生物指示剂使用记录

记录编号：SOR-ZL-012-A/0品名：购入日期：年月日批号：购入数量

有效期至：芽孢含量：

生产单位：贮存方式：

3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法

3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法压力灭菌用生物指示剂1262 该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。 1. 将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中; 2. 按照国家规范, 分别将测试包放于锅内不同位置; 3. 灭菌完毕, 取出该生物指示剂; 4. 挤破内含的安瓿, 与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。结果阅读： 1.培养后指示管不变色(呈紫色), 表示灭菌通过; 2.培养后指示管变色(呈黄色), 表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。 3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色), 如阴性,可能的原因为: 培养条件不符合要求; 生物指示剂有问题; (应及时查出阴性原因)。注意事项： 1. 灭菌完毕, 含生物指示剂的包裹很热并有一定压力; 需至少冷却10分钟以上, 否则可能引起塑料管内的安瓿破裂, 飞溅的碎片导致损伤; 2. 只有对照管为阳性, 其生物监测结果才算有效。 3. 贮存于室温: 15-30℃; 相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消

毒剂。 1292 该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。 3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3M ATTEST 290 培养锅共用时, 通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。使用方法: 1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期; 不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。 2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。 3、正常装载。 4、灭菌循环完毕, 取出生物指示剂。 5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。同时在压碎安瓿之前，让生物指示剂在培养锅外再冷却10分钟后才能压碎，然后进行生物培养。 6、检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。 7、戴上防护眼镜，挤碎安瓿，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅3M ATTEST 290 培养锅操作说明。 8、每次培养须同时培养一个未灭菌过的生物指示剂进行阳性对照，阳性对照

关于生物指示剂-2

关于生物指示剂生物指示剂系一类特殊的活微生物制品。可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。（一）制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性；②菌种应无致病性；③菌株应稳定。存活期长，易于保存；④易于培养。若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。（二）生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示）等。菌株应用适宜的培养基进行培养。培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效

期。载体和包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。载体和包装应设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。（三）生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。可使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的最耐受微生物制备的孢子。在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的耐受性，并测定孢子的纯度和数量。验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。在最终灭菌法中，生物指示剂应放在灭菌柜的不同部位。并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。生物指示剂按设定的条件灭菌后取出，分别置培养基中培养，确定生物指示剂中的孢子是否被完全杀灭。过度杀灭产品灭菌验证一般不考虑微生物污染水平，可采用市售的生物指示剂。对灭菌手段耐受性差的产品，设计灭菌程序时，根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平，选择生物指示剂的菌种

实验室用试剂配制管理规程

文件名称实验室用试剂配制管理规程编制者审核者批准者编制日期审核日期批准日期颁发部门制作备份分发部门实施日期实验室用试剂配制管理规程目的：本办法规定了实验室用试剂使用的操作要点及管理要求。范围：适用于QC实验室试剂的管理。责任：QC检验员对本标准实施负责。内容： 1.0 术语：试剂：指杂质检查的标准贮备液（以下简称标准贮备液）、杂质检查的标准溶液（以下简称标准溶液）、标准缓冲液、指示剂、一般试液及缓冲液。 2.0 试剂 2.1 配制标准贮备液必须使用优级纯或分析纯的化学试剂。 2.2 配制标准缓冲液必须使用正规厂家生产的标准缓冲液试剂。 2.3 配制一般试液及缓冲液必须使用分析纯或化学纯的化学试剂。 2.4 所用的化学试剂必须达到优级纯或分析纯的标准。 3.0 溶剂 3.1 配制试剂及培养基所使用的水均指纯化水、纯化水的质量必须符合《中华人民共和国药典》2010年版规定。 3.2 配制标准缓冲液的水必须是新沸冷却pH为5.5—7.0的纯化水。

3.3 配制硫代硫酸钠、氢氧化钠的水及规定试剂使用的水必须是新沸冷却的。 3.4 所有的有机溶剂一般的应为化学纯或分析纯，检验对溶剂有特殊规定的，必须符合该标准操作规程项下的要求。 4.0 配制方法 4.1各类试剂必须严格按照《药品检验操作通则》或《中华人民共和国药典》现行版规定的方法配制。 4.2 配制标准缓冲液、标准贮备液、指示剂的称量必须用万分之一的分析天平称取，配制一般试液及缓冲液的称量≥1g的用架盘天平称取，﹤1g的用分析天平称取。 4.3 标准缓冲液、标准贮备液、指示剂由QC检验员配制、复核。 4.4 各类试剂的配制必须有两人同时进行，复核人对配制的全过程进行复核，包括所用的化学试剂、溶剂、称量、溶解、稀释、定容，全部准确无误后，该试剂方可使用。 4.5 生物测定使用的缓冲液必须灭菌。 5.0 试剂的标识 5.1 标准缓冲液、标准贮备液，必须用统一的标签标识，内容包括溶液名称、配制日期、浓度、有效期、配制人、复核人，一般试剂及缓冲液、标准溶液、指示剂按以上要求标识。 6.0 配制记录：各类试剂配制必须建立记录，内容包括名称、配制浓度、配制数量、配制日期、编号、配制人、复核人等。 7.0 试剂的效期：标准缓冲液、标准贮备液、标准溶液的有效期一般为三个月，指示剂、一般试剂除另有规定外有效期一般为六个月。 8.0 试剂的贮存 8.1 各类试剂均应按《药品检验操作标准》等要求的条件贮存。

