啤酒发酵酵母扩培学习资料
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啤酒厂获得接种酵母的方式有三种方式，其优缺点见图2.1：
这三种方式是：购买酵母泥；购买纯种酵母；自己保存和培养纯种酵母。
图2.1 啤酒获得酵母的方式和其优缺点
第一节纯种酵母的培养
一、培养啤酒纯种酵母工艺原理
酵母是一种兼性微生物，这就是说，细胞的新陈代谢和繁殖即可以在有氧的状态下也可以在无氧的状态下进行。
啤酒酵母菌的的繁殖过程分为四个阶段（见图2.7）：
1．迟缓期：在此期间，虽有营养物质存在，但酵母基本不繁殖；
2．对数生长期：此期间酵母繁殖最为迅速；
3．稳定期：此时，代谢产物CO2和酒精的积累使酵母繁殖逐渐变慢，活菌数最高；
4．衰亡期：营养物质耗尽和有毒代谢产物大量积累，酵母菌死亡率增加，活菌数减少。
酵母培养中，最重要的阶段是对数生长期，此时的营养、氧气供给及其他条件如：酵母细胞浓度和温度都必须达到最佳。酵母由于不断地消耗氧气，必须连续通入足够的无菌空气。因为氧气缺乏时，其中一部分酵母会进行发酵，从而产生CO2和酒精，而不是产生新细胞，这样生成的有活力的细胞数就减少了。
二、啤酒纯种酵母的分离培养
啤酒酵母的分离培养就是利用特殊的分离技术，将优良强壮的单细胞酵母从原菌中分离出来，加以扩大培养，供生产使用。分离培养的方法很多，工厂常用的是平板分离法或划
线分离法。
获得原菌的方法：
（1）从实验室保存的原菌种中分离，原菌种必须先经过几次培养活化的再行分离；
（2）从生产中的酵母泥或主发酵液中分离。
1．平板分离培养法（又称稀释分离法，见图2.2）
这种方法简单易行，适合于工厂现场使用。
先将盛有麦汁的琼脂试管培养基放在热水中融化，冷却至42～45℃，再将准备分离培养的酵母原菌用白金针移植到已融化的培养基内。如分离培养发酵液的酵母，则先使之静置，倾出上部清液，留少量发酵液，混合均匀后接种。如分离培养酵母泥，需加少量无无菌水或麦汁，稀释后再接种。
将分离培养的酵母移植于融化的培养基内后，充分振荡，使混合均匀，用白金针从该试管挑少许移植到第2支试管中，随即将第1支试管中的培养基倾注在已灭菌的培养皿中，均匀分布在培养皿底面，使之凝固。用同样方法再从第2支试管移植到第3支，而后第4支试管内，分别将取样后的培养基倾注在培养皿内，如图所示。然后，将培养皿置25～27℃保温箱中培养2～3天，每天检查菌落生长情况，剔除形态上有改变的菌落，选择菌落形态正常、细胞大小均匀的菌落进行培养。必要时应进行2～3次重复分离。
图2.2 平板分离培养法
2．划线分离培养法
此法和平板分离法的根据是相似的，各有优点。划线法简单，速度较快；平板法在平板上分离的菌落单一均匀，获得纯种的机率略高。
用接种针挑取适当稀释的菌液，直接在已灭菌的平面皿培养基上划线（图2.3），在第3或第4划线区可能得到单一菌落。然后将所需要的菌落移植到斜面培养基上，以待进一步检查。这个方法一般用于分离纯化生产上已有的菌种。
图2.3 划线分离培养法
1,2,3,4-分别表示第1,2,3,4次划线区
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啤酒发酵酵母扩培学习资料 啤酒厂获得接种酵母的方式有三种方式，其优缺点见图2.1： 这三种方式是：购买酵母泥；购买纯种酵母；自己保存和培养纯种酵母。 图2.1 啤酒获得酵母的方式和其优缺点 第一节纯种酵母的培养 一、培养啤酒纯种酵母工艺原理 酵母是一种兼性微生物，这就是说，细胞的新陈代谢和繁殖即可以在有氧的状态下也可以在无氧的状态下进行。 啤酒酵母菌的的繁殖过程分为四个阶段（见图2.7）： 1．迟缓期：在此期间，虽有营养物质存在，但酵母基本不繁殖； 2．对数生长期：此期间酵母繁殖最为迅速； 3．稳定期：此时，代谢产物CO2和酒精的积累使酵母繁殖逐渐变慢，活菌数最高； 4．衰亡期：营养物质耗尽和有毒代谢产物大量积累，酵母菌死亡率增加，活菌数减少。 酵母培养中，最重要的阶段是对数生长期，此时的营养、氧气供给及其他条件如：酵母细胞浓度和温度都必须达到最佳。酵母由于不断地消耗氧气，必须连续通入足够的无菌空气。因为氧气缺乏时，其中一部分酵母会进行发酵，从而产生CO2和酒精，而不是产生新细胞，这样生成的有活力的细胞数就减少了。 二、啤酒纯种酵母的分离培养 啤酒酵母的分离培养就是利用特殊的分离技术，将优良强壮的单细胞酵母从原菌中分离出来，加以扩大培养，供生产使用。分离培养的方法很多，工厂常用的是平板分离法或划
线分离法。 获得原菌的方法： （1）从实验室保存的原菌种中分离，原菌种必须先经过几次培养活化的再行分离； （2）从生产中的酵母泥或主发酵液中分离。 1．平板分离培养法（又称稀释分离法，见图2.2） 这种方法简单易行，适合于工厂现场使用。 先将盛有麦汁的琼脂试管培养基放在热水中融化，冷却至42～45℃，再将准备分离培养的酵母原菌用白金针移植到已融化的培养基内。如分离培养发酵液的酵母，则先使之静置，倾出上部清液，留少量发酵液，混合均匀后接种。如分离培养酵母泥，需加少量无无菌水或麦汁，稀释后再接种。 将分离培养的酵母移植于融化的培养基内后，充分振荡，使混合均匀，用白金针从该试管挑少许移植到第2支试管中，随即将第1支试管中的培养基倾注在已灭菌的培养皿中，均匀分布在培养皿底面，使之凝固。用同样方法再从第2支试管移植到第3支，而后第4支试管内，分别将取样后的培养基倾注在培养皿内，如图所示。然后，将培养皿置25～27℃保温箱中培养2～3天，每天检查菌落生长情况，剔除形态上有改变的菌落，选择菌落形态正常、细胞大小均匀的菌落进行培养。必要时应进行2～3次重复分离。 图2.2 平板分离培养法 2．划线分离培养法 此法和平板分离法的根据是相似的，各有优点。划线法简单，速度较快；平板法在平板上分离的菌落单一均匀，获得纯种的机率略高。 用接种针挑取适当稀释的菌液，直接在已灭菌的平面皿培养基上划线（图2.3），在第3或第4划线区可能得到单一菌落。然后将所需要的菌落移植到斜面培养基上，以待进一步检查。这个方法一般用于分离纯化生产上已有的菌种。 图2.3 划线分离培养法 1,2,3,4-分别表示第1,2,3,4次划线区
