0.22微米过滤除菌能去除内毒素吗
溶液过滤除菌操作规程
溶液过滤除菌操作规程一、目的1.保证实验室中的溶液在进行实验前得到有效的除菌处理，防止实验中的交叉感染。
2.减少实验操作时的污染，提高实验结果的准确性和可靠性。
二、范围适用于实验室中常见的溶液的除菌处理操作。
三、操作步骤1.准备工作（1）准备所需的溶液：例如含有细菌的培养基、蛋白质溶液等。
（2）准备滤纸或膜：选择合适的滤纸或膜，如无菌过滤器或0.22微米的滤膜。
（3）准备滤液装置：如无菌滤液器、滤液瓶等。
（4）准备操作台面：清洁操作台面，可用70%酒精进行消毒处理。
2.过滤操作（1）无菌操作：准备好所需的材料后，进行无菌操作。
洗手、穿戴实验服、戴上手套。
（2）连接滤液装置：将滤液瓶和滤膜按照说明书进行连接。
（3）浸润滤膜：将滤膜放入无菌的过滤器中，用适量的溶液进行浸润，以充分湿润滤膜表面。
（4）滤液过滤：将浸润后的滤膜装置放在一个无菌的容器（如培养皿）上，然后将待过滤的溶液缓慢地倒入滤液装置中，让溶液经过滤膜过滤，滤液流入滤液瓶中。
（5）滤液回收：滤液装置中的溶液过滤完毕后，可以回收滤液。
将滤液瓶中的滤液转移至无菌容器中，等待后续处理。
（6）清洗和消毒：滤液装置和滤膜过滤完毕后，需进行清洗和消毒处理。
首先将滤液瓶和滤膜取出，用温水和洗涤剂进行清洗，然后用70%酒精进行消毒，彻底清洗干净，放置到干燥的地方。
3.建档记录（1）操作人员和日期：记录进行该操作的人员和日期。
（2）滤液装置和滤膜信息：记录所使用的滤液装置和滤膜的批号、型号等信息。
（3）溶液信息：记录所使用的溶液的名称、浓度、制备日期等信息。
（4）滤液处理结果：记录滤液处理后的结果，如是否除菌成功等。
四、安全注意事项1.操作过程中要严格遵守无菌操作规范，以防止交叉污染。
2.操作时要佩戴实验服、手套等个人防护用品，以保证操作的安全性。
3.滤液装置和滤膜的选择要根据溶液的性质进行，确保能够有效过滤除菌。
4.操作完成后要及时清洗和消毒滤液装置和滤膜，以保持其无菌状态。
16 PALL 除菌过滤法规要求和相关方案(楚天-out)
欧盟GMP指南
Note for guidance on Manufacture of the Finished Dosage Form (1996)
成品剂型生产规范指南
7. Special Items (特别事项)
对于过滤除菌而言，必须在申请文件中注明过滤之前容许的微 生物污染水平的最大值。大多数情况下，药品中可以接受的水 平为10 CFU /100 ml，取决于待过滤药品体积与过滤器直径的 相对比例。如果达不到上述要求，有必要利用细菌截留过滤器 进行预过滤，以达到足够低的微生物污染水平。
第七十五条
（一）可最终灭菌的产品不得以过滤除菌工艺替代最终灭菌工艺。 如果药品不能在其最终包装容器中灭菌，可用0.22μm（更小或相 同过滤效力）的除菌过滤器将药液滤入预先灭菌的容器内。由于除 菌过滤器不能将病毒或支原体全部滤除，可采用热处理方法来弥补 除菌过滤的不足。 （二）应当采取措施降低过滤除菌的风险。宜安装第二只已灭菌的 除菌过滤器再次过滤药液，最终的除菌过滤滤器应当尽可能接近灌 装点。
是 辐射灭菌，吸收剂量≥ 25KGy
是 经过验证的辐射剂量，辐射灭菌
是 除菌过滤和无菌工艺过程
9
新版GMP的要求概述
除菌过滤工艺
灭菌方法决策树的理念 “除菌级”过滤器 过滤器的完整性 过滤器的确认和工艺验证 气体过滤器的选择 过滤器灭菌方式的选择
10
新版GMP
附录1 无菌药品
另外，检测应当原位进行以确认滤壳内的整体过滤器的 完整性。
EMA/Regulatory/Inspections/(GMP/GDP compliance)/Q&A
