弓浆虫(弓形虫)病的实验诊断
弓形虫病诊断与防治
弓形虫病诊断与防治本病是由龚地弓形虫引起的一种人畜共患的原虫病。
诊断要点（1）流行特点常发生于夏秋季节，温暖潮湿的地区，尤以3～5月龄的仔猪发病严重。
本病可以通过母猪胎盘感染，引起怀孕母猪发生早产或产出发育不全的仔猪或死胎；另外，消化道感染，呼吸道粘膜感染以及吸血昆虫机械性的传播。
（2）临诊特征本病临床症状与猪瘟、猪流感皆相类似。
病初体温升高约40～42度，稽留7～10天。
食欲减少或废绝，便秘。
耳、唇及四肢下部皮肤发绀或有淤血斑。
呼吸快，鼻镜干燥有鼻漏，咳嗽，呼吸困难，口流白沫，窒息死亡。
（3）剖检病变主要是肺高度水肿，小叶间质增宽，小叶间质内充满半透明胶冻样渗出物，气管和支气管内有大量粘液性泡沫，有的并发肺炎。
全身淋巴结肿大，上有小点坏死灶。
肝略肿胀，呈灰红色，散在有小点坏死；脾略肿胀呈棕红色；肠系膜淋巴结呈囊状肿胀。
（4）实验室诊断①直接抹片取剖检的肝、脾、肺和淋巴结等作成抹片，用姬姆萨氏或瑞特氏液染色，于油镜下发现月牙形或梭形的虫体，核为红色，细胞质为蓝色。
②动物接种以病猪血液或肝、脾、脑组织制成1：10乳剂，给小鼠腹腔注射０.2～1毫升，观察20天，小鼠的腹水或肝脾、淋巴结中可发现大量虫体。
病初高温时，有时在血液中能够查对弓形虫。
③鸡胚接种以病猪的肝、脾、脑组织制成乳剂，给5～11日龄的鸡胚作绒毛尿囊膜接种，7～10天内，在死亡鸡胚的尿囊膜液及肝、脑、肺等组织中可发现大量虫体。
④血清学诊断可用染色试验、间接凝集试验、酶联吸附试验等方法进行诊断。
防治方法（1）用磺胺类药能控制本病的发展，降低死亡率，缩短病程，可选用以下有效处方：①磺胺嘧啶(SD)+乙胺嘧啶；前者按70毫克/公斤体重，后者按6毫克/公斤体重，内服，每天服两次，首次倍量，连用3～5天。
②增效碘胺—5—甲氧嘧啶（内含10％磺胺—5—甲氧嘧啶和2％三甲氧苄氨嘧啶）；按10公斤体重肌注不超过2毫升，每天1次，连用3～5天。
③磺胺—6—甲氧嘧啶（SMM）；按60毫克/公斤体重，配成10％注射溶液肌注，每天1次，连用3～5天，或者按内服首次量0.05～0.1克/公斤体重，维持量0.025～0.05克/公斤体重，每天2次，连用3～5天；或者按内服首次量0.05～0.1克/公斤体重，维持量0.025～0.05克;公斤体重，每天2次，连用3—5天；或者SMM加DVD（敌菌净）增效剂，按5：1混合，服混合物60毫克/公斤体重。
犬猫弓形虫病的诊断及防控
主要内容
弓形虫病概述 弓形虫病的实验室诊断 犬猫弓形虫防治
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)简称弓 形虫。属于孢子虫纲、真球虫目、弓形 虫科。因其虫体呈弓形，故命名为刚地 弓形虫。在弓形虫生活史中有五个不同 形态阶段即速殖子、包囊、裂殖体、配 子体和卵囊，其中对人体具致病或传染 性的阶段为速殖子、包囊和卵囊。
ELISA可检测抗弓形虫的IgM、IgA、 IgG、IgE抗体及C抗原(循环抗原)。
ELISA用于诊断弓形虫病作了较多研 究，衍生出多种方法，如间接ELISA、 PPA-ELISA(金萄菌A蛋白-酶联免疫吸 附试验)、ABC-ELISA(生物素-亲和素 过氧化物酶联免疫吸附试验)、BAELISA(亲和素生物素ELISA)、DotELISA