QCP0001028 菌种和生物指示剂使用管理规程

目的：对菌种和生物指剂进行有效的及安全规范的使用范围：无菌检查、微生物限度检查和抗生素检测用菌种，灭菌设备质量监测用生物指示剂职责：菌种和生物指示剂管理使用人员对本规程负责规程： 1、菌种 1.1菌种管理 1.1.1根据定期检查的结果，按时向省级药检所、卫生防疫站采购需用的标准菌种，并做好登记。 1.1.2以购入的菌种作必要的原始鉴定，主要通过观察菌落形态特征和革兰氏染色镜检。鉴定结果出来后做好记录并对符合规定的菌种进行编号、贴上标签标明有效期等。 1.1.3菌种需单独放置于2~8℃冰箱内保藏。 1.1.4视细菌的生长情况，对菌种进行传代接种，正常情况下芽孢杆菌每3~6个月传代接种一次，其他细菌每月传代接种一次，酵母菌每4~6个月传代接种一次，丝状真菌每4个月传代接种一次，一般菌种购入后传代接种2次。每次传代各接种2支试管，一支工作中使用，另一支作为备用及下一次传代使用。 1.1.5对于超出有效期的菌种，应按规定予以销毁，并做好记录。 1.1.6菌种应有专人保管，在使用时，保管人应作好菌种的使用记录 1.2菌种的使用 1.2.1菌种必须在有效期才能使用 1.2.2每次菌种使用前应先将菌种从冰箱内取出在室温中复苏一段时间，一般为20分钟，以确保菌种在使用中的质量。 1.2.3菌种在使用过程中应做到安全、正确，按标准操作规程操作，以免影响检验工作及污染菌种和环境。 1.3菌种的处理 1.3.1使用后的菌种经121℃30分钟灭菌处理，废液排入污水站。 1.4菌种的管理、使用、处理应有登记。（见附录一、附录二） 2、生物指示剂

2.1生物指示剂的管理根据使用情况按时采购所需的生物指示剂。生物指示剂应有专人保管，按说明书给出保存条件保存，使用时应做好相应的领用和使用记录，由于生物指示剂中含有活的微生物芽胞，对于使用后颜色的指示剂和超出使用期的指示剂必须经高压灭菌后方可遗弃。2.2生物指示剂的使用方法 2.2.1压力蒸汽灭菌生物指示剂：非致病性嗜热肪芽胞（ATCC7953）制成的蓝紫色液体2.2.1.1使用方法应用于药品、生物制品、无菌衣、包装材料、敷料等方面的压力蒸汽灭菌的质量监控和验证。使用时，将生物指示剂和被灭菌物品一起放置在灭菌柜（锅）内，上、中层和排气口（冷点处），灭菌后取出，然后直接置于56~60℃培养24~48小时，并另取一支未经灭菌生物指示剂一起培养，作阳性对照。 2.2.1.2结果判断根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持蓝紫色灭菌合格。若由蓝紫色变为黄色判灭菌不合格。对照管应蓝紫色变为黄色为该指示剂有效。 2.2.2干热灭菌指示剂：枯草黑色芽胞（ATCC9372）菌片 2.2.2.1使用方法取出塑料管内菌片，无菌移至灭菌玻璃平皿内，将平皿置于干热灭菌柜内、中、外各部位，或通过隧道灭菌柜一起消毒。完毕后将菌片以无菌技术接种于培养液内37℃48小时培养，并另取一支未经消毒菌片作阳性对照。 2.2.2.2结果判断经48小时培养后若培养液变浑浊，颜色由红变黄判为阳性，培养液澄清，颜色不变为阴性，继续培养至七天，若仍无菌生长判为灭菌合格。阳性对照应为阳性 2.3生物指示剂领用记录（附录三）

