出四氮唑还原 量。
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸乙 4 酯（ml)
OD(485 nm)
2 3 4 5 6 空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
按下表制作 T T F标准曲线。以空白作参比，在 485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。
漏斗； 量筒； 移液管；试管； 刻度试管 10ml； 试管架； 药勺； 石英砂适量； 烧杯； 小培养皿；洗瓶。
二、材料、设备仪器及试剂
（三）试剂： 1. 乙酸乙酯 2. 次硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉） 3. 1mg/ml的TTC溶液： 4. 磷酸缓冲液（66mmol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸： 6. 0.4mol/L琥珀酸：