基因工程试题及答案
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中，限制性内切酶用于切割DNA分子，产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物，通过对生物基因进行改造，使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具，可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗，通过修复或替换异常基因，治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术，可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题（每题10分，共30分）1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中，然后转化到宿主细胞中，使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术，通过在DNA复制过程中加入特定引物，使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物？请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造，将外源基因导入到目标生物体中，使其具有新的遗传性状的生物。
例如，将耐旱基因导入水稻，使其具有抗旱能力；将Bt毒素基因导入棉花，使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用？举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如，利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因，治疗遗传性疾病。
另外，基因工程也可以用于疫苗研发，通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞，产生病原体的抗原蛋白，从而刺激免疫系统产生抗体，用于预防传染病。
基因工程期末考试试题及答案
基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案：B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶？A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案：C3. 基因枪技术主要用于：A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案：A二、填空题1. 基因工程中，常用的载体有________、________和________。
答案：质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中，________是基因表达的调控元件。
答案：启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。
答案：基因工程的基本步骤包括：目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程在医学领域的应用有哪些？答案：基因工程在医学领域的应用包括：生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。
答案：基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面：提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。
2. 基因工程在环境保护中的应用。
答案：基因工程在环境保护中的应用主要包括：开发生物修复技术，用于污染土壤和水体的净化；利用基因工程改造微生物，用于处理工业废水和废气；通过基因工程改良植物，用于重金属污染土壤的修复等。
五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉，该抗虫棉能够减少农药的使用，降低农业生产成本。
请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。
答案：该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量，减少因农药使用带来的健康风险。
经济效益包括降低农药成本，提高作物产量，增加农民收入。
环境效益包括减少农药对环境的污染，保护生态平衡，促进农业的可持续发展。
基因工程试题及答案全集
作业一：一、名词解释：1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。
2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。
这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。
这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。
4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。
在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。
有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。
5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。
增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。
6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。
二、简答题1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。
基因工程试题及答案解析
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是：A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案：D2. 基因工程中，用于将目的基因导入植物细胞的方法是：A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案：C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案：C二、填空题1. 基因工程中，常用的运载体有____、____和____。