生物指示剂管理规程

目的建立生物指示剂管理规程，规范生物指示剂进厂质量验收、储存、使用和销毁程序，保证生物指示剂质量安全有效。范围本规程适用于公司确认与验证及监控生物指示剂使用管理。责任生物指示剂使用部门负责采购申请填写及按照说明书要求使用、储存、销毁生物指示剂，质量部QA负责监督和检查执行情况。内容 1.生物指示剂概念生物指示剂（BI）：系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。 2.生物指示剂形式一定数量的孢子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等。孢子悬浮液密封于安瓿中。 3.生物指示剂特性具有较高的耐受性、贮存稳定性、批与批之间的一致性、无致病性、易于培养和制备的细菌芽孢。耐受性要高于灭菌前产品中污染菌的耐受性。符合地方、国内、国际相关法规要求。可根据灭菌程序的设计要求而制备。 4. 生物指示剂分类第一类生物指示剂：由微生物孢子和载体包装而成。第二类生物指示剂：由可接种在产品表面或内部的孢子悬液构成。第三类生物指示剂：包含微生物恢复生长培养基的类型。

7. 生物指示剂采购、验收、质量信息登记生物指示剂使用部门根据年度验证总计划内容及临时需求说明填写生物指示剂购买申请，采购部门根据申请从有资质的生产厂家及供应商处购得相应生物指示剂，购买的生物指示剂应附有相应的合格质量检验报告单。生物指示剂进厂验收部门为库房，库房人员应该仔细核对品名、规格、批号、数量、生产日期、有效期、生产厂家，检查外包装应完好，封口严密，标签完整，内容清晰，核对无误后填写《物料验收记录》（1））和《物料台账》（1），不合格的生物指示剂退回厂家处理。生物指示剂质量信息登记部门为领用部门，登记内容包括生物指示剂名称，生产厂家，生产批号及生产日期，失效日期，Z值，储存环境和销毁方法。《生物指示剂质量信息登记台账》（1）。 8. 生物指示剂储存、发放验收合格的生物指示剂由使用部门领回并填写《生物指示剂质量信息登记台账》（1）和《生物指示剂接收、发放记录》（2），生物指示剂使用部门负责按照该种生物指示剂使用说明书储存要求进行储存。查看《生物指示剂质量信息登记台账》（1）），确认质量信息合格的生物指示剂才可以发放使用，不合格的生物指示剂销毁处理。生物指示剂发放要及时填写《生物指示剂接收、发放记录》（2）。 9. 生物指示剂使用生物指示剂放置位置及放置数目。放置位置按照确认与验证方案执行，建议放置位置： ①在灭菌器中最大包装的中心； ②灭菌器排气口，往往不易达到灭菌温度； ③靠灭菌器的门口和底部； ④不同的生物指示剂摆放要求不同。放置数目：根据设备规格调整生物指示剂数量，一般每个灭菌周期使用量不少于10支。正确使用生物指示剂: 使用时，将生物指示剂放入标准检测包的中心或待灭菌物品包的中心，置于灭菌器的难消毒的位置，按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理，对于胶塞清洗机类的设备，生物指

压力蒸汽灭菌生物指示剂

压力蒸汽灭菌生物指示剂是由嗜热指肪杆菌( ATCC 7953)芽孢菌片、恢复培养基和外管组成。菌片含菌量为5.0 X?5.0 x cfU片。生物指示剂的抗力符合国际标准和国家标准的规定：既在121C饱和蒸汽作用下，存活时间 >3.9min杀灭时间< 19min D10值 1.3? 1.9min。【适用范围】适用于121 C下排气式压力蒸汽灭菌器、132C?134C预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌器、134C?136C台式或卡式压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测和制药工业、医院制剂生产等各行业使用的压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测。【使用方法】，，， 1使用时，将生物指示剂放入标准检测包的中心或待灭菌物品包的中心，置于灭菌器的难消毒的位置按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理。 2灭菌完毕，即刻将生物指示剂取出，盖朝上垂直握于手中，用专门工具夹碎管内安瓶，让培养液流出浸没菌片，置于56C恒温培养箱内或配套的微型培养器内培养24小时观察初步结果，48小时观察最终结果，按规定每月至少用生物指示剂进行一次灭菌效果监测。【结果判定】培养后生物指示剂中的溴甲酚紫培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体即表示有菌生长，判定为灭菌不合格；培养液仍为紫色澄清液体为无菌生长，同时阳性对照管中的嗜热脂肪杆菌生长正常即培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体，判定为灭菌合格。【注意事项】 1 将生物指示剂管从灭菌器内取出或从冰箱内取出后，需在室温下放10min 左右，再夹碎安瓿，以免过热或过冷夹碎外管。

2液体培养基的pH值低于7.0或高于7.5,均可使嗜热脂肪杆菌不能生长; 3培养温度须在56C?65C之间，否则可导致嗜热脂肪杆菌生长不良，或不能生长。 4 灭菌处理后,生物指示剂中的液体培养基颜色与压力蒸汽灭菌前比较会变浅,呈显浅紫色,这种变化属正常现象。 5用恢复培养液在56C培养时间过长（72小时以上），阳性对照管中培养液的黄色容易消退,培养液逐渐干燥,应注意每天观察,随时记录培养结果。 6本生物指示剂于4C条件下保存。【包装规格】20 支/ 盒, 10 盒/ 箱。【有效期】12个月。

