病毒学-微生物学-医学微生物学实验四

丝状菌落
菌落呈棉絮状、绒毛状、粉末状， 石膏样小孢子菌、铁锈 蜡样等。其正面和背面可显示不同 色毛癣菌等 颜色，可看到伸向空间的气生菌丝， 伸入到培养基内部的营养菌丝
酵母型菌落
类酵母型菌落
丝状菌落
二、白假丝酵母菌的形态与结构观察(一)
纯培养物涂片 革兰染色 10 ×100倍
纯培养物涂片 棉兰染色 10 ×100倍
一、真菌的培养及菌落观察（示教）
1.真菌的培养：
培养基：sarbouraud培养基
（配方简单,营养单一,成本低廉）
温 度：22-28 ℃，某些深部真菌37 ℃
pH: 4.0-6.0
sarbouraud培养基配方(/1L)
蛋白胨：10g 葡萄糖：40g 琼 脂：20g 蒸馏水：1000mL
菌落：酵母型菌落；类酵母型菌落； 丝状菌落。
二、白假丝酵母菌的形态与结Baidu Nhomakorabea观察(二)
自做革兰染色
【原理】
渗透性学说：两类细菌的细胞壁成分和结构差异
G+菌：
肽聚糖多 交联度大
脂类含量低
结晶紫 卢戈碘液
酒精 复红
G-菌： 脂类含量高 肽聚糖少
【材料】
1. 白假丝酵母菌培养物。 2. 革兰染色液。 3. 载玻片、接种环、酒精灯等。
【步骤】
涂片制作
三、四体及真菌的形态与染色
三、四体及真菌的形态与染色
衣原体 (Chlamydia)
严格真核细胞内寄生 有独特发育周期
三、四体及真菌的形态与染色
鹦鹉热嗜衣原体包涵体
• Hela细胞培养物 • Giemsa染色 • 10 ×100倍
三、四体及真菌的形态与染色
Cy2标记二抗
Cy3标记二抗
间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体
梅毒螺旋体 感染兔睾丸组织涂片 镀银染色 10 ×100倍
新生隐球菌
脑脊液沉渣涂片 墨汁负染色 10 ×100倍
白假丝酵母菌 纯培养物涂片 革兰染色 10 ×100倍
涂片：注意无菌操作
干燥
固定
染色
各实验室老师具体指导
染色
初染：结晶紫染液染 1min
水洗，甩干
媒染：卢戈氏碘液染1min
水洗，甩干
脱色： 酒精脱色约30s，关键步骤！
水洗，甩干
复染： 复红染液染1min
水洗，甩干
印干
油镜检
【结果】
假菌丝 孢子
革兰染色结果 取材：白假丝酵母菌培养物 放大倍数：10X100
上述成分混合加热溶解，分装试管， 121.3℃高压灭菌15min,制成斜面
菌落类型
菌落特点
2. 真菌菌落观察
举例
酵母型菌落
呈浅棕褐色，较大，表面湿润光滑， 新生隐球菌 细腻；无菌丝伸入培养基内，类似 一般细菌菌落
类酵母型菌落 白色奶油状，较大，表面湿润光滑， 白假丝酵母菌 细腻，有假菌丝伸入培养基内，呈 树枝状
《医学微生物学》实验四
衡阳医学院医学微生物学教研室 病原生物学实验中心
实验内容
一、真菌的培养及菌落观察（示教） 二、白假丝酵母菌的形态与结构观察（自做——革兰） 三、四体及真菌的形态与染色（阅片）
※自阅片：钩端螺旋体 ※示教片：支原体菌落、梅毒螺旋体、鹦鹉热衣原体包涵体、
恙虫病立克次体、新生隐球菌
注：照片
三、四体及真菌的形态与染色
恙虫病立克次体 • 感染小鼠腹腔液涂片 • Giemsa染色 • 10 ×100倍
注：照片
三、四体及真菌的形态与染色
三、四体及真菌的形态与染色
梅毒螺旋体
• 肝组织切片 • 镀银染色 • 10 ×100倍
注：照片
三、四体及真菌的形态与染色
梅毒螺旋体
• 感染兔睾丸组织涂 片
恙虫病立克次体、新生隐球菌
第二页：四体及真菌的形态绘图
支原体菌落
纯培养物印片 Diense染色 10×10倍
鹦鹉热嗜衣原体包涵体
• Hela细胞培养物 • Giemsa染色 • 10 ×100倍
恙虫病立克次体 感染小鼠腹腔液涂片 Giemsa染色
10 ×100倍
钩端螺旋体 纯培养物涂片 镀银染色 10 ×100倍
• 镀银染色 • 10×100倍
三、四体及真菌的形态与染色
新生隐球菌
脑脊液沉渣涂片 墨汁负染色 10 ×100倍
作业
第一页：实验内容
一、真菌的培养及菌落观察（示教） 二、白假丝酵母菌的形态与结构观察（自做——革兰） 三、四体及真菌的形态与染色（阅片）
※自阅片：钩端螺旋体 ※示教片：支原体菌落、梅毒螺旋体、鹦鹉热衣原体包涵体、