石蜡切片具体过程及操作步骤

石蜡切片具体过程及操作步骤

固定：

组织块大小：1.5×1.5×0.2 CM

固定液>4倍组织体积

福尔马林固定

市售为40%甲醛水溶液，应放入小量碳酸钠放置一段时间

福尔马林固定液：40%甲醛溶液1份，水9份

固定数小时后用水洗24小时

优点：克服了乙醇固定的缺点

脱水（组织块）

70%乙醇片刻

80%乙醇2-4小时

95%乙醇2-4小时

95%乙醇2-4小时

100%乙醇2-4小时

100%乙醇2-4小时

注：为保证100%乙醇无水，可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分，变蓝后更换。

最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明（组织块）

100%乙醇：二甲苯（1：1）15分钟

二甲苯15分钟

二甲苯15分钟

注意：时间太长变脆

浸蜡（组织块）

石蜡熔点52—56℃

温箱：56℃

二甲苯：石蜡（1：1）1-2小时

石蜡1-2小时

石蜡1-2小时

包埋

将熔化了的石蜡倾入包埋框内，随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内，平置底面。注意组织切面，放入冷水，冷固后将蜡块修齐，固定于木块上。

石蜡切片

切片机：调整好。

刀：磨刀时一个方向，液体石蜡。

切下的片子，右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片，左手用干燥毛笔将切片取下，放入盛温水（约

30℃）的玻璃皿内，将切片摊于温水面上，光亮的切面向下，用弯镊子细心张开皱纹。然后将水温加到40℃，使切片更平均地展开于水面上，再用弯镊子细心分开各蜡片，将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面，然后将切片从水面取出。最后将切片置于56℃保温箱内烘干，需时2小时。

刀的倾角：20—30°

冬天石蜡52-54℃，夏天56-58℃

HE染色法

石蜡切片

Ⅰ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）

Ⅱ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）

100%乙醇1min

95%乙醇1min

80%乙醇1min

70%乙醇1min

先用自来水而后用蒸馏水洗0.5min

Harris氏苏木紫液5min。苏木紫为盐基性染料可染细胞核。在冬季可预先放入保温箱内，使染剂保持在30℃左右，如此染5min即已足够。染色时间与气候和染液的浓度都有密切关系，须灵活掌握。

自来水洗2秒钟。

用1%酸性酒精（1mLHCl和99mL70%酒精混合液）分化5秒钟。

用自来水洗少许时候，而后入饱和碳酸锂水溶液中，使切片变蓝色，共需时约10秒钟。（此步后须用镜检细胞核是否适当，如细胞核过淡，可用自来水和蒸馏水洗一下，再用苏木紫重染，如细胞核过深，可用水洗一下，再在酸酒精中分化一下，其余步骤与上相同。此步骤镜检很重要，不可忽视。）

充分流动自来水冲洗2-10min，冲洗时间愈久，分化愈清楚（但不要超过12小时）。而后入80%酒精中1分钟。

入0.5%伊红酒精溶液中1-2min（伊红为酸性染色剂，可染细胞浆，100mL溶液中加入1-2滴冰醋酸，冰醋酸为促染剂，使伊红容易着色，经酒精是不易脱色）。

经Ⅰ95%乙醇脱水2min

经Ⅱ95%乙醇脱水2min

经Ⅰ100%乙醇脱水1min

经Ⅱ100%乙醇脱水1min

浸入石炭酸二甲苯混合液（1：3）透明和吸水5min。

再经Ⅰ二甲苯1min洗净石炭酸，并使其更为透明。

再经Ⅱ二甲苯1min，切片自二甲苯中取出，用干纱布揩净切片以外的二甲苯，立刻滴上一小滴加拿大树胶液，并迅速用镊子取洁净盖玻片盖上（勿留气泡）。

结果：细胞核呈蓝紫色，细胞浆呈红色。

Harris氏苏木紫染色液配制法

甲液：苏木紫1g

100%乙醇10mL

（可稍加热使苏木紫溶解于酒精中）

乙液：钾明矾20g

蒸馏水200mL

（可稍加热使明矾溶解于蒸馏水中）

混合甲乙二液，煮沸后，即加氧化汞（HgO）0.5g，热至染液变深紫色，立即将烧瓶放入流动冷水中冷却。次日进行过滤，可暴露于日光中，使其氧化为苏木红，这个过程叫做成熟。使用时加冰醋酸4mL，可增加细胞核染色。