蛇葡萄素乳凝胶剂的制备及其质量控制

・　７Ｏ　・　福建医药杂志２０１２年２月第３４卷第１期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ。Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１２，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．１　

蛇葡萄素乳凝胶剂的制备及其质量控制　福建省福州市传染病医院制剂室（福州３５００２５）　黄德福　黄仁杰　【摘　要】　目的　制备蛇葡萄素凝胶剂并建立其质量控制的方法。方法　通过单因素考察法筛选处方工艺，并进行质　量控制。结果蛇葡萄素凝胶剂制备可选用３％海藻酸钠溶液与１　无水氯化钙溶液为基质，二甲基亚砜为增溶剂，维生素　Ｃ为抗氧剂。结论　本法制备蛇葡萄素凝胶剂的工艺简单可行，质量稳定可控。　【关键词】蛇葡萄素；乳凝胶剂；质量控制　【中图分类号】Ｒ９３１．７１　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１００２—２６００（２０１２）０１—００７０—０３　

蛇葡萄素又名二氢杨梅素，属二氢黄酮醇类化　合物，系葡萄属显齿蛇葡萄植物～一藤茶的主要活　性成分。其具有广泛药理作用，如抗菌、消炎、降　血脂、抗氧化等作用，因此极具开发潜力［１］。但目　前相关文献报道主要集中在药理活性与提取方法等　的研究，尚未见该药物被成功开发成产品用于临床　的报道ｌ２］。本研究拟开发外用给药的蛇葡萄素制　剂，考虑到其在水溶液中稳定性较差，易发生氧化　反应，而在油相中稳定性较好。。］，故选用同样具有　多种外用功效的茶油为油相ｌ４］，将其制成水包油型　乳凝胶剂，使蛇葡萄素主要分布于茶油中，在提高　稳定性的同时发挥协同作用。　１仪器与试剂　１．１　仪器：ＬＣ一１０ＡＴ型高效液相色谱仪（苏州岛　津制造）；ＳＨＢ－Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城　科工贸有限公司）；ＳＹ３２００一Ｔ超声波清洗器（上海　声源超声波仪器设备有限公司）；ＴＧＬ一１６Ｇ型离心　机（上海安亭科学仪器厂）；ＸＨＦ一工高速分散器　（宁波新芝生物科技股份有限公司）；ＳＨＡ—Ａ水浴　恒温振荡器（江苏金坛市环宇科学仪器厂）；ＡＥＧ一　２２０电子天平（岛津制作所）；ＨＨ—ＢＨ一４２０电热恒　温培养箱（福州台江医疗器械厂）。　１．２试剂：蛇葡萄素（二氢杨梅＞９８　，张家界　生力生物有限公司）；茶油（龙岩云岭山茶油有限　公司）；海藻酸钠（上海化学试剂站分装站）；二甲　基亚砜（ＤＭＳｏ，辽宁省本溪创科医药化工有限公　司），甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司）；其　他试剂均为分析纯，水为纯化水。　２方法与结果　２．１　乳凝胶制备：取茶油１　ｇ，ＤＭＳＯ　０．３　ｇ，吐　温一８０　２　ｇ，置水浴加热至７Ｏ℃，加入十八醇０．５　１　福建卫生职业技术学院药学系，通信作者　ｇ，边加热边搅拌至完全溶解，加入蛇葡萄素１５０　ｍｇ搅拌至完全溶解；另取丙二醇２　ｇ，３　海藻酸　钠水溶液５　ｍＬ，加热至７Ｏ℃后，按０．２　加入维　生素Ｃ；将油相加入水相中，高速分散１０　ｍｉｎ，加　入１　无水氯化钙３　ｍＬ，高速分散即得。　２．２乳化剂筛选：根据蛇葡萄素在不同乳化剂中　溶解度的大小，通过单因素考察法，优选最佳乳化　剂。选取常用的水包油型乳化剂吐温一８０、吐温一２０、　乳化剂ＯＰ分别于离心管中，加入蛇葡萄素适量，　置于水浴恒温振荡器中（１００　ｒ／ｍｉｎ，２５℃）振荡　２４　ｈ。离心后各取１００肚Ｌ于１０　ｍＬ容量瓶中，甲　醇定容，ＨＰＬＣ法测定含量。经比较，各乳化剂中　蛇葡萄素的溶解度大小顺序分别为：乳化剂ＯＰ＞　吐温一８０＞吐温一２Ｏ。但实验中发现应用乳化剂ＯＰ　的制剂，在高速离心１３　ｍｉｎ后出现分层现象，而　应用吐温一８Ｏ的制剂高速离心３０　ｍｉｎ未见分层现　象，说明后者乳化性能更好，故选择吐温一８Ｏ作为　乳化剂。同法比较了常用的辅助乳化剂ＰＥＧ４００，　１，２一丙二醇，丙三醇，正丁醇中蛇葡萄素的溶解　度大小，其结果为１，２一丙二醇＞正丁醇＞丙三醇＞　ＰＥＧ４００。初步选择１，２一丙二醇作为辅助乳化剂。　２．３凝胶基质的筛选：常用凝胶基质有卡波姆、　ＰＥＧ４０００、羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ—Ｎａ）、海藻酸　钠等。本实验曾选用卡波姆为基质，但需加入三乙　醇胺等碱性物质进行胶凝反应，由于蛇葡萄素在碱　性条件下不稳定，易氧化变色故不宜选用。而以　ＰＥＧ４０００为基质的处方不易形成凝胶状，且有明显　的油腻感，而ＣＭＣ—Ｎａ形成凝胶不够细腻。经筛选　以海藻酸钠与无水氯化钙混合后较易形成凝胶，并　通过单因素考察不同浓度的海藻酸钠溶液对凝胶外　观及稳定性的影响，结果见表１，故选用３　海藻　福建医药杂志２０１２年２月第３４卷第１期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１２，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．１　酸钠溶液经１　氯化钙溶液处理后为基质。　表１　单因素考察海藻酸钠溶液的浓度（ｇ／ｍＬ）　

