ACQUITY UPLC 光电二极管阵列检测器 入门指南
UPLC法测定山茱萸中的莫诺苷和马钱子苷
UPLC法测定山茱萸中的莫诺苷和马钱子苷李崇勇;孟怡璠;杜欢欢;江海【摘要】Objective To establish a UPLC method for simultaneous determination of morroniside and loganin in Cornus.Methods The analysis was performed on a Waters Acquity UPLC BEH C18 column (50 mm×2.5 mm,1.7 μm).The mobile phase was acetonitrile (A)-1 mL·L-1 methanoic acid (B) in a gradient elution mode at a flow rate of 0.3 mL·min-1 and detected at the wavelength of 240 nm.The column temperature was30 ℃.Results Under the chromatographic conditions, the separation of the components in Cornus met the requirements of analysis,the linear equation of morroniside was y=241.65x+27.59,r=0.999 66,and the linear equation of loganin was y=192.39x-31.96,r=0.999 89.The peak area and sample quantity of morroniside showed good linearity within the scope of 0.112 5-1.80 μg,and loganin within the scope of 0.087 5-1.40 μg.The contents of morroniside and loganinin Cornus of Foping in Shaanxi were 16.53±0.89 and 6.81±0.32 mg·g-1.Conclusion This method is rapid and efficient,which is quite suitable for determining and analyzing the contents of morroniside and loganin in Cornus.The Cornus of Shaanxi has much higher contents of active ingredients than that of required in Chinese Pharmacopeia.%目的建立一种同时测定山茱萸中莫诺苷和马钱子苷的UPLC法.方法采用超高效液相色谱仪.色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18(50mm×2.5 mm,1.7 μm);检测波长:240 nm;流动相:乙腈(A)-1 mL·L-1甲酸水溶液(B);采用梯度洗脱;流速:0.3 mL·min-1;柱温:30 ℃.结果该色谱条件下,山茱萸中各组分的分离满足分析要求,莫诺苷和马钱子苷的线性回归方程分别为y=241.65x+27.59,r=0.999 66和y=192.39x-31.96,r=0.999 89;莫诺苷和马钱子苷在0.112 5~1.80和0.087 5~1.40 μg范围内峰面积与进样量线性关系良好;测得陕西佛坪山茱萸中莫诺苷和马钱子苷的含量分别为16.53±0.89和6.81±0.32 mg·g-1.结论该方法高效、快速,适合山茱萸中莫诺苷和马钱子苷的含量分析;陕西山茱萸中有效成分的含量远高于《中国药典》规定,品质优异.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2017(032)004【总页数】4页(P407-410)【关键词】山茱萸;莫诺苷;马钱子苷;超高效液相色谱法;含量测定【作者】李崇勇;孟怡璠;杜欢欢;江海【作者单位】汉中市食品药品检验检测中心,汉中 723000;汉中市食品药品检验检测中心,汉中 723000;陕西理工大学生物科学与工程学院,汉中 723000;陕西理工大学生物科学与工程学院,汉中 723000;汉中市食品药品检验检测中心,汉中 723000;陕西理工大学生物科学与工程学院,汉中 723000;陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心,汉中 723000;陕西省天麻山茱萸工程中心,汉中 723000【正文语种】中文【中图分类】R284山茱萸(Cornus officinalis Sieb.et Zucc.)为山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉，是我国传统中药材，又称枣皮、萸肉、药枣、蜀枣、山萸、山萸肉、实枣子、红皮树等。
