从鸡蛋清中提取溶菌酶
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溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，鸡蛋(含 量约为2%～4%)和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的主要来 源，目前，溶菌酶仍属于紧销的生化物质， 鸡蛋的 蛋清中含有丰富的上述物质，本实验以鸡蛋蛋清为原 料，对溶菌酶进行提取并分离纯化。
溶菌酶常温下在中性盐溶液中具有较高天然活性 ， 在中性条件下溶菌酶带正电荷，因此在分离制备时， 先采用等电点法粗分离，再用DE-52纤维素离子交换 色谱和葡聚糖G50凝胶层析分离纯化。
溶菌酶的用途 ：
溶菌酶是生物体内广泛存在的一 种能分解黏多糖的水解酶。能是革 兰阳性菌细胞壁溶解，从而发挥抗 菌作用。有抗菌、抗病毒、止血、 消肿、加速组织功能恢复及增强抗 生素疗效等作用。 临床主要用于慢性鼻炎、急慢性咽 喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹
和扁平疣等。
医学课件ppt
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【试剂配制】
冰醋酸、 5mol/L NaOH、20%磺基水杨酸 溶液、 考马斯亮蓝染色液、 脱色液： 450mL甲醇：水（1：1）、50mL冰醋酸 、 0.02 mol/L PBS( pH8.0)
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【实验步骤】
1.溶菌酶的粗提取（约两个半小时）
拿3个鸡蛋破壳取蛋清置于250mL烧杯中，轻轻 搅拌5分钟，使其的稠度均匀，然后用两层纱布 过滤，去除脐带和蛋壳。记录其体积V1
取清液装在10mL离心管中 -20℃冻存备用。（样品S1）
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2.溶菌酶的分离纯化
（1）DE-52初次纯化溶菌酶 ① DE-52纤维素的处理 ②装柱
③ 加样、洗脱
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（2）葡聚糖G50再次纯化溶菌酶
① 凝胶的处理 ② 装柱 ③ 加样、洗脱
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【注意事项】
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【材料与仪器】
鸡蛋3个 DE-52纤维素 葡聚糖G50
0.5*7cm色谱柱、2.5*20cm色谱柱、烧 杯(100ml,250mL，1000mL)、锥形瓶 (100ml)、玻璃棒、漏斗、定性快速滤纸 、纱布、量筒（100mL,250 mL，1000 mL）、10 mL 离心管、1.5mL Ep管、高 速离心机、冰箱、电炉
加入1.5倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌均匀
用冰醋酸调pH4.7左右，充分搅拌
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3500rpm，离心20min 弃沉淀，转移上清至烧杯中
加入1倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌 均匀，并用5mol/L NaOH调pH8.0
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滤纸过滤，取清液，测量并记录体积V2
从鸡蛋清中提取溶菌酶
制作者：
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1ห้องสมุดไป่ตู้
目录
1、溶菌酶的含义 2、溶菌酶的理化性质 3、溶菌酶的提取及分离 4、溶菌酶的用途
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什么是溶菌酶？
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质 聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏
多糖的碱性酶。
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3
溶菌酶的物理性质：
白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶 于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适 pH值6.5。稳定性：酸性介质中可稳定 存在，碱性介质中易失活。存储条件为 2-8摄氏度。
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4
溶菌酶的化学性质：
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5
溶菌酶的结构 医学课件ppt
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一:【实验目的】
1. 熟练掌握离子层析分离纯化溶菌酶的原 理以及离子交换层析的操作方法
2. 理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）测 定蛋白质纯度与分子量的原理
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二:【实验原理】
溶菌酶是一种有效的抗菌剂，全称为1,4-β-N-溶 菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。 是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基 葡萄糖与N-乙酰胞壁酸间的β-1，4糖苷键，由129氨 基酸残基构成，由于其中含有较多碱性氨基酸残基， 所以其等电点高达10.8左右，最适温度为50℃，最适 PH为6～7左右。