M压力灭菌用生物指示剂的使用方法

M压力灭菌用生物指示剂的使用方法集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-

3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法压力灭菌用生物指示剂1262 该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。 1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中; 2.按照国家规范,分别将测试包放于锅内不同位置; 3.灭菌完毕,取出该生物指示剂; 4.挤破内含的安瓿,与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。结果阅读： 1.培养后指示管不变色(呈紫色),表示灭菌通过; 2.培养后指示管变色(呈黄色),表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。 3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色),如阴性,可能的原因为:培养条件不符合要求;生物指示剂有问题;(应及时查出阴性原因)。注意事项：

1.灭菌完毕,含生物指示剂的包裹很热并有一定压力;需至少冷却10分钟以上,否则可能引起塑料管内的安瓿破裂,飞溅的碎片导致损伤; 2.只有对照管为阳性,其生物监测结果才算有效。 3.贮存于室温:15-30℃;相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。1292 该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。? 3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3MATTEST290培养锅共用时,通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。使用方法:? 1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号,负荷数量,灭菌日期;不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。 2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。 3、正常装载。 4、灭菌循环完毕,取出生物指示剂。

生物指示剂GMP

17.9 生物指示剂的管理《中国药典》附录XVⅡ灭菌法中对生物指示剂有较详细的描述。生物指示剂，简称BI，是一类特殊的活微生物制品，是对特定灭菌工艺有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。 17.9.1制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所用可能污染的耐受性；菌种应无致病性；菌株应稳定，存活期长，易于保存；易于培养。若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。 17.9.2生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值等。菌株应用适宜的培养基进行培养。培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应战优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式。通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也了密封于安瓶中；有的生物指示剂还配有培养基系统。D值与灭菌条件相关外，还与微生物存在的坏境有关。因此，一定形式的生物指示剂制备完成后，应测定D值和孢子总数。生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效期。载体和包装材料在保护生物指示剂不致污染的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触，载体和包装的设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。有些生物是指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。 17.9.3生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管克通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。克使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的耐受性最强的微生物制备的孢子。在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的D值，并测定孢子的纯度和数量。验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。在最终灭菌法中，生物指示剂应放在灭菌柜的不同部位。并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。生物指示剂按设定的条件灭菌后取出，分别置培养基中培养，确定生物指示剂中的孢子是否被完全杀灭。过度杀灭产品灭菌验证一般不考虑微生物污染水平，可采用市售的生物指示剂。对灭菌手段耐受性差的产品，设计灭菌程序时，根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平，选择微生物指示剂的菌种和把瓶子数量、耐受性和灭菌程序验证羧获得的数据进行评估。 17.9.4常用生物指示剂湿热灭菌法湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子。D值为1.5~3.0分钟，每片活孢子数5×105~5×106个，在121℃、19分钟下应被完全杀灭。此外，还可使用生胞梭菌孢子，D值为0.4~0.8分钟。干热灭菌法干热灭菌法最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子。D值大于1.5分钟，每片活孢子数5×105~5×106个。取热原验证时大肠埃希菌内毒素，加量不小于1000细菌内毒素单位。辐射灭菌法辐射灭菌法最常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子。每片活孢子数107~108个，置于放射剂

Mesalabs-EZS6生物指示剂说明书

Mesalabs-EZS/6生物指示剂说明书型号：EZS/6 菌种：嗜热芽孢脂肪杆菌7953（1）生物指示剂用途：蒸汽灭菌培养：EZTest 培养基，55-60℃培养。所提供的细菌培养基符合促生长能力的需求。纯度：使用标准平板计数技术时没有污染的证据生产批号：S-459 生产日期：2013年12月19日失效日期：2015年12月19日热冲击计数：2.2×106孢子量/支载体尺寸：6mm×19mm 抗力分析： D值（2）存活时间杀灭时间 121℃蒸汽 2.2 9.71 23.12（3） Z值：16.9℃ 使用指导：注意：灭菌之后，玻璃安瓿内的生物指示剂热且带有压力。应至少冷却10分钟。冷却少于10分钟安瓿可能破碎以及热的液体所导致的伤害。 A 灭菌过程使用生物指示剂 1.从包装盒中取适量的指示剂。 2.从标签上鉴别生物指示剂的信息。 3.将生物指示剂放在代表性装载的合适测试包装中。 4.将测试包装放置在灭菌器的最大挑战区域，通常是在靠近门排水口上方的架子上。如果没有使用测试包，将生物指示剂放置在装载的水平位置。 5.按正常过程进行装载。 6.将带有生物指示剂的包装从灭菌器移除后应给与足够的时间进行冷却，至少10分钟以上。 7.将生物指示剂从测试的装载中取出。 8.灭菌后当标签上的化学指示剂由蓝色变为黑色。与没有进行灭菌的生物指示剂进行区别。注意：黑色不能表明接受过灭菌。 B 培养 55-60℃的条件将满足指示剂的培养条件。为了使指示剂解触培养基，将指示剂以垂直位置放置在塑料破碎器里面。轻轻地挤压破碎器破坏玻璃安瓿。将与培养基接触的生物指示剂放置在培养箱的架子上，立即进行培养。 C 解释说明： 1.在培养至8小时，12小时，18小时和24小时检查生物指示剂的颜色变化。出现黄色表明有细菌生长。没有变化表明经过了适当的灭菌。 2.一旦发生阳性试验（变为黄色）第一时间应记录下来。通知医院人员（例如疾病控制中心）。 3.建议的培养时间是24小时（符合US FDA/RIT协议）。 4.记录结果。 5.销毁生物指示剂应符合所在机构的规定。任何阳性指示剂应焚烧或在121℃,30分钟的条件下进行灭菌。使用控制： A 使用一只指示剂作为阳性对照，放置一只未破碎的，未灭菌的生物指示剂在培养箱中作为日常控制。 B 在4小时，8小时，12小时，18小时和24小时检查阳性指示剂。黄色表明有细菌生长。

