ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程(盐水法)#(精选.)

ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程（盐水法）

一．目的

规范ABO/Rh (D) 血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性及有效性。

二．职责

血库技术人员负责ABO和Rh (D) 血型鉴定。

三．适用范围

适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。

四．所需材料和设备

1.材料

抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。

2.设备

普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。

五．操作步骤

1.将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。

2.取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。

3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红

细胞悬液1滴，混匀。

4.以1000r/分钟离心1分钟。

5.将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。

6. ABO血型结果判定（见下表）：

ABO血型结果判断

分型试剂+受检者红细胞（正定型）

受检者血清+试剂红细胞（反定型）

抗-A 抗-B A细胞 B细胞 O细胞血型

注：“＋”凝集；“－”不凝集

7.Rh（D）血型判定：红细胞与抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性

无凝集为Rh阴性。

8.凝集强度判断标准：

4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；

3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；

2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞；

1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；

±镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；

混合外观凝集（Mixed Field, MF）是指镜下可见少数红

细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；

－（阴性）镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

六．注意事项

1.单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外）每次使用前必须与相对应的红细胞和血清做阳性、阴性对照，以检测其活性。

2.观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或Cis（顺式）AB的发现。

3.人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中的抗体反应结果所决定，因此正反定型的结果应该一致。正反定型起到一个互相验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判定ABO血型。

4.反定型对ABO亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者细胞上A 或 B 抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。

5.如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在正定型试验中增加抗-A1、抗-AB及抗-H；反定型试验中增加A2、O及自身细胞。正定型试验中的抗-AB是用来确认弱A和弱B抗原，抗-A1用来鉴定A亚型，抗-H用于鉴定亚型及孟买型；反定型试验中的A2细胞用于鉴定A2亚型，O型细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影响型，

自身对照用于鉴定是否存在自身抗体影响定型。如果是O型细胞或自身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一步进行血型鉴定。

6.ABO正反定型不一致的原因：

（1）新生儿尚未形成ABO同种抗体，所以三个月内的新生儿只要求做正定型确定ABO血型。

（2）漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可造成假阴性、假阳性结果。

（3）器材不洁可产生假阳性结果。

（4）分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减弱，易误定血型。

（5）红细胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不适当，出现前带或后带现象，易误判为假阴性。

（6）受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或某些恶性肿瘤）以及类B或CisAB等，均可使

凝集反应强度减弱。

（7）受检者血清蛋白紊乱（如巨球蛋白血症）或实验温度过高，常引起细胞呈缗线状排列。

（8）受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏症，可引起正、反定型不符。

（9）各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体，或者患者血清中血型物

质过多，中和了相应抗体，可导致假阴性结果。

（10）由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。近期曾输过异型血，使患者血液标本成为不

同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝聚”现象。（11）嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”

现象。

（12）获得性类B 由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。

（13）药物等因素药物、右旋糖及静脉注射某些造影剂聚集而类似凝集。

（14）血清中有意外抗体，如自身抗-I，常干扰定型。

（15）老年人血清中抗体水平大幅度下降，影响反定型结果。

7.如果无法找到正反定型不一致的原因，患者又需要紧急输血，则只能给患者输注Rh（D）同型的O型红细胞（O型红细胞须正反定型相符），同时可请中心血站协助鉴定患者血型。

8.旧性血标本，红细胞要用生理盐水洗涤2至3次，配制悬液再行鉴定。

9.含有冷凝集素的患者血清，可采用37℃生理盐水洗涤3次，如果37℃还显弱凝集，再用42℃或45℃生理盐水洗涤1次，再进行血型鉴定。

10.自身免疫性温抗体产生的非特异性凝集患者，采用递增温度22℃→37℃→45℃的生理盐水洗涤红细胞后作血型鉴定，或者采用放