柱前衍生高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量

高效液相色谱法测定氨基酸

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案 1、仪器与试药 1.1 仪器 1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国） 1.2 药品与试剂 16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。批号：2013、2013、2013. 乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。2、方法与结果 2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。

时间 (min) 流速 (ml/min) % A % B 曲线起始 1.0 100 0 * 0.5 1.0 98 2 6 15.0 1.0 93 7 6 19.0 1.0 90 10 6 32.0 1.0 65 35 6 33.0 1.0 65 35 6 34.0 1.0 0 100 6 37.0 1.0 0 100 6 38.0 1.0 100 0 6 42.0 1.0 100 0 6 2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）门冬氨酸 4.80 苏氨酸 1.20 异亮氨酸 1.10 丝氨酸 2.60 丙氨酸 2.50 亮氨酸 2.70 谷氨酸 6.20 脯氨酸 2.00 苯丙氨酸 1.20 甘氨酸 2.40 缬氨酸 1.60 色氨酸0.40 组氨酸0.90 甲硫氨酸 1.00 精氨酸 1.20 赖氨酸 3.45 取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。衍生剂配制将水浴锅设置55℃，加热，待温度稳定, 取AccQFluor衍生剂2A，轻轻弹击,确保AccQFluor 衍生剂2A粉末全落在瓶底，吸取AccQFluor衍生稀释剂2B 1ml并放掉，清洗移液器管，再吸取AccQFluor 衍生稀释剂2B 1ml，加入AccQFluor衍生剂2A的瓶中，振荡10秒钟，在恒温水浴锅中溶解，保持10分钟。于干燥器中室温保存一周,于干燥器中4℃保存二周。 2.3测定方法分别取20ul对照品溶液和供试品溶液加入衍生专用管底部，加入60uLAccQFluor硼酸

第31章氨基酸及其重要衍生物的转化

第31章氨基酸及其重要衍生物的转化一、判断题（）1. 芳香族氨基酸都是通过莽草酸途径合成的。（）2．丝氨酸能用乙醛酸为原料来合成。（）3．限制性内切酶的催化活性比非限制性内切酶的催化活性低。（）4．莽草酸途径是所有生物所共有的氨基酸代谢方式。（）5．肝细胞浆中的氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ是合成尿素的关键酶。（）6．嘧啶核苷酸的合成伴随着脱氢和脱羧反应。（）7．脱氧核糖核苷酸的合成是在核糖核苷三磷酸水平上完成的。（）8. 合成芳香氨基酸的前体物质是糖酵解和三羧酸循环的中间产物。（）9. Ser和Thr的分解代谢有相似的地方，他们脱氨后都产生酮酸，都是生糖氨基酸。（）10. 微生物对Phe和Tyr的分解代谢作用，与动物对这两种氨基酸的分解作用完全相同。二、选择题 1．转氨酶的辅酶是： A．NAD+ B．NADP+ C．FAD D．磷酸吡哆醛 2．下列哪种酶对有多肽链中赖氨酸和精氨酸的羧基参与形成的肽键有专一性：A．羧肽酶B．胰蛋白酶 C．胃蛋白酶D．胰凝乳蛋白酶 3．参与尿素循环的氨基酸是： A．组氨酸B．鸟氨酸C．蛋氨酸D．赖氨酸 4．γ-氨基丁酸由哪种氨基酸脱羧而来: A．Gln B．His C．Glu D．Phe 5．经脱羧后能生成吲哚乙酸的氨基酸是： A．Glu B．His C．Tyr D．Trp 6．L-谷氨酸脱氢酶的辅酶含有哪种维生素： A．VB1 B．VB2 C．VB3 D．VB5 7．磷脂合成中甲基的直接供体是： A．半胱氨酸B．S-腺苷蛋氨酸C．蛋氨酸D．胆碱 8．在尿素循环中，尿素由下列哪种物质产生： A．鸟氨酸B．精氨酸C．瓜氨酸D．半胱氨酸 9．需要硫酸还原作用合成的氨基酸是： A．Cys B．Leu C．Pro D．Val 10．下列哪种氨基酸是其前体参入多肽后生成的： A．脯氨酸B．羟脯氨酸C．天冬氨酸D．异亮氨酸 11．组氨酸经过下列哪种作用生成组胺的： A．还原作用B．羟化作用 C．转氨基作用D．脱羧基作用 12．氨基酸脱下的氨基通常以哪种化合物的形式暂存和运输： A．尿素B．氨甲酰磷酸C．谷氨酰胺D．天冬酰胺 13．丙氨酸族氨基酸不包括下列哪种氨基酸： A．Ala B．Cys C．Val D．Leu

