高效液相色谱系统ppt讲解
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高效液相色谱仪ppt课件
8
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
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根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
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2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高效液相色谱法 PPT课件
①固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt
色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 ： 190 ～ 800mm ， 钨灯，氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
高效液相色谱法培训PPT课件
chromatography）。
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手性色谱(chiral chromatography) 用于分离手性药物对映体的一种有效技 术，可分为直接法和间接法两类： 直接法 手性固定相法（chiral stationary phase;CSP) 手性流动相法(chiral mobile phase additive;CMPA) 间接法—手性试剂衍生化法 chiral derivatization reagent,CDR)
离子对色谱（ion pair chromatography）— —将反离子加入流动相中，与呈解离状态的被 测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物， 从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度， 改善分离效果，达到分离目的。
常用反离子有：季铵盐 ——用于酸类 烷基磺酸盐——用于碱类
5
离子色谱法（ ion chromatography ） 离子色谱是由经典的离子交换色谱 发展起来的一种液相色谱技术，利 用物质在离子交换柱上迁移的差异 而达到分离，用于亲水性阴阳离子 的测定。根据是否采用抑制柱，可 分为抑制型离子色谱和非抑制型离 子色谱。
本法中流动相在检测前已蒸发，故梯度 洗脱基线稳定。
45
喷雾 蒸发 检测
色谱柱流出物
N2
组分的 气溶胶
溶剂 光 源
泵
水不注
、 醋 酸 。
能 含 缓 冲 盐 ， 若 调 节
意
： 流 动 相 必 须 是 挥
pH
发
可性
用的
氨，
46
质 谱 检 测 器
47
Flu
10%
Ms
1%
other 4%
Conduc 5%
1
第一节 概述
8
手性色谱(chiral chromatography) 用于分离手性药物对映体的一种有效技 术，可分为直接法和间接法两类： 直接法 手性固定相法（chiral stationary phase;CSP) 手性流动相法(chiral mobile phase additive;CMPA) 间接法—手性试剂衍生化法 chiral derivatization reagent,CDR)
离子对色谱（ion pair chromatography）— —将反离子加入流动相中，与呈解离状态的被 测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物， 从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度， 改善分离效果，达到分离目的。
常用反离子有：季铵盐 ——用于酸类 烷基磺酸盐——用于碱类
5
离子色谱法（ ion chromatography ） 离子色谱是由经典的离子交换色谱 发展起来的一种液相色谱技术，利 用物质在离子交换柱上迁移的差异 而达到分离，用于亲水性阴阳离子 的测定。根据是否采用抑制柱，可 分为抑制型离子色谱和非抑制型离 子色谱。
本法中流动相在检测前已蒸发，故梯度 洗脱基线稳定。
45
喷雾 蒸发 检测
色谱柱流出物
N2
组分的 气溶胶
溶剂 光 源
泵
水不注
、 醋 酸 。
能 含 缓 冲 盐 ， 若 调 节
意
： 流 动 相 必 须 是 挥
pH
发
可性
用的
氨，
46
质 谱 检 测 器
47
Flu
10%
Ms
1%
other 4%
Conduc 5%
1
第一节 概述
高效液相色谱分析 教学PPT课件
四、离子交换色谱
此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结 合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既 适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、 氨基酸、核酸等。
1. 原理：利用不同待测离子对固定相的亲和能力 （或离子交换能力）的差别来实现分离的。
阳离子交换: R - SO-3H M R SO-3M H
从速率理论各项的差别看HPLC与GC的区别
H A B Cu u
1）涡流扩散项A 2）分子扩散项 B/u
A=2dp B=2Dl
3）传质阻力项
包括固定相传质阻力系数和流动相传质阻力系数
Hs
Cs df2 Ds
u
Hm
Cm
d
2 p
Dm
u
Hsm
Csm d p2 Dm
u
改进固定相成为提高液相色谱柱效的一个重要问题
惰性核
薄膜型
表面多孔型
四、排阻色谱法固定相
• 软质凝胶：水为流动相，孔径大小由交联剂控制 • 半硬质凝胶：适用于非极性有机溶剂，不能随意 更换溶剂，能耐较高压力，流速不宜大
• 硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠；多孔硅胶化学 稳定性好，热稳定性好，机械强度高，吸附问题需 要进行特殊处理。
• 选择填料时首先要考虑相对分子质量排阻极限
三、离子对色谱法（IPC）
主要用来分离强极性有机酸和有机碱。
原理：将与待测物离子A电荷相反的离子B（称为 对离子或反离子）加入到流动相中，使待测离子 与对离子形成离子对AB，该AB离子对的性质与A 离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子 的保留特性。
