小鼠动脉血管内皮细胞的原代培养和鉴定_周晓彤

子、渗透压变化、生长因子撤除等所激活。有研究表明,大鼠全脑缺血再灌可以诱导J NK1/2磷酸化活性增强,并且出现2个激活峰,分别为复灌30m in 和3天[4]。其中第2个激活峰通常被认为与细胞迟发性死亡有重要关系。与之相符的是,本实验结果也显示局灶脑缺血2h再灌注过程中J NK1/2呈现30m i n和3天2个激活峰,分别为sha m组的2.3和2.8倍(见图1,P<0.05,n=5)。由于3天J NK1/2激活峰被认为与细胞迟发性死亡有关,因而,我们选择3天这个时间点来观察Egb761干预对J NK1/2活化的影响。发现Egb761可以显著抑制缺血/再灌注3天对J NK1/2的活化。这同样也说明了Egb761可能通过抑制J NKs信号通路减少细胞凋亡从而产生保护作用。Egb761诱导J NK1/2抑制可能与Egb761有抗自由基、保护细胞功能的作用有关。有大量研究表明,Egb761能有效抑制脑缺血/再灌注损伤NOS活性,减少NO产生和直接清除NO[9]。研究发现,Egb761在脑缺血后能有效清除自由基,可防止脑缺血后的神经细胞凋亡。而NO生成增多可以激活J NK信号通路[10]。这里提出一个推测: Egb761有可能通过减少NO的生成从而抑制J NK 通路的激活来达到保护作用。

综上所述,脑缺血/再灌注可以激活J N K信号通路,Egb761可以抑制J NK信号通路的激活,表明Egb761对大鼠脑缺血/再灌注损伤有良好的保护作用,对J NK信号通路进行调节,抑制J NK死亡通路,进而抑制细胞凋亡是Egb761脑保护的可能机制之一。

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收稿日期:2007-03-02修回日期:2007-05-15

本文编辑:徐芹

小鼠动脉血管内皮细胞的原代培养和鉴定*

周晓彤1,沈振亚2,滕小梅2,夏漫辉2

(1.徐州医学院附属医院心胸外科,江苏徐州221002;

2.苏州大学附属第一医院心血管外科器官移植研究室,江苏苏州215006)

摘要:目的探讨小鼠动脉血管内皮细胞分离、培养的方法,为进一步实验研究提供相应的技术手段。方法手术显微镜辅助下取小鼠主动脉,去除外膜及脂肪组织,将血管剪成1mm@1mm大小的组织块,用植块法在含20%胎牛血清的DM E M培养液中培养。倒置相差显微镜观察细胞形态和生长特征,免疫细胞化学方法进行血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原(von W illebrand facto r,v W F)鉴定。结果60h后,相差显微镜下可观察到内皮细

*基金项目:国家自然科学基金九五重大课题(39993430)