高效液相色谱习题和答案解析

高效液相色谱法习题一、思考题 1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理 14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？ 17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？ 18．试述CZE的基本原理 19．试述CGE的基本原理 20．试述MECC的基本原理二、选择题 1．液相色谱适宜的分析对象是（）。 A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物 C 所有有机化合物 D 所有化合物 2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。 A 柱前压力高 B 流速比GC的快 C 流动相钻度较小 D 柱温低 3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL －1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。 A mA/m B B mB/mA C CB/CA D CA/CB。 4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。 A 外标标准曲线法 B 内标法 C 面积归一化法 D 外标法 5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（）是有效的？ A 改变流动相种类 B 改变固定相类型 C 增加流速 D 改变填料的粒度 6．在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂（分子间作用力不同），以改善分离度，主要是（）。 A 提高分配系数比 B 容量因子增大 C 保留时间增长 D 色谱柱柱效提高 7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（）。 A 吸附色谱 B 反离子对色谱 C 亲和色谱 D 空间排阻色谱 8．分离糖类化合物，选以下的柱子（）最合适。 A ODS柱 B 硅胶柱 C 氨基键合相柱 D 氰基键合相柱 9．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（）。 A 异构体 B 沸点相近，官能团相同的化合物 C 沸点相差大的试样 D 极性变化范围宽的试样 10．在高效液相色谱中，采用254 nm紫外控制器，下述溶剂的使用极限为（）。 A 甲醇210 nm B 乙酸乙醋260 nm C 丙酮330 nm 11吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用（）。 A 液一液色谱法 B 液一固色谱法 C 键合相色谱法 D 离子交换法 12．当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为（）。

9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)

9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生法） 2013-09-05 方法： HPLC 基质：标准溶液应用编号： 103087 化合物： Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸) Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖氨酸) 固定相： Endeavorsil C18 色谱柱/前处理小柱： Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm 样品前处理： 1 溶液配制：氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液三乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准溶液衍生化：量取200 μl氨基酸混合使用液，置于 1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μ l，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μ

高效液相色谱法测定甲硝唑的含量

实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含量一、实验目的 1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。 2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3.了解流动相的选择依据及配制方法。 4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。二、实验原理高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。三、实验内容（一）实验仪器与材料 1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。 2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。（二）实验内容 1、色谱操作条件的制定：色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80）流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL 2、标准溶液配制精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。 3、标准曲线的建立（1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤

高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量

河北医科大学学报 JOURNAL OF HEBEI MEDICAL UNIVERSITY 1999年第20卷第4期Vol 20No.41999 高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量颜京霞　宋秀君　卞小芸　勾凌燕　王仁杰　张亚超摘　要　目的　探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。方法　采用2种流动相,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8),流动相B为0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80);色谱柱为necleos ODSΦ4.6 nm×150 nm。Wistar大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。结果　该方法最低检出限为10 μg/ml,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为0.998±0.002,回收率为91.07 %～96.79 %,牛磺酸峰面积变异系数在进样量3μl时为10.75 %,进样量5 μl时为3.12 %。结论　高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。主题词　牛磺酸/分析;白内障/病因学;色谱法,高压液相/方法;大鼠中图号　R493.2;R776.1 DETERMINATION OF TAURINE CONTENT BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Yan Jingxia　Song Xiujun　Bian Xiaoyun Department of Ophthalmology,the Third Hospital of Hebei Medical University (Shijiazhuang 050051) Gou Lingyan　Wang Renjie　Zhang Yachao Shijiazhuang Medical College of PLA ABSTRACT　Objective　To explore the method for determination of taurine in plasma, aqueous and lenses of rate by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods　Two mobile phase were used:0.05 mol/L sodium acetate buffer (pH=6.5)-methanolfourhydrofuran(80∶20∶0.8) and 0.05 mol/L sodium citrate butter (pH=6.5)-methanol(20∶80);the analytical column was Φ4.6 nm×150 mm necleos ODS.The Wistar rat's plasma,aqueous and lenses samples were determined after derivation.Results　Using this method,the minimum detected limit was 10 μm/ml;the mean related coefficient between concentration of amino acids and reaction valus was 0.998±0.002;the rate of recovery were 97.07 %～96.79 %;the coefficient of variation of taurine's peak area was 10.75 % when the analysed sample was 3 μl and was 3.12 % when the analysed sample was