UPLC法同时测定旋覆花属植物中2种倍半萜内酯成分的含量
Journal of Kunming Medical University昆明医科大学学报2012，（12）：4～6ＵＰＬＣ法同时测定旋覆花属植物中２种倍半萜内酯成分的含量郭伟琳１，２），冷红琼１），邓亮１），郭亚东１），沈志强１）（1）昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明650500；2）玉溪市人民医院，云南玉溪653100）［摘要］目的建立超高效液相色谱（ｕｌｔｒａｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＵＰＬＣ）快速测定旋覆花属植物中２种倍半萜内酯的含量．方法仪器为ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵｌｔｒａＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬＣＴＭ超高效液相色谱仪，带有二极管阵列检测器，检测波长２０５ｎｍ，色谱柱为ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８（１００ｍｍ×２．１ｍｍ，１．７μｍ），以乙腈－水为流动相，梯度洗脱，流速０．４ｍＬ／ｍｉｎ，柱温：２５℃．结果２种倍半萜内酯在７ｍｉｎ内完成测定．结论该方法简单、准确可靠、重复性良好，可用于旋覆花属植物中２种倍半萜内酯含量的快速测定．［关键词］旋覆花；倍半萜内酯；含量测定；超高效液相色谱［中图分类号］Ｒ９６［文献标识码］Ａ［文章编号］１００３－４７０６（２０１２）１２－０００４－０４ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣｏｎｔｅｎｔｓｏｆＴｗｏＳｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓｉｎＩｎｕｌａＰｌａｎｔｓｗｉｔｈＵＰＬＣＧＵＯＷｅｉ－ｌｉｎ１，２），ＬＥＮＧＨｏｎｇ－ｑｉｏｎｇ１），ＤＥＮＧＬｉａｎｇ１），ＧＵＯＹａ－ｄｏｎｇ１），ＳＨＥＮＺｈｉ－ｑｉａｎｇ１）（１）School of Pharmaceutical Science &Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products ，Kunming Medical University ，Kunming Yunnan ６５０５００；２）People ’s Hospital of Yuxi City ，Yuxi Yunnan６５３１００，China ）［Abstract ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｗｏａｃｔｉｖｅｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓｉｎＩｎｕｌａｐｌａｎｔｓｗｉｔｈＵＰＬＣ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｅｑｕｉｐｍｅｎｔｗａｓＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵｌｔｒａＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬＣＴＭＵＰＬＣ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２０５ｎｍ．ＴｈｅｃｏｌｕｍｎｗａｓＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８（１００ｍｍ２．１ｍｍ，１．７μｍ）．Ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ：ＡｗａｓａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄＢｗａｓｗａｔｅｒｗｉｔｈｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ．Ｆｌｏｗｓｐｅｅｄｗａｓ０．４ｍＬ／ｍｉｎ，ａｎｄｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｃｏｌｕｍｎｗａｓ２５℃．ＲｅｓｕｌｔＴｗｏｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ（ｉｎｕｌｉｃｉｎａｎｄｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ）ｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｔｂａｓｅｌｉｎｅｗｉｔｈｉｎ７ｍｉｎ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ，ｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｑｕｉｃｋｌｙｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｗｏｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓｉｎＩｎｕｌａｐｌａｎｔｓ．