还可借助离子对的生成给试样引入紫外吸收活发 荧光的基团，以提高检测的灵敏度。
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定 相, 现多为化学键合固定相（通过化学反应将有机 分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、 流失小、适于梯度淋洗等特点 ）。
高效液相色谱系统PPT课件
荧光检测器
❖ 原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 ❖ 优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一
2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 ❖ 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 ❖ 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸 、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）
示差折光检测器
行参数。 • 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确
LC-5510柱温箱
技术指标： • 温度控制范围：5～80℃ • 温度控制精度：±0.2℃ • 温度设定值误差： ±0.5℃
LC-5510柱温箱
功能特点： • 控温精度准确 • 分析结果重现性好 • 保证检测稳定性 • 采用LCD带背光的显示屏来显示柱温的设
• 管路与连接件 • 脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器 • 过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器 • 进样器：平头进样器
不同材质的管路
• 不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度， 一般用于高压部分
• 聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶 到泵、检测器出口以后和进样器排液口等 低压部分
• PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高 性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜 于生物样品的分离分析
工作站
数据采集系统 功能： 采集处理数据
目标： 使用便捷 功能完善
梯度洗脱
●HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient) 洗脱两种方式
等度洗脱是在同一分析周期内流动相组 成保持恒定，适合于组分数目较少，性质 差别不大的样品
梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制 流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度 和pH值等，用于分析组分数目多、性质差 异较大的复杂样品
气机使用方便、省事，尤其是在作梯度洗 脱时最好用在线脱气机。
高效液相色谱HPLC简介.ppt
种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不
同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
2
操作过程图示
3
色谱分离的机理
分离是一个 物理的过程。
固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 样品 (溶解于流动相中的溶质)
4
项目 进样方式 流动相 分离原理 检测器
14
液-液分配色谱
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性 （反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的 游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。
15
液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。
16
色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2） 和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离 的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色 谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯 甲烷等。
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检测器简介（二）
◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、 灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。
高效液相色谱法教学精【全】ppt课件
§1-3 色谱柱的分离效率
一、塔板理论 塔板理论认为: 一根柱子可以分为n
段，每段内组分在两相间迅速达到平衡， 把每一段称为一块理论塔板。
设柱长为L，理论塔板高度为H，则
H=L/Ｎ
Ｎ为理论塔板数。
理论塔板数一N
①色谱峰对称 ： N 16(tR )2
说明：
tW
a. 在给定的操作条件下，N几乎相同
三、高效液相色谱法的特点
高压: 以液体作为流动相，液体流经色谱柱时，
受到阻力较大 必须对流动相施加高压。 一般可达到150～300kg／cm2， 甚至可达700kg／cm2以上。
高速:
分析时间较经典液相色谱少得多（交 换速度快），一个复杂样品的分析仅需几 分钟到几十分钟。
高效:
气相色谱的分离效能很高，高效液相 色谱的柱效则更高（化学键合相），一般 约可达 6000理论塔板／米
②一定色谱条件下，对k’有差异的组