弓形虫病概述
弓形虫病(Toxoplasmosis) 是由刚地弓形 虫(Toxoplasma gondii)感染而引起的一种 呈世界性分布且严重危害人类健康的人兽 共患寄生虫病。
犬猫可以感染并传播弓形虫病，随着家养 宠物逐渐增多，人与宠物密切接触，人群 弓形虫的感染率亦逐年上升。全球估计约
弓形虫的生活史
弓形虫的整个生活史发育需要经过2个宿 主,猫科动物为终末宿主，人和其他动物为 中间宿主。
弓形虫病的实验室诊断
病原学诊断 免疫学诊断 分子生物学诊断
病原学诊断
a 直接涂片或组织切 片检查法
将所采集的检查 病料直接涂抹或压 印在玻片上，用姬 氏染液或瑞氏染液 染色镜检。发现典 型的新月形滋养体
b 动物接种法 动物接种法即将病料研磨后过滤
c 间接荧光抗体试验（IFAT） 是以完整的弓形虫为抗原，采用荧光标
记的二抗检测特异 IgM和IgG。
寄生虫病实验三
實驗三弓形蟲病的免疫學診斷一、內容1.弓形蟲病病原學診斷2.弓形蟲病的間接紅細胞凝集試驗3.弓形蟲的ELISA免疫診斷二、參考資料1. 弓形蟲病病原學診斷弓形蟲的塗片製作及染色，取陽性小白鼠腹水一滴，於潔淨的載玻片上，製成塗片，自然乾燥，甲醇固定5分鐘，姬姆薩染色，最後“慢染”，其方法是：將固定好的血片置於染色缸內，加上1:20-50倍稀釋的染色液，染色2-12小時,染色時宜保持一定的溫度。
滋養體（速殖子）呈弓形或新月形，一端較尖，一端鈍圓，大小為4－7×2－4μm，核在中央，偏於蟲體鈍圓一端。
染色後觀察，胞漿呈淺藍色，有顆粒，核呈深藍紫色。
在急性病例的腹水中，常見到此種游離的單個蟲體。
在宿主細胞的胞漿裏，可見有滋養體簇集在一個囊內，為之假包囊。
慢性病例的腦、眼、骨骼肌中可見有包囊，呈卵圓形，有較厚的囊膜，囊中有蟲體（慢殖子）數十個至數千個，包囊直徑50－60μm。
2. 弓形蟲病的間接紅細胞凝集試驗診斷液保存於4℃冰箱內，不應凍結。
試驗在96孔（12×8）“V”型底微量血凝反應板上進行，被檢血清為一排，陽性和陰性對照血清各一排，每排最後一孔為空白對照，事先每孔順序加入稀釋液1滴（0.05ml）。
然後分別用移液管吸取血清1滴（0.05ml）於每排第一孔，按倍比進行稀釋後改用0.025ml滴管，每孔加入1％致敏紅細胞液0.025ml，振搖混合2－3分鐘，加蓋平放在室溫（25℃左右）中2－3小時後觀察結果。
凝集價1：64以上為陽性，1：32為可疑，1：16以下為陰性。
3．酶聯免疫吸附試驗酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一種免疫標記技術。
其原理是根據酶具有強大的催化作用和抗原抗體反應的高度特異性特點，在不破壞酶活性和抗原抗體免疫學特性前提下，通過化學交聯或免疫學方法，將酶分子聯結到抗原或抗體分子上，然後與特異性抗原或抗體反應，形成酶標記免疫複合物。
結合在免疫複合物上的酶在遇到相應的底物時，催化其水解，生成肉眼可見的顏色變化，從而用比色法判斷結果。
弓形虫pcr检测操作方法
弓形虫pcr检测操作方法弓形虫PCR检测是一种高效、灵敏和特异的分子诊断方法，能够在短时间内检测到弓形虫DNA的存在。