［Key words ］Ｉｎｕｌａｐｌａｎｔ；Ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ；Ｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＵＰＬＣ［基金项目］国家自然科学基金资助项目（８１１６０４０１）［作者简介］郭伟琳（１９８０～），女，云南西双版纳州人，在读硕士研究生，主管药师，主要从事医院药剂工作．［通讯作者］邓亮．Ｅ－ｍａｉｌ：６５１１３６０３＠ｑｑ．ｃｏｍ菊科旋覆花属（ＩｎｕｌａＬ．）植物全世界约有１００种，分布于欧洲、亚洲及非洲等地，以地中海地区为主．我国有２０余种．本属多种植物常供药用，如土木香（Ｉ．ｈｅｌｅｎｉｕｍ）可作为健胃、利尿、祛痰和驱虫药；大花旋覆花（Ｉ．ｂｒｉｔａｎｎｉｃａ）具有消痰、下气、软坚、行水等功效［１］．倍半萜类化学成分是本属植物的特征性成分［２］，有文献报道倍半萜内酯类化合物对一氧化氮（ＮＯ）的产生有抑制作用［３，４］，以及抗肿瘤作用［５］．杨茜等［６］用ＨＰＬＣ对旋覆花属植物中５种倍半萜内酯类化合物含量进行测定，需要５５ｍｉｎ．本文采用ＵＰＬＣ法快速测定旋覆花属植物中２种倍半萜内酯的含量，７ｍｉｎ内完成，可以用于快速检测．1材料与方法1.1仪器与试剂ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵｌｔｒａＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬＣＴＭ超高效CN 53-1221/R液相色谱仪（带有二极管阵列检测器，美国Ｗａｔｅｒｓ公司）．Ｔ６３２８Ｂ型万分之一电子天平（上海），超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＭｉｌｌｉ－Ｑ超纯水器（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）．乙腈为色谱纯（ＴＥＤＩＡ公司），乙醇为分析纯（天津市风船化学试剂科技有限公司），水为Ｍｉｌｌｉ－Ｑ超纯水．1.2色谱条件色谱柱ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８（１００ｍｍ×２．１ｍｍ，１．７μｍ），以乙腈－水为流动相，梯度洗脱（见表１），流速０．４ｍＬ／ｍｉｎ，柱温２５℃，时间（ｍｉｎ）乙腈（％）水（％）０２０８０５３０７０１０５０５０１２９０１０１８２０８０表1梯度洗脱程序Ｔａｂ．1Ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ图1混合对照品（Ａ），样品（Ｂ）色谱图Ｆｉｇ．1Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄａｎｄｓａｍｐｌｅ１：旋覆花次内酯；２：ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ．检测波长２０５ｎｍ，进样量５μＬ．1.3实验方法1.3.1对照品溶液配制精密称取旋覆花次内酯６．７ｍｇ，ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ５．５ｍｇ，分别置于１０ｍＬ容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为０．６７，０．５５ｍｇ／ｍＬ的单一成分对照品储备液．分别精密量取１ｍＬ对照品储备液于１０ｍＬ容量瓶中，用乙醇定溶即得每１ｍＬ含旋覆花次内酯０．０６７ｍｇ及ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ０．０５５ｍｇ的对照品混合溶液．1.3.2供试品溶液配制取药材粉末约１ｇ，精密称定，置１００ｍＬ磨口锥形瓶中，加入６０％乙醇２５ｍＬ，盖上磨口塞，称定重量，置于超声波清洗器中超声４５ｍｉｎ，放冷，用６０％乙醇补足重量，摇匀后经０．２２μｍ微孔滤膜过滤，即得供试品溶液．2结果在选定的色谱条件下，混合对照品及样品色谱图见图１．郭伟琳，等．ＵＰＬＣ法同时测定旋覆花属植物中２种倍半萜内酯成分的含量5第12期０．０００．０５０．１００．１５０．２００．２５０．００．５１．０１．５２．０２．５３．０３．５４．０４．５５．０５．５６．０６．５７．０７．５８．０８．５９．０９．５１０．０２１０．０００．０５０．１００．１５０．２００．２５０．００．００．５１．０１．５２．０２．５３．０３．５４．０４．５５．０５．５６．０６．５７．０７．５８．０８．５９．０９．５１０．０１２结果表明旋覆花次内酯及ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ分别在０．０６７～０．６７０μｇ和０．０５５～０．５５０μｇ范围内线性关系良好．2.2回收率试验取３份各１．０ｇ已知含量的样品，精密称重，分别在线性范围内低、中、高３个水平进行回收率实验，精确加入０．