分，则柱效愈高，分离效果愈好。
塔板理论的特点和不足：
(1)当L一定时，N 越大(H 越小)，被测组
分在柱内被分配的次数越多，柱效越 高，所得色谱峰越窄。 (2)柱效不能表示被分离组分的实际分离
效果：如两组分的分配系数K 相同，
无论该色谱柱的柱效多大，都无法 分离。
① 柱效较高，ΔK(分配系数)较大，完全分离。 ② ΔK 不是很大，柱效较高，峰较窄，基本分离。 ③ 柱效较低，ΔK 较大，但分离的不好。 ④ ΔK 小，柱效低，分离效果更差。
一．分离度的数学表达式：
Rs
2(tR 2 tR1 ) W2 W1
2(tR 2 tR1 )
1.699 [Y1/ 2(2) Y1/ 2(1) ]
于世林编著)
第一章 高效液相色谱法基本原理 §1－1 概述 一、色谱法
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Agilent
1100 型
0.001~10 0.001~10
LC-10ATvp 型
Elite P200 II型
LC-5500 型
0.001~9.99 9
0.01~4.99
0.01～ 4.99
检定 要 求
调节精度
0.001
0.001
0.001
0.01
0.01
流量精密度 流量准确度
RSD 0.1%
0.15% （<0.3 0.3% %）
LC-5500紫外-可见光检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±2nm • 波长重复性:优于2nm • 基线噪声：±1×10-4AU • 基线漂移：±5×10-4AU/h • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜4×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
等度洗脱是在同一分析周期内流动相组 成保持恒定，适合于组分数目较少，性质 差别不大的样品
梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制 流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度 和pH值等，用于分析组分数目多、性质差 异较大的复杂样品
梯度洗脱
低 压
B AC
梯D
度 比例阀
高压输 液泵
阻尼器 混合器
进样器
色谱柱
检测器
• 通用型检测器（适合 于挥发性比流动相低 的任何组分）；响应 值与组分质量有关； 可用于梯度洗脱
样品液滴
HPLC柱 喷雾气体 蒸发漂移管
激光光源
散射室 光二极管检测器
工作站
数据采集系统 功能： 采集处理数据
目标： 使用便捷 功能完善
梯度洗脱
●HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient) 洗脱两种方式
不同材质的管路
• 不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度， 一般用于高压部分
• 聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶 到泵、检测器出口以后和进样器排液口等 低压部分
• PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高 性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜 于生物样品的分离分析
液路连接件
• 连接件也称接头 • 一般可分为两种：高压接头和低压接头
2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸 、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）
示差折光检测器
原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试 样中各组分浓度。
优点：通用型检测器， 缺点： 1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3）属于中等灵敏度的检测器
行参数。 • 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确
LC-5500高效液相色谱仪主机
主机包括两部分： • 柱温箱 • 紫外-可见光检测器
LC-5500柱温箱
技术指标： • 温度控制范围：室温＋10～80℃ • 温度控制精度：±1℃ 功能特点： • 控温精度准确 • 更换色谱柱方便 • 分析结果重现性好 • 保证检测稳定性
进样器原理－六通阀
手动进样器－六通阀
• 一般HPLC分析常用六 通进样阀（以美国 Rheodyne公司的7725 和7725i型最常见），其 关键部件由圆形密封垫 （转子）和固定底座 （定子）组成。耐高压 （35~40MPa），进样 量准确，重复性好，操 作方便
分离系统 功能： 组分分离 目标： 分辨力强 效率高
LC-5500紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度准确 • 能够实现多波长测定
LC-5500工作站
功能特点： • 具有仪器控制系统、数据采集和处理系统； • 可进行波长程序控制 • 可设定柱温 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱
LC-5510
高效 液相 色谱
仪
LC-5510 在线脱气机
色谱柱
液相色谱柱是高效液相 色谱仪的核心部分，是 分析好坏、成败的关键
键合相色谱柱
• 键合相: – 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 <5%, – 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH – 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10%
• 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 • C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。
行参数。 • 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确
LC-5510柱温箱