答案：质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中，常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案：抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案：基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中，基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物；在医学领域，基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等；在工业上，基因工程可以用于生产酶、疫苗等；在环境保护方面，基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中，如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达？答案：确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面：首先，目的基因需要有合适的启动子和终止子，以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止；其次，需要考虑目的基因的密码子偏好性，以确保其在宿主细胞中能被高效翻译；再次，需要考虑目的基因的稳定性，避免其在宿主细胞中被降解；最后，还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案：基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病；基因治疗可以用于治疗遗传性疾病；疾病诊断可以通过基因检测来实现；基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而，基因工程的应用也带来了伦理问题，如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
基因工程期末考试试题及答案
基因工程期末考试试题及答案卷型：A考试时间：90分钟满分：100分一、名词解释（3X5）限制性内切酶（或其它工具酶）：能在特异位点上催化双联DNA 分子断裂，产生相应的限制性DNA片段荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量PCR 是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA 反转录成cDNA再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA勺相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端转基因技术（或转基因动植物等）就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。
二、填空（1X15）1.Cosmid实际上是由cos位点和质粒构成的杂合载体,也可以说是带有cos序列的质粒。
2.超螺旋质粒DNA开环质粒DNA线状质粒DNA在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒＞线状质粒＞开环质粒。
3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。
4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%,长度在17-30bp。
6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。
三、选择题（2X15,实卷应是1X35）1.基因工程创始人（D）A A.KornbergB W.GilbertC P.BergD S.Cohen2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C）A.既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNAB.只能作用于单链DNAC.只能作用于双链DNAD.只能作用于RNA3.氨苄青霉素的工作原理为（A）A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成B.可以抑制核糖体的转位C.可以与核糖体50S亚基结合并抑制蛋白质合成D.可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成4.反转录酶是一种（C）A.依赖DNA的DNA聚合酶B.依赖DNA的RNA聚合酶C.依赖RNA的DNA聚合酶D.依赖RNA的RNA聚合酶5.11类限制性内切核酸酶（A）A.仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B.限制性识别非甲基化的核苷酸序列C.有外切核酸酶和甲基化酶活性D.仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供6.下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列（C）A.GAATCGB.AACCTTC.GATATCD.ACGGCA7.（多选）在基因工程中，可用碱性磷酸酶（AB）。
高中基因工程试题及答案
高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案：C2. 基因工程中常用的载体是：A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案：A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案：B4. 以下哪个不是基因工程的步骤？A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案：D5. 基因工程在医学领域的应用不包括：A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案：D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。
答案：重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。
答案：大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。
答案：转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。
答案：生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。
答案：生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。
答案：基因工程的基本原理是利用分子生物学技术，将目的基因从一种生物体中提取出来，然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中，使其在新的宿主细胞中表达，从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。
12. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括基因治疗，通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病；基因检测，用于疾病诊断和风险评估；基因编辑，通过修改基因序列来治疗疾病；以及生产生物药物，如胰岛素、干扰素等。
