寄生虫实验诊断方法

1临床诊断：A病史、症状、体征 B物理诊断：X线、B超、CT、MRI

2实验室检查：A病原学方法：粪便检查；血液检查；排泄物分泌物检查；其他器官组织检查

B免疫学方法 C分子生物学方法

（一）粪便检查：直接涂片法；厚涂片法；浓集法；毛蚴孵化法；肛门拭子检查法；钩蚴培养法；虫卵计数法；定量透明法；带绦虫孕节检查法。粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。要取得准确的结果

1）粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24小时； 2）盛粪便的容器要干净，并防止污染与干燥；3）粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果； 4）取材部位：尽可能取病变部位。

直接涂片法:用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。方法简便，适用范围广，但检出率相对较低。一般要求连续作3次涂片，可提高检出率。

⑴蠕虫卵检查：方法：一般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。应注意虫卵与粪便中异物的鉴别。虫卵都具有一定形状和大小；卵壳表面光滑整齐，具固有色泽；卵内含卵细胞或幼虫。

⑵原虫检查：1）活滋养体检查：方法同查蠕虫卵。注意事项。 2）包囊的碘液染色检查：方法同上，以一滴碘液代替生理盐水。若同时需检查活滋养体，可在用生理盐水涂匀的粪滴附近滴一滴碘液，再盖上盖片。涂片染色的一半查包囊；末染色的一半查活滋养体。

3）隐孢子虫卵囊染色检查：目前较佳的方法为金胺酚改良抗酸染色法。对于新鲜粪便或经10％福尔马林固定保存的含卵囊粪便都可用此法染色。染色过程是先用金胺－酚染色，再用改良抗酸染色法复染。

厚涂片透明法（改良加藤法）取约5mg粪便，置于载玻片上，覆以浸透甘油－孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压，使粪便铺开（20×25mm）。待粪膜稍干，即可镜检。玻璃纸准备：将玻璃纸浸于甘油－孔雀绿溶液中，至少浸泡24小时，至玻璃纸呈现绿色。使用此法需掌握粪膜的合适厚度和透明的时间。如粪膜厚，透明时间短，虫卵难以发现；如透明时间过长，则虫卵变形，也不易辨认。

沉淀法：原虫包囊和蠕虫卵的比重大可沉集于水底，有助于提高检出率。但比重较小的钩虫卵和某些原虫包囊则效果较差。方法：自然沉淀法；离心沉淀法；醛醚沉淀法；

自然沉淀法：取粪便20～30g、加水成混悬液，经金属筛过滤，再加清水冲洗残渣；过滤粪液在容器中静置25分钟，倒去上液，重新加满清水，以后每隔15～20分钟换水一次（3～4次），直至上液清晰为止。最后倒去上液，取沉渣作涂片镜检。

离心沉淀法：将上述滤去粗渣的粪液离心（1500～2000rpm/min）1～2分钟，倒去上液，注入清水，再离心沉淀，如此反复沉淀3～4次，直至上液澄清为止，最后倒去上液，取沉渣镜检。

醛醚沉淀法：置粪便1～2g加水10～20ml调匀，将粪便混悬液过滤，离心（2000rpm）2分钟；倒去上层粪液，加水10ml混匀，离心2分钟；倒去上液，加10％甲醛7ml。5分钟后加乙醚3ml，塞紧管口并充分摇匀，取下管口塞，离心2分钟，即可见管内自下而上分为4层。取管底沉渣涂片镜检。如检查原虫包囊，可加卢戈氏液染色，加盖片镜检。

浮聚法：利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮，集中于液体表面。常用的方法有三种：

1.饱和盐水浮聚法；

2.硫酸锌离心浮聚法；

3.蔗糖离心浮聚法

饱和盐水浮聚法：此法用以检查钩虫卵效果最好。方法、优缺点、适用范围。饱和盐水配制：将食盐徐徐加入盛有沸水的容器内，不断搅动，直至食盐不再溶解为止

硫酸锌离心浮聚法：此法可用于检查原虫包囊，球虫卵囊和蠕虫卵。取粪便约1g，加水充分搅碎，按离心沉淀法过滤，反复离心3～4次，至水清为止，最后倒去上液，在沉渣中加入比重的硫酸锌液（33％的溶液），调匀后再加硫酸锌溶液至距管口约1cm处，离心1分钟。用金属环取表面的粪液置于载玻片上，加碘液一滴，镜检。