HPLC柱前衍生和柱后衍生

HPLC柱前衍生和柱后衍生 1、为什么要衍生？衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性；对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的相应。 2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物；柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。 3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素（聚醚类抗生素多见）和氨基酸类。 4、衍生化要求？ 1）衍生剂必须过量且稳定；不过量反应不完全，检测不充分。不稳定，重现性差。 2）衍生物、衍生产物和衍生副产物至少是好分离的。当然如果只能检测到衍生产物最好。3）衍生反快速完全。反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。 5、两种衍生比较柱前衍生优点是，对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。缺点是，引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物（当然这个是检测需要的）和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。柱后衍生优点是，重现性好，认为因素少，引入物质比较少。缺点是，可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢（必然流速低）、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。仪器管路的清洗 Agilent的液相，反相柱，想用异丙醇清洗下系统.用纯异丙醇,流速一般在0.2~0.4ml/min 先用甲醇-水，甲醇洗，再用异丙醇洗，流速低一点，根据你的压力决定，不要超过平时使用压力就可以了,洗完了，再用甲醇洗把流通池拿掉，看基线，基本可以确定，问题在哪个方向，如果基线稳定，那就是流通池或者流动相或者泵什么的问题了.再有，检测器光路透镜老化什么的也会有这个情况，光电倍增管是否老化等基线走不平一般是1.流动相脏，2.灯能量不够（流通池），3.系统有气泡，4.泵压力不稳。5.系统有杂质等。 10%异丙醇作用冲洗泵头的，防止含盐流动相中的盐分结晶损毁宝石杆开机就要用，控制一定的流速，不能太快也不能太慢带缓冲盐的流动相一定要用,每分钟2-3滴的速度，虹吸，保持泵的宝石杆湿润，起保护作用的安捷伦1200，灯使用时间大概半年，今晚把紫外灯关闭后冲洗柱子，两小时候开灯老显示紫外灯打开失败。怎么回事啊？ 1.如果只是关2小时的话实际上就是浪费灯能量了关一次一般就是8小时的能量损失

高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.360docs.net/doc/1612983938.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂 (Carbamate Pesticide)方面的分析分析 1．氨基甲酸盐杀虫剂分析柱 Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法，保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。对于C18柱，两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。杀虫剂分析的柱后条件：衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130 衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor ? in 950 mL of CB910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度，0.1mL 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测：荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm 氨基甲酸盐柱1846250 （4.6×250mm ） , C18, 5um

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.360docs.net/doc/1612983938.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ） 8. 克百威（Carbofuran ） 9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 （4.6×150mm ） , C18, 5um 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ）

高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯

高效液相色谱（HPLC ）法测定邻苯二甲酸酯一、实验目的： 1. 了解高效液相色谱仪原理； 2. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法； 3. 利用高效液相色谱仪测定邻苯二甲酸酯、邻苯二乙酸酯、邻苯二丁酸酯的峰图和含量。二、实验原理： ① 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC ）是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R ）的计算公式为： R ＝ 2[t (R2)-t (R1)] /1.7*(W 1＋W 2) //式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间；t (R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W 1 及W 2为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。 ② 本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE ，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。同时也有一定的致癌作用。如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC 分离检测。三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul 微量注射器。 2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水，样品。出峰次序样品组成 1 邻苯二甲酸二甲酯（DMP ） 2 邻苯二甲酸二乙酯(DEP) 3 邻苯二甲酸二丁酯(DBP)

高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量北京液相色谱仪分析案例

食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定一、简介测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定，但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置 LC-10Tvp高压恒流泵：2台 SPD-10Tvp紫外检测器：1台 SCL-10Tvp 系统控制器：1台 7725i手动进样阀： 1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点 LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。

高效液相色谱仪LC2000-技术标书(全检测器+自动进样器+柱后衍生)

