农产品中农药残留的检测方法

农药残留速测仪是根酶抑制法—农药残留速测仪

1.1原理：

据国标GB/T5009.199-2003，采用酶抑制原理和光电比色法原理研制而成。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计测定412nm下吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留。可以实现有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的现场快速检测。

1.2 试剂：

PH=8.0缓冲液：常温保存

11.9 mg 无水磷酸氢二钾 1 包缓冲剂

3.2 mg 磷酸二氢钾或者

1000 mL 蒸馏水500 mL 蒸馏水

底物：4℃保存，时间不超过一周

25.0 mg 硫代乙酰胆酯或者1瓶底物

8.0 mL 蒸馏水12.5 mL 蒸馏水

乙酰胆碱酯酶：4℃保存

无需配制，直接使用

显色剂：4℃冰箱保存

160mg 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）1瓶显色剂

15.6mg 碳酸氢钠或者

20mL 缓冲液25mL 缓冲液

1.3 测试步骤：

1.样品处理：

取出2g果蔬样品(4g块茎类)，叶菜剪成25px左右见方的碎片，块茎类取横截面样品或取其表皮，放入三角瓶中，加入10mL缓冲液，振荡1～2min ，倒出提取液，静置2min，待测。若提取液混浊或杂质太多可过滤后再测。

2.对照反应

于反应瓶中加入2.5mL缓冲液，再分别加入100μL酶液和显色剂，混匀，静置反应10min后加入100μL底物，摇匀并立即倒入比色杯中，及时放入仪器的测量室通道中。于412nm波长下比色，按〈对照〉键，显示屏延迟设定秒数后，测量时间开始倒计时，计时完毕，显示屏显示对照吸光度增量(ΔΑ1)，并提示完成。在进行对照测试时，其他通道可同时进行样品测试。

3.样品测试：

于反应瓶中加入2.5mL待测液，再分别加入100μL酶液和显色剂，混匀，静置反应10min后加入100μL底物，摇匀并立即倒入比色皿中，及时放入仪器

的测量室通道。于142nm波长下比色，按〈样品〉键，显示屏下方延迟设定秒数后，测量时间开始倒计时，计时完毕。显示屏显示样品吸光度增量（ΔΑ2)及抑制率，并提示合格或超标。数据可进行自动保存，如有需要按〈打印〉键打印。

抑制率的计算公式：ΔΑ1—ΔΑ2 ×100%

ΔΑ1

抑制率与农药残留量呈正相关，若样品抑制率≥50%，表示样品农残超标，为阳性结果，不合格。若样品抑制率＜50%，未超标，为阴性结果。阳性结果的样品需做2次以上重复检测，多次检测仍呈阳性需用气相色谱等仪器做进一步确认。

1.4 注意事项

各蔬菜品种间不同（如：葱蒜类、香菜等15类会出现假阳性的蔬菜），会对检测抑制率有不同的干扰和影响，会出现误差。

排除色素干扰的常规及通用的科学方法。

1：色素干扰可以通过使用滤纸过滤，离心机离心和活性炭吸附发软手段来消除。

2：色素干扰也可以通过使用检测软件的特殊功能来消除，无需依靠其他的设备帮助。

3：由于果蔬细胞液中存在有抑制胆碱酯酶的物质，在检测取样时，最好不要将果蔬类样品切得太碎，以免果蔬细胞液流入检测液中，影响实验结果。

4：大多数果蔬由于剪得太碎，或者浸提时间的时间太长，使得提取的样品溶液中，存在较多的叶绿素，干扰实验结果的准确性。

5：韭菜、生姜、辣椒、葱、胡萝卜等蔬菜中，含有破坏酶活性的物质，处理这类样品时，必要时可采取整株蔬菜浸提。

6：在做标准溶液配制是，加完底物后要晃动试管并将溶液导入比色皿后快速地放入比色池，不要过很长时间再放，检查比色皿是否由于清洁而影响其透光率，更换新的比色皿或者把不干净的比色皿放入酒精中浸泡4-5小时，然后用棉球将其擦拭干净。

7：怎样的对照才是正常的对照，一般看对照的差值，检测的时间为3分钟，则差值应该大于8，如果差值偏小达不到要求时，则表明试剂中有一样或是几样过期，无法使用。

8：试剂加入放入顺序一定是：酶、显色剂、底物。

9：制作样品检测液时，静置等待的时间要够15分钟。

10：加入酶和显色剂后等待的时间要够15分钟。

1.5 “一三五”具体的取样原则：

一：即一个样品使用一个袋子，独立包装；

三；茄果类大型蔬菜至少采自不同的地方的三个。

五：叶菜类蔬菜至少采自不同的地方五棵。

1.6 抽样的具体方法：

1：花菜类

白花菜、青花菜

花菜类选取3颗样品，取叶1克（1厘米长宽，不要剪得太碎）；

2：叶菜类：

菠菜、青菜、杭白菜、小青菜、米苋、鸡毛菜、菜心、菜苋、生菜、壅猜菜、空心菜、油麦菜、塔菜、芥兰、紫角叶、娃娃菜、集采、蓬蒿、黄心菜、黄芽菜、

甘蓝、卷心菜、牛心菜、草头、芹菜、美芹、水芹、黄心芹、香菜、豆苗、金丝芥、芥菜、马兰、菊花菜、韭菜、韭黄、大葱、小葱、大蒜、蒜苗、洋葱等叶菜类去1g样品。不宜太碎，以叶为主。葱蒜等特殊物质注意假阳性，样品比对比用标准对照库。

3：食用菌

香菇、蘑菇、袖珍菇、金针菇、茶树菇、平菇

食用菌类可以用整体浸泡的方法，直接利用荧光增白剂测定仪来检测。

4：果菜类

番茄、茄子、青茄、红茄、辣椒、尖椒、甜椒、杭椒、青椒、黄瓜、西葫芦、冬瓜、瓤瓜、苦瓜、丝瓜、南瓜、节瓜、金瓜、佛手瓜、豇豆、刀豆、芸豆、扁豆、白扁豆、毛豆、蚕豆、豌豆、荷兰豆

果菜类可以顺皮削取1g的方法，豆类削皮的同时，应该将里面的豆子剥除。