该方法不仅适用于临床患者的诊断，还可以在食品和环境样本中检测弓形虫的污染情况。
下面将介绍PCR检测弓形虫的具体操作方法。
1. 样品的处理和提取在进行PCR检测之前，需要从样本中提取出弓形虫DNA。
其中，临床样本包括血液、脑脊液、尿液、胎盘和胸腺组织等；食品和环境样本包括生肉、蔬菜、水和土壤等。
样品处理和提取方法主要包括三种：碱裂解法、有机溶剂法和商用提取盒法。
其中商用提取盒法是最为常用的方法，其具体操作步骤如下：首先，将样品加入提取液中，加入玻璃珠粉，在粗糙的颤动台上颤动5~10分钟，破坏样品细胞壁并充分混匀。
然后将混合液转移到离心管中，离心10~15分钟，使液体分离成沉淀和上清液。
接着吸取上清液，再通过离心柱或聚丙烯酰胺凝胶柱，获得纯化的DNA溶液。
2. PCR反应成功提取的DNA样品接着需要进行PCR反应，具体操作如下：首先将PCR反应液配置好。
反应液成分包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、PCR 缓冲液和引物。
其中引物一般采用B1和B2引物，其序列为5'-TCC TGT CCG AAG GTC GAT GAA-3'和5'-TCT TAA ACT TGC GAA GAC ATC TTG TC-3'，能够特异性地扩增弓形虫18S rRNA基因序列。
然后将PCR反应液均匀地加到PCR管中，加入提取的模板DNA，盖上片盖，置于PCR仪中进行扩增。
PCR反应参数通常为95预处理5分钟，然后进行40~45个循环反应，每次包括95脱变性30~60秒、55退火30~60秒和72延伸20~40秒，最后72延伸10分钟，以保证PCR扩增的有效性。
3. 分析PCR产物PCR反应完成后，需要对PCR产物进行电泳检测，以判断是否扩增出预期的弓形虫DNA片段。
具体操作步骤如下：首先将PCR产物与DNA加载缓冲液混合均匀，通过电泳将产物分离出来，然后将电泳胶放入染料溶液中，染色20~30分钟后，洗净染料，放入透明的塑料袋中，然后将其放置到照相机中进行成像。
某奶牛场奶牛弓形虫病的诊断与防治
某奶牛场奶牛弓形虫病的诊断与防治
奶牛弓形虫病是一种常见的寄生虫疾病，由弓形虫引起，主要危害奶牛的健康和生产。
弓形虫会在奶牛的肠道内繁殖，通过排泄物传播给其他奶牛，导致牛群的患病率逐渐增加。
本文将介绍奶牛弓形虫病的诊断与防治措施，帮助奶牛场管理者更好地保护奶牛健康。
一、奶牛弓形虫病的症状
1.消瘦和贫血：患有弓形虫病的奶牛在患病初期会出现消瘦和贫血的症状，毛色暗淡，食欲减退。
2.产后抵抗力下降：弓形虫病会导致奶牛的产后抵抗力下降，易患感染性疾病，影响
产奶量和产奶质量。
3.流产和胎儿畸形：患有弓形虫病的奶牛在妊娠期间容易发生流产，胎儿也可能出现
畸形。
4.神经系统症状：在严重感染的情况下，奶牛可能出现神经系统症状，如抽搐、行走
困难等。
1.采集粪便样本：可以通过采集奶牛的粪便样本，进行弓形虫囊体的检测，确认是否
感染了弓形虫。
2.观察临床症状：结合奶牛的临床症状，如消瘦、贫血、产后抵抗力下降等，进行初
步判断。
1.改善饲养环境：保持饲养环境干净整洁，定期清理牛棚和牛舍，减少弓形虫的传播
途径。