影响啤酒酵母发酵的异常因素及其防治
影响啤酒酵母发酵的异常因素及其防治 酵母是啤酒发酵的灵魂，酵母质量的优劣直接关系到啤酒质量的好坏。产品质量是企业的生命，是企业长期发展的基石。在啤酒的生产过程中，酵母的性能和管理在啤酒生产中占着举足轻重的作用。做好酵母管理，提高酵母质量，酿造高质量的啤酒并保持产品稳定是我们所追求的目标。 酵母性能很大程度上影响着啤酒酿造工艺的控制，对啤酒品质起着非常重要的作用。保持接种酵母有旺盛的发酵力是保证啤酒质量稳定的前提，生产酵母一旦发生退化或发酵表现异常，就会影响啤酒酿造工艺的控制和啤酒质量的稳定。 鉴于啤酒酵母对啤酒质量有如此的重要性，如何防止酵母退化，如何预防和控制发酵异常，是我们啤酒厂应时刻关注的问题，应把酵母扩培、酵母管理给予足够的重视。 一、酵母发酵异常的原因 由于环境因素的影响，往往造成酵母细胞机能的衰退。如麦汁营养不良等因素，造成酵母退化突变，造成发酵异常，也会造成酵母细胞的死亡，导致酵母自容量的增加。酵母的变异会造成各种性能的转变。以下从酵母菌种、麦汁营养成分、发酵过程控制三方面谈谈原因。 ㈠酵母菌种 1.凝聚性受遗传基因和细胞膜的结构影响，跟酵母的类型有关。是一种酵母细胞本身生理机能的衰退。 2.菌种保存条件不好，如培养基干燥，将引起酵母菌种的退化。 3.保种温度升高，也将引起酵母菌种退化。温度越高，高温时间越长，菌种退化越严重。 4.保菌不当，营养丰富致使酵母长得过分肥大，易衰退。 5.有些酵母代数升高，凝聚性较强。 6.留种酵母急着用于扩培，造成代谢慢，易衰老。 7.汉生罐留种量多，新酵母少，酵母易衰老。 ㈡麦汁营养成分 1.麦汁过滤布合理，蛋白质，多酚(或树脂)复合物、酒花中的多酚(单宁)等高分子会大量进入发酵罐，造成酵母吸附成团。 2.麦汁营养组成不合理，导致代谢慢，酵母易衰老，突变机会多。 3.麦汁中的凝固物去除不好。麦汁中带正电荷的蛋白质、类脂、葡聚糖小颗粒的物质与带负电荷的酵母互相作用形成紧密的凝聚物，酵母易早衰。混浊麦汁中含有大量的脂肪酸或沉淀物会吸附在酵母表面，造成酵母呼吸代谢困难。造成降糖迟缓或产生大量高级醇。 ㈢发酵过程控制
酵母表达系统使用心得
Pichia酵母表达系统使用心得 甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，收集了部分用户在使用EasySelect Pichia Expression System这个被誉为最简单的毕赤酵母表达的经典试剂盒过程中的心得体会。其中Xiang Yang是来自美国乔治城大学（Georgetown University）Lombardi癌症中心（Lombardi Cancer Center），部分用户来自国内。 甲醇酵母部分优点： 1.属于真核表达系统，具有一定的蛋白质翻译后加工，有利于真核蛋白的表达； 2.AOX强效启动子，外源基因产物表达量高，表达产物可以达到每升数克的水平； 3.酵母培养、转化、高密度发酵等操作接近原核生物，远较真核系 统简单，非常适合大规模工业化生产； 4.可以诱导表达，也可以分泌表达，便于产物纯化； 5.可以甲醇代替IPTG作为诱导物，部分甲醇酵母更可以用工业甲醇替代葡萄糖作为碳源，生产成本低。 产品性能：优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化；缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题。 巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。 毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-myc epitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alpha factor（α-factor）用以分泌表达，并且在表达后α-factor可以自动被切除。在进行克隆的时候，如果你选择的是EcoRI，那么只需在目标蛋白中增加两个氨基酸序列即可完成。另外pPICZ系列选用的是Zeocin抗生素作为筛选标记，而诱导表达的载体需要甲醇——甲醇比一般用于大肠杆菌表达诱导使用的IPTG便宜。 第一步——构建载体 Xiang Yang：pPICZ系列有许多克隆位点可供选择，同时也有三种读码框以便不用的用户需要。 红叶山庄：有关是选择pPIC9K还是pPICZ系列？pPIC9K属于穿梭质粒，也可以在原核表达，而pPICZ系列比较容易操作，大肠和毕赤酵母均用抗Zeocin筛选（PIC9K操作麻烦一点，大肠用amp抗性，而毕赤酵母先用His缺陷筛选阳性克隆，在利用G418筛选多拷贝），而且对于大小合适（30—50KD）的蛋白在产量上是pPIC9K无法比拟的。 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的
【免费下载】酵母及酵母制品生产许可证审查细则
