化妆品企业微生物检验原始记录(国标法)
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 UDC 668：576 .85.07(GB7918.2－87)Standard methods of microbiological examination for cosmeticsStandard plate count细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌，数量。
测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。
1 方法提要化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理物质性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。
2 培养基和试剂2.1 生理盐水：见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分：蛋白胨 20g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.2，加入琼脂，121℃(15 1b)20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。
3 仪器3.1 锥形烧瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压消毒锅。
3.5 试管。
3.6 灭菌平皿：直径9cm。
3.7 灭菌刻度吸管：10ml、2ml、1ml。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。
4 操作步骤4.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ml，分别注入到两个灭菌平甲内，每皿1ml。
化妆品微生物检验方法标准
化妆品微生物检验方法标准概述：化妆品微生物检验是对产品中的微生物含量和活性进行检测，旨在确保化妆品的质量和安全性。
本文将介绍化妆品微生物检验的方法标准，包括采样方法、微生物总数测试、致病微生物测试等内容。
一、采样方法采样是化妆品微生物检验的第一步，正确的采样方法对检验结果的准确性至关重要。
总体的采样方法包括以下几个方面：1. 选取适当数量和规格的样品，并确保样品具有代表性；2. 使用干净的取样工具，避免污染样品；3. 选择不同生产批次和生产日期的化妆品进行采样，以评估产品的质量稳定性；4. 遵循严格的卫生规范和操作规程进行采样。
二、微生物总数测试微生物总数测试是对化妆品样品中微生物总数量的测定。
其目的是评估产品的细菌污染程度和是否符合相关的卫生标准。
以下是常用的微生物总数测试方法：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法通过分离、测定化妆品中微生物代谢产物的含量，从而推断微生物总数；2. 膜过滤法：通过将样品通过膜过滤器，然后将膜培养在适当的培养基上，计数培养基上出现的菌落数量；3. 稀释平板计数法：将样品进行系列稀释后，移取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的平板上，培养并计数菌落数量；4. 流式细胞术：利用流式细胞仪对样品中微生物进行计数和鉴定。
三、致病微生物测试致病微生物测试是对化妆品样品中致病微生物含量的检测。
该测试主要关注常见的致病菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
以下是常用的致病微生物测试方法：1. 酶免疫分析法（ELISA）：通过检测样品中致病菌特异性的抗原或抗体来判断样品是否存在致病菌；2. PCR技术：通过引物特异性扩增样品中的致病菌DNA，从而检测样品是否受到致病菌污染；3. 快速培养技术：利用快速培养方法，减少培养周期，快速检测致病菌的存在。
四、标准和参考文献化妆品微生物检验方法的标准和参考文献主要包括国际组织和国家相关机构发布的标准。
以下是几个常见的标准：1. 国家药品监督管理局发布的《化妆品质量规范》2. 国际标准化组织（ISO）发布的相关标准，如ISO 21149：2020 "Cosmetics -- Microbiology -- Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria"3. 美国食品药品管理局（FDA）发布的相关指导文件，如《微生物检验的尺度适应性》总结：化妆品微生物检验是保证化妆品质量和安全的重要环节。
微生物检测原始记录
室温：湿度：
样品名称
规格
检验类别
出厂检验
抽样基数
抽样方式
抽样数量
检测依据
GB/T4789.2-2010
接种时间
使用主要仪器
恒温培养箱
培养基名称
平板计数琼脂培养基
报告时间
样号
36+1℃培养24～48h
稀释度
报告数cfu/ml(g)
1:10
1:100
1:1000
空白
1
接种量ml
1
1
1
1
0.1
0.01
分析号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
初发酵产酸、气
复发酵产酸、气
BGLB分离培养
2
初发酵产酸、气复发酵产酸、气BGL Nhomakorabea分离培养
检测结果
检验结论
备注：月桂基硫酸盐胰蛋白胨发酵阳性管转种培养实验：1.复发酵：+/+表示产酸、产气为阳性；-/-表示不产酸、不产气为阴性；+/-表示产酸、不产气。接种量在1ml以上者，用双料发酵管；1ml以下者，用单料发酵管。
检验员：审核人：审核时间：
大肠菌群检测原始记录
室温：湿度：
样品名称
规格
检验类别
出厂检验
抽样基数
抽样方式
抽样数量
检测依据
GB/T4789.3-2010
接种时间
使用主要仪器
恒温培养箱
报告时间
样号
培养温度、时间
培养基名称
结果判定报告数（MPN）/100ml(g)
36±1℃24h±2
化妆品原料微生物检验标准
化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的：评估化妆品原料的细菌污染程度，反映化妆品生产过程中的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行细菌总数的测定。
3.判定标准：细菌总数小于或等于1000 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
二、霉菌和酵母菌总数1.目的：评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。
3.判定标准：霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
三、耐热大肠菌群1.目的：检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。
3.判定标准：未检出耐热大肠菌群为合格，检出耐热大肠菌群为不合格。
四、金黄色葡萄球菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。
3.判定标准：未检出金黄色葡萄球菌为合格，检出金黄色葡萄球菌为不合格。