2.合理饲养管理：合理安排奶牛的饲食结构和定期进行蛋白质添加，增强奶牛的免疫力，减少感染弓形虫的机会。
3.定期驱虫：定期给奶牛进行驱虫处理，选择有效的驱虫药品进行预防和控制，避免
弓形虫的传播。
4.隔离患病奶牛：对已经确诊患有弓形虫病的奶牛进行隔离，避免病情传播给其他奶牛。
5.定期体检：定期请兽医进行奶牛的健康体检，及时发现并治疗患有弓形虫病的奶
牛。
弓形虫病的快速诊断与预防
弓形虫病的快速诊断与预防陈光义（上海快灵生物科技有限公司上海200125）弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxo-plasma gondii)引起的以孕妇(畜)流产、弱胎、畸胎、死胎和儿童(幼畜)生长受阻、死亡等为特征的人畜共患病。
弓形虫属专性细胞内寄生的原虫，猫是刚地弓形虫的唯一终末宿主。
全世界仅有1个种、1个血清型[1]。
刚地弓形虫在自然界分布广泛，寄生宿主范围大，可自然感染人、猪、牛、羊、狗、猫等多种动物。
人类通过先天性(垂直传播)和获得性(受损的皮肤、呼吸道、眼等途径传染)两种途径感染。
人感染后多呈隐性感染，临床检测及诊断困难[2]。
在免疫功能低下时，可引起中枢神经系统损害和全身性播散性感染。
当产妇感染后，病原可通过哺乳方式感染给育儿，如不及时治疗可长期寄生于儿童体内[3]。
先天性感染后胎儿畸形，且病死率高，是优生学关注的严重问题。
弓形虫可通过口、眼、鼻、呼吸道、肠道、皮肤等途径侵入猪体。
妊娠母猪后期一旦感染，常出现流产或产死胎的现象，给养猪场和养猪户带来严重的经济损失[4]。
2011年11月，武威市某猪场有20多头仔猪突然发生以咳嗽、流浆液性鼻液、体温升高、皮岀肤有血斑点、呼吸困难为特征的一种疾病。
患病后用清热解毒、抗病毒、抗生素、血虫净等药物治疗无效。
经病理剖检和实验室镜检，确诊为猪弓形虫病[5]。
2012年8月份以来，山东省利津县一些大型生猪养殖园区和部分生猪养殖户的生猪时常发生弓形虫病，主要是猪通过采食被弓形虫包囊、卵囊污染的饲料、饮水或接触患弓形虫病的鼠、雀等感染，其发生无明显季节性[6]。
猪弓形虫病感染在信阳地区规模化猪场已普遍存在[7]。
猪感染后表现为高热、喘气、皮肤发红等，易被误诊为猪瘟、链球菌病、感冒等，必须通过实验室诊断方能确诊[8]。
黑龙江省部分地区牛弓形虫的感染情况与以往调查阳性率有较大提升，应当引起人们对牛弓形虫病的足够重视[9]。
青海省所检地区的牛羊都有不同程度的弓形虫感染，不同地区和不同品种的牛、羊对弓形虫的感染率不同且弓形虫感染率与性别无关[10]。
犬蠕形病诊断-弓形病的诊断及治疗
犬蠕形病诊断-弓形病的诊断及治疗弓形病的诊断及治疗弓形虫侵入后,主要通过淋巴、血液循环到达各器官的有核细胞内,在胞浆中以出芽的方式进行无性增殖。
弓形病在慢性病例或缺乏症状表现的一些隐性感染者,通常是由于受体内多种因素的影响,使存在于体内的弓形虫无性增殖过程受阻,这些虫体就会在宿主体内的某些脏器中形成包囊,所以,包囊型虫体是弓形虫的一种静息状态。
包囊型虫体主要存在于中间宿主的脑、眼睛、骨骼肌、心肌、肝、肺和肾等器官中,囊中的虫体又被称为缓殖子,每个包囊中有数十个,数百个至数干个虫体。