试剂、试液、培养基和检定菌管理规程

页次：共4 页第1 页文件名称：试剂、试液、培养基和检定菌管理规程编码：03SMP02700 起草审核批准颁发部门质量保证部日期日期日期实施日期分发部门及份数：质量管理部1份、采购部1份目的：为使购进的试剂、试药、培养基、检定菌能妥善保存，有计划合理地使用，制订本规程。范围：检验使用的标准品、菌种、试剂与试液。职责： 1.采购部：采购员负责试剂、试药、培养基和检定菌的采购。 2.检验人员对本制度实施负责，检验室主任对本制度有效执行承担监督检查责任。内容： 1.试剂、试药（含基准物质）、培养基和检定菌的购进 1.1 有计划购进试剂、试药（含基准物质）、培养基和检定菌。由QC填写需求计划单，由供应部统一从可靠的供应商购进，并对供应商进行评估。 1.2 药品微生物检验用的试验菌应来至认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或是用于标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株，例如美国菌种收集中心（ATCC)和中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心（CMCC)。 1.3 微生物检定用的标准菌种，规定用中国药品生物制品检定所或当地药检所提供的冷冻干燥品。 2.试剂、试药（含基准物质）、培养基和检定菌的接收 2.1 试剂、试药（含基准物质）、培养基领取后，需有专人记录，接收应有接收记录，必要时应在每个试剂瓶或包装箱上贴上标签，标签上应注明接收日期和有效期；试剂的首次开启者应将试剂的开启日期同时标注于试剂标签上并签名。 2.2 检定菌应设专人接收保管，此人应受过专业培训，有足够的菌种保存经验。接收菌种时，应核实菌种的名称、编号、形态特征等，并调查清楚菌种的保存条件和注意事项。 2.3 填写菌种接收登记表。内容有：菌种名称、菌种编号、菌种批号、购买日期、菌种来源等。

灭菌用生物指示剂指导原则新增

灭菌用生物指示剂指导原则（新增）生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281-的要求。（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂、过滤等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数、D值和Z值。（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。生物指示剂用微生物的基本要求生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。一般认为含芽胞的细菌更适合用于制备生物指示剂。

2020版《中国药典》指示液与指示剂配制操作规程

一、目的：建立指示液与指示剂配制规程，规定了指示液与指示剂的配制内容、方法与要求二、范围：适用于指示液与指示剂的配制操作三、职责：化验室对实施本规程负责四、内容： 1、乙氧基黄叱精指示液：取乙氧基黄叱精0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。变色范围PH3.5～5.5(红→黄) 2、二甲基黄指示液：取二甲基黄0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。变色范围PH2.9～4.0(红→黄) 3、二甲基黄一亚甲蓝混合指示液：取二甲基黄与亚甲蓝各15mg，加三氯甲烷100ml，振摇使溶解(必要时微温)，滤过，即得。 4、二甲基黄-溶剂蓝19混合指示液：取二甲基黄与溶剂蓝19各15mg，加三氯甲烷100ml使溶解，即得。 5、二甲酚橙指示液：取二甲酚橙0.2g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用新制。 6、二苯胺磺酸钠指示液：取二苯胺磺酸钠0.2g, 加水100ml使溶解，即得。 7、二苯偕肼指示液：取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。 8、儿茶酚紫指示液：取儿茶酚紫0.1g，加水100ml使溶解，即得。变色范围PH6.0～7.0～9.0(黄→紫→紫红)。 9、中性红指示液：取中性红0.5g，加水使溶解成100ml，滤过，即得。变色范围 PH6.8~8.0（红→黄）。 10、中性红指示液(用于微生物限度检查)：取中性红0.5g，研细，加95%乙醇60ml使溶解，再加水至100ml，即得。变色范围PH6.8～8.0(红→黄)。 11、双硫腙指示液：取双硫腙50mg ,加乙醇100ml使溶解，即得。 12、孔雀绿指示液：取孔雀绿0.3g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。变色范围PH0.0～2.0(黄→绿)；11.0～13.5(绿→无色)。 13、石蕊指示液：取石蕊粉末10g，加乙醇40ml，回流煮沸1h，静置，倾去上层清液，再用同一方法处理2次，每次用乙醇30ml，残渣用水10ml洗涤，倾去洗液，再加水50ml煮沸，放冷，滤过，即得。变色范围：PH4.5～8.0(红→蓝) 14、甲基红指示液：取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围：PH4.2～6.3(红→黄) 15、甲基红-亚甲蓝混合指示液：取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。 16、甲基红-溴甲酚绿混合指示液：取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚绿的乙