液相色谱仪技术标书 1. 总则： 1.1 提供相应货物的技术规格文件，在应答的品目标题下，表明货物的型号、商标名称及生产厂家。 1.2 货物的制造和检验，必须是按照现行的中国国家标准，或通用国际标准。 1.3 仪器设备如需特殊工作条件（如：水、电源、磁场强度、特殊温度、湿度、振动强度等），应在相关文件中加以说明。 1.4 所提供的货物的技术规格应与响应品目所要求相符。应根据产品的正式出版样本（原本）和说明书如实逐项填写技术规格响应表。 1.5 在价目表上应分别列出每台（套）设备的单价及每台（套）设备的配置清单，每个包的总价应是该包中各设备单价的总和，如在统计上有差错，则以单价为准，总价由买方更正。 2. 工作条件除该品目在技术要求中另有说明外，所有仪器、设备和装置，均应适合以下条件：能在电源电压220V（±10%），50Hz，5~35℃。 3．技术参数 3.1 输液泵 3.1.1 液体输送原理：双柱塞串联往复式，自动脉冲抑制系统； 3.1.2 流速范围：0.001mL/min～9.999mL/min； 3.1.3 最大输出压力：39MPa； 3.1.4 *流速准确度：±2μL/min(0.01～0.1mL/min); ±2%(0.101～8.01mL/min); ±4%(8.01～9.999mL/min)； 3.1.5 *流速精密度：SD＜0.02min 或RSD＜0.075%(流速为1.0mL/min时的保留时间)； 3.1.6 润湿部分材料：SUS 316,陶瓷，氟树脂。 3.2 梯度系统 3.2.1 混合液体数：4种液体；

3.2.2 *混合原理：用比例阀的开关时间编程进行梯度比例控制，流动相只在泵前合流，泵后直接混合； 3.2.3 *混合准确度：±1%； 3.2.4 *混合精密度：0.2%； 3.2.5 四元连续在线脱气（选配）。 3.3 紫外检测器 3.3.1 光源：进口氘灯； 3.3.2 光学系统：比例双光束，凹面光栅，1200线/mm； 3.3.3 波长范围：190～600nm； 3.3.4 波长精度：≤±2nm； 3.3.5 波长重复性：≤0.2nm； 3.3.6 光谱带宽：≤8nm； 3.3.7 *噪音水平：不超过±0.00001AU (254nm,流通池充满空气，时间常数2.0秒)； 3.3.8 *漂移水平：不超过0.00025AU/hr (254nm,室温恒定，稳定的工作状态)； 3.3.9 自动调零范围：－0.3～2 AU； 3.3.10 补偿范围：0～2AU,每步0.001ＡＵ； 3.3.11 响应时间：0.1 , 0.5 , 2.0 , 4.0 秒； 3.3.12 波长时间程序：有。 3.4柱温箱 3.4.1 操作简便； 3.4.2 控温精度：≤±0.1℃； 3.4.3 控温范围：室温+5℃～80℃。 3.5 Primaide自动进样器 3.5.1 *进样方法：全部体积直接进样方式（高压进样）； 3.5.2 *样品数：≥200个（标准1.5ml样品瓶）； 3.5.3 *扩展样品数： 4mL×128； 3.5.4 标准进样体积：0.1－50μL（100μL标准注射器）；

高效液相色谱法测定有机化合物的含量

实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作（1）样品与流动相的处理配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。（2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液洗液一般为：50%的甲醇。

柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述

柱前衍生和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法的进展与评述美瑞泰克有限公司中国代表处整理柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。 1、柱前衍生技术和反向色谱分离氨基酸à衍生物à色谱分离 1.1 AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯)法优点：能同时检测一级二级氨基酸，检出现1pmole 缺点：pH值和洗脱温度要求控制准确。 1.2 PITC（异硫氰酸苯酯）法缺点：PITC试剂进入柱子使柱填料过早的老化，柱子寿命降低，因此过量的衍生剂需要真空干燥除掉，为此，仪器要附设衍生及真空干燥装置。（主要用在生物饲料及食品分析中应用） 1.3 OPA （邻苯二甲醛-巯基乙醇）缺点：OPA只能与伯氨反应，使二级氨不能同时被检测。由于反向柱分离过程中会有部分衍生物发生裂解，致使OPA-氨基酸的稳定性很差，尤其是胱氨酸和赖氨酸衍生物信号衰减较快，灵敏度低。 1.4 DANSYL-Cl（丹磺酰氯）法优点：同时可以检测1，2级氨基酸同时能够准确的测定样品中的胱氨酸。缺点：衍生物在紫外光下不稳定，特别是蛋氨酸对紫外光十分敏感，收率很低，因此衍生反应必须避光进行，而且反应最好要在室温下进行40min左右，如果温度高于45度降低衍生物的产率。 1.5 FMOC-Cl（芴甲氧羟基氯）法 2 柱后衍生技术和阳离子交换色谱分离 2.1 OPA（邻苯二甲醛-巯基乙醇）法优点：程序化柱后衍生，OPA以极快的速度于氨基酸反应成发荧光团物质，又在很短的时间内进入灵敏度很高的荧光检测器检测，消除了柱前手动衍生是衍生物不稳定的因素，该方法具有较高的分辨率和灵敏度。 2.2 Nin-hydrin（茚三酮）法优点：程序化衍生，衍生反应速度快（60S），衍生物稳定性好，衍生试剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测。缺点：衍生物只能用紫外检测器检测，使灵敏度较低而不适合微量氨基酸测定；衍生反应条件要求较高，需要附设加温衍生装置，仪器造价高；流动相与衍生液同时泵入体系，体系平和时间较长长。综上所述：经过改进和完善的柱后衍生，离子交换色谱法，仪器已具备很高的自动化水平，被分离出来的氨基酸在特有的诸侯氧化剂衍生设备中按固定程序与衍生剂迅速反应并被检测，消除了个样品由于衍生时间，衍生温度等因素的差异带来的测试误差，实践证明该方法是继稳定性分辨率，分离度具佳的可靠的氨基酸分析方法，而衍生试剂不直接计入色谱柱，使柱寿命延长时柱后衍生法的一明显优势。柱前——柱后衍生对照表自动化程度衍生物的稳定性柱子的损害前处理氨基酸分析的种类一次性设备投入柱前衍生法低低大繁琐18-26种小柱后衍生法高高小简单22-45种大

