常用培养基的配方精修订

常用培养基的配方标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]

伊红美蓝培养基

原理

一般用来鉴定大肠杆菌。

伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。

当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。

常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。

用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌

步骤如下：

①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。

③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。

④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。

⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。

配置方法

蛋白胨 10g

乳糖 10g

磷酸氢二钾 2g

琼脂 20~30g

蒸馏水 1000ml

2%伊红水溶液 20ml

0.5 %美蓝水溶液 13ml

储备培养基的制备

先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

制法

将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

麦康凯培养基

原理

1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯

2.一种用于分离鉴定的培养基，杆菌在其上呈红色或，有的菌落只是中间红色。

配置方法

蛋白胨17g

脙胨3g

猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g

氯化钠5g

琼脂17g

蒸馏水1000mL

乳糖10g

0.01%结晶紫水溶液 10mL

0.5%中性红水5mL

麦康凯-制法

1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃灭菌15min备用。

2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。

注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

吲哚试验

吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。

LB培养基

配方

1g提取物0.5g1g1.5-2g 100ml

LB培养基-LB培养基条件

LB培养基-固态培养基

LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。

LB固体培养基倒板

1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉

2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。

4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。

牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂）

配方

10g；3g ；5g；15～20g；1000mL；

制法

将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。

甲基红试验

甲基红试验-化学属性

甲基红（Methyl Red）试验

肠杆菌科各菌属都能发酵，在分解葡萄糖过程中产生，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH 值下降至pH4.5以下，使甲基红变红。

甲基红试验-试验方法

挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1°C或30°C （以30°C较好）3~5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂

1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定。

甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4~6.0，其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养，重复。

尿素酶

某些能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35℃孵育18~24h，观察结果。红色为阳性，不变为阴性。主要用于肠杆菌科变形、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。

明胶液化

gelaune liquefaction指把的现象。

明胶液化-它的特征