【症状】多数犬呈隐性感染,幼犬和青年犬感染较为普遍,且症状明显该病症状与犬瘟热、犬传染性肝炎相类似,主要表现体温升高、精神委顿、食欲减退或废绝、咳嗽、呼吸困难、腹泻、眼和鼻有分泌物、黏膜苍白或黄染,怀孕母犬常发生流产、早产或产死胎。
【诊断】犬弓形虫病在临床上很容易与犬瘟热相混淆。
需要进行病原体检查或者血清抗体检测方可确诊。
病原体检查和血清学检查,采集可疑病犬体液或病犬尸体涂片、压片或切片,显微镜下观察有无弓形虫虫体;或通过间接支光试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验和凝集试验等检测血清中抗体及其滴度。
这是确诊本病的主要方法.【防治】1治疗磺胺类药对本病疗效较好。
常用的药物有:①磺胺嘧啶每千克体重70~100毫克,每日2次肌注或内服。
配合使用甲氧苄氨嘧啶(每千克体重14毫克)或乙胺嘧啶(每千克体重毫克),效果更好。
②复方新诺明片,每千克体重70毫克,每日2次内服。
③增效磺胺-5-甲氧嘧啶,每干克体重60~70亳克,每日1次肌注。
同类药物还有磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺邻甲氧嘧啶等,一般需连续用药3~4天。
同时应注意,由于药物只对滋养体等游离的病原体起作用,故应在发病初期尽早治疗。
另外,为防治这类药物在尿液中析出结晶,使用时可配合等量碳酸氢钠,并使犬多饮水对于症状表现严重的病例,还应采取补液、止血、止泻和降温等对症治疗。
弓形虫假阳性判断标准
弓形虫假阳性判断标准
弓形虫病是一种由弓形虫引起的寄生虫病，其临床表现多样，包括发热、淋巴结肿大、肝脾肿大等症状。
但是，弓形虫血清学检测在临床诊断中却存在着一定的假阳性问题，因此需要建立一套科学的判断标准来准确诊断弓形虫病。
首先，对于弓形虫假阳性的判断，需要考虑患者的临床表现。
弓形虫病的临床表现多样，但并非所有患者都会出现典型症状。
因此，对于存在疑似症状的患者，需要结合血清学检测结果进行综合分析，以排除其他疾病引起的类似症状。
其次，血清学检测是诊断弓形虫病的重要手段。
但是，弓形虫血清学检测存在着一定的假阳性率，这可能会对临床诊断造成一定的困扰。
因此，需要建立一套科学的判断标准来准确判断弓形虫假阳性的情况。
通常情况下，需要对患者进行两次以上的血清学检测，若两次检测结果均为阳性，且存在典型的临床表现，则可以初步判断为弓形虫阳性感染。
此外，对于存在弓形虫假阳性的患者，还需要进行进一步的检测。
例如，可以采用PCR技术对患者进行基因检测，以排除其他可能的感染因素。
同时，还可以进行病原学检测，直接检测患者组织或体液中的弓形虫，以确诊患者的感染情况。
在临床实践中，医生需要充分了解弓形虫病的临床表现和血清学检测特点，以准确判断患者的感染情况。
同时，患者在接受血清学检测时，也需要注意遵医嘱进行多次检测，以减少假阳性结果的可能性。
综上所述，弓形虫假阳性的判断标准需要综合考虑患者的临床表现和血清学检测结果，同时结合其他检测手段进行综合分析，以准确判断患者的感染情况。
希望通过科学的判断标准，能够准确诊断弓形虫病，为患者提供及时有效的治疗。
弓形虫的检查原理是什么【新知识】
弓形虫的检查原理是什么