测定氨基酸的方法以及试剂

一采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸 1.氨基酸测定原理：食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。 2.测定氨基酸所用仪器: 真空泵;恒温干燥箱;水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30mL。用去离子水冲洗干净并烘干;真空干燥器(温度可调节);氨基酸自动分析仪。 3.测定氨基酸所用试剂及其配制方法: 3.1试剂：全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。浓盐酸(优级纯);苯酚(须重蒸馏); 混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售)：0.00250mol/L; 不同pH值柠檬酸钠缓冲液；氢氧化锂(LiOH·H2O)；冰乙酸(优级纯)；二甲基亚砜(C2H6OS)；水合茚三酮(C9H4O3·H2O)；还原茚三酮(C18H10O6·2H2O);NaOH；高纯氮气（纯度99.99%）；冷冻剂：市售食盐与冰按1∶3混合。 3.2试剂配制方法： 3.2.1. 6mol/L盐酸∶浓盐酸(3.1)与水1∶1混合而成。 3.2.2. pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)和16.5mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2。 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠(优级纯)加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 3.2.3. 茚三酮溶液 pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂(LiOH·H2O)168g，加入冰乙酸(优级纯)279mL，加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至5.2。茚三酮溶液：取150mL二甲基亚砜(C2H6OS)和乙酸锂溶液(3.6.1)50mL加入4g水合茚三酮(C9H4O3·H2O)和0.12g还原茚三酮(C18H10O6·2H2O)搅拌至完全溶解。二.液相法测定氨基酸柱前衍生法：参见文献（高效液相色谱柱-前衍生化法测定饲料中的含硫氨基酸柱前衍生化反相高效液相色谱法测定板蓝根中的氨基酸高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸含量） 1.仪器:Waters2695 HPLC; Waters2998 PDA检测器；电热恒温鼓风干燥箱色谱柱：Phenomenex Luna C18 (250mm×4.6mm,5μm) 试剂：流动相A：0.1mol/L醋酸钠缓冲液（以醋酸调pH6.5）-乙腈（93:7）流动相B：乙腈-水（4:1）梯度洗脱检测波长：254nm 2.试剂：衍生试剂：PITC(异硫氰酸苯酯)；浓盐酸；三乙胺；正己烷；苯酚；氨基酸标准品衍生化试剂的配制方法：1mol/L三乙胺-乙腈溶液：取三乙胺7mL加乙腈稀释至50Ml 0.01mol/L PITC-乙腈溶液：取PITC 60μL加乙腈稀释至50mL

高效液相色谱法测定水样中的苯酚

实验三高效液相色谱法测定水样中的苯酚一、实验目的 1.1熟悉HPLC仪器的各个部件及熟悉操作方法； 1.2掌握应用高效液相色谱法对苯酚的定性、定量分析； 1.3掌握水样中苯酚的测定。二、实验原理 HPLC原理高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。特点 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～ 350×105Pa。 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。高效液相色谱仪一般分为四个部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还可以根据一些特殊的要求配备一些附属装置，如梯度洗脱、自动进样及数据处理装置等，如图1所示。