６７ｍｇ／ｍＬ旋覆花次内酯１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、２．０ｍＬ，０．５５ｍｇ／ｍＬＩｖａｎｇｕｓｔｉｎ１．０ｍＬ、２．０ｍＬ、３．０ｍＬ．按实验方法１．３．２处理，进样量５μＬ，考察方法的回收率，以实测量除以添加量计算回收率，见表２．2.3精密度试验取对照品溶液按上述色谱条件，重复进样６次，每次进样５μＬ，记录峰面积，结果得出ＲＳＤ分别为旋覆花次内酯１．３７％、Ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ０．９８％．2.4稳定性试验精密吸取同一供试品溶液进样５μＬ，分别在０、４、８、１２、２４ｈ进样，测定其峰面积，结果显示旋覆花次内酯峰面积的ＲＳＤ为２．７１％，Ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ峰面积的ＲＳＤ为１．３４％，表明样品在２４ｈ内稳定性良好．2.5重复性试验取同一样品６份，制备供试品溶液，每次进样５μＬ，平行测定６份样品．旋覆花次内酯及Ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ峰面积的ＲＳＤ分别为２．５６％和１．９８％．2.6样品含量的测定取不同产地的药材粉末各约１ｇ，精密称定，按１．３．２处理后，进样５μＬ测定，见表３．2.1工作曲线精密吸取１．３．１项下的二级对照品溶液１、３、５、８、１０μＬ，进样，记录色谱图，测定其峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归，其回归方程和相关系数分别为：成分样品质量（ｇ）本底值（ｍｇ）添加量（ｍｇ）测得量（ｍｇ）回收率（％）平均回收率（％）ＲＳＤ％旋覆花次内酯１．０５１２１．０３１２０．６７００１．６７３５９８．４１．０４３１１．０２３２１．００５０１．９７６９９７．５９７．１１．５８１．０９８５１．０７７６１．３４００２．３０５７９５．４Ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ１．０３０６１．２６７００．５５００１．７６５８９７．２１．０２５８１．２５４６１．１０００２．３２５０９８．７９７．８０．８３１．０４７５１．２８１１１．６５００２．８５４３９７．４表2旋覆花次内酯及Ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ的回收率试验结果（n ＝３）Ｔａｂ．2Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｔｈｅ２ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（n ＝３）样品旋覆花次内酯（ｍｇ／ｇ）ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ（ｍｇ／ｇ）云南１１．６３１．３１湖北２．２３０．８０河南２．６４１．９８河北０．９８１．２２广西－２．１７安徽１２．２３１．１８安徽２１．８３１．５２云南２１．６０１．６０表3不同样品中２种化合物的含量Ｔａｂ．3Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ２ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓａｍｐｌｅｓ3讨论3.1提取条件的选择选择供试品溶液制备方法时，分别采用４０％甲醇、６０％甲醇、８０％甲醇、４０％乙醇、６０％乙醇、８０％乙醇和水对药材进行超声提取，还比较了不同的料液比和超声时间对提取率的影响．结果以６０％乙醇提取液，料液比为１：２５，超声时间为４５ｍｉｎ的提取率最大．3.2流动相的选择实验过程中分别以甲醇－水、乙腈－水、甲醇－０．４％冰醋酸水溶液、乙腈－０．４％冰醋酸水溶液进行二元等度和梯度洗脱，结果表明：乙腈－水进行二元梯度洗脱时，得到的ＵＰＬＣ色谱图具有很好的分离度，峰形较好且保留时间合适．3.3检测波长的选择分别以２００、２０５、２１０和２２０ｎｍ４个波长进行检测，发现２０５ｎｍ波长处有最大吸收；２０５ｎｍ波长检测效果最佳，色谱峰几乎不受溶剂以及杂旋覆花次内酯：Ｙ＝５７６５６５５．７６３Ｘ＋４７２７８．５４５Ｒ２＝０．９９９４Ｉｖａｎｇｕｓｔｉｎ：Ｙ＝４７３５６３１．６４７Ｘ＋３１７４３．８０１Ｒ２＝０．９９９６（下转第１０页）本实验中肝癌组ＤＬＫ１蛋白阳性表达率与文献相符合，而且在ＡＦＰ阴性的肝癌组织中仍有２２．７３％的ＤＬＫ１蛋白阳性表达，故ＡＦＰ联合ＤＬＫ１蛋白检测可提高肝癌的检出率，ＤＬＫ１蛋白可作为肝癌诊断候选标志物．ＡＦＰ和ＤＬＫ１在肝硬化组不表达而在癌周肝硬化组中有阳性表达，说明癌周肝硬化不同于不伴癌的肝硬化，更具有癌前病变性质．［参考文献］［１］ＥＬ－ＳＥＲＡＧＨＢ，ＭＡＳＯＮＡＣ．Ｒｉｓｉｎｇｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｈｅｐａ－ｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ［Ｊ］．ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ，１９９９，３４０（１０）：７４５－７５０．［２］ＨＵＡＮＧＪ，ＺＨＡＮＧＸ，ＺＨＡＮＧＭ，ｅｔａｌ．Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＤＬＫ１ａｓａｎｉｍｐｒｉｎｔｅｄｇｅｎｅｃｏｕｌｄｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｈｕｍａｎｈｅｐ－ａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００７，２８（５）：１０９４－１１０３．［３］ＦＵＫＡＺＡＷＡＲ，ＨＥＡＴＨＣＯＴＴＲＷ，ＭＯＲＩＳＯＮＩＭ，ｅｔａｌ．Ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄｌｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎｏｆＤＬＫ１ｉｎＷｉｌｍｓｔｕｍｏｕｒｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ，２００５，５８（２）：１４５－１５０．［４］ＨＵＡＮＧＣＣ，ＣＨＵＡＮＧＪＨ，ＨＵＡＮＧＬＬ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｈｕ－ｍａｎＤｅｌｔａ－ｌｉｋｅ１ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｉｓｉｍｐｌｉｃａｔｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓ－ｓｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｂｉｌｉａｒｙａｔｒｅｓｉａ［Ｊ］．ＪＰａｔｈｏｌ，２００４，２０２（２）：１７２－１７９．［５］许良中，杨文涛．免疫组织化学反应结果的判断标准［Ｊ］．中国癌症杂志，１９９６，６（４）：２２９－２３１．［６］ＳＮＯＷＢＥＲＧＥＲＮ，ＣＨＩＮＮＡＫＯＴＬＡＳ，ＬＥＰＥＲＭ，ｅｔａｌ．Ａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ，ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄｔｏｍｏｇｒａｐｈｙａｎｄｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅｉｍａｇｉｎｇｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌ－ｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｄｖａｎｃｅｄｃｉｒｒｈｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｌｉ－ｍｅｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌＴｅｒ，２００７，２６（９）：１１８７－１１９４．［７］申丽娟，邱建武，余洁，等．ｐ３８丝裂原活化蛋白激酶在顺铂诱导癌周肝硬化肝细胞株凋亡中的作用［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２０１０，１８（１２）：９３１－９３５．［８］ＯＫＡＨ，ＴＡＭＯＲＩＡ，ＫＲＵＯＫＩＴ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆα－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｐａｔｉｅｎｔｓｍｏｎｉｔｏｒｅｄｆｏｒｄｅｖｅｌ－ｏｐｍｅｎｔｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９４，１９（１）：６１．［９］ＳＭＡＳＣＭ，ＳＵＬＨＳ．ＰＲＥＦ－１，ａｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＥＧＦ－ｌｉｋｅｒｅｐｅａｔｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｓａｄｉｐｏｃｙｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９３，７３（４）：７２５－７３４．［１０］ＬＵＯＪＨ，ＲＥＮＢ，ＫＥＲＹＡＮＯＶＳ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃａｎｄｇｅｎｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｓａｎｄｈｅｐａｔｏｂｌａｓｔｏｍａｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００６，４４（４）：１０１２－１０２４．