酵母及酵母制品生产许可证审查细则 一、发证产品范围及申证单元 酵母及酵母制品按生产工艺可分为食用酵母、酵母深加工产品、酵母调配食品等三类产品品种。食用酵母是以糖蜜、淀粉质等为主要培养基，采用优良的啤酒酵母菌，经发酵培养、分离、洗涤、处理、浓缩或灭活浓缩、干燥而得的食用酵母。酵母深加工产品是以完整新鲜食用酵母为原料，经自溶、酶解、提取等生物技术处理所得到的酵母深加工产品。酵母调配食品是以食用酵母或酵母深加工产品为主要原料，添加适量的食品辅料或食品添加剂，经相应工艺制成的酵母调配食品。 酵母及酵母制品申证单元为1个。在生产许可证上要注明申证单元名称和获证产品名称，即其他食品[酵母及酵母制品（食用酵母、酵母深加工产品、酵母调配食品）]。生产许可证有效期为3年，其产品类别编号为2801。 二、基本生产流程和关键控制环节 （一）基本生产流程食用酵母生产流程 原料处理→发酵培养→酵母菌分离、洗涤→处理、浓缩→干燥→包装→成品酵母深加工产品生产流程： 已洗涤的新鲜食用酵母→自溶、酶解→提取→浓缩或浓缩干、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
生活中啤酒酵母菌的作用都有哪些
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活中啤酒酵母菌的作用都有哪些 导语：随着经济发展，啤酒酵母菌在我们日常生活中是非常常见的，使得现代人吃的好，啤酒酵母菌给我们提供了丰富的维他命B群等营养，可以增强病患 随着经济发展，啤酒酵母菌在我们日常生活中是非常常见的，使得现代人吃的好，啤酒酵母菌给我们提供了丰富的维他命B群等营养，可以增强病患的免疫系统。那么，生活中啤酒酵母菌的作用有哪些？ 什么是啤酒酵母？啤酒酵母是指用于酿造啤酒的酵母。多为酿酒酵母的不同品种。啤酒酵母是啤酒生产上常用的典型的上面发酵酵母。菌体维生素、蛋白质含量高，可作食用、药用和饲料酵母，还可以从其中提取细胞色素C、核酸、谷胱甘肽、凝血质、辅酶A和三磷酸腺苷等。在维生素的微生物测定中，常用啤酒酵母测定生物素、泛酸、硫胺素、吡哆醇和肌醇等。今天佳酿网小编就来跟大家谈谈啤酒酵母的那些事。 酵母在发酵过程中自身也在不断地繁殖，到发酵终了，酵母的重量可达啤酒重量的2.5%。优良的酵母菌种可保持10—12代酵母性质及形态——生 理特征的稳定性，因此，成熟啤酒中的酵母可重复使用，作为下一批麦芽汁发酵的酵母菌种。但重复使用的酵母只占一小部分，大部分的酵母要被排放掉或作其他用途。 啤酒营养丰富，不仅含有大量的蛋白质和人体必需的8种氨基酸，还含有多种维生素，其中b族维生素含量最为丰富，此外还有14种人体所需的矿物质。而作为啤酒酿造的副产物酵母的营养及医疗价值，同样不可小视。尤其引人注目的是啤酒酵母含有丰富的抗衰老的有效成分——核酸，特别是rna(核糖核酸)含量在4.5%-8.3%以上，还有约占 生活中的小知识分享，对您有帮助可购买打赏
毕赤酵母实验操作手册簿
毕赤酵母表达实验手册 大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠，是以包含体状态存在。包含体的形成虽然简化了产物的纯化，但不利于产物的活性，为了得到有活性的蛋白，就需要进行变性溶解及复性等操作，这一过程比较繁琐，同时增加了成本。 与大肠杆菌相比，酵母是低等真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单等原核生物的特点，又具有真核生物时表达的蛋白质进行正确加工，修饰，合理的空间折叠等功能，非常有利于真核基因的表达，能有效克服大肠杆菌系统缺乏蛋白翻泽后加工、修饰的不足。因此酵母表达系统受到越来越多的重视和利用。 大肠杆菌是用得最多、研究最成熟的基因工程表达系统，当前已商业化的基因工程产品大多是通过大肠杆菌表达的，其主要优点是成本低、产量高、易于操作。但大肠杆菌是原核生物，不具有真核生物的基因表达调控机制和蛋白质的加工修饰能力，其产物往住形成没有活性的包涵体，需要经过变性、复性等处理，才能应用。近年来，以酵母作为工程菌表达外源蛋白日益引起重视，主更是因为酵母是单细胞真核生物，不但具有大肠杆菌易操作、繁殖快、易于工业化生产的特点，还具有真核生物表达系统基因表达调控和蛋白修饰功能，避免了产物活性低，包涵体变性、复性等等间题［1］。 与大肠杆菌相比，酵母是单细胞真核生物，具有比较完备的基因表达调控机制
酵母扩培工作流程
酵母扩培工作流程 1，菌种选购 首先购买具备国家权威机构认可（或注册）的单位提供的菌种，并与提供菌种的科研单位沟通，让其将此菌种制成二十支冻干管（便于常温下长期保存不会变异），以后每年拿出一支冻干管进行转移、保藏（使用至当年年底）、扩培。这种方式培养菌种可以确保生产上使用的酵母不会变异、退变。 2，菌种移植 将菌种移植在斜面培养基上（4-7支斜面管），25°培养2-3天，挑选出边缘整齐、呈乳白色无污染长势良好的菌株两只管，放入4°冰箱内保存（注明移种日期、操作人、菌株特性等信息，同时做好笔记）。另选出一支长势良好的菌株移至斜面培养基上（活化）培养2-3天，此次最好移植3-5支斜面培养基。最后从此斜面上挑选出1支长势最好的菌种（待用），用于下一步扩培。 3，实验室扩培 取上述一支活化过的待用菌种，挑一菌耳接种至含有10ml液体培养基试管内，最好接种3-5管以防失败），25°培养1—2天，培养期间每隔半小时用手震荡一次充氧（或放在恒温振荡器内培养）。选出发酵旺盛的液体试管（掌握好移种时间非常重要），分别全量移至装有100ml麦汁的300ml三角烧瓶内（4个300ml的三角烧瓶），22°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或放在恒温振荡器内培养）。然后全量分别移至装有1500ml麦汁的3000ml烧瓶内（三个3000烧瓶），19°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或在恒温振荡器内培养）。将已培养好的（掌握移种时间非常重要）3000ml烧瓶内的麦汁分别全量移入15L麦汁的卡氏罐内（卡氏罐内的麦汁事先杀好菌，冷却至接种温度后再接种），16°培养1-2天，培养期间应定期充氧（每隔3小时用无菌压缩空气充氧5分钟）。 4，生产车间扩培 卡氏罐内培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml，将卡氏罐内的麦汁最大按1:10的比列全量移至培养罐（培养罐内的麦汁要二次杀菌冷却后才能接种），14°C下培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml）后，按1:5的比列转接至下一扩大罐（可直接取沉淀槽冷却的麦汁），培养期间每隔2小时充氧10分钟，转接之前镜检酵母数、死亡率、杂菌。酵母数达到：5-8x107个/ml；死亡率小于2％；镜检下未见杂菌时可用于大罐接种。
