汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定

2、色谱检识 、 色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板 色谱材料：硅胶 硬板 点样：汉防己总碱、 点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己 乙素的0.1%醇溶液 乙素的 醇溶液 展开剂： 氯仿—丙酮 甲醇（ ∶ ∶ ） 丙酮—甲醇 展开剂：①氯仿 丙酮 甲醇（6∶1∶1） 氯仿—乙醇 乙醇（ ∶ ） ②氯仿 乙醇（10∶1） 甲苯—丙酮 乙醇（ ∶ ∶ ） 丙酮—乙醇 ③甲苯 丙酮 乙醇（4∶5∶1） 显色剂：改良碘化铋钾试剂 显色剂： 观察记录： 观察记录：记录图谱及斑点颜色
Oe M H3C N O R O O Oe M N CH3
汉防己甲素 R=CH3 汉防己乙素 R=H
实验器材： 实验器材： 试药：汉防己、 乙醇、 盐酸 氯仿、 盐酸、 试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、 乙醇 氨水、 氢氧化钠 无水硫酸钠、氧化铝、 氢氧化钠、 氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、 丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、 丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、 碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂 碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、 碘化钾试剂 等 仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、 仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层 析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、 析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、 试管等
实验四 汉防己中生物碱的 提取、 提取、分离和鉴定
实验目的： 实验目的： 1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 2、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 3、掌握生物碱的鉴定方法。 、掌握生物碱的鉴定方法。
实验原理： 实验原理： 根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇 的通性，利用乙醇提取总生物碱。 的通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵 型生物碱易溶于水， 型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂 的性质， 的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和 水溶性生物碱； 水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸 结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂， 结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂， 在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的 性质反复处理后， 性质反复处理后，在利用两者在冷苯中溶解 度的不同，使它们相互分离。 度的不同，使它们相互分离。
实验注意事项： 实验注意事项： 1、 提取装置的安装要小心， 不能打碎仪 、 提取装置的安装要小心 ， 器。 2、 提取总生物碱时 ， 回收乙醇至稀浸膏 、 提取总生物碱时， 状即可，过干时， 状即可 ， 过干时 ， 当加入盐酸后会结成胶 状团块，影响提取效果。 状团块，影响提取效果。 3、用 1%氢氧化钠溶液洗氯仿液目的是分 、 氢氧化钠溶液洗氯仿液目的是分 除酚性生物碱。 除酚性生物碱 。 汉防己乙素结构中的酚羟 基由于空间效应和氢键的形成， 基由于空间效应和氢键的形成 ， 呈隐性酚 羟基性质，酸性减弱，不溶于强碱溶液中， 羟基性质 ， 酸性减弱 ， 不溶于强碱溶液中 ， 在此步骤中仍留在氯仿液中。 在此步骤中仍留在氯仿液中
实验内容与方法： 实验内容与方法： 一、总生物碱的提取 取汉防己粉末100g，置于 取汉防己粉末 ， 置于500ml圆底烧瓶 圆底烧瓶 乙醇300ml， 水浴加热回流 小时 ， 小时， 中 ， 加 85%乙醇 乙醇 ， 水浴加热回流1小时 滤 出 乙 醇 提 取 液 ； 药 渣 重 新 加 入 85% 乙 醇 200ml同法提取 次 ， 合并两次提取液 ， 过滤 ， 同法提取1次 合并两次提取液， 过滤， 同法提取 浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。 浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。
三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离 1.装柱 取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下 装柱 取层析柱垂直固定在铁架台上， 端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目20g，缓缓 端垫入少量棉花，称取中性氧化铝 目 ， 加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱， 加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在 柱中填实均匀。 柱中填实均匀。 2.上样 取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少 汉防己总碱置于小蒸发皿中， 上样 汉防己总碱置于小蒸发皿中 量丙酮溶解，另加0.5g色谱用氧化铝（作吸附剂）， 色谱用氧化铝（ 量丙酮溶解，另加 色谱用氧化铝 作吸附剂）， 搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。 搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样 品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。 品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。 3.洗脱 将色谱柱活塞开，以环己烷 丙酮（4∶1） 丙酮（ ∶ ） 洗脱 将色谱柱活塞打开，以环己烷-丙酮 洗脱，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml～ 洗脱，流速控制在 ，收集各流分（ ～ 15ml/份）。 份 4.检查 将各流分回收溶剂，依次点于硅胶 检查 将各流分回收溶剂，依次点于硅胶G-CMCNa薄层板上，用氯仿 丙酮 甲醇（6∶1∶1）为展 薄层板上， 丙酮—甲醇 薄层板上 用氯仿—丙酮 甲醇（ ∶ ∶ ） 开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂， 开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的 Rf值，合并相同 值的流分。 值的流分。 值 合并相同Rf值的流分 5.结晶 将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置， 结晶 将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置， 析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、 析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉 防己乙素结晶。
四、检识 1、化学检识 、 将提取的氯仿液， 将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃 的盐酸萃 得盐酸溶液10毫升 毫升， 取，得盐酸溶液 毫升，分为四个小 试管储存， 试管储存，分别在四个小试管中加入 改良碘化铋钾、 碘化钾 碘化汞钾、 碘化钾、 改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、 硅钨酸试剂，观察各试管中的变化， 硅钨酸试剂，观察各试管中的变化， 记录在如下表格中。 记录在如下表格中。
二、精制 将上述糖浆状提取液转入烧杯中， 将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐 盐 酸调PH为 ，边加边搅拌，静置，过滤， 酸调 为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄 明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为 明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调 为 10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后 以上， 以上 于分液漏斗中振摇萃取， 放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次， 放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯 仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化 仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以 氢氧化 钠溶液洗2次 再用水洗2-3次后加入约 次后加入约5g无水 钠溶液洗 次，再用水洗 次后加入约 无水 硫酸钠脱水，放置过夜，过滤， 硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少 得汉防己总碱。 量，得汉防己总碱。