压力蒸汽灭菌生物指示剂

压力蒸汽灭菌生物指示剂是由嗜热指肪杆菌（ATCC 7953）芽孢菌片、恢复培养基和外管组成。菌片含菌量为 5.0× ～5.0× cfu/片。生物指示剂的抗力符合国际标准和国家标准的规定：既在121℃饱和蒸汽作用下，存活时间≥3.9min，杀灭时间≤19min，D 10 值1.3～1.9min。【适用范围】适用于 121℃下排气式压力蒸汽灭菌器、132℃～134℃预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌器、134℃～136℃台式或卡式压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测和制药工业、医院制剂生产等各行业使用的压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测。【使用方法】，，， 1 使用时，将生物指示剂放入标准检测包的中心或待灭菌物品包的中心，置于灭菌器的难消毒的位置按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理。 2 灭菌完毕，即刻将生物指示剂取出，盖朝上垂直握于手中，用专门工具夹碎管内安瓶，让培养液流出浸没菌片，置于56℃恒温培养箱内或配套的微型培养器内培养24小时观察初步结果，48小时观察最终结果，按规定每月至少用生物指示剂进行一次灭菌效果监测。【结果判定】培养后生物指示剂中的溴甲酚紫培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体即表示有菌生长，判定为灭菌不合格；培养液仍为紫色澄清液体为无菌生长，同时阳性对照管中的嗜热脂肪杆菌生长正常即培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体，判定为灭菌合格。【注意事项】 1将生物指示剂管从灭菌器内取出或从冰箱内取出后，需在室温下放10min左右，再夹碎安瓿，以免过热或过冷夹碎外管。 2液体培养基的pH值低于7.0或高于7.5，均可使嗜热脂肪杆菌不能生长； 3 培养温度须在56℃～65℃之间，否则可导致嗜热脂肪杆菌生长不良，或不能生长。 4 灭菌处理后，生物指示剂中的液体培养基颜色与压力蒸汽灭菌前比较会变浅，呈显浅紫色，这种变化属正常现象。 5 用恢复培养液在56℃培养时间过长（72小时以上），阳性对照管中培养液的黄色容易消退，培养液逐渐干燥，应注意每天观察，随时记录培养结果。 6 本生物指示剂于4℃条件下保存。【包装规格】 20支/盒，10盒/箱。【有效期】 12个月。

生物指示剂

生物指示剂： 1.芽孢悬液 CICC芽孢悬液采用国际通用标准菌株，参照国家药典、相关标准、卫生部《消毒技术规范》等、经严格质量控制制备而成。芽孢悬液中含有一定数量、具有特定抗性的细菌芽孢，可直接接种，也可用于自制生物指示剂。萎缩芽孢杆菌芽孢悬液嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢悬液

短小芽孢杆菌芽孢悬液注：CICC亦可按照客户要求提供不同规格包装。另外根据客户要求可提供：生孢梭菌（Clostridium sporogenes），枯草芽孢杆菌（B. subtilis），巨大芽孢杆菌（B. megaterium），蜡状芽孢杆菌（B. cereus）等的芽孢悬液。 2.工业生物指示剂

工业生物指示剂是根据工业企业实际情况，按照标准要求定制加工而成，以满足企业的特殊需求，通常采用不同的载体材料和包装形式，例如钢片、钢线、纸片、棉线、塑料片和滑石粉等，它与芽孢条、自含式等标准生物指示剂相比更具优势。CICC可按照客户要求提供定制工业生物指示剂。染菌滑石粉 CICC研制的标准专用染菌滑石粉，以符合标准要求的滑石粉为载体，选用CICC 自行生产的微生物材料萎缩芽孢杆菌ATCC 9372芽孢悬液，按标准要求精制而成，每批染菌滑石粉产品均经过芽孢含量检验，确保质量稳定。该产品适用于评定屏障材料对携菌微粒阻穿透性的实验方法，适用于国家医药行业手术衣标准《病人、医护人员和器械用手术单、手术衣和洁净服》（YY/T 0506-2009）、国际标准ISO 22612:2005 Clothing for protection against infectious agents -- Test method for resistance to dry microbial penetration（传染介质防护服--防干微生物渗入的试验方法）。产品参数：染菌石英粉 CICC研制的标准专用染菌石英粉，以符合标准要求的石英粉为载体，选用CICC 自行生产的微生物材料萎缩芽孢杆菌ATCC 9372芽孢悬液，按标准要求精制而成，每批染菌石英粉产品均经过芽孢含量检验，产品质量稳定。该产品适用于评定干性条件下屏障材料对微生物屏障性能。