啤酒酵母质量检查
啤酒酵母的质量检查 一、实验目的学习酵母菌种的质量鉴定方法 二、实验原理酵母的质量直接关系到啤酒的好坏。酵母活力强发酵就旺盛若酵母被污染或发生变异酿制的啤酒就会变味。因此不论在酵母扩大培养过程中还是在发酵过程中必须对酵母质量进行跟踪调查以防产生不正常的发酵现象必要时对酵母进行纯种分离对分离到的单菌落进行发酵性能的检查。 三、实验器材与试剂显微镜恒温水浴温箱高压蒸汽灭菌锅带刻度的锥形离心管等 0.025美兰又称次甲基兰Methylene blue水溶液0.025g美兰溶于100mL水中 pH4.5的醋酸缓冲液0.51g硫酸钙0.68g硫酸钠0.405g冰醋酸溶于100mL水中 醋酸钾钠培养基葡萄糖0.06蛋白胨0.25 醋酸钾钠0.5琼脂2 pH 7.0。 四、实验步骤 1.显微形态检查 载玻片上放一小滴蒸馏水挑酵母培养物少许盖上盖玻片在高倍镜下观察。优良健壮的酵母菌应形态整齐均匀表面平滑细胞质透明均一。年幼健壮的酵母细胞内部充满细胞质老熟的细胞出现液泡呈灰色折光性较强衰老的细胞中液泡多颗粒性贮藏物多折光性强。 2.死亡率检查 方法同上可用水浸片法也可用血球计数板法。酵母细胞用0.025美兰水溶液染色后由于活细胞具有脱氢酶活力可将兰色的美兰还原成无色的美白因此染不上颜色而死细胞则被染上兰色。一般新培养酵母的死亡率应在1以下生产上使用的酵母死亡率在3以下。 3.出芽率检查 指出芽的酵母细胞占总酵母细胞数的比例。随机选择5个视野观察出芽酵母细胞所占的比例取平均值。一般生长健壮的酵母在对数生长阶段出芽率可达60以上。 4.凝集性试验 对下面发酵来说凝集性的好坏牵涉到发酵的成败。若凝集性太强酵母沉降过快发酵度就太低若凝集性太弱发酵液中悬浮有过多的酵母菌对后期的过滤会造成很大的困难啤酒中也可能会有酵母味凝集性可通过本斯试验来确证将1g酵母湿菌体与10mL pH4.5的醋酸缓冲液混合20℃平衡20分钟加至带刻度的锥形离心管内连续20分钟每隔1分钟记录沉淀酵母的容量。实验后检查pH是否保持稳定。一般规定10分钟时的沉淀酵母量在1.0mL以上者为强凝集性0.5mL以下者为弱凝集性。 5.死灭温度检测
酵母表达系统使用心得
精心整理 Pichia酵母表达系统使用心得 甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会 这个 是来中心（ 1. 3. 4. 5. 产品性能：优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化；缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题。 巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由
于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。 毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-mycepitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alphafactor（α-factor）用以 的是系 PIC9K G418无 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微
镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的时间了。 基本熟悉了毕赤酵母，了解了她生长的喜好（多糖偏酸环境），生长的周期等等 有 的 余的 （起始密码子），有人认为酵母启动子与外源基因的ATG之间的距离越短对于表达的该基因越有利； ⑤如果不希望有c-myc和His-tag，可以在基因片段末尾加入终止密码子；
酵母扩培工艺
酵母扩大培养工艺 1、目的 规范酵母扩培作业程序，有效控制扩培工艺参数，保证培养酵母质量均一、稳定。 2.适用范围 适用于实验室、酿造车间现场扩培和锥罐扩培工序。 3.职责 由公司技术处负责编制、修改，实验室和酿造车间负责实施。 4.规定内容 4.1实验室培养 4.1.1培养基制备流程 4.1.1.1取12度生产定型(热或冷)麦汁,调整pH至 5.3-5.5,进行稀释，稀释比例 以最终煮沸浓度控制在12度为准。 4.1.1.2稀释后麦汁冷却(或加热)至40℃按每升2个蛋清搅至起泡后打入。升温 至60℃保温30分钟，保温结束后升温至100℃煮沸30分钟。 4.1.1.3检测调整浓度后过滤、分装入试管、小三角瓶、大三角瓶， 0.07Mpa灭 菌30分 钟。 4.1.1.4灭菌后培养基要贴有制备日期标签，空培(室温放置)3天以上确认无菌后 方可使用。 4.1.1.5卡氏罐培养基制备采用过滤后热麦汁装入清洗并经0．10Mpa蒸汽杀菌 1 小时后的卡氏罐中0．10Mpa灭菌30分钟，提前1-2天完成，确保接 种温度稳定。当天能够迅速冷却的，则取当天麦汁处理，冷却后接种。 4.1.2无菌室卫生操作流程
