设计培养基的制备的实验方案

设计培养基的制备的实验方案

制药1302闫敏

一、实验设计思想

金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus）。有“嗜肉菌"的别称。可引起许多严重感染。细菌按形态可分为：球菌，杆菌，和螺旋菌。金黄色葡萄球菌就是球菌的一种。它是革兰氏阳性菌的代表。革兰氏阳性菌就是可以被结晶紫初染，碘液媒染，乙醇脱色，沙黄（红色）复染后呈现紫红色的细菌。而革兰氏阴性菌则呈现红色。这些差别源于金黄色葡萄球菌具有阴性菌所没有的细胞壁结构。金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。相反，阴性菌没有细胞壁结构。[1]

葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。其中金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。是一种不利于人体的细菌。

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。在干燥环境中存活数月；空气中存在，但不繁殖。耐热性强，加热70℃1h，80℃30min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%-66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，广泛分布于自然界，可以引起人和动物的感染。在人体主要寄殖于鼻前庭黏膜、腹股沟、会阴部和新生儿脐带残端等部位，偶尔也寄生于口咽部、皮肤、肠道及阴道口等，是医院感染常见的病原体之一。在医院里，耐甲氧西林和其他抗生素的金黄色葡萄球菌广泛流行，对万古霉素不敏感的菌株也有所增加，给临床治疗带来了很大的困难。金黄色葡萄球菌除了引起感染外，其产生的肠毒素可污染食物而致食物中毒，为人类带来非常严重的公共卫生负担

包括：原因、研究价值或意义等。

二、实验目的（同综合实验）

2.1学习培养基的制作过程和注意事项。

2.2学习设计培养基和倒平板。

2.3学习高压蒸汽灭菌过程和使用方法。

2.4学习实验方案设计。

三、实验基本流程（可画流程图）

称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。

四、实验原理

4.1微生物的营养类型

为碳源，光做能源，无机物为供光能自养型的微生物可在完全无机的环境中生长，以CO

2

H体还原CO

合成细胞有机物质的微生物。可以直接利用光能把无机物转化成自身需要的糖类

2

等有机物，比如蓝藻。

化能自养型的微生物可以在完全无机的环境中生长发育，以无机化合物氧化为时释放的

能量为能源，以CO

2

或碳盐为碳源，合成细胞物质的微生物。这类细菌包括硫细菌、硝化细菌、铁细菌等，硫细菌和硝化细菌与生产密切相关。所以我们的生活是依赖微生物的。对于异养型微生物：

光能异养型微生物，这类微生物具有光合色素。能利用光做能源，以有机化合物为供H

体，还原CO

2，合成细胞物质的微生物。光能异养微生物能利用CO

2

，但必须在有机物存在的

条件下，才能生长，人工培养还需供给生长因素。目前已用这类微生物，如红螺菌来净化高浓度有机废水，这对处理污水、净化环境，很有发展前途。

化能异养型微生物，这类微生物以有机化合物为碳源，利用有机化合物氧化过程中产生的能量为能源，以有机或无机含氮化合物为氮源，合成细胞物质。由于栖息场所和摄取养料不同，可将异养微生物分为腐生型和寄生型两大类。

腐生型：利用无生命的有机物获得营养物质。

寄生型：从活的寄生体内获取营养物质，如病毒。

中间类型（兼性腐生或兼性寄生）如结核杆菌、痢疾杆菌就是兼性寄生菌自养型微生

物与异养型微生物的区别不在能否利用CO

2，而在于是否以CO

2

为唯一或主要碳源进行生长。

自养型微生物以无机碳化物为碳源，但也可能也可以利用有机物进行生长。异养型微生物虽

然也可利用CO

2

，但必须在有机碳存在情况下。有些微生物在不同生

4.2营养进入微生物的方式

扩散(diffusion) 原生质膜是一种半透性膜，营养物质通过原生质膜上的小孔，由高浓度的胞外环境向低浓度的胞内进行扩散。是非特异性的营养物质吸收方式。

特点:在扩散过程中，营养物质的分子结构不发生变化不消耗能量,不能逆浓度运输运输,速率与膜内外物质的浓度差成正比, 细胞膜的特性、膜上含水小孔的大小和形状对被扩散的营养物质分子的种类、大小有一定的选择性。物质跨膜扩散的能力和速率与物质本身的性质有关,分子量小、脂溶性、极性小的物质易通过扩散进出细胞

扩散并不是微生物细胞吸收营养物质的主要方式,水是唯一可以通

扩散

自由通过原生质膜的分子,脂肪酸、乙醇、甘油、苯、一些气体分子(O

2

、

CO

2

)及某些氨基酸在一定程度上也可通过扩散进出细胞。

促进扩散

易化扩散是膜蛋白介导的被动扩散。物质通过膜上的特殊蛋白质（包括载体、通道）的介导、顺电—化学梯度的跨膜转运过程，其转运方式主要有两种：一是经载体介导的易化扩散。二是经通道介导的易化扩散。单纯扩散与易化扩散都属于被动转运，被动转运的主要特点是：转运物质过程的本身不需要消耗能量易化扩散是膜蛋白介导的被动扩散。物质通过膜上的特殊蛋白质（包括载体、通道）的介导、顺电—化学梯度的跨膜转运过程，其转运方式主要有两种：一是经载体介导的易化扩散。二是经通道介导的易化扩散。单纯扩散与易化扩散都属于被动转运，被动转运的主要特点是：转运物质过程的本身不需要消耗能量，是在细胞膜上的特殊蛋白的“帮助”下，顺着浓度梯度或电位梯度进行的跨膜转运，是一个“被动”的过程。

促进扩散同简单扩散相比，具有以下一些特点：

①促进扩散需要膜蛋白的帮助，并且比简单扩散的速度要快几个数量级。

②简单扩散的速率与溶质的浓度成正比，而膜蛋白帮助的促进扩散可以达到最大值，当溶质的跨膜浓度差达到一定程度时，促进扩散的速度不再提高。

③在简单扩散中，结构上相似的分子以基本相同的速度通过膜，而在促进扩散中，运输蛋白具有高度的选择性。如运输蛋白能够帮助葡萄糖快速运输，但不帮助与葡萄糖结构类似