技术指标： • 温度控制范围：5～80℃ • 温度控制精度：±0.2℃ • 温度设定值误差： ±0.5℃
LC-5510柱温箱
功能特点： • 控温精度准确 • 分析结果重现性好 • 保证检测稳定性 • 采用LCD带背光的显示屏来显示柱温的设
LC-5500高压输液泵
主要特点 • 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运
动曲线，保证输出液体流速稳定 • 精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定
性 • 压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害 • 性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲 • 采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运
高效液相色谱系统
——ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ相色谱培训（二）
液相色谱流程图
储液瓶
高压泵
色谱柱
检测器
色谱工作站
进样器
高压输液泵
柱
输液系统功能： 溶剂输送
目标： 稳定 准确
双柱塞往复式并联泵
重要指标： 耐压能力 压力脉动 流量精密度 柱 流量准确性
双柱塞往复式串联泵
各品牌输液泵的基本参数
项目 流速范围
Waters 515型
置和运行温度 • 既可升温也可降温，能满足一些特殊用户
的需求
LC-5510紫外-可见光检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±0.2nm • 波长重复性:优于0.2nm • 基线噪声：±6×10-5AU（动态，254nm） • 基线漂移：±2.5×10-4AU/h（动态，254nm） • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜1×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗提 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
二极管阵列检测器
样品池 D2 / W 灯
光栅
每一组分可在每一波 长处得到一吸光度值
二极管阵列
二极管阵列检测器
二极管阵列检测器的优点
1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰
• 所用的溶剂纯度要求高 • 所用的溶剂要彻底脱气，防止混合时产生
气泡 • 混合溶剂的黏度常随组成而变化，因而在
梯度洗脱时常出现压力变化 • 每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处
理，使其恢复初始状态
高效液相色谱的配件
• 管路与连接件 • 脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器 • 过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器 • 进样器：平头进样器
检测器
• 紫外检测器（包括二极 管阵列检测器）
• 荧光检测器 • 示差折光检测器 • 电导检测器 • 蒸发光散射检测器
重要指标：
噪声、漂移、线性、检出限
功能： 检测组分浓度
目标： 准确 检出限低
紫外检测器
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光 的选择性吸收
定量基础：朗伯-比耳定律，A＝KCL 优点： 1）灵敏度高
过滤装置
溶剂过滤器 • 为了除去流动相中的杂质，对流动相进行过滤 • 溶剂过滤器要配滤膜（有机系和水系，规格
0.45μm或更小孔径的滤膜） 针筒式过滤器 • 样品溶液在进入色谱系统前必须经过针筒式过滤
器 • 针筒式过滤器也分为有机系和水系，规格0.45μm
或更小孔径的
进样器
• 液相色谱的进样器必须是平头进样器 • 常配的进样器规格为10、25、50、100 μL • 最常使用的为50 μL和100 μL的进样器
高
高压输 液泵
压
梯 高压输
度 液泵
进样器
梯度混合器
色谱柱
检测器
梯度洗脱的特点
• 优点
– 缩短分析时间 – 增加分离能力 – 提高检测灵敏度
• 缺点
– 仪器设备要求高 – 不适合某些检测方式(RI) – 柱需再生平衡 – 定量分析的重复性较低
梯度洗脱注意的问题
• 注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能 用作梯度洗脱的流动相
LC-5510紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度高 • 噪声低漂移小 • 可用汞灯自动校正波长 • 采用LCD带背光的显示屏来显示波长的设
置参数和运行参数
LC-5510工作站
功能特点： • 具有色谱仪控制系统、数据采集和处理系
统； • 可进行波长程序控制 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱 • 功能健全，操作便捷
高压接头采用不锈钢材质 低压接头采用高聚物材质 • 连接件主要有卡套和空心螺钉
液路连接密封示意图
液路连接装配不合适的示意图
脱气装置
超声波清洗器 • 通过超声波作用使流动相中的气泡排除，
超声脱气效率只有20％～30％左右
在线脱气机 • 脱气效果好，脱气效率大于70％，在线脱
气机使用方便、省事，尤其是在作梯度洗 脱时最好用在线脱气机。
电导检测器
原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的 电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离 子色谱法
优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可 用于梯度洗脱
缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率 增加2%-2.5%)
主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子
蒸发激光光散射检测器（ELSD）
LC-5100高压输液泵
主要特点 • 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运