细胞增殖实验(Brdu法)
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细胞增殖实验(Brdu法)
1.将盖玻片放入到24孔板中，将长满的大盘细胞用胰酶消化后，按1-2万个细胞/孔加入到24孔板中。
2.待细胞长至50%-60%的密度后，更换培养液，导入相应质粒，4-6小时后更换培养液。
3.培养24h后，于每孔板加入10µm的Brdu，继续培养4h。
4. 4％冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。
5. 0.2％Triton X－100通透10分钟，PBS洗三遍。
6. 按1:1000稀释Brdu抗体，于每孔中加300µl，4度过夜后，PBS洗三遍。
7.0.5ug/ml DAPI染核，然后直接照荧光片。
8.蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。
4%20min
甲醇+30%丙酮）
PBS3×5min
穿孔15min
()
PBS×5min
加入5%BSA Brdu，于4℃杂交过夜
PBS×5min
染色2min
1.将盖玻片放入到24孔板中，将长满的大盘细胞用胰酶消化后，按1-2万个细胞/孔加入到24孔板中。
2.待细胞长至50%-60%的密度后，取出细胞爬片，
3. 4％冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗两遍。
4. 2N HCL in PBS(1:5 用PBS稀释盐酸) 室温10分钟
5. neutralize by incubating the samples in borate buffer (0.1 M) for 10 min at room temperature.
硼酸中和，PBS 3次
4. Blocking buffer (5% BSA, PBS, Tween-20 0.2%)。Goat serum 10%
5. Blocking buffer封闭（5%BSA）1 小时
6. BrdU(rat)/Cdk5(rabbit) 一抗4度过夜，PBS洗三遍。
7.二抗室温2小时（避光），或者37度1半小时，PBS洗三遍。
（一抗，二抗稀释到blocking buffer）
Dip the cover silp into DD-H20, and air-dry in filter-paper.
8. Anti-fade with DAPI,put the coversilp up-side down,然后直接照荧光片。
9.指甲油封片子的四周。