4.1.2.1每天对室内进行30分钟紫外杀菌。超净台用前提前打开风机及自带的紫 外灯灭菌30分钟。 4.1.2.2无菌操作前对无菌室进行全面彻底清洁。地面、墙壁、天棚及空间采用甲 醛熏蒸或75%酒精擦试。同时用紫外杀菌30分钟。 4.1.2.3卡氏罐接种，超净台无法操作时，室内空间当天再次进行上述空间杀菌。 4.1.2.4无菌室内应避免其他物品的摆放，尤其操净台面。以免破坏空气层流。 4.1.2.5每次扩培时应对无菌室内空间及超净台进行两次空气捕捉检测。斜面接 出及卡氏罐接种时各进行一次。 4.1.3实验室阶段扩培工艺流程 1.安培管(或斜面菌种)在无菌条件下,接入装10ml麦汁培养液的18×180mm 试管中，在25℃培养箱中活化培养24小时(如从安培管转接,需再活化一次). 2.将活化后的试管培养液摇均,在无菌条件下,分别接1ml入装10ml麦汁培养液的 18×180mm试管中，在25℃培养箱中培养活化24小时. 3.将试管中的10ml酵母培养液转接到装50ml麦汁培养液的150ml三角瓶中, 在22℃培养箱中培养24小时. 4.将三角瓶中的50ml酵母培养液转接到装500ml麦汁培养液的1000ml三角 瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时. 5.将三角瓶中的500ml酵母培养液转接到装3000ml麦汁培养液的5000ml三 角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时. 6.将三角瓶中的3000ml酵母培养液转接到装25L麦汁培养液的卡氏罐, 在 13℃培养箱中培养24小时～48小时. 7.将卡氏罐中的酵母培养液转接到装300L麦汁培养液的汉生罐(种子罐), 在13℃条件下培养24小时～48小时.
酵母扩大培养过程关键控制点
酵母扩大培养过程关键控制点 金星集团信阳啤酒有限公司黄华龙465100 啤酒工厂从单细胞分离得到一个酵母细胞，经过鉴定确认、生产试验，得到优良菌株，然后经过若干次扩大培养，最后制备成107～108个细胞/ml后供发酵用，酵母扩大培养关键在于：第一，选择优良的单一细胞出芽菌株；第二，在整个扩大培养中保证酵母菌种的强壮、无污染。近代由于发酵规模越来越大，对接种酵母要求越来越严。各工厂扩大培养方式和顺序大致相同，而扩陪的结果得到种酵母的纯度、强壮情况、污染情况却差异很大，其原因在于是否有一个科学、无菌的扩培技术管理。 一、出芽菌株的选择 作为扩大培养的出芽菌株，，无论是实验室保藏菌株还是生产现场（主酵或酵母泥）分离得到的菌株。一般均需进行单细胞分离，并通过一系列生理特性和生产性能测定，包括酿酒口味鉴评后，确认是工厂生产需要的优良纯种后才允许投入生产扩大培养。此单细胞分离和菌株鉴定，需要在有丰富微生物理论和实践经验的技术人员指导下进行。 二、扩陪过程的无菌操作 扩大培养应严格建立在纯种的基础上，扩大培养过程的无菌技术是扩陪成败的关键。它包括：培养器皿、设备的无菌，移种操作的无菌，培养过程中通风调节温度的无菌。在汉生罐以后从麦汁进罐至移种结束，必须保证汉生罐处于正压状态，这是杜绝吸入有菌空气的先
决条件。 三、优良的培养基 麦汁是啤酒厂最方便的酵母培养基，但绝对不是“凡可以用来酿造啤酒的麦汁均是优良的培养基”。许多工厂，常常从大生产麦汁中分割作为任何一级扩陪培养基，由于麦汁组成太差，会造成扩大培养失败。无论是哪级扩陪，培养基均需要有特殊要求的麦芽汁。 实验室（从试管至大锥形瓶）培养用麦汁，一般应有实验室自己制备，可按以下方式制备成10°P全麦芽麦汁用于试管活化及菌种保藏。 1.麦汁制备: 1)称取优级麦芽约200g，除去铁屑、石粒等坚硬杂质，采用EBC 粉碎。 2)调EBC粉碎机的磨间距，使细粉颗粒直径为0.2㎜。 3)料水比例：1：3～3.5 4)称取细粉适量（准确至0.1g），于已知重量的糖化杯（500～ 600ml专用金属杯中），加入46℃水200ml,在不断搅拌下于 45℃水浴中保温30min。 5)把温度数显表调至70℃，设定。使醪液以1℃/min的速度升 温，在25min内升至70℃，此时于杯内加入70℃水100ml（加 水时注意冲洗杯壁和搅拌棒）。 6)醪液在70℃下保温1hr，在保温10min时开始碘检，用玻璃 棒取一滴麦汁，置于白瓷滴板上，冷却后加一滴碘溶液，混
啤酒酵母 的介绍
导言： 啤酒酵母是啤酒生产的灵魂，啤酒酵母的种类和质量的不同将影响啤酒的发酵和成品啤酒的质量。本章主要介绍啤酒酵母、啤酒发酵机理、啤酒发酵技术等内容。啤酒酵母部分主要包括啤酒酵母的分类、结构和组成，啤酒酵母的新陈代谢、特性，酵母的选育与扩大培养，啤酒酵母质量的鉴别方法。重点是酵母的扩大培养和啤酒酵母质量的鉴别；啤酒发酵机理主要涉及发酵过程中主要物质的转化、代谢主产物（乙醇）的合成途径和副产物（高级醇、双乙酰、酯类、醛类、有机酸、含硫化合物等）的合成与有关控制理论，要求重点掌握啤酒发酵过程中糖类和含氮物质是如何转化的？代谢主要副产物高级醇、双乙酰等是如何形成的？对啤酒质量有何影响？如何控制其产生量？啤酒发酵技术主要包括传统发酵技术、现代发酵技术（以圆柱锥形发酵罐发酵法为主）和其他发酵技术。重点学习锥形罐发酵技术及其相关知识。 第一节啤酒酵母 一、酵母的分类、结构和组成 （一）啤酒酵母的分类 在微生物分类学上，通常将微生物分为门、纲、目、科、属、种，种以下有变种、型、品系等。啤酒酵母属于真菌门，子囊菌纲，原子囊菌亚纲、内孢霉目，内孢霉科，酵母亚科，酵母属，啤酒酵母种。酵母采用双名法命名，前一个是属名，后一个是种名，后面还跟有首次描述这个种的科学家名字。根据啤酒酵母的发酵（棉子糖发酵）类型和凝聚性的不同可分为上面酵母与下面酵母、凝聚性酵母与粉状酵母。 凝聚性酵母与粉状酵母：发酵时容易相互凝聚而沉淀的酵母称为凝聚性酵母。一般发酵期间，酵母由于带相同电荷不会相互凝聚，发酵快结束时pH降至4.3～4.7接近酵母细胞的等电点，使酵母细胞相互凝聚而沉淀。使用凝聚性酵母，啤酒澄清快，但发酵度较低。酵母的凝聚性既受基因的控制，又与环境条件有关且凝聚作用是可逆的；粉状酵母在发酵期间始终悬浮于发酵液中，不易沉淀，酵母回收困难，啤酒难以澄清，但发酵度高。 （二）啤酒酵母的结构 通过显微镜观察啤酒酵母的细胞，可以看到有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、内质网膜、线粒体、颗粒等。 （三）酵母细胞的组成