26
美cGMP
FDA Guidance for Industry –Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing （Sept. 2004）
去除热源和细菌内毒素的方法
去除热源和细菌内毒素的方法
去除热源和细菌内毒素是制药和生物制品生产过程中的重要环节。
1. 热处理：热处理是一种有效的去除热源和细菌内毒素的方法。
通过将溶液或产品加热到一定温度并维持一定时间，可以破坏细菌细胞和病毒，同时还可以灭活内毒素。
热处理通常分为巴氏灭菌、高温短时灭菌和超高温瞬时灭菌等不同方法，具体选择取决于产品的性质和生产工艺要求。
2. 过滤：过滤是一种常用的去除热源和细菌内毒素的方法。
通过使用孔径合适的过滤器，可以去除溶液或产品中的细菌、颗粒物和内毒素等杂质。
在过滤过程中，需要选择合适的滤膜材质和孔径大小，以确保过滤效果和产品透过率。
3. 化学处理：化学处理是一种使用化学物质破坏细菌和内毒素的方法。
常用的化学物质包括次氯酸钠、过氧化氢、甲醛等。
这些化学物质可以与细菌和内毒素发生反应，破坏其结构和活性，从而达到去除的目的。
4. 紫外线照射：紫外线照射是一种有效的杀菌方法。
通过照射一定时间和剂量的紫外线，可以破坏细菌细胞和病毒的核酸结构，导致其死亡。
同时，紫外线还可以破坏内毒素的结构，降低其毒性。
5. 离子交换：离子交换是一种利用离子交换剂与溶液中的离子进行交换的方法。
通过使用适当的离子交换剂，可以去除溶液中的细菌、内毒素和其他杂质。
离子交换剂的选择取决于目标离子的性质和浓度。
去除热源和细菌内毒素的方法有很多种，具体选择取决于产品的性质、生产工艺要求和质量标准。
在生产过程中，需要采取有效的措施确保产品质量和安全性。
除菌过滤指南
附件1除菌过滤技术及应用指南1.目的为指导和规范除菌过滤技术在无菌药品生产中的应用，保证无菌药品的安全、有效和质量稳定，依据《药品生产质量管理规范（2010年修订）》及附录，制定本指南。
本指南不具有法律约束性，仅作为药品生产企业、工程设计、设备制造以及药品监管单位的人员参考使用。
本指南是基于目前的认知与科技水平起草的，并不限制新技术与新方法的引入。
企业可以采用经过验证的替代方法，达到本指南要求。
2.定义本指南中的除菌过滤是指采用物理截留的方法去除液体或气体中的微生物，以达到无菌药品相关质量要求的过程。
3.范围本指南包括除菌过滤系统的设计、选择、验证、使用等内容，适用于无菌药品从工艺开发到上市生产的整个生命周期。
4.过滤工艺及系统设计4.1 过滤工艺的设计过滤工艺设计时，应根据待过滤介质属性及工艺目的，选择合适的过滤器并确定过程参数。
除菌过滤工艺应根据工艺目的，选用0.22—1 —微米（更小孔径或相同过滤效力）的除菌级过滤器。
0.1微米的除菌级过滤器通常用于支原体的去除。
对无菌药品生产的全过程进行微生物控制，避免微生物污染。
最终除菌过滤前，待过滤介质的微生物污染水平一般小于等于10cfu/100ml。
选择过滤器材质时，应充分考察其与待过滤介质的兼容性。
过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量产生不利影响。
除菌过滤器不得脱落纤维，严禁使用含有石棉的过滤器。
合理的过滤膜面积需要经过科学的方法评估后得出。
面积过大可能导致产品收率下降、过滤成本上升；过滤面积过小可能导致过滤时间延长、中途堵塞甚至产品报废。
应注意过滤系统结构的合理性，避免存在卫生死角。
过滤器进出口存在一定的限流作用。
应根据工艺需要，选择合适的进出口大小。