四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。
答案：基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。
大学基因工程试题及答案
大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶？A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案：A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案：D3. 基因工程中常用的运载体有哪些？A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案：D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。
答案：PCR2. 基因工程中，_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
答案：转化3. 在基因工程中，_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。
答案：克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。
答案：目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。
四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。
答案：基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。
可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。
2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。
答案：目的基因表达调控在基因工程中至关重要，它决定了基因工程产品的功能和产量。
调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案# 基因工程试题及答案## 一、选择题1. 基因工程中常用的工具酶是：A. 限制性内切酶B. DNA聚合酶C. 逆转录酶D. DNA连接酶2. 基因工程中，用于目的基因的克隆通常使用：A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 转座子3. 下列哪项不是基因工程的应用领域？A. 农业改良B. 疾病治疗C. 能源开发D. 武器制造## 二、填空题1. 基因工程中，常用的宿主细胞包括________、________和________。
2. 基因枪法是一种________技术，可以将目的基因直接导入植物细胞。
## 三、简答题1. 简述基因工程的基本操作步骤。
2. 基因工程在医药领域的应用有哪些？## 四、论述题1. 论述基因工程对现代农业的影响及其潜在风险。
## 参考答案### 一、选择题1. 答案：A, D。
限制性内切酶和DNA连接酶是基因工程中用于切割和连接DNA片段的常用工具酶。
2. 答案：A。
质粒是基因工程中常用的载体，用于克隆和表达目的基因。
3. 答案：D。
基因工程的应用领域广泛，但武器制造不属于其应用范围。
### 二、填空题1. 答案：大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞。
这些是基因工程中常用的宿主细胞，用于表达外源基因。
2. 答案：基因转移。
基因枪法是一种基因转移技术，通过高速微粒子将DNA射入细胞内。
### 三、简答题1. 答案：基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的获取、载体的选择与构建、目的基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有目的基因的细胞、目的基因的表达与检测。
2. 答案：基因工程在医药领域的应用包括：生产重组蛋白药物、基因治疗、疫苗开发、疾病诊断等。
### 四、论述题1. 答案：基因工程对现代农业的影响主要体现在作物改良、提高产量、增强抗病虫害能力等方面。
通过基因工程，可以培育出抗旱、抗盐碱、抗病的作物新品种，提高作物的适应性和产量。
然而，基因工程也存在潜在风险，如基因流可能导致非目标物种的基因改变，以及转基因作物对生态环境的影响等。
生物选修基因工程试题及答案
生物选修基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中，常用的运载体不包括以下哪一项？A. 质粒B. 噬菌体C. 病毒D. 染色体答案：D2. 基因枪法是一种用于将外源基因导入植物细胞的方法，它主要利用了什么原理？A. 电穿孔B. 显微注射C. 基因重组D. 粒子轰击答案：D3. 在基因工程中，PCR技术的主要作用是什么？A. 基因测序B. 基因克隆C. 基因扩增D. 基因编辑答案：C二、填空题4. 基因工程中，常用的限制性内切酶能够识别特定的_______序列，并在这些序列的特定位置切割DNA分子。
答案：核苷酸5. 基因工程中，将目的基因插入到运载体中后，需要通过_______技术将重组DNA导入宿主细胞。
答案：转化三、简答题6. 请简述基因工程在医学领域的应用。
答案：基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断等。
例如，利用基因工程技术生产胰岛素、干扰素等生物药物；通过基因编辑技术治疗遗传性疾病；利用基因芯片技术进行疾病相关的基因检测。
四、论述题7. 论述基因工程在农业中的应用及其潜在的伦理问题。
答案：基因工程在农业中的应用主要包括转基因作物的培育、抗病抗虫作物的开发、作物品质改良等。
例如，通过基因工程培育出抗虫害的棉花、抗旱的玉米等。
然而，基因工程也引发了一些伦理问题，如转基因作物对环境的影响、对生物多样性的潜在威胁、以及公众对食品安全的担忧等。
结束语：通过本试题，我们对基因工程的基本概念、技术方法及其在不同领域的应用有了更深入的了解。
同时，我们也认识到了基因工程在实际应用中可能遇到的伦理和环境问题，这需要我们在进行基因工程研究和应用时，更加谨慎和负责任。
基因工程考研试题及答案
基因工程考研试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程中最常用的载体是：A. 质粒B. 噬菌体C. 病毒D. 人工染色体答案：A2. 基因工程中常用的限制性内切酶的作用是：A. 连接DNA片段B. 切割DNA片段C. 复制DNA片段D. 转录DNA片段答案：B3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 目的基因的表达C. 目的基因的复制D. 目的基因的检测答案：C4. 基因工程中常用的转化方法不包括：A. 电穿孔法B. 化学转化法C. 基因枪法D. 病毒转导法答案：D5. 基因工程中常用的筛选标记是：A. 抗生素抗性基因B. 荧光蛋白基因C. 色素基因D. 以上都是答案：D6. 下列哪种方法不是基因克隆的方法？A. PCR扩增B. 限制性内切酶切割C. 连接酶连接D. 转录答案：D7. 基因工程中，用于检测目的基因是否成功表达的方法是：A. DNA测序B. RNA测序C. 蛋白质电泳D. DNA杂交答案：C8. 基因工程中，用于提高转化效率的方法是：A. 增加载体DNA的量B. 提高转化温度C. 增加宿主细胞的量D. 增加转化时间答案：A9. 下列哪种物质不是基因工程中常用的连接酶？A. T4 DNA连接酶B. E.coli DNA连接酶C. 限制性内切酶D. 噬菌体T4连接酶答案：C10. 基因工程中，用于构建基因文库的方法不包括：A. 限制性内切酶切割B. 连接酶连接C. 载体DNA的制备D. 基因的转录答案：D二、填空题（每题2分，共20分）1. 基因工程中常用的运载体必须具备的条件包括________、________、________和________。