酵母表达载体pPICZ手册
pPICZ A, B, and C Pichia expression vectors for selection on Zeocin? and purification of recombinant proteins Catalog no. V190-20 Rev. Date: 7 July 2010 Manual part no. 25-0148 MAN00000034 User Manual
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Table of Contents Kit Contents and Storage (iv) Accessory Products (v) Introduction (1) Overview (1) Methods (3) Cloning into pPICZ A, B, and C (3) Pichia Transformation (9) Expression in Pichia (13) Purification (15) Appendix (17) Recipes (17) Zeocin? (19) Map and Features of pPICZ A, B, and C (21) Lithium Chloride Transformation Method (23) Construction of In Vitro Multimers (24) Technical Support (32) Purchaser Notification (33) References (34) iii
Kit Contents and Storage Contents The following components are included with Catalog no. V190–20. Note that the pPICZ expression vectors are supplied in suspension. Component Quantity Composition pPICZ A Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 pPICZ B Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 pPICZ C Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 GS115/pPICZ/lacZ Positive 1 stab -- Control strain Shipping/Storage The components included with Catalog no. V190–20 are shipped on wet ice. Upon receipt, store as directed below. For long-term storage of your positive control stab strain, we recommend preparing a glycerol stock immediately upon receipt and storing at –80°C. Component Shipping Storage pPICZ A Expression Vector Wet ice Store at –20°C pPICZ B Expression Vector Wet ice Store at –20°C pPICZ C Expression Vector Wet ice Store at –20°C GS115/pPICZ/lacZ positive control strain Wet ice Store at 4°C iv
酵母管理系统知识
1.目的 使用糖化醪，在密闭罐内接入酵母菌种，通入微量的无菌空气，保压培养，获得发酵力强的纯酒母醪，供酒精发酵。 2.扩培工艺流程 3.工艺数据 复活温度：35℃—38℃。 培养温度：28℃—30℃。 分割时，留种量：15%左右。 酒母培养时间：8小时。 通风量：观察罐内液体翻动即可，每两小时开一次，每次15分钟左右。 4.要点 配料：酒母糖液罐全容积为18m3，实装容积为80%，计算15.0m3。 配方：糖化醪15m3，尿素0.15%（12kg），青霉素50g。 5.看罐 值班人员每小时检查一次酒母罐温度，做好原始记录，发现异常及时调整，至培养成熟为止。 6.生产工艺