五、铜绿假单胞菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。
3.判定标准：未检出铜绿假单胞菌为合格，检出铜绿假单胞菌为不合格。
六、沙门氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行沙门氏菌的测定。
3.判定标准：未检出沙门氏菌为合格，检出沙门氏菌为不合格。
七、志贺氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行志贺氏菌的测定。
3.判定标准：未检出志贺氏菌为合格，检出志贺氏菌为不合格。
八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的：检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7，预防感染性疾病的发生。
化妆品微生物检测标准
化妆品微生物检测标准
一、细菌总数检测
细菌总数是指化妆品中含有的细菌类微生物的总数。
细菌总数是评价化妆品卫生质量的重要指标之一，也是反映化妆品被污染程度的重要指标之一。
实验原理：采用倾注平板法，将一定体积的样品注入细菌培养基中，经过培养后，细菌在培养基表面生长繁殖形成菌落，通过计数菌落数，可以推测出样品中细菌的总数。
实验步骤：
（1）将样品进行适当稀释；
（2）将一定体积的稀释液注入细菌培养基中；
（3）将培养基放入培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养；
（4）观察菌落的生长情况，并进行计数。
注意事项：
（1）实验前要对手部进行消毒，避免污染样品和培养基；
（2）实验过程中要使用无菌技术和无菌器材；
（3）实验后要对培养基进行灭菌处理。
二、大肠菌群检测
大肠菌群是指一群好氧性芽孢杆菌，它们的出现意味着化妆品可能被粪便污染。
实验原理：采用滤膜法，将一定体积的样品通过滤膜过滤，将滤膜放在培养基上培养，观察是否有大肠菌群生长。
实验步骤：
（1）将样品进行适当稀释；
（2）将滤膜放在过滤器上，将稀释液过滤；
（3）将滤膜放在培养基上培养；
（4）观察是否有大肠菌群生长。
注意事项：
（1）实验前要对手部进行消毒，避免污染样品和培养基；
（2）实验过程中要使用无菌技术和无菌器材；
（3）实验后要对培养基进行灭菌处理。
三、肠道致病菌检测
肠道致病菌是指能够引起肠道疾病的细菌，如沙门氏菌、霍乱弧菌等。
实验原理：采用生化反应和血清学试验等方法，对样品中的肠道致病菌进行检测。
化妆品微生物标准检验方法总则及注解
化妆品微生物标准检验方法总则及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法 UDC 668：576 .85.07总则 (GB7918.1－87)Standard methods of microbiological examination for cosmeticsGeneral rules1 样品的采集及注意事项1.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。
包装量小的样品，取样量可酌减。
1.2 供检样品，应严格保持原有的包装状态。
容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。
1.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验，样品应放不室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
1.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其他分析。
1.5 在检验过程中，从开封到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行。
或在相应条件下，按无菌操作规定进行。
1.6 如检出烘大肠菌群或其他致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。
2 供检样品的制备2.1 培养基和试剂2.1.1 生理盐水氯化钠8.5g蒸馏水1000ml溶解后，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90ml，121℃(15 1b)20min高灭菌。
2.1.2 SCDLP液体培养基成分：酪蛋白胨 17g大豆蛋白胨 3g氯化钠 5g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法：将上述成分混合后，加热溶解，凋pH为7.2～7.3分装，121℃(15 1b)20min 高压灭菌。
注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。
注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用日本多胨代替。
化妆品微生物检验
一、总则General Principle1 范围本规范规定了化妆品微生物学检验总则。
本规范适用于化妆品样品的采集、保存、供检样品制备。
2 仪器和设备2.1 天平。
2.2 高压灭菌器。
2.3 振荡器。
2.4 三角瓶。
2.5 玻璃珠。
2.6 玻璃棒。
2.7 刻度吸管。
2.8 研钵。
2.9 均质器。
2.10 恒温水浴箱。
2.11 采样用具：不锈钢勺，剪刀，开罐器等。
3 培养基和试剂3.1 生理盐水成分：氯化钠8.5g蒸馏水加至1000 mL溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌。
3.2 SCDLP液体培养基成分：酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g氯化钠5g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为7.2～7.3，分装，103.43kPa(15lb)20min高压灭菌。
注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。
注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
3.3 灭菌液体石蜡。
3.4灭菌吐温80。
4 样品的采集及注意事项4.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。
包装量小于20g的样品，采样量应适量增加，其总量应大于16g。
4.2 供检验样品，应严格保持原有的包装状态，进口产品应为市售包装。
容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。
4.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
4.4 若只有一份样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，应先做微生物检验，再将剩余样品做其它分析。
4.5 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。
微生物检验原始记录