选择过滤器时，应根据实际工艺要求，确定过滤温度范围、最长过滤时间、过滤流速、灭菌条件、进出口压差范围或过滤流速范围等工艺参数，并确认这些参数是否在可承受范围内。
药品生产企业在选择除菌过滤器供应商时，应审核供应商提供的验证文件和质量证书，确保选择的过滤器是除菌级过滤器。
0.22μm 热原 -回复
0.22μm 热原-回复什么是0.22μm 热原？0.22μm热原是一种微孔过滤器，其孔径大小为0.22微米。
它被广泛应用于各种领域，特别是在生物医学领域。
由于其微小的孔径，它能够有效地过滤掉微生物和其他细菌，因此被认为是一种重要的工具和技术。
为什么需要使用0.22μm热原？在生物医学实验和研究中，净化和过滤样品是非常关键的一步。
许多实验需要排除样本中的微生物和其他细菌，以确保实验结果的准确性和可靠性。
0.22μm热原能够高效地过滤掉这些微生物，从而保护实验的完整性，并减少潜在的感染和交叉污染的风险。
0.22μm热原的工作原理是什么？0.22μm热原是一种基于物理过滤原理的设备。
它的核心是由许多微小而密集的孔组成的薄膜。
这些孔的直径仅有0.22微米，比许多细菌和微生物的尺寸要小得多。
当样品通过0.22μm热原时，这些微生物将被阻挡在膜上，而较小的溶液和溶质则可以通过孔径进入下一个步骤。
0.22μm热原的应用领域是什么？0.22μm热原在生物医学研究、生产和临床诊断等各个领域都有着广泛的应用。
在实验室中，它常被用于细胞培养液的净化、培养基的制备、DNA 和RNA的提取以及滤过样品中的微生物。
在药厂中，该技术是制药过程中不可或缺的一环，用于过滤、净化和保护产品的无菌性。
此外，0.22μm热原也可以用于医院的医疗设备和器械的无菌过滤。
如何正确使用0.22μm热原？在使用0.22μm热原之前，首先需要将其浸泡在无菌生理盐水或适当的清洗液中进行预处理，以确保其表面和孔隙都是干净的。
然后，将待过滤的样品通过0.22μm热原，可以使用手动滤器或自动化设备来完成。
完成过滤后，将0.22μm热原取下，并按照实验要求进行后续处理。
需要注意的是，使用0.22μm热原时要确保操作环境的无菌性，避免外界细菌和微生物的污染。
此外，在选择0.22μm热原时，还需要考虑样品的需求和适应性，以及热原的耐用性和寿命。
总结：0.22μm热原是一种常用的微孔过滤器，广泛应用于生物医学研究和实验室、药厂生产以及临床诊断等领域。
微生物学和卫生学基础知识
细菌的生长曲线
10 细 菌 数 的 对 数
总菌数
活菌数
1 5小时 10小时 15小时 20小时
3.细菌的致病性 ㈠. 细菌的毒力：主要表现在它的侵袭力与毒素的强弱。
Ⅰ.侵袭力： 是指病原菌突破机体的防御机能，在体内生长繁殖、蔓延 扩散的能力。主要依靠细菌的各种酶和荚膜，以及其他表面结 构物质的作用。 Ⅱ.毒素： （1）外毒素—主要由革兰氏阳性菌产生，其毒性强、 亲组织 性；是一种蛋白质：不耐热，可酶解，遇酸变性；甲醛脱毒→ 类毒素，保持抗原性。 （2）内毒素—主要存在革兰氏阴性菌的体内，是细菌的结构 成分，在菌体自溶时裂解释放出来；成分为脂多糖，耐热，在 干热180℃以上30分钟可破坏，但高压蒸汽灭菌无作用。 作用：发热反应《热原反应》，糖代谢紊乱，血管机能紊乱， 弥漫性血管内凝血（DIC）等病变；早期白细胞减少； 鲎试剂检测： 内毒素定性和定量测定。 ㈡. 细菌侵入数量：数量愈大，发病的可能性愈大； ㈢. 细菌的侵入门户：要有适当部位才能引起发病； ***同时还要取决机体的免疫状态。
2.生长繁殖：
