放线菌的形态观察.

实验四放线菌的形态观察

、目的要求

1.学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。

2.了解放线菌的形态特征和繁殖方式。

二、基本原理

放线菌是由纤细的有分枝的菌丝构成，菌丝体为单细胞原核微生物。大多数放线菌的菌丝分化为营养菌丝和气生菌丝两部分。营养菌丝深入培养基中生长，气生菌丝则生长在培养基的表面，并向空中伸展。因此用普通方法制片，往往很难观察到放线菌的整体形态。必须采用适当的培养方法，以便将自然生长的放线菌直接置于显微镜下观察。通常采用的方法有玻璃纸培养法、插片法和印片法。

三、材料及器材

1. 菌种：细黄链霉菌（5406 放线菌）

2.溶液和试剂：吕氏美蓝染液

3.仪器及其他用具：盖玻片，载玻片，擦镜纸，接种环，显微镜，剪刀，镊子，吸管，玻璃涂布棒，玻璃纸等。

四、方法与步骤

（一）插片法

1.取一淀粉琼脂培养基平板，用接种环将菌种在琼脂平板上划线接种，然后用无菌镊子将灭菌的盖玻片以大约45°角插人琼脂内（插在接种线上，插片数量可根据需要而定。

2.倒置培养，28C, 3〜5天。

3.用镊子小心取出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。

（二）玻璃纸法

1.以无菌操作用镊子将已灭菌的小块玻璃纸片铺在琼脂淀粉培养基表面，用无

菌涂布棒将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面，不留气泡，每个平板可铺5〜10 块玻璃纸。

2.用接种环挑取菌种斜面培养物在玻璃纸上划线接种。

3.平板倒置，28C,培养3〜5天。

4.镜检在载玻片上加一小滴水，用镊子小心取下玻璃纸片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上，中间不要有气泡，直接镜检。

（三）印片法

用一洁净盖玻片，平放在培养皿中放线菌的培养物上，轻轻按压一下，取出盖玻片，将印有放线菌的一面朝下，放置在加有一滴美蓝染液的载玻片上，观察孢子丝和孢子。

五、实验作业及实验报告

（一）结果绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。

（二）思考题

1.试比较3种培养和观察放线菌方法的优缺点。

2.玻璃纸法是否适用于其他类群微生物的培养和观察?为什么?

3.放线菌的菌体为何不易挑取？六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室