答案：自主复制能力、标记基因、多个限制酶切割位点、稳定性2. 基因工程中，目的基因的获取方法包括________、________、________和________。
答案：PCR扩增、化学合成、基因文库筛选、基因组DNA提取3. 基因工程中，转化过程包括________、________、________和________。
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基因工程试题及答案
1简述基因工程的定义和现代生物技术的内容
基因工程是利用DNA体外重组或PCR扩增技术从某种生物基因组中分离感兴趣的基因，
或是用人工合成的方法获取基因，然后经过一系列切割，加工修饰，连接反应形成重组
DNA分子，再将其转入适当的受体细胞，以期获得基因表达的过程.
现代生物技术的内容：基因工程技术、蛋白质工程技术、细胞（组织）工程技术、酶
工程技术、发酵工程技术
2请简述基因工程中使用的主要酶类和它们的功能 限制性内切酶―主要用于DNA分子
的特异切割 DNA甲基化酶―用于DNA分子的甲基化 核酸酶―用于DNA和RNA的非特
异性切割 核酸聚合酶―用于DNA和RNA的合成 核酸连接酶―用于DNA和RNA的连接
核酸末端修饰酶―用于DNA和RNA的末端修饰
其它酶类--用于生物细胞的破壁，转化，核酸纯化，检测等 3载体必备的功能元件是
什么，各有什么功能
至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制。 至少应有一个克隆位
点，以供外源DNA插入。 至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否
进入宿主细胞。
4何为α互补，它在载体构建中有何作用
β―半乳糖苷酶基因有1021 AAs，基因产物不具酶活性，装配为四聚体后才有酶活。
该蛋白质可分为两部分：α链和β链。前者负责四聚体装配，后者具β―半乳糖苷酶活
性；只有当两者都存在时，才会表现出酶活性，该作用称之为α-互补作用。这两个部分
可独立存在， 分别由两个基因编码。为α链编码的基因称之为lacZα(编码145 AAs)。
这两个基因（LacZ和LacZα）均可作为标记基因。通过其是否具有β―半乳糖苷酶活性
作为构建载体的筛选标志。
β―半乳糖苷酶基因的优点:
a. 酶催化X-Gal水解为兰色产物，检测直观
b. lacZα编码5'-端可容许很大的变化而不影响酶活性 c. lacZα和β链基
因的分别表达可使载体小而容量大
5简述利用T7噬菌体启动子的pET系列表达载体的工作原理。
pET载体及其表达系统pET-5a：在载体的基本结构上加入了T7噬菌体启动子序列及
其下游的几个酶切位点。当外源基因插入到这些酶切位点后，就可在特定的宿主细胞中诱
导表达。T7噬菌体启动子：只能由T7噬菌体的RNA聚合酶识别并启动转录，而大肠杆菌
的RNA聚合酶不能作用于T7噬菌体启动子。用于表达的宿主细胞必须能表达T7噬菌体的
RNA聚合酶。常用的pET表达载体的宿主菌：大肠杆菌BL21（DE3）。通过宿主控制T7
RNA聚合酶的量来实现的，即在宿主细胞中引入一个带有T7噬菌体的溶菌酶编码基因的质
粒，如pLysS或pLysE，它们分别低量和高量表达T7噬菌体的溶菌酶。该溶菌酶可抑制
T7 RNA聚合酶的活性，从而减少在未诱导情况下外源基因的表达。使启动子的控制效应更
严谨。在pET载体上装载lacⅠ基因，提高阻抑物的浓度。可利用T7-lac启动子（在T7
启动子序列下游装入一个由25bp组成的lacO操纵子序列），当阻抑物结合在lacO位点
时，即使存在T7 RNA聚合酶，外源基因也无法表达。只有当诱导物存在时，才能解开T7
RNA聚合酶基因和外源基因表达的双重阻遏。 6请简述PCR引物设计的要点
① 长度：至少 16bp ，通常为 18-30bp ，更短的引物一般会降低扩增的特异性，但
会提高
扩增的有效性。
② 引物的解链温度：两个引物之间的 Tm 值差异最好在 2-5℃ 。对于小于 20 个碱
基的引物其 Tm 值可用简易公式计算，即 Tm=4（G+C）+2（A+T）。 对于 14-70 个核苷
酸的引物可用以下公式计算。
Tm=81.5+16.6（1g[K+]）+0.41（G+C）%-（675/N）
N 表示引物的核苷酸数目， [K+] 表示单价离子即钾离子的浓度。 ③ 避免引物内部
或引物之间存在互补序列（3个碱基），从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结
构的形成。
④ G+C 含量：尽量控制在 40% 至 60% 之间， 4 种碱基的分布应尽可能均匀。尽量
避免嘌呤或嘧啶的连续排列，以及 T 在 3' 末端的重复排列。 ⑤ 引物的 3' 末端最好
是 G 或 C ，但不要 GC 连排。 7请简述DNA诱变的种类和特点
一、 随机诱变 特点：不需要有序列针对性的设计，引起突变的位置及性质是随
机的。 随机诱变的关键和策略，选择合适的突变频率：目的基因中有1.5-5个碱基发生
碱基替换时，诱变结果最理想。根据研究目的对突变体进行定向选择或筛选。做定向进化
或试管进化。
1、 错误渗入诱变
指在体外DNA扩增过程中，使用具有错配倾向的DNA聚合酶以及反应条件，使碱基错
误渗入到新合成的基因中。
2、 盒式诱变
包含简单盒式取代诱变和混合寡核苷酸诱变两种方式。
简单盒式诱变：用限制性内切酶去掉特定的片段，然后用含有突变的序列取代。 若
使用含随机突变的混合寡核苷酸，则可在限定区域内引入大量的随机突变。 3、 增变菌
株的诱变作用 4、 化学诱变
用化学诱变剂处理双链DNA片段，将发生随机突变的片段群体克隆到合适的宿主中可
构成一个重组突变体库。常用的化学试剂有：亚硝酸、羟胺、亚硫酸氢盐或肼。 8某研究
者通过蛋白质分离纯化的方法，得到了某一真核生物蛋白质并测定了该蛋白质N端的氨基
酸序列，请叙述如何综合利用分子生物学和基因工程技术得到该蛋白质相应的cDNA基因
序列？
提取总RNA，设计引物对mRNA进行RT-PCR，连接到载体，进行质粒转化，阳性克隆
筛选，重组质粒鉴定，原核表达，测序。 上游引物设计：可以根据蛋白质N端的氨基酸
序列可以得到几段DNA序列，则是与基因5’的DNA序列，可根据这一段序列设计基因的
上游引物。由于不同的密码子可能编码同一个氨基酸，得到的5’的DNA序列会有好几种，
设计的引物也对应有好几种，再则氨基酸那里不同的基因密码子的偏好性会不同，可以根
据该分离的蛋白质氨基酸密码子的偏好性选择设计好了的合适的上游引物。
下游引物：mRNA的poly-A尾巴对于的olig-dT
利用上述引物对mRNA进行逆转录测序得到的就是cDNA基因序列有好几条，然后到
genebank中进行比对筛选出引物那段序列一致的cDNA序列，那就是要的蛋白质相应的
cDNA序列。
感谢您的阅读，祝您生活愉快。