1）生长条件： (1) 营养物质：水、无机盐类、氮和碳化合物、气体（氧气. 二氧化碳、氮气）和生长因子等； （2）酸碱度：大多数病原菌PH 7.2 ~ 7.6； （3）温度：适宜温度 15~55℃； 病原菌最适宜温度与人体温相同，实验室培养细菌均采用 37℃。 2）生长繁殖： 方式：为无性二分裂法； 规律：分四期 Ⅰ.迟缓期（0~3h）：数目不增，代谢活跃，体积增大； Ⅱ.对数生长期（3~7h）：细菌数目的对数与时间呈直 线 增长关系,生长速度最快； Ⅲ.稳定期：（7~12h）活菌数下降，死亡数上升，总数 稳定。由于营养物质消耗及代谢产物积聚，PH值亦下降； Ⅳ.衰退期： (12~….h)死亡数大大超过活菌数（细菌自 溶）。
过滤除菌原理与验证
过滤器生产商通常会指明生产过滤器用到的动物性原材料的来源。由牛脂肪制成的硬脂酸盐 不会有传播疯牛病或其它疾病的风险，因为这些生产工艺过程对生物安全的控制要求非常严格。
15.3.4 运行条件
4
过滤器生产商会标明每种过滤器的运行条件范围包括工作温度、压力、灭菌条件、和过滤水 的流速等。厂家会提供过滤器在安全范围内的最大正向和反向压差限度。可能还会提供这些限度 与温度的对应关系，这些信息将为选择与生产工艺条件（产品流速、温度和灭菌条件）相匹配的 过滤器提供方便。
常用膜过滤技术总结
过滤方式分类-普通过滤
过滤方式分类-切向流过滤
过滤方式分类-切向流过滤
过滤方式分类-对比
普通过滤
使用滤芯，也称死端过滤 料液流向垂直于过介质 所有液体全部透过过滤介质 颗粒被截留在过滤膜内部或表面
切向流过滤
超滤
交叉流动过滤 料液流向切向于（平行）于滤膜表面
一小部分液体透过过滤介质 截留的颗粒从膜的表面被“扫除”
③再次使用足量注射用水冲洗膜包
注意事项
①冲洗时，回流端、透出端均需要打开 保证足够的液体流量及压力
②泵底阀门也需要进行冲洗
③冲洗过程避免水排干导致膜包进气损 坏
何时冲洗
系统在超滤工艺前后均需要进行冲 洗，在进行清洁、去除热原或消毒
步骤后均需要进行冲洗
超滤工艺—水通量测试
一种水透过膜的能力的评估标准，在一定的泵速，原液、透过、
膜分类
固体膜 液体膜
膜材质
膜材料来源
பைடு நூலகம்天然膜 合成膜：无机材料及有机高 分子材料
膜结构
多孔膜：目前我们经常接触的
致密膜：电子显微镜难以观察
2
3
种类
1
4
膜功能
离子交换膜 渗析膜 微孔过滤膜 超滤膜 反渗透膜 渗透汽化膜 气体渗透膜
膜分类-固体膜各类形态
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常用膜过滤技术总结
魏欣
1 膜过滤概述 原理、过滤分类、膜分类及材质
2 普通过滤 3 切向流过滤 4 完整性测试
目录
为什么要过滤？
➢保护下游设备
➢保护环境
➢保证产品质量
膜分离法系指以压力为推动力，依靠膜的选择性，将液体中的组分进行分离的 方法。膜过滤法的核心是膜本身，膜必须是半透膜，即能透过一种物质,而阻碍 另一种物质。
中国药典版灭菌方法
一、湿热灭菌法本法系指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
该法灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。
药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品，均可采用本法灭菌。
流通蒸汽不能完全杀灭细菌孢子，一般可作为不耐热无菌产品的辅助灭菌手段。
湿热灭菌条件通常采用121℃*15min、121℃*30min、或116℃*40min的程序，也可采用其他温度和时间参数，但必须保证物品灭菌后的SAL《10-6。
对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，其SAL应《10-12。