２．４　质量控制：（１）性状：本品为类白色半固体　凝胶，质地均匀细腻，稠度适宜。（２）ｐＨ值测定：　取样品０．２　ｇ，加蒸馏水２０　ｍＬ混匀，用ｐＨ计进　行测定。结果ｐＨ为５．Ｏ２，符合《中国药典》　（２０１０版）中有关局部外用制剂的相关规定。（３）　加速离心实验：取本品适量，２　５００　ｒ／ｒａｉｎ离心３０　

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空白乳凝胶　

・　７１　・　ｒａｉｎ未见分层现象，结果稳定。（４）耐热与耐寒试　验：取本品少量分别置于５５℃烘箱６　ｈ，一１５℃　冰箱２４　ｈ，均未见分层现象，结果表明制剂稳定。　２．５含量测定：ＨＰＬＣ色谱条件：　（１）流动相：　甲醇：水：磷酸（３５：６５：０．２）；（２）流速：０．７　ｍＬ／ｍｉｎ；（３）检测波长：２９２　ｎｍ；（４）柱温：室　温；（５）进样量：２Ｏ“Ｌ。　２．５．１　专属性实验：分别取适量的空白乳凝胶、　蛇葡萄素对照液、蛇葡萄素乳凝胶，加无水乙醇　后，超声振荡１０　ｍｉｎ，定容，３　５００　ｒ／ｍｉｎ离心３Ｏ　ｍｉｎ，取上清液１　ｍＬ，用无水乙醇稀释至１０　ｍＬ，　在上述色谱条件下，进样检测。如图１所示，空白　乳凝胶对蛇葡萄素的检测不产生干扰。　

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蛇葡萄素对照液　蛇葡萄素乳凝胶　图１　ＨＰＬＣ法专属性实验色谱图　