文章导读 弓形虫是一种寄生在细胞里面的寄生虫，会跟随血液的流动到达身体的每一个部位，会使人的 免疫力 下降，患上各种疾病，弓形虫的常规检查一般分为病理检查，免疫学检查，皮内实验等检查方法。 病原检查 1、直接镜检 取患者血液、骨髓或脑脊液、胸腹水、痰液、支气管肺泡灌洗液、眼房水、羊水等作涂片，或淋巴结、肌肉、肝、胎盘等活组织切片，作瑞氏或姬氏染色镜检可找到滋养体或包囊，但阳性率不高。亦可作直接免疫荧光法检查组织内弓形虫。 2、动物接种或组织培养 取待检体液或组织悬液，接种小白鼠腹腔内，可产生感染并找到病原体，第一代接种阴性时，应盲目传代3次。或作组织(猴肾或 猪肾 细胞)培养以分离、鉴定弓形虫。 3、DNA杂交技术 国内学者首次应用32P标记含弓形虫特异DNA序列的探针，与患者外周血内细胞或组织DNA进行分子杂交，显示特异性杂交条带或斑点为阳性反应。特异性和敏感性均高。此外，国内亦已建立多聚酶链反应诊断本病，并与探针杂交、动物接种和免疫学检查方法相比较，显示春具高度特异、敏感和快速等优点。4 免疫学检查 1、检测抗体 所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞质抗原)和胞膜抗原。前者的抗体出现较早(用染色试验、间接免疫荧光试验检测)、而后者的抗体出现较晚(用间接血凝试验等检测)。同时采用多种方法检测可起互补作用而提高检出率。由于弓形虫在人体细胞内可长期存在，故检测抗体一般难以区别现症感染或以往感染，可根据抗体滴度的高低以及其动力学变化加以判断。 2、检测抗原 系用免疫学方法检测宿主细胞内的病原(速殖子或包囊)、在血清及体液中的代谢或裂解产物(循环抗原)。是早期诊断和确诊的可靠方法。国内外学者建立了McAb-ELISA以及McAb与多抗的夹心型ELISA法检测急性患者血清循环抗原，其敏感度为能检出血清中0.4μg/ml的抗原。4 皮内试验 以受染小白鼠腹腔液或鸡胚液作抗原。常出现延迟性、结核菌素反应。可用作流行病学调查。目前应用不多。
某奶牛场奶牛弓形虫病的诊断与防治
某奶牛场奶牛弓形虫病的诊断与防治【摘要】奶牛弓形虫病是奶牛场常见的寄生虫病，给奶牛的生长和健康造成一定影响。
本文就奶牛弓形虫病进行了全面的介绍和分析。
从临床症状入手，详细描述了奶牛患病后可能出现的表现。
然后，介绍了该病的诊断方法，包括实验室检测和临床症状观察。
接着，论述了奶牛弓形虫病的防治措施和治疗方法，强调了预防工作的重要性。
结合实际情况提出了建议，呼吁对奶牛弓形虫病进行定期监测，并总结了诊断与防治措施，同时展望未来研究方向。
通过本文的介绍，读者能够全面了解奶牛弓形虫病，为预防和治疗提供参考。
【关键词】奶牛场、奶牛、弓形虫病、诊断、防治、临床症状、预防措施、治疗方法、定期监测、研究方向。
1. 引言1.1 奶牛场奶牛弓形虫病概述奶牛场奶牛弓形虫病是一种常见的寄生虫感染疾病，主要由弓形虫引起。
弓形虫是一种单细胞原虫，可以寄生在奶牛的消化系统和其他器官内。
这种病原体可以通过奶牛的粪便排泄到环境中，传播给其他奶牛或人类。
奶牛弓形虫病的临床症状通常包括发热、厌食、腹泻、体重减轻、贫血等，严重的情况下甚至会导致死亡。
诊断奶牛弓形虫病的方法主要依靠实验室检测，包括血液检查、粪便检查等。