热稳定性较差产品的标准灭菌时间F0［指灭菌温度为121℃，生物指示菌的耐热参数D值为1分，灭菌温度系数Z值为10.0℃时的标准灭菌时间（121℃下计算的微生物等效灭活率）］一般不低于8min。
如产品的热稳定性很差时，可允许湿热灭菌的F0低于8，此情况下，应在生产全过程中，对产品中污染的微生物严加监控，并采取各种措施降低微生物污染水平，确保被灭菌产品达到无菌保证要求。
采用湿热灭菌时，被灭菌物品有适当的装载方式，不能排列过密，以保证灭菌的有效性和均一性。
湿热灭菌法应确认灭菌柜在不同装载时可能存在的冷点。
当用生物指示剂进一步确认灭菌效果时，应将其置于冷点处。
本法生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（spores of Bacillus stearothermophilus）。
二、干热灭菌法本法系指将物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。
适用于耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品灭菌，如玻璃器具、金属材质容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等均可采用本法灭菌。
干热灭菌条件一般为160~170℃*120min以上、170~180℃*60min以上或250℃*45min以上，也可采用其他温度和时间参数。
应保证物品灭菌后的SAL《10-6。
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0.22微米过滤除菌能去除内毒素吗
不能。
0.22微米的膜是用于阻挡细菌的。
.内毒素虽然是大分子，但相对于细菌来说，还是很小的。
其次其可溶解于水相中，所以不会像不溶物那样容易积聚成团块。
另外一般的微米膜没有吸附内毒素的能力
内毒素的化学成分是脂多糖，是革兰氏阴性菌细胞壁的主要组分之一。
一个活的细菌很少释放内毒素，但死后可放出大量内毒素。
内毒素在血液中存在时会引起动物发热，是医疗注射液中最主要的。
19 世纪40 年代开始用注射溶液引起兔的发热反应实验来检测热原（主要是细菌内毒素）。
后来研究者发现鲎（一种海洋生物）血液遇到极微量的内毒素会发生凝血反应，从而在19 世纪70 年代发明了鲎试剂用于快速精确检测内毒素。
内毒素含量一般用国际单位（EU ）来衡量，一般来说1EU 大致等于0.1-0.2ng。
由于内毒素会对很多种细胞产生刺激，影响实验结果，所以在实验中要尽量减少在培养液中的内毒素的来源。
由于生产工艺的提高，来自标准厂家的血清和培养液中的内毒素含量很少。
所以现代实验室细胞培养中内毒素的来源主要是水、添加剂、细胞培养器皿等。
传统的玻璃仪器制备的双蒸水和通过离子交换柱、活性炭柱和超滤三个环节的纯水制备仪制备的超纯水都能满足细胞培养用水的要求。
盛水器具上的细菌内毒素可能给超纯水带来污染。
长时间放置的超纯水也可因盛水器具上细菌生长而污染细菌内毒素。
内毒素能紧密的粘在玻璃器皿上，实验室里用普通的方法不能完全的消除除内毒素。
用250 ℃，30 分钟或180 ℃， 2 小时干热灭菌能完全除掉玻璃器皿上的内毒素。
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。
脂多糖对宿主是有毒性的。
内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。
内毒素不是蛋白质，因此非常耐热。
