奶粉中亚硝酸盐的测定方法

奶粉中亚硝酸盐的测定方法GB/T 5009.33—1996

1 主题内容与适用范围

本标准适用于食品中亚硝酸盐的测定.亚硝酸盐方法检出限为1mg/kg.

第一篇格里斯试剂比色法(第一法)

(一)亚硝酸盐测定

2 原理：样品经沉淀蛋白质,除去脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料,与标准比较定量.

3 试剂：实验用水为蒸馏水,试剂不加说明者,均为分析纯试剂.

3.1 氯化铵缓冲液:1L容量瓶中加入500mL水,准确加入20.0mL盐酸,振荡混匀,准

确加入50mL氢氧化铵,用水稀释至刻度.必要时

用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7.

3.2 硫酸锌溶液(0.42mol/L):称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O),用水溶解,并稀释至1000mL.

3.3 氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1L.

3.4 对氨基苯磺酸溶液:称取10g对氨基苯磺酸,溶于700mL水和300mL冰乙酸中,

置棕色瓶中混匀,室温保存.

3.5 N-1-萘基乙二胺溶液(1g/L):称取0.1gN-1-萘基乙二胺,加60%乙酸溶解并稀释

至100mL,混匀后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,一周内稳定.

3.6 显色剂:临用前将N-1-萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合.

3.7 亚硝酸钠标准溶液:准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解移入500mL容量瓶中,加100mL氯化铵缓冲液,加水稀释至刻度,混匀,在4℃避光保存.此溶液每毫升相当于500 g的亚硝酸钠.

3.8 亚硝酸钠标准使用液:临用前,吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于5.0 g亚硝酸钠.

4 仪器

4.1 小型粉碎机.

4.2 分光光度计.

5 操作方法

5.1 样品处理

乳粉祥品:在100mL烧杯中称取log样品，准确至。.OO lg。用112mL5 0^55℃的水将样品洗入

500ml锥形瓶中，混匀。称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品,置于打碎机中,加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L),混匀,用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH=8,定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液,混匀,如不产生白色沉淀,再补加2～5mL氢氧化钠,混匀.置60℃水浴中加热10min,取出后冷至室温,加水至刻度,混匀.放置0.5h,用滤纸过滤,弃去初滤液20mL,收集滤液备用.

5.2 测定

5.2.1 亚硝酸盐标准曲线的制备:吸取0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0,2.5,5,10,15,20,25 g亚硝酸钠),分别置于25mL带塞比色管中.于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液,加2.5mL60%乙酸后立即加入5.0mL显色剂,加水至刻度,混匀,在暗处静置25min,用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯),以零管调节零点,于波长550nm处测吸光度,绘制标准曲线.

低含量样品以制备低含量标准曲线计算,标准系列为:吸取0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于0,2,4,6,8,10 g亚硝酸钠).

5.2.2 样品测定:吸取10.0mL上述滤液(5.1)于25mL带塞比色管中,自5.2.1"于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液"起依法操作.同时做试剂空白.

6 计算

式中:X1——样品中亚硝酸盐的含量,mg/kg;

m1——样品质量,g;

m2——测定用样液中亚硝酸盐的质量, g;

V1——样品处理液总体积,mL;

V2——测定用样液体积,mL.

结果的表述:报告算术均值的二位有效数.

7 允许差

相对相差≤10%.金黄色葡萄球菌

0128.01

GB/T4789.10—2003食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验