净含量检测原始记录
样品名称检验日期生产日期样品状态检测依据JJF1070-2005定量包装商品净含量计量检验规则
序号净含量标示值实测值偏差平均值报出值1
2
3
4
5
微生物检验原始记录
样品名称样品生产日期
检测起止日期接样日期
检测依据□GB4789.2-2016□GB4789.3-2016
检测仪器□电子天平（型号：FA1004）□电热恒温培养箱（型号：202-0型）□净化工作台（型号：2D)□高压灭菌锅（型号：JX-18B）
□万用电炉（型号：DL-1）□组织捣碎机（型号：FK-A(JJ-2)
培养基□平板计数琼脂□结晶紫中性红胆盐琼脂□煌绿乳糖胆盐肉汤
样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225ml生理盐水的无菌灭菌杯内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25ml于样品于225ml生理盐水中，混匀。
□液体样品：直接吸原液检验。
菌落总数/（CFU/g）N=5，c=2，m=104，M=105大肠菌群/（CFU/g）N=5，c=2，m=10，M=102
菌落总数
培养温度℃，培养时间h
序号10-110-210-3空白检测结果/（CFU/g）1
2
3
4
5
大肠菌群
培养温度℃，培养时间h
BGLB培养,观察产气试管数培养温度℃，培养时间h
序号10-110-210-3空白产气试管数检测结果/（CFU/g）1
2
3
4
5
检验人：审核人：。
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所用培养基及批号:□Baird Parker培养基□甘露醇发酵培养基
镜检
甘露醇发酵试验
血浆凝固酶试验
结果：□未检出（符合规定）
□检出（不符合规定）
结论：□检验合格□检验不合格
4、被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
所用培养基及批号:□SCDLP液体培养基
□十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基
2、如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃培养18h-24h。同时取该培养液1-2滴接种到蛋白胨水中，置44.5℃±0.5℃培养24h±2h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。平板上无菌落生长，可作出未检出耐热大肠菌群。耐热大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深菌落。挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5mL，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红色，阴性反应液面呈试剂本色。根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则报告被检样品中检出耐热大肠菌群。
微生物检验记录
产品名称
产品批号
检验日期
年月日
检验类别
原料半成品成品
报告日期
年月日
供试液制备：取供试品□10g□10mL，加到90mL灭菌生理盐水中，混匀制成1:10供试液，下一级稀释采用10倍递增稀释法。
检验项目
检验结果
一、菌落总数
皿号
10-1
10-2
空白对照
取适宜的连续2个稀释度的供试液2mL，分别注入到2个无菌平皿中，每皿1mL，每皿倾注约15mL卵磷脂吐温80营养琼脂（1个不加样品的平皿，倾注培养基作为空白对照），随即转动平皿，使供试液与培养基混匀后置水平台面上，待凝固后将平皿倒置于36℃±1℃培养箱中培养48h±2h，计算平皿上的菌落数。
所用培养基及批号：□孟加拉红琼脂
1
2
结果:□CFU/g□CFU/mL
□符合规定□不符合规定
三、耐热大肠菌群
供试品
1、取10mL1:10的供试液，加到10mL双倍乳糖胆盐培养基（含中和剂）中，置44.5℃±0.5℃培养箱中培养24h，如不产酸也不产气，继续培养至48h，如仍既不产酸也不产气，则报告为耐热大肠菌群阴性。
所用培养基及批号：□卵磷脂吐温80营养琼脂
1
2
结果:□CFU/g□CFU/mL
□符合规定□不符合规定
二、霉菌和酵母菌
皿号
10-1
10-2
空白对照
取适宜的连续2个稀释度的供试液2mL,分别注入到2个无菌平皿中，每皿1mL，倾注孟加拉红琼脂（1个不加样品的平皿，倾注培养基作为空白对照），随即转动平皿，使供试液与培养基混匀后置水平台面上，待凝固后将平皿倒置于28℃±2℃培养箱中培养5d，计算平皿上的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其它霉菌和酵母菌的计数,应于48h及时将此平板取出计数。
镜检
氧化酶试验
绿脓菌素试验
硝酸盐还原产气试验
明胶液化试验
42℃生长试验
结果：□未检出（符合规定）
□检出（不符合规定）
五、金黄色葡萄球菌
供试品
1、取1:10样品供试液10mL加到90mL的SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养24h±2h。
2、自上述增菌培养液中，取1-2接种环，划线接种在Baird Parker平板培养基，置36℃±1℃培养48h，观察菌落生长情况。如无菌落生长，可作出未检出金黄色葡萄球菌报告。在Baird Parker平板培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带或及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养24h±2h。挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检，革兰氏阳性球菌者应进行甘露醇发酵试验、血浆凝固酶试验。
2、从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置36℃±1℃培养18h-24h，观察菌落生长情况。如无菌落生长，可作出未检出铜绿假单胞菌。凡铜绿假单胞菌在此培养基上，其菌落呈扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，菌落周围培养基呈红色，其他菌不生长。
3、挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性菌者应进行氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验、42℃生长试验。
所用培养基及批号：□双倍乳糖胆盐培养基（含中和剂）
□伊红美蓝琼脂培养基□蛋白胨水培养基
EMB
颜色
形状
边缘
表面
镜检
பைடு நூலகம்靛基质试验
结果：□未检出（符合规定）
□检出（不符合规定）
四、铜绿假单胞菌
供试品
1、取1:10样品供试液10mL加到90mL的SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养18h-24h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
检验
复核
制表人/日期：审批人/日期：