（２０１２－０９－１４收稿）质的干扰，故选择２０５ｎｍ作为检测波长．［参考文献］［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｍ］．中国医药科技出版社，２０１０：２０２－２０３．［２］郭启雷，杨峻山．旋覆花属植物中倍半萜类成分及药理活性研究进展［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００５，１７（６）：８０４－８０９．［３］ＱＩＮＪＪ，ＪＩＮＨＺ，ＺＨＵＪＸ，ｅｔａｌ．ＮｅｗｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓｆｒｏｍＩｎｕｌａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ．ｗｉｔｈｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｇａｉｎｓｔＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄＮＯｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＲＡＷ２６４．７ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２０１０，６６：９３７９－９３８８．［４］ＱＩＮＪＪ，ＺＨＵＪＸ，ＺＨＵＹ，ｅｔａｌ．ＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅａｅｒｉａｌｐａｒｔｓｏｆＩｎｕｌａｊａｐｏｎｉｃａ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１０，８（４）：２５７－２５９．［５］于峰，王思明，董玫，等．三种倍半萜类化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性研究［Ｊ］．天然产物研究与开发，２０１０，２２：５０６－５０９．［６］杨茜，刘慧，何雅君．ＨＰＬＣ法同时测定旋覆花属植物中５种倍半萜内酯成分的含量［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２０１２，２９（２）：１１６－１２０．（２０１２－０９－１２收稿）!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!（上接第６页）。
沃特世针对白酒中塑化剂的分析解决方案
沃特世针对白酒中塑化剂的分析解决方案作者：来源：《食品安全导刊》2013年第02期目前，众多白酒被曝出塑化剂严重超标，中国酒业协会即声明白酒产品中基本上都含有塑化剂成分，中国白酒标准正在研究白酒产品塑化剂含量标准限定，并要求卫生部门进行白酒塑化剂残留量安全风险评估。
白酒产品中的塑化剂可能属于特定迁移，主要可能源于生产运输及包装等环节。
本方法介绍了两种基于Waters超高效液相色谱技术（UPLC○R技术）分析18种（含台湾FDA要求）邻苯二甲酸盐的方法。
方法1为采用Waters超高效液相色谱质谱联用技术（UPLC/MS/MS），该方法具有分析速度快，灵敏度高的特点。
适用于实验室拥有质谱系统并追求检测灵敏度的用户。
方法2为采用Waters超高效液相色谱系统和二极管阵列检测器（UPLC/PDA）分析方法，适用于暂时还不具有质谱系统的用户。
A.UPLC条件LC系统：ACQUITY○R UPLC H-Class；色谱柱：ACQUITY UPLC HSS C18，1.7um，2.1mmX100mm；流动相A：0.1%FA水溶液；流动相B：乙腈；流速：0.4mL/min；梯度洗脱：见表1；进样体积：10uL；柱温：35℃；样品温度：10℃；强洗溶剂：ACN；弱洗溶剂：H2O∶ACN=95∶5；运行时间：7.5min。
多溶剂混合：QSM可将4种溶剂按任何组合或比例混合。
使用选配的内部溶剂选择阀，将可选溶剂扩展到多达九种，方法更加灵活。
直接注射取样：SM-FTN的针流入路径采用专门的技术，在高压力下能够保证精确的进样针密封性，可实现高精度注射，具有极佳的样品回收率。
下一代色谱柱温箱：我们的新式UPLC色谱柱加热器和管热理器已实现了标准化，具有易于操作、体积小的主动式预加热器，使系统之间具有相同的效率，色谱柱预热器保证了稳定的热效能；色谱柱管理器提供了多区域的灵活性，温度范围为4～90℃，并可叠加使用。
受控的滞留体积：ACQUITY UPLC H-Class的SmartStart技术（专利待批）可同时对梯度起始时间和各个预注射步骤进行自动管理。
Waters XBridge XP和 或XBridge Premier BEH色谱柱维护和使用手
1目录I. 简介II. 入门指南III.色谱柱使用a. 样品制备b. pH 范围c. 溶剂d. 压力e. 温度IV. 色谱柱清洗、再生和存放V.eCord 智能芯片技术 VI.其他信息VII.注意事项I. 简介非常感谢您选择Waters™ XBridge™ XP 和/或XBridge Premier BEH 色谱柱。