6.1 破碎工艺 破碎颗粒直径：1.5mm—1.8mm； 拌料温度：70℃—75℃； 拌料加水比：1：2.5—2.8； 添加耐高温α-淀粉酶：用量0.8ц/g—1.2ц/g淀粉。 6.2 蒸煮糖化 蒸煮温度为81℃—83℃，蒸煮时间为90min，用酶量为90单位/g—120单位/g，控制糖化时间在60℃±2。 6.3 发酵 糖化醪入二分之一，加入青霉素1ц/mL，入罐温度32℃—34℃，主发酵期34℃—36℃，发酵周期60小时。 7.结论 7.1 扩培后使用，干酵母的用量较少，并减少了传统酵母多级培养中小酒母前的操作环节，便于控制酒母质量。 7.2 扩培中，糖液是直接由糖化锅泵入，省去了传统酵母培养中对醪液的杀菌过程，从而节约了水、电、汽。 7.3 发酵成绩提高，发酵醪酒精浓度提高1%，吨酒精节省蒸汽消耗约300kg，降低生产成本约50元。同时，吨酒精节省工艺用水1.2t—1.5t，减少酒糟排放量1.5t—2t。 汉生罐留种扩大培养酵母的控制点击数：199 发布时间：2009年11月1日来源：中国发酵在线进入论坛交流
酵母的保存和管理
“酵母是啤酒酿造的灵魂！”啤酒生产不仅要有优质的原料、先进的生产工艺，更要有优良的酵母菌种。如何做好菌种的保存，以及酵母的正确使用、回收、排放等管理工作，对促进企业产品质量有着极其重要的作用。 一、菌种保存 1.建立菌种管理档案 建立原始酵母菌种的档案，例如菌种的编号、使用状态、转接时间、菌种来源等，定期进行原菌的活化、转接、筛选等工作，做好菌种跟踪检测。检测项目包括满罐酵母数、死亡率、发芽率、降糖速度、还原降双乙酰情况、酵母凝聚性、酵母回收质量等。 2.原始菌种的保存方法 2.1 固体斜面保存法 将保存的酵母接种到麦汁琼脂培养基斜面上，25℃保温培养2至3天，待酵母繁殖成菌落，经检查无污染后，即放入4℃的冰箱中保存。每年移接3至4次。 2.2 液体石蜡斜面保存法 酵母菌种接在培养基的斜面试管中，加入已灭菌的不含水分的液体石蜡，防止培养基水分蒸发，并隔绝与空气的接触，然后置于2℃—4℃下保存。 2.3 液体试管保存 将要保存的酵母接种到10%的灭菌蔗糖溶液中，25℃培养24小时后，置于2℃—4℃下保存。 二、酵母扩培 1.编制扩培计划 1.1 每次扩培前，编写详细的扩培计划，安排、协调好车间糖化生产，提供组分合理的扩培麦汁，有利于菌种的扩培质量。 1.2 建立扩培各阶段的质量控制点，及时依据实测数据掌握酵母转接的时机。 2.啤酒酵母的实验室扩培 斜面试管（原菌）→20毫升试管→500至1000毫升三角瓶→卡氏罐。 步骤：取适量麦汁于试管内灭菌，将斜面原菌接种到试管内，在25℃—27℃保温下，培养
2至3天，每天定期摇动，使沉淀的酵母细胞重新分布到培养基中。 无菌条件下，将试管中的酵母液接种到500mL—1000mL的灭菌麦汁中，25℃培养2至3天，每天检查培养情况。 无菌条件下，将三角瓶中的酵母液接种到10L—20L的灭菌麦汁中，混合均匀于15℃—20℃保温培养3至5天，即可接入生产现场扩培。 3.啤酒酵母的扩培 三、酵母生产现场保存 1.保存要求 在酵母菌种的保存中，由于贮存时间长，酵母会因长期处于饥饿状态，造成酵母细胞营养不良。为恢复酵母细胞活力，麦汁生产使用的辅料比例不能超过30%，麦汁浓度不低于10°P，有利于提高酵母活性。 2.保存方法 2.1 种子罐酵母菌种的保存 种子罐保存菌种要注意事项： （1）种子罐保种前，酵母扩培室内墙、地面要清洗、杀菌，设备罐体、管 道要严格彻底地清洗灭菌。 （2）种子罐菌种起发后，当糖度降至7.5°P（以10°P麦汁为例），酵母数在40×106 个/mL左右时，即可降温至3℃保压在0.01Mpa—0.02Mpa下保存菌种。 2.2 锥形罐保存种酵母 2.2.1 保种酵母的温度控制 发酵罐种酵母在贮存期间，发酵罐上、中、下温度要控制在0℃—-1℃，控温要平稳，不能忽高忽低，更要谨防因供冷过低造成罐内壁结冰，这样会使锥底保存酵母细胞的生理受损、性能退化。 2.2.2 锥形罐保存种酵母的选择标准 （1）选主酵期间发酵正常，双乙酰还原速度快的罐。
啤酒酵母发酵啤酒实验报告课件.doc
啤酒发酵实验报告 xxx 班xxx 摘要啤酒发酵过程主要包括麦芽汁糖度的测定，啤酒酵母的扩大培养，酒精度及原麦汁浓度测定，啤酒后发酵及品质评价；后发酵后对其进行品质评价。通过实验，了解啤酒发酵的过程，掌握啤酒发酵的方法和条件，学会用传统发酵的方法酿制啤酒 关键字主发酵后发酵酒精度实际浓度原麦芽汁浓度发酵度 前言啤酒是人类最古老的酒精饮料，是水和茶之后世界上消耗量排名第三的饮 料。其原料包括大麦﹑酿造用水﹑酒花、酵母以及淀粉质辅助原料(玉米﹑大米﹑大麦﹑小麦等)和糖类辅助原料等，啤酒酵母属真核生物，细胞结构类似高等 生物。在正常的营养状态下，啤酒酵母都是无性繁殖。主要以芽殖为主；大麦 提供啤酒酿造所必需的浸出物和适量的蛋白质；有独特的酒花香味和苦味﹐淡色 啤酒较明显﹐且酒体爽而不淡﹐柔和适口﹐而浓色啤酒苦味较轻﹐具有浓郁的麦 芽香味﹐酒体较醇厚﹔含有饱和溶解的CO2﹐有利于啤酒的起泡性﹐饮用後 有一种舒适的刺激感觉﹔ 啤酒发酵的原理如下： 啤酒酵母的可发酵性糖和发酵顺序是：葡萄糖＞果糖＞蔗糖＞麦芽糖＞麦芽三 糖，通过： 1.EMP—TCA 循环产生酵母繁殖所需能量 C6H12O6 + 6O2 + 38ADP + 38Pi →6CO2 + 6H2O + 38ATP + 热能（有氧呼吸）2822kJ 2. EMP—丙酮酸—酒精发酵途径（人们的目的） 由葡萄糖发酵生成乙醇的总反应式为： C6H12O6 + 2ADP + 2H3PO4 →2CH3CH2OH + 2CO2 + 2ATP + 113kJ 综上，酵母的主要代谢产物为乙醇和二氧化碳，发酵副产物为醇类、醛类、 酸类、酯类、酮类和硫化物等物质。 工业啤酒生产工艺流程可以分为制麦、糖化、发酵、包装四个工序： （1）制麦的主要过程为：大麦进入浸麦槽洗麦、吸水后，进入发芽箱发芽， 成为绿麦芽。绿麦芽进入干燥塔/炉烘干，经除根机去根，制成成品麦芽。从大 麦到制成麦芽需要10 天左右时间。 （2）糖化的步骤为：
啤酒酵母