生物指示剂活性确认

荣仁药业 1.目的：规范本公司生物指示剂活性确认操作，保证测试结果准确、可靠。 2.范围：适用于本公司购买的生物指示剂。 3.职责：中心化验室管理人员、QA人员负责监督本规程的执行；QC微生物实验员按本规定严格执行。 4.内容： 4.1生物指示剂活性确认取同一批次的生物指示剂2支，将塑料瓶中的菌纸片取出一同放进1支装有4个玻璃珠和5.0ml的0.9%无菌氯化钠溶液的试管中。将试管振摇5-10分钟，直到菌纸片浸渍成浆状，再往试管中加入5.0ml0.9%无菌氯化钠溶液，再振摇1分钟。振摇完毕后立即从中吸取1.0ml溶液至0.9%无菌氯化钠溶液9.0ml的试管中，作为1号管，同法制2号管。将1号管于80℃水浴中放置15min，作为热处理。分别将1号和2号管做连续10倍稀释（10-1、10-2、10-3），然后吸取后两个稀释级（10-2、10-3）的菌悬液1ml，各加入两个无菌平皿中，然后倒入15～20ml冷却至50℃左右的胰酪大豆东琼脂培养基，混合后待冷却。倒置平皿在56℃下培养48小时。 QC-SOP(B)007-00 第1页共2页

荣仁药业培养结束后，计数每个平皿碟上的菌落数，计算热处理组和未处理组各稀释液中的平均菌落数，然后计算出生物指示剂纸片上平均实际活菌数和活芽孢数。生物指示剂合格标准：每条带菌纸片上的平均活菌数不小于制造商标明的平均数的95%，同时纸片上的活芽孢数也不小于活菌数的一半，则该批次生物指示剂判定为合格。将结果记录在“生物指示剂的活性确认表”上，每批购买的生物指示剂均应进行本项检查。经确认批次的生物指示剂若用于验证，还应将该表附在相应的验证文件中。 5、附件： QC-SOP(B)007-00 第2页共2页

生物指示剂GMP

生物指示剂G M P 文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

装材料在保护生物指示剂不致污染的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触，载体和包装的设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。有些生物是指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。 17.9.3生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管克通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。克使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的耐受性最强的微生物制备的孢子。在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的D值，并测定孢子的纯度和数量。验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。在最终灭菌法中，生物指示剂应放在灭菌柜的不同部位。并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。生物指示剂按设定的条件灭菌后取出，分别置培养基中培养，确定生物指示剂中的孢子是否被完全杀灭。过度杀灭产品灭菌验证一般不考虑微生物污染水平，可采用市售的生物指示剂。对灭菌手段耐受性差的产品，设计灭菌程序时，根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平，选择微生物指示剂的菌种和把瓶子数量、耐受性和灭菌程序验证羧获得的数据进行评估。 17.9.4常用生物指示剂湿热灭菌法湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子。D值为1.5~3.0分钟，每片活孢子数5×105~5×106个，在121℃、19分钟下应被完全杀灭。此外，还可使用生胞梭菌孢子，D值为0.4~0.8分钟。

M压力灭菌用生物指示剂的使用方法

M压力灭菌用生物指示剂的使用方法 Revised final draft November 26, 2020

压力灭菌用生物指示剂1262 该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。 1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中; 2.按照国家规范,分别将测试包放于锅内不同位置; 3.灭菌完毕,取出该生物指示剂; 4.挤破内含的安瓿,与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。结果阅读： 1.培养后指示管不变色(呈紫色),表示灭菌通过; 2.培养后指示管变色(呈黄色),表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。 3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色),如阴性,可能的原因为:培养条件不符合要求;生物指示剂有问题;(应及时查出阴性原因)。注意事项： 1.灭菌完毕,含生物指示剂的包裹很热并有一定压力;需至少冷却10分钟以上,否则可能引起塑料管内的安瓿破裂,飞溅的碎片导致损伤;

2.只有对照管为阳性,其生物监测结果才算有效。 3.贮存于室温:15-30℃;相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。 1292 该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。 3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3MATTEST290培养锅共用时,通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。使用方法: 1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号,负荷数量,灭菌日期;不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。 2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。 3、正常装载。 4、灭菌循环完毕,取出生物指示剂。 5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。同时在压碎安瓿之前，让生物指示剂在培养锅外再冷却10分钟后才能压碎，然后进行生物培养。