XBridge BEH 填料由通过cGMP 和ISO 9001认证的工厂使用超纯试剂生产。
每批XBridge BEH 填料均采用酸性、碱性和中性分析物进行了色谱分析测试，并依据窄范围的技术指标进行质量控制，确保色谱柱具有可重现的理想性能。
每根色谱柱都经过单独测试，并由eCord™智能芯片提供性能色谱图和批次分析证书。
XBridge Premier BEH 色谱柱提供带或不带VanGuard™完全集成技术[FIT]保护柱两种规格。
VanGuard FIT 保护柱专为延长分析柱使用寿命而设计，可防止不需要的样品基质或颗粒物进入色谱柱，而不会影响分离性能。
保护柱可轻松更换，以便恢复分离性能，延长分析柱的使用寿命。
此外，XBridge Premier BEH 色谱柱采用创新的MaxPeak™高性能表面技术，能够尽量减少分析物/表面相互作用，避免可能因此造成的样品损失，从而提高分析物回收率、分析灵敏度和重现性。
XBridge XP 和XBridge Premier 2.5 µm BEH 色谱柱a. eCord 安装b. 色谱柱安装c. 色谱柱平衡d. 初始柱效测定e. 色谱柱QR 码f. XBridge XP 色谱柱 - VanGuard 保护柱g. VanGuard FIT 保护柱a. 清洗与再生b. 存放a. 简介b. 安装c. 生产信息d. 色谱柱使用信息a. 延长ACQUITY BEH 色谱柱 使用寿命的技巧b. BEH HILIC 色谱柱入门c. BEH Amide 色谱柱入门II. 入门指南每根XBridge BEH 色谱柱的色谱柱包装盒或eCord 智能芯片中都随附COA 报告和性能测试色谱图。
waters Amide 维护
e. 对新色谱柱进行基准检查的实用性功能测试 我们建议使用Waters 2-AB标记的糖基性能测试标准品(部件 号186006349)对新色谱柱进行基准检查并监测其使用过 程中的性能变化。 注：沃特世在XBridge BEH Amide 130Å 2.5 µm XP和3.5 µm糖基 分析专用柱生产过程中，采用相同的2-AB糖基性能测试标 准品对专为此应用设计的每批柱填料进行质量控制测试 (参阅图1的示例)。
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30 min
峰识别
1. G0 (NGA2)
2. G0F (NGA2F) 3. Man-5 4. G0F+GN
5. G1
6. G1Fa (NA2G1F) 7. G1Fb (NA2G1F) 8. G1F+GN
9. Man-6
我们将100 µL的50 mM甲酸铵缓冲液(pH 4.4)和100 µL乙腈直 接加入样品瓶中，得到总体积200 µL的标准溶液。
通过倒置轻轻混合样品。
糖基性能测试标准品 图1所示的分离结果是采用ACQUITY UPLC®系统分析所得， 该系统所具有的总系统体积和柱外扩散体积非常适用于 该应用。请注意，分析人员也可使用经过适当配置的HPLC 系统获得类似结果。还应当注意该应用的进样溶剂和进样 体积。较大的糖基在含50%以上乙腈的溶液中溶解度较差。 在这类条件下较大的糖基将逐渐沉淀而导致损失。然而， 还应注意到，在HILIC色谱分析中，含水样品采用较大的进 样体积时会使峰形变形。因此，这类应用中的最佳进样 体积为<3 µL。
液相色谱 – 质谱法测定橡胶制品中的福美双
液相色谱–质谱法测定橡胶制品中的福美双武彤;徐文野;赵慧;张兰兰;王华;严洪连【摘要】建立了测定橡胶制品中福美双的液相色谱–质谱法.以甲醇为萃取溶剂,对橡胶制品超声萃取,选用ACQUITY UPLC(R)BEH C18色谱柱,用超高效液相色谱–二极管阵列–质谱联用仪对福美双进行检测.在优化的分析条件下,福美双于3 min 内获得对称的色谱峰,分离效果良好.福美双的质量浓度在0.5～10 mg/L范围内与其色谱峰面积呈良好的线性关系,相关系数r2大于0.999,检出限为0.5 mg/L,7次重复性测定结果的相对标准偏差小于4％,样品加标回收率为94.0％～107.9％.该测试方法方便快速,测试结果准确、可靠,满足橡胶制品中福美双的定量测定要求.%Liquid chromatography–mass spectrometry (LC–MS) method was set up to determine thiram in plastic. Rubber samples were extracted with methanol in an ultrasonic bath, chromatographic column of ACQUITY UPLC(R) BEH C18 column was chosen, thiram was analyzed by liquid chromatography–mass spectrometry. Under the optimized conditions, very good chromatographic peak and separation effect were obtained in 3 min, the mass concentration of thi-ram has good linearity with the chromatographic