总介： 用于酿造啤酒的酵母。多为酿酒酵母（Sac-charomyces cerevisiae）的不同品种。E．C．Hansen（1883）开始分离培养酵母并将它用于酿造啤酒。丹麦Carlsberg酿造研究所的下面酵母是有名的。细胞形态与其它培养酵母相同，为近球形的椭圆体，与野生酵母不同。啤酒酵母是啤酒生产上常用的典型的上面发酵酵母。菌体维生素、蛋白质含量高，可作食用、药用和饲料酵母，还可以从其中提取细胞色素C、核酸、谷胱甘肽、凝血质、辅酶A 和三磷酸腺苷等。在维生素的微生物测定中，常用啤酒酵母测定生物素、泛酸、硫胺素、吡哆醇和肌醇等。 主要分类 分类学：微生物界-真菌门-子囊菌纲-内孢霉目-内孢霉科-酵母属-啤酒酵母种啤酒酵母在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳白色，有光泽，平坦，边缘整齐。无性繁殖以芽殖为主。能发酵葡萄糖、麦芽糖、半乳糖和蔗糖，不能发酵乳糖和蜜二糖。 DHC啤酒酵母 按细胞长与宽的比例，可将啤酒酵母分为三组。第一组的细胞多为圆形、卵圆形或卵形（细胞长/宽<2），主要用于酒精发酵、酿造饮料酒和面包生产。第二组的细胞形状以卵形和长卵形为主，也有圆或短卵形细胞(细胞长/宽≈2)。这类酵母主要用于酿造葡萄酒和果酒，也可用于啤酒、蒸馏酒和酵母生产。第三组的细胞为长圆形(细胞长/宽>2)。这类酵母比较耐高渗透压和高浓度盐，适合于用甘蔗糖蜜为原料生产酒精。活性用途发酵各类酒非活性用途：医药类原料、饲料类蛋白源、医药试剂发酵蛋白源（简称发酵氮源）、食品类营养品、第四代调味品原料（通过氨基酸呈味——可牛肉味、鸡肉味、虾味等）。 酵母的工业发展史 早在公元3000年前，人类开始利用酵母来制作发酵产品。最早在市场上销售的产品是酵母泥，这种产品的特点是发酵速度快，但运输和使用不便，产品的商业化受到了一定的限制。从销售酵母泥算起，把制造酵母作为一种工业来看，酵母工业的发展已有200余年的历史了。酵母已成为世界上研究最多的微生物之一，是当今生物技术产品研究开发的热点和现代生物技术发展、基因组研究的模式系统。目前，全球酵母生产能力总计（以干酵母计）超过100万吨，年销售收入超过25亿美元。20世纪80年代以来，中国酵母工业取得了跨越式发展，拥有了畅销全球的自主创新品牌，酵母产品的研究、生产和应用达到了
毕赤酵母表达操作手册(精译版)
毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒 用于在含多拷贝基因的毕赤酵母菌中表达并分离重组蛋白 综述： 基本特征： 作为真核生物，毕赤酵母具有高等真核表达系统的许多优点：如蛋白加工、折叠、翻译后修饰等。不仅如此，操作时与E.coli及酿酒酵母同样简单。它比杆状病毒或哺乳动物组织培养等其它真核表达系统更快捷、简单、廉价，且表达水平更高。同为酵母，毕赤酵母具有与酿酒酵母相似的分子及遗传操作优点，且它的外源蛋白表达水平是后者的十倍以至百倍。这些使得毕赤酵母成为非常有用的蛋白表达系统。 与酿酒酵母相似技术： 许多技术可以通用： 互补转化基因置换基因破坏另外，在酿酒酵母中应用的术语也可用于毕赤酵母。例如：HIS4基因都编码组氨酸脱氢酶；两者中基因产物有交叉互补；酿酒酵母中的一些野生型基因与毕赤酵母中的突变基因相互补，如HIS4、LEU2、ARG4、TR11、URA3等基因在毕赤酵母中都有各自相互补的突变基因。 毕赤酵母是甲醇营养型酵母： 毕赤酵母是甲醇营养型酵母，可利用甲醇作为其唯一碳源。甲醇代谢的第一步是：醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛，还有过氧化氢。为避免过氧化氢的毒性，甲醛代谢主要在一个特殊的细胞器－过氧化物酶体－里进行，使得有毒的副产物远离细胞其余组分。由于醇氧化酶与O2的结合率较低，因而毕赤酵母代偿性地产生大量的酶。而调控产生醇过氧化物酶的启动子也正是驱动外源基因在毕赤酵母中表达的启动子。 两种醇氧化酶蛋白： 毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶－AOX1及AOX2。细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1基因产物。甲醇可紧密调节、诱导AOX1基因的高水平表达，较典型的是占可溶性蛋白的30%以上。AOX1基因已被分离，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。AOX2基因与AOX1基因有97%的同源性，但在甲醇中带AOX2基因的菌株比带AOX1基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离Muts菌株。 表达： AOX1基因的表达在转录水平受调控。在甲醇中生长的细胞大约有5%的polyA+ RNA 来自AOX1基因。AOX1基因调控分两步：抑制/去抑制机制加诱导机制。简单来说，在含葡萄糖的培养基中，即使加入诱导物甲醇转录仍受抑制。为此，用甲醇进行优化诱导时，推荐在甘油培养基中培养。注意即使在甘油中生长（去抑制）时，仍不足以使AOX1基因达到最低水平的表达，诱导物甲醇是AOX1基因可辨表达水平所必需的。 AOX1突变表型： 缺失AOX1基因，会丧失大部分的醇氧化酶活性，产生一种表型为Muts的突变株（methanol utilization slow），过去称为Mut，而Muts可更精确地描述突变子的表型。结果细胞代谢甲醇的能力下降，因而在甲醇培养基中生长缓慢。Mut+（methanol utilization plus）指利用甲醇为唯一碳源的野生型菌株。这两种表型用来检测外源基因在毕赤酵母转化子中的整合方式。 蛋白胞内及分泌表达： 外源蛋白可在毕赤酵母胞内表达或分泌至胞外。分泌表达需要蛋白上的信号肽序列，将外源蛋白靶向分泌通路。几种不同的分泌信号序列已被成功应用，包括几种外源蛋白本身分