２．５．２工作曲线建立：取ｌＯ　ｍｇ蛇葡萄素对照品　于ｌＯ　ｍＬ容量瓶中，用甲醇定容。分别取８、１６、　２４、２８、３６、４２　Ｌ于１０　ｍＬ容量瓶中用甲醇稀　释。ＨＰＬＣ法测定峰面积，以峰面积为纵坐标，蛇　葡萄素浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程：　Ｙ一４３　８１２Ｘ一６　４９４（ｒ一０．９９９　８），表明蛇葡萄素　浓度在８～４２￣ｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好线性关　系。　２．５．３精密度（ＲＳＤ）试验：取上述对照品溶液，　重复进样６次，记录峰面积，计算的ＲＳＤ为　０．６４　，表明方法精密度良好。　２．５．４　回收率试验：取空白乳凝胶０．２　ｇ用适量无　水乙ｌ醇溶解，分别加入１　ｍｇ／ｍＬ蛇葡萄素对照液　１．８、２．２、２．６　ｍＬ配制成低中高３组不同的浓度，　每组取样３次。３　５００　ｒ／ｒａｉｎ离心３　ｍｉｎ，取上清液　１　ｍＬ用无水乙醇稀释后，ＨＰＬＣ法测定峰面积。　经计算，平均回收率为１００．６４　，ＲＳＤ为２．１７　。　２．５．５含量测定：精密称取样品适量用无水乙醇　溶解后，超声振荡１０　ｒａｉｎ后定容，３　５００　ｒ／ｍｉｎ离　心３　ｍｉｎ，取上清液１　ｍＬ，用无水乙醇稀释至１０　ｍＬ，ＨＰＬＣ法测定峰面积。结果３个批号的含量　分别为９６．８２　、１０１．８６　和９８．Ｏ８　，平均含量　９８．９２　，ＲＳＤ　２．６５　。　３讨论　实验中发现蛇葡萄素在茶油中溶解度较小，为　增加蛇葡萄素在油相中的溶解量，曾考虑添加其他　的油相成分，如加入单硬脂酸甘油酯但发现会导致　产生黑色物质，并随蛇葡萄素加入量增多而增多，　而正己酸等油类物质有明显的异味。故采用少量的　ＤＭＳＯ来增加油相中的溶解量，经考察发现能有效　增加蛇葡萄素在茶油中的溶解度。　蛇葡萄素在水相中易被氧化，但在酸性溶液中　・　７２　・　福建医药杂志２０１２年２月第３４卷第１期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１２，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．１　

稳定性稍好　］，故考察了亚硫酸氢钠和维生素Ｃ两　种常用水溶性抗氧剂，实验发现加入亚硫酸氢钠制　成的处方中，凝胶外观颜色随放置时间延长而逐渐　加深，而加入维生素Ｃ的处方，能够使样品静置两　周后颜色仍保持不变，故选用维生素Ｃ为抗氧剂。　本研究通过单因素考察法确定了吐温一８０为乳　化剂，１，２一丙二醇作为辅助乳化剂，３％海藻酸钠　溶液与１　无水氯化钙溶液为基质，ＤＭＳＯ为增溶　剂，维生素Ｃ为抗氧剂的处方稳定性最佳，经留样　观察３个月，未见异常。说明，本法制备的蛇葡萄　素凝胶剂工艺是简单可行的，质量是稳定可控的。　

参考文献　［１］董倩倩，陈立峰．二氢杨梅素药理研究进展［Ｊ］．中南药学，　２００５，３（５）：２９５－２９８．　Ｅ２］陈咏，黄仁杰，魏捷．蛇葡萄素的物化常数测定［Ｊ］．海峡药　学，２００７，１９（６）：６９—７０．　［３］刘德育，邓健杏，王炜，等．蛇葡萄素微囊的制备［Ｊ］．中药　材，２００３，２６（５）：３５５　３５７．　Ｅ４］马力，陈永忠．茶油的功能特性分析．中国农学通报ＥＪ］．　２００９，２５（８）：８２－８４．　［５］林淑英，高建华，郭清泉，等．二氢杨梅素的稳定性及其影响　因素［Ｊ］．无锡轻工大学学报，２００４，２３（２）：１７－２０．　