在100℃的高温下加热1小时也不会被破坏，只有在160℃的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。
与外毒素不同之处，还有：内毒素不能被稀甲醛溶液脱去毒性成为类毒素；把内毒素注射到机体内虽可产生一定量的特异免疫产物（称为抗体），但这种抗体抵消内毒素毒性的作用微弱。
内毒素脂多糖分子由菌体特异性多糖、非特异性核心多糖和脂质A三部分构成。
脂质A是内毒素的主要毒性组分。
不同革兰氏阴性细菌的脂质A结构基本相似。
因此，凡是由革兰氏阴性菌引起的感染，虽菌种不一，其内毒素导致的毒性效应大致类同。
这些毒性反应主要有：
发热反应。
人体对细菌内毒素极为敏感。
极微量（1-5纳克/公斤体重）内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。
自然感染时，因革兰氏阴性菌不断生长繁殖，同时伴有陆续死亡、释出内毒素，故发热反应将持续至体内病原菌完全消灭为止。
内毒素引起发热反应的原因是内毒素作用于体内的巨噬细胞等，使之产生白细胞介素1、6和肿瘤坏死因子α等细胞因子，这些细胞因子作用于宿主下丘脑的体温调节中枢，促使体温升高发热。
白细胞反应。
细菌内毒素进入宿主体内以后，血流中占白细胞总数60-70%的中性粒细胞数量迅速减少，这是因为细胞发生移动并粘附到组织毛细血管上了。
不过1-2小时后，由内毒素诱生的中性细胞释放因子刺激骨髓释放其中的中性粒细胞进入血流，使其数量显著增加，有部分不成熟的中性粒细胞也被释放出来。
革兰氏阴性菌的伤寒沙门菌是例外，其内毒素使白细胞总数始终是减少状态，目前还不清楚是什么原因。
由于绝大多数被革兰氏阴性菌感染的患者血流中白细胞总数都会增加，所以现在医生在诊断前，为了初步区别是细菌性感染还是病毒性感染，常常要化验病人的血液，对白细胞进行总数测定和分类计数。
被病毒感染的病人，其白细胞总数和中性粒细胞百分比基本在正常值范围内。
内毒素血症与内毒素休克。
当病灶或血流中革兰氏阴性病原菌大量死亡，释放出来的大量内毒素进入血液时，可发生内毒素血症。
大量内毒素作用于机体的巨噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板，以及补体系统和凝血系统等，便会产生白细胞介素1、6、8和肿瘤坏死因子α、组胺、5羟色胺、前列腺素、激肽等生物活性物质。
这些物质作用于小血管造成功能紊乱而导致微循环障碍，临床表现为微循环衰竭、低血压、缺氧、酸中毒等，于是导致病人休克，这种病理反应叫做内毒素休克。
关于内毒素休克，过去曾有过惨痛的教训。
20世纪40年代青毒素刚问世的时候，医生发现青霉素对脑膜炎奈瑟菌引起的流行性脑膜炎疗效非常显著。
因此，凡发现这类病人，一律优选青霉素进行治疗；且按照一般规律，用药剂量随病情严重程度而递增。
结果发生了意外，用大剂量青霉素治疗重症脑膜炎患者时，不少发生了内毒素休克而死亡。
后来经过研究分析，发现了其中的原委。
病情严重的患者，体内存在的病原菌数量多，医生采用大剂量“轰炸”，意欲“一举歼敌”。
快速、彻底杀灭病原体，这种战略无可非议，但有些医生忽略了另一方面，即流行性脑膜炎的病原菌是属革兰氏阴性菌的脑膜炎奈瑟菌，其致病物质是内毒素，而内毒素是要在病菌死亡后再放出的。
如今用大剂量青霉素一下子将全部病菌杀死，也就是使大量内毒素一次放出，促成了内毒素休克，加速了患者的死亡。
随着医学的进步，现在医生遇到这类病人，一方面仍然要用大剂量的有效抗菌药物去对付，同时要加用激素类药物，以保护对内毒素敏感的细胞不对内毒素诱生的细胞因子发生反应，从而度过“休克”难关。
犹如外科手术时，采用麻醉药使病人丧失痛觉一样。