为了预防和控制奶牛弓形虫病的传播，需要采取一系列的防治措施，包括定期清洁牛棚、饮水设施，合理排泄粪便等。
可以使用抗生素和抗寄生虫药物来治疗感染的奶牛。
在未来，建议加强对奶牛弓形虫病的监测和研究，探索更有效的预防和治疗方法，以保障奶牛健康和生产。
2. 正文2.1 奶牛弓形虫病的临床症状奶牛弓形虫病是一种常见的寄生虫病，其临床症状可谓千变万化。
病原体侵入宿主体内后，会引起宿主一系列的不适症状。
奶牛弓形虫病的临床症状主要包括以下几个方面：1. 消瘦：患上奶牛弓形虫病的奶牛往往会出现消瘦的情况，食欲不振，身体状态明显变差。
2. 发热：感染奶牛弓形虫病后，奶牛体温会明显升高，出现持续性发热的症状。
3. 呼吸困难：部分患有奶牛弓形虫病的奶牛会出现呼吸困难的症状，呼吸急促，无法正常呼吸。
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弓浆虫(弓形虫)病的实验诊断
浆虫的诊断对4种人特别重要，在受孕时发生感染的孕妇，婴儿或新生儿的先天性感染，免疫缺陷患者和脉络膜视网膜炎患者。
对此4种人的诊断虽各有其问题，但最具挑战性的是确定孕妇是否在受孕时发生急性感染，因为在妊娠前的感染不会引起婴儿的感染（除非孕妇为免疫缺陷患者）。
在美国不对孕妇系统地检查抗体，而法国则对孕妇每月检查抗体以确定近期感染。
单靠一次血清学检查，极有可能漏诊。
在世界许多地区健康人群中弓浆虫IgG抗体普遍持续存在，IgM,IgA性抗体在鉴别近期感染和既往感染方面缺少可靠性。
加之，试验缺乏质控，商品化的试剂在敏感性和特异性上的差异，使许多临床医师对相互矛盾或不一致的结果而困惑，导致试验室向医师，医师向患者发出错误的信息。
近年来，对孕妇近期感染和胎儿，新生儿先天性感染的诊断有了新的试验方法。
其中包括IgG的亲合力试验，体液或组织的PCR 和母婴间配对的Western Blot试验等。
前两者在欧洲已广泛使用。
下面介绍这些方法及其意义和各自的优缺点。
一．IgG抗体亲合力试验
此试验测定弓浆虫特异性IgG抗体的功能性亲合力。
在抗原刺激下初形成的抗体亲合力低，在抗体成熟过程中，经数周至数月而逐渐增强。
IgG的亲合力增强是抗原引起的B细胞选择的过程，使抗原-抗体结合位点互补性增强。
它们通过化学键如氢键，静电力，va n der Waaler力等而增强结合的紧密性。
在试验中，用尿素或其他蛋白变性剂来解离抗原-抗体复合物，再用ELISA法测定IgG抗体。
一份标本经尿素处理，另一份不经处理，比较两者的光密度值，得出低亲合力IgG在总IgG中的比例。
此法首先由芬兰的Hedson等人提出，现在欧洲已有试剂盒供应。
在美国尚未获批准。
此法将减少应用过去的确证性试验和多次随访检查，减少PCR的应用，也减少治疗药物Spiramycin的应用和患者的疑虑。
应用此试验可排除4-5月前的感染，这对妊娠1个月或IgG,IgM抗体阳性的孕妇特别有用。
如有高亲合力抗体的妊娠3个月的妇女，说明在此前3个月没有急性感染；而在受孕之前的感染，不会危及胎儿。
在受孕前或接近受孕时感染而发生宫内传播的几率极小，几近于零。
这对美国的只在妊娠1月时采1次标本来说更为有用。
有人统计40名孕妇，由于不能排除近期感染，有17.5%服用了Spiram ycin.