大孔吸附树脂纯化荷叶中黄酮苷的研究　天津市滨海新区塘沽中医医院（天津３００４５１）　赵静李碉　【摘要】　目的　比较几种不同型号的大孑Ｌ吸附树脂纯化荷叶中黄酮苷的性能，为利用大孔吸附树脂纯化荷叶中黄酮　苷优选出最佳工艺条件。方法　以荷叶中黄酮苷的醇提液为样本，分别在Ｄ－１０１、Ｄ－４０２０、ＡＢ－８、ＮＫＡ－９型４种树脂上进　行平行吸附试验，采用不同浓度的乙醇进行梯度洗脱，比较其吸附与解吸附性能，来选择最佳方案，确定方法的可行性。结　果树脂型号和乙醇浓度对提纯效果都有重要影响，其中乙醇浓度影响最大，采用梯度洗脱能提高荷叶中黄酮苷的纯化产　率。结论用大孔吸附树脂法纯化荷叶中黄酮苷可行。　【关键词】大孔吸附树脂；黄酮苷；吸附　【中图分类号】Ｒ２８４．２　【文献标识码】Ｂ　【文章编号１　１００２—２６００（２０１２）０１—００７２—０３　

中药精制是采用适当的方法和设备除去中药提　取液中杂质的操作，其目的是为了保证中药制剂的　疗效。中药精制的方法很多，如水提醇沉法、醇提　水沉法、盐析法、超滤法、酸减法、萃取法、大孔　吸附树脂法等，其中大孔吸附树脂法由于其优越的　性能被广泛应用。大孔吸附树脂对中药化学成分　（如生物碱、黄酮等）都具有良好的吸附作用。麻　秀萍等口　利用大孔吸附树脂对银杏叶黄酮的吸附研　究，表明ＡＢ一８树脂是一种对银杏叶黄酮吸附性能　优良的吸附剂。安彩贤等　用大孔吸附树脂分离纯　化葛根与山楂叶总黄酮、郭文勇等口　用大孔吸附树　脂吸附层析法提取淡豆豉中总异黄酮，王雅君等［４］　应用大孔吸附树脂吸附分离技术制备菟丝子总黄酮　的研究都表明大孔吸附树脂在一定条件下对黄酮有　良好的吸附作用。以上文献证实了大孔吸附树脂在　一定条件下对黄酮类成分不仅吸附快、解析度高，　而且具有吸附容量大、洗脱率高、树脂再生简化等　特点。本研究以中药荷叶中主要药效成分黄酮苷为　对象，通过选用几种具有代表性的大孔吸附树脂来　纯化荷叶的黄酮苷，比较这几种树脂的性能，以优　选提纯荷叶黄酮苷的最适宜树脂及最佳工艺条件，　为工业化生产中采用大孔吸附树脂法提纯荷叶中有　效成分提供参考。　１　实验材料　１．１仪器：ＤＵ一５３０紫外分光光度计（美国Ｂｅｃｋ—　ｍａｎ公司）；树脂柱（天津市天元玻璃仪器有限公　司）；电热恒温水浴锅（天津市中环实验电炉有限　公司）。　１．２试剂：荷叶（安徽毫州）；芦丁标准品（中国　药品生物制品检定所，批号：１０００８０—２００３０６）；大　孑Ｌ吸附树脂型号与来源：Ｄ一１０１型（天津农药股份　有限公司树脂分公司）、Ｄ－４０２０型、ＡＢ一８型、　ＮＫＡ－９型（南开大学化工厂）；黄酮显色剂：盐酸一　镁粉（实验室自备）。　１．３试剂配制：芦丁标准品溶液：精密称取芦丁　标准品１０．０　ｍｇ置于２５　ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水，　置水浴上微热使溶解，后加蒸馏水至刻度线定容、　摇匀，作为对照品溶液备用。