1.等电点沉淀后利用离心的办法，要尽量除去沉淀 ；
2.调节pH时要避免局部过酸； 3.提取过程中尽量避免泡沫的产生 4．加样蛋白浓度低于20 mg/mL，上样体积小于柱
体积的1/3。 5. 在整个实验过程中，流速必须得到一定的控制。
控制流速为2mL/min。 6．冲平过程一定不能省。
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溶菌酶常温下在中性盐溶液中具有较高天然活性 ， 在中性条件下溶菌酶带正电荷，因此在分离制备时， 先采用等电点法粗分离，再用DE-52纤维素离子交换 色谱和葡聚糖G50凝胶层析分离纯化。
溶菌酶的用途 ：
溶菌酶是生物体内广泛存在的一 种能分解黏多糖的水解酶。能是革 兰阳性菌细胞壁溶解，从而发挥抗 菌作用。有抗菌、抗病毒、止血、 消肿、加速组织功能恢复及增强抗 生素疗效等作用。 临床主要用于慢性鼻炎、急慢性咽 喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹
和扁平疣等。
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【试剂配制】
冰醋酸、 5mol/L NaOH、20%磺基水杨酸 溶液、 考马斯亮蓝染色液、 脱色液： 450mL甲醇：水（1：1）、50mL冰醋酸 、 0.02 mol/L PBS( pH8.0)
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【实验步骤】
1.溶菌酶的粗提取（约两个半小时）
拿3个鸡蛋破壳取蛋清置于250mL烧杯中，轻轻 搅拌5分钟，使其的稠度均匀，然后用两层纱布 过滤，去除脐带和蛋壳。记录其体积V1
取清液装在10mL离心管中 -20℃冻存备用。（样品S1）
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2.溶菌酶的分离纯化
（1）DE-52初次纯化溶菌酶 ① DE-52纤维素的处理 ②装柱
③ 加样、洗脱
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（2）葡聚糖G50再次纯化溶菌酶
① 凝胶的处理 ② 装柱 ③ 加样、洗脱
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【材料与仪器】
鸡蛋3个 DE-52纤维素 葡聚糖G50
0.5*7cm色谱柱、2.5*20cm色谱柱、烧 杯(100ml,250mL，1000mL)、锥形瓶 (100ml)、玻璃棒、漏斗、定性快速滤纸 、纱布、量筒（100mL,250 mL，1000 mL）、10 mL 离心管、1.5mL Ep管、高 速离心机、冰箱、电炉
加入1.5倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌均匀
用冰醋酸调pH4.7左右，充分搅拌
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3500rpm，离心20min 弃沉淀，转移上清至烧杯中
加入1倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌 均匀，并用5mol/L NaOH调pH8.0
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滤纸过滤，取清液，测量并记录体积V2
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制作者：
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1、溶菌酶的含义 2、溶菌酶的理化性质 3、溶菌酶的提取及分离 4、溶菌酶的用途
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什么是溶菌酶？
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质 聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏
多糖的碱性酶。
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溶菌酶的物理性质：
白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶 于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适 pH值6.5。稳定性：酸性介质中可稳定 存在，碱性介质中易失活。存储条件为 2-8摄氏度。
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溶菌酶的化学性质：
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一:【实验目的】
1. 熟练掌握离子层析分离纯化溶菌酶的原 理以及离子交换层析的操作方法
2. 理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）测 定蛋白质纯度与分子量的原理
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二:【实验原理】
溶菌酶是一种有效的抗菌剂，全称为1,4-β-N-溶 菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。 是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基 葡萄糖与N-乙酰胞壁酸间的β-1，4糖苷键，由129氨 基酸残基构成，由于其中含有较多碱性氨基酸残基， 所以其等电点高达10.8左右，最适温度为50℃，最适 PH为6～7左右。
1.等电点沉淀后利用离心的办法，要尽量除去沉淀 ；
2.调节pH时要避免局部过酸； 3.提取过程中尽量避免泡沫的产生 4．加样蛋白浓度低于20 mg/mL，上样体积小于柱
体积的1/3。 5. 在整个实验过程中，流速必须得到一定的控制。
控制流速为2mL/min。 6．冲平过程一定不能省。
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