peak area in the range of 0.5–10 mg/L with the correlation coefficient more than 0.999. The detection limit was 0.5 mg/L, the relative standard deviation of determiantion results was less than 4％(n=7), the recoveries of spiked sample were 94.0％–107.9％. The result shows that this method is accurate and reliable, and it is satisfy for detection requirements.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2018(027)001【总页数】4页(P64-67)【关键词】液相色谱–质谱法;福美双;橡胶制品【作者】武彤;徐文野;赵慧;张兰兰;王华;严洪连【作者单位】长春轨道客车股份有限公司工程研究中心,长春 130062;长春轨道客车股份有限公司工程研究中心,长春 130062;长春轨道客车股份有限公司工程研究中心,长春 130062;广州广电计量检测股份有限公司,广州 510656;广州广电计量检测股份有限公司,广州 510656;广州广电计量检测股份有限公司,广州 510656【正文语种】中文【中图分类】O657.7福美双，化学名为二硫化四甲基秋兰姆，具有一定毒性，对皮肤和粘膜有刺激作用［1–4］，可以治疗疫病等菌类感染疾病。
化妆品中富马酸二甲酯的测定-超高效液相色谱法
·28· 科研开发
化工中间体
Chenmical Intermediate
2.1.2 检测波长的确定 富马酸二甲酯的特征吸收峰（如图2）为209.6
nm，选择210nm作为本方法的定量波长。
图2富马酸二甲酯的特征吸收光谱图 Fig. 2 The characteristic absorption spectrum of dimethyl fumarate
第03期
化妆品中富马酸二甲酯的测定- 超高效液相色谱法
·29·
2 结果与讨论 2.1 色谱条件的选择 2.1.1 流动相条件的选择
文献报道富马酸二甲酯带有负电荷，在流动相中 加入带正电的四丁基溴化铵，可以促进富马酸二甲酯 的保留，改 善出峰效 果[12, 14]，也有 采用甲醇 - 醋 酸铵缓 冲溶液做流 动相[15]。 本方法对三 种流动相（ ①甲醇- 20 mmol/L 醋酸铵+8mmol/ L 四丁基溴化铵混合水溶液； ②甲醇- 20mmol/L 醋酸铵水溶液，③甲醇- 水）的色谱 分离情况进行了比较。结果表明，三种成分的流动相 均有较好的分离效果和峰形，但是①和②流动相基线 噪声较甲醇- 水流动相大，且盐溶液配制费时，容易 堵塞仪器，而甲醇、水流动相体系简单、方便，避免 了使用无机盐，更有利于保护仪器。所以，直接选择 甲醇、水为流动相，经优化流动相比例条件，确定为 1.3的梯度洗脱程序。在优化的梯度洗脱条件下，目标 物的到了良好的分离如图1所示，且有冲洗色谱柱的过 程，延长了柱子使用寿命。
HPLC应用手册
Fast HPLC
Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC)
High Performance Liquid Chromatography
超高效液相色谱
二、高效液相色谱仪流程图
1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置
高效液相色谱技术及应用
生命试验中心 何海辉 hehh@ Tel:3607335
生物秀—专心做生物！
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概述
高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相 色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法 一、历史 二、高效液相色谱仪流程图 三、特点
历史
1906年 俄国植物学家Tsweet创立色谱法 30年代 茨维特分离绿叶色素 40年代 TLC，纸色谱 50年代 GC出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代末 HPLC出现，使色谱分析范围进一步扩 大
医药方面
可以了解监控药物生产过程中主体和副 体产物的存在情况。另外通过测定人体 血或尿中药物的含量分析药物在体内的 代谢情况也是近来医药研究的主要内容 之一。
生化方面
高效液相色谱法在生化方面的研究主要 体现在对RNA,DNA及其碎片的研究，对 氨基酸，肽和蛋白质的分析，以及对酶 和糖的分析
天然产物
1960～现在
高效液相色谱仪与质谱仪器的联用是一 个重要的发展方向。
2004年推出的超高效液相色谱 （UPLC)技术。
液相色谱技术的发展1960-2004
60’s 60’ 70’s 70’ 80’s 80’ 90’s 90’ 00’s 00’