生物指示剂相关参考资料

保证产品无菌是注射剂产品质量保证的核心问题。无菌生产工艺是保障注射剂产品无菌的关键手段。而只有经过充分验证后的灭菌（无菌）生产工艺，才能保证生产出无菌的产品。微生物挑战试验是无菌生产工艺验证的重要环节。而选择适当的生物指示剂则是微生物挑战试验结果获得认可的关键。本文将围绕如何为终端灭菌工艺（过度杀灭和残存概率法）选择适当的生物指示剂进行讨论。灭菌是指杀灭所有形式微生物的过程。在业界，常用“无菌保证水平”（Sterility Assurance Level,SAL）概念来评价灭菌（无菌）工艺的效果，SAL的定义为产品经灭菌/除菌后微生物残存的概率。该值越小，表明产品中微生物存在的概率越小。为了保证注射剂的无菌安全性，国际上一致规定，采用湿热灭菌法的SAL不得大于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。生物指示剂就是为了保证整个灭菌过程达到SAL 水平而应用的,它能综合反映影响灭菌效果的各种因素。因此为了保证验证结果的重复性，生物指示剂应当采用标准化的菌株（即变异性小，各项生物学特征均一性好的菌种），并且应当具备合乎要求的抗力。更重要的是，参照USP的要求“It must be esta blished that the biological indicator system provides a challenge to the sterilization process that exceeds the challenge of the natural microbial burden in or on the product.”，我们应当选择比现有生产线自然环境下所发现的菌株更难杀灭的菌株来作为生物指示剂。举例来说，比如通过对现有车间环境，生产线，人员，物料两年的的连续观测，发现在现有生产条件下所发现的菌株的D 值最高不超过0.8，则选择D值在0.8～1.5之间的生孢梭菌( Clostridium sporogenes；ATCC7955)为生物指示剂进行验证就是不合适的。而如果在现有生产条件下所发现的菌株的D值最高不超过0.6，则可以选择生孢梭菌为生物指示剂。只要满足以上两个原则（标准化菌株及合乎要求的抗力），生产企业可以自行选择、研究、培养生物指示剂（前提是提供充分的生产环境和验证菌株的研究资料）；也可以选择商用的生物指示剂产品，如Bacillus stearothermophilus（嗜热脂肪芽孢杆菌）、Clostridium Sporogenes（生孢梭菌）、Bacillus subtilis （枯草芽孢杆菌）、Bacillus coagulans（凝结芽孢杆菌）等菌种的孢子。不论采用何种验证菌株，参照USP，对湿热灭菌（121℃）的工艺验证用菌株均应证明“具备合乎要求的抗力”；通常应满足以下要求：D值在1.5～3.0之间；存活时间在4.5～14.0min之间；完全杀灭时间在13.5～32.0min之间。为了表征菌株的“抗力”，可参照USP<55> BIOLOGICAL INDICATORS—RESISTANCE PERFORMANCE TESTS的相关标准化程序，测定D值、存活时间和杀灭时间，并提交相关的验证资料。但在大多数情况下，在申报新药时国内企业缺乏对车间环境，生产线，人员，物料连续两年的检测资料。在这种情况下企业不能自行选择“新”的生物指示剂，而应当选择为目前业界熟知的一些生物指示剂。美国NIH 首先(1955 年) 使用嗜热脂肪芽孢杆菌制备生物指示剂,因为该菌的孢子无致病性、无热原、无毒，而且，对压力蒸汽的抵抗力在大多数微生物中最强。目前，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(A TCC 7953)已成为验证湿热灭菌程序的最常用的生物指示剂。采用该菌株进行灭菌工艺验证通常不再需要企业提供连续两年的微生物环境监测结果。验证过程通常为将一定量已知耐热性的孢子接入产品中, 用设定的灭菌程序灭菌, 以确认设定的灭菌工艺是否符合标准。然而有的产品可能会增加微生物的耐热性, 有的产品可能会杀灭微生物或与之不相容, 在后一种情况下, 可考虑用生理盐水或与产品相似的溶液替代产品进行验证试验。所以研究灭菌程序之前, 必须了解生物指示剂在产品或替代产品中的耐热性。即参照USP<55>的要求对D值进行测定。其中规定“The requirements of the test are met if the determined D value is within 20% of the labeled D value for the selected sterilizing temperature and if the confidence limits of the estimate are within 10% of the determined D value.”。即测定的D值应该为标定值的80～120%（置信区间为10%以内）。此外，企业有责任对购买的指示剂产品的纯度和分类学特征进行研究，至少应当确定该微生物的“种”；并详细说明供应商提供的菌种的D值范围、适用的灭菌条