蔗糖离心浮聚法：此法适用于检查粪便中隐孢子虫的卵囊。取粪便约加水并过滤。取滤液离心5～10分钟，吸弃上清液，加蔗糖溶液再离心，然后如同饱和盐水浮聚法，取其表液膜镜检（高倍或油镜）。卵囊透明无色，隐孢子虫的卵囊在漂浮液中浮力较大，常紧贴于盖片之下，但1小时后卵囊脱水变形不易辨认，故应立即镜检。也可用饱和硫酸锌溶液或饱和盐水替代蔗糖溶液。

毛蚴孵化法取粪便约30g，先经重力沉淀法浓集处理,将粪便沉渣倒入三角烧瓶内，加清水（去氯水）至

瓶口,在20～30℃的条件下经4～6小时后肉眼或放大镜观察结果。,如见水面下有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。

肛门拭子检查法适用于在肛周产卵（蛲虫），或常在肛门附近发现虫卵（牛带绦虫）的虫卵检查法。

棉签拭子法：用浸泡生理盐水的棉签，在肛门周围擦拭，随后将棉签放入盛有饱和盐水的试管中，用力搅动，迅速提起棉签并弃去，再加饱和盐水至管口处，覆盖一载玻片，5分钟后取载玻片镜检。也可将擦拭肛周的棉签放在盛清水的试管中，经充分浸泡，取出，弃去。试管静置10分钟，或经离心后，倒去上液，取沉渣镜检。

透明胶纸法：用长约6cm，宽约2cm的透明胶纸粘擦肛门周围的皮肤，取下胶纸，将有胶面平贴玻片上，镜检。

钩蚴培养法：根据钩虫卵在适宜条件下可在短时间内孵出幼虫的原理设计的方法。

虫卵计数法:虫卵计数用于估计人体内寄生虫的感染度，常用司徒尔（Stoll）氏法，即司氏稀释虫卵计数法

定量透明法适用于各种粪便内蠕虫卵的检查及计数。方法：将所得虫卵数×24，再乘上述粪便性状系数，即为每克粪便虫卵数（eggs per gram，EPG）。

（二）血清检查：是诊断疟疾、丝虫病的基本方法。涂制血膜用的载玻片用前需经洗涤液处理，自来水、蒸馏水冲洗，在95％酒精中浸泡，擦干或烤干后使用。厚薄血膜同片制作:检查疟原虫。操作步骤、优缺点

检查微丝蚴

⑴新鲜血片检查：晚间9时至次晨2时取血1滴滴于载玻片上，加盖片，在低倍镜下观察，发现蛇形游动的幼虫后，仍须作染色检查，以确定虫种。

⑵厚血膜检查：厚血膜的制作、溶血、固定与姬氏液染色同疟原虫。但需取血3滴，也可用苏木素染色法染色。

（三）排泄物与分泌物等的检查

痰液痰中可能查见肺吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体、棘球蚴的原头蚴、粪类圆线虫幼虫、蛔蚴、钩蚴、尘螨等；卡氏肺孢子虫的包囊也可出现于痰中，但检出率很低。

肺吸虫卵检查：直接涂片法；浓集法

直接涂片法：在洁净载玻片上先加1～2滴生理盐水，挑取痰液少许，最好选带铁锈色的痰，涂成痰膜，加盖片镜检。如未发现肺吸虫卵，但见有夏科－雷登晶体，提示可能是肺吸虫患者。

浓集法：收集24小时痰液，置于玻璃杯中，加入等量10％NaOH溶液，使痰液消化成稀液状。以1500rpm 离心5～10分钟，弃去上清液，取沉渣滴涂片检查。

溶组织内阿米巴大滋养体检查：取新鲜痰液作涂片。天冷时应注意镜台载玻片保温。高倍镜观察。如为阿米巴滋养体，可见其伸出伪足并作定向运动。

十二指肠液和胆汁用十二指肠引流管抽取十二指肠液及胆汁，以直接涂片法镜检；

也可经离心浓集后，吸取沉渣镜检。可检查蓝氏贾第鞭毛虫滋养体、华支睾吸虫卵、肝片形吸血卵和布氏姜片虫卵等；急性阿米巴肝脓肿患者偶在胆汁中发现大滋养体。

尿一般先离心，后取沉渣镜检。但乳糜尿需加等量乙醚，用力振荡，使脂肪溶于乙醚。然后吸去脂肪层，离心，取沉渣镜检。

鞘膜积液主要检查班氏微丝蚴。阴囊皮肤经碘酒精消毒后，用注射器抽取鞘膜积液作直接涂片检查，也可加适量生理盐水稀释离心，取沉渣镜检。

阴道分泌物检查阴道毛滴虫

其它器官组织检查

1．骨髓穿刺主要检查杜氏利什曼原虫无鞭毛体。一般常作髂骨穿刺，取少许骨髓液作涂片；甲醇固定，同薄血膜染色法染色，油镜检

淋巴结穿刺