重要的是，IgM抗体阳性时低亲合力抗体并不能说明近期感染。
低亲合力抗体可持续存在约1年。
有些孕妇可表现为边缘性或相等量的抗体（一项研究指出，有40%妇女有IgG抗体，无IgM抗体，但有边缘性或相等量抗体）。
此时应补充其他试验，如测IgM,IgA,I gE性抗体，IgG的滴度和鉴别凝集试验。
尚不能单独将亲合力试验作为决定性试验。
二．母婴配对的IgG和IgM Western Blot 试验
新生儿的先天性弓浆虫感染的诊断常用IgG,IgM抗体检查。
由于母体的IgG可经胎盘输入，故不能测IgG抗体。
但在解释IgM/I gA的结果时应注意，此种抗体可在产程中由母体进入新生儿体内。
因此，新生儿的IgM抗体应在2-4天后复查，IgA抗体应在至少10天后复查，但有的新生儿的先天性感染，其IgM或IgA抗体或两者均可为阴性。
此时就需测IgG抗体以鉴别其来自母体还是由新生儿免疫产生，需每月测IgG抗体的滴度，共测6个月或更长时间，这取决于母体原来的抗体滴度（婴儿体内的母体抗体约每月减少一半）一种新的方法由Remington在1985年提出，即母婴配对的IgG,IgM Western Blot试验，后有人加以改进。
用EIA显色来比较母婴的抗体消长，在新生儿出生当天，第5天，1个月，3个月时进行比较。
母体的IgG逐渐减低，新生儿的IgG,IgM逐渐升高即可确定新生儿的感染，此法比IgM免疫吸附凝集试验(ISAGA)敏感（86.9%与69.6%），特异性高（96.1%与92.2%）。
如联合应用此二试验，早期诊断率可达91.3%。
只用IgG的Weatern Blot试验的敏感性最低。
如婴儿出生数日Western Blot试验为阴性时，应注意有可能在数周内不呈阳性，有的病例在1月后才呈阳性，IgM抗体仍为阴性。
产前治疗或新生儿出生后治疗也会造成假阴性。
此试验虽有鉴别价值，也应与单测IgM,IgA的ELISA试验或ISAGA试验联合应用。
随访检查也有必要。
有些病例直到4-5月后才延迟得合成IgG,而且是唯一的标志物。
此试验的试剂盒已由法国里昂的LDBIO Diagnostics供应。
Rilling等报告在德国应用的结果，回顾性调查175名婴儿，在出生时的敏感性为67%，特异性96%。
如与其他试验联用，在出生3个月时敏感性达78%，3个月时达85%。
总计如联合应用常规血清学试验可在出生3个月时检出94%的先天感染。
Robert-gangneux等用自制的IgG,IgM印迹法，在17名新生儿感染中，在2月时的敏感性为85.2%,
特异性100%。
Frank等用LDBIO试剂盒检查出生时的婴儿的阳性预测值（PPV）为100%，阴性预测值（NPV）89.3%。
如联合应用IgM,IgA, ISAGA时PPV和NPV分别为100%和98.7%。
重要的假阴性出现在婴儿在宫内时接受了治疗。
三．聚合酶链反应(PCR)
PCR已成功得用于羊水，胎盘，脑组织，血液，脑脊液，尿液，玻璃体液，房水，支气管灌洗液，胸水，腹水中的弓形虫DNA扩增。
最常用的是羊水的PCR作产前诊断。
大多数实验室以35重复序列的B1基因为靶，欧洲有的实验室用200-300重复序列的AF146527为靶。
有人比较了3种靶序列（另一为16S rDNA）发现在敏感性和特异性方面没有明显差异。
扩增的方法基本一致。
妊娠18周后取羊水作PCR扩增是最敏感的诊断方法，对急性期感染最为适用。
法国巴黎的一项研究，用P CR检查了339名妊娠期急性感染者，在妊娠18-38周的PPV为100%，NPV为99.7%。
许多报告的结果大体一致。
实时PCR的出现可将出结果的时间缩短至4小时。
用自动化DNA提取法避免了污染的可能。
此法且可定量，由体内弓浆虫的感染量预示感染的后果。
（经母体传播的患儿如羊水中>100/ml,具有最严重的后果。
）
上述3种方法的正确应用，依赖于正确地选择方法（包括质控和试剂盒的质量），正确的操作，对结果的正确解释，并应紧密地结合患者的临床表现。