柱前衍生化_高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化

68 柱前衍生化—高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化黄晓杰1，李京华2，王俊德2* 1.辽宁医学院食品学院（锦州 121001）； 2.大连化物所（大连 116023）摘要采用自行制备的反相高效液相色谱柱，以2，4-二硝基氟苯为衍生化试剂，色谱条件为：流动相醋酸钠缓冲溶液-乙腈（体积比875∶125），检测波长360 nm，外标法定量。得到最佳衍生条件为4.36 μmol牛磺酸和0.4% DNFB 0.1 mL，pH=7。对鲍鱼样品进行了测定，测得鲍鱼中牛磺酸含量1.12 g/100 g，此方法回收率与精密度试验结果较好。关键词反相高效液相色谱法；柱前衍生化；2,4-二硝基氟苯；牛磺酸；鲍鱼 Precolumn Derivatization—Optimization on Determining Taurine by High Performance Liquid Chromatogramphy Huang Xiao-jie 1, Li Jing-hua 2，Wang Jun-de 2 1.Liaoning Medical university (jinzhou 121001； 2.Dalian Institute Of Chemical Physics (Dalian 116023) Abstract Taurine was determined by reverse phase high performance liquid chromatographic method. Derivatized with 2,4-dinitro-? uorobenzene, NaAc-Methanol(V:V=875:125) as mobile phase, with wavelength 360 nm. The external standard method was used. Get the best derivatized condition: 4.36 μmol taurine and 0.4% DNFB 0.1 mL, pH=7. This method was used for abalone, the content of taurine in abalone was 1.12 g/100 g. This method has better recovery and precision. Keywords reversed-phase high performance liquid chromatography ；pre-column derivatization ；2,4-dinitro-? uorobenzene ；taurine ；abalone 牛磺酸又称牛胆碱（taurine），化学名为2-氨基乙磺酸，是人体条件性必需氨基酸，以游离形式存在，不参与蛋白质代谢。常见的牛磺酸检测方法有氨基酸分析仪法和高效液相色谱法[1]。氨基酸分析仪法需要通过泵和反应器以保证洗脱液与柱后衍生试剂均匀混合，使仪器局限于一类分析。柱前衍生反相高效液相色谱法常用的衍生剂有OPA和DNFB等。OPA衍生法具有样品制备简单、衍生反应迅速等特点，但其衍生物不够稳定[2]；DNFB可以克服衍生物不稳定的缺点，但会产生衍生干扰物。试验对高效液相色谱柱前DNFB衍生法的衍生条件进行优化，以克服衍生干扰物的影响，获得最优衍生条件。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂法国吉尔森GAD-LN007 型高效液相色谱仪、305型高压输液泵、Gilson715色谱软件、116型可编程序紫外吸收检测器。色谱柱：本实验室自行研制的KF-AA05型反相氨基酸专用分析柱，(4.6×250) mm。飞利浦搅拌机（型号HR 2860/60/A）。牛磺酸标样：生化试剂，北京奥博星生物技术责任有限公司，纯度98%；衍生剂2,4-二硝基氟苯（DNFB）：德国Merck公司；离子对试剂N,N-二甲基甲酰胺（N,N-DMF）：沈阳市联邦试剂厂，分析纯；乙腈为色谱纯(TEDIA)，鲍鱼样品为市售鲜样。1.2 色谱条件流动相：30 mM NaAc缓冲溶液-乙腈(体积比85∶15)，含1%N,N-二甲基甲酰胺，pH=6.20。经0.45 μm滤膜过滤，超声脱气待用。流速1.0 mL/min；检测波长360 nm；进样量10 μL。1.3 溶液的配制 NaAc缓冲溶液：称取NaAc 2.46 g，加5 mL N,N-二甲基甲酰胺，重蒸馏水825 mL，乙腈175 mL，稀醋酸调pH至6.2。标准溶液：称取牛磺酸标准品10.9 mg，置10 mL 量瓶中，加重蒸馏水至刻度，即得到1.09 mg/mL的标准溶液。衍生缓冲溶液：配制不同p H 值的N a H C O 3和KH 2PO 4缓冲溶液（均为0.5 mol/L）。衍生溶液：准确称取2,4-二硝基氟苯(0.2~1) g置于100 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得到0.2%~1%浓度的衍生溶液。平衡溶液：配制0.1 mol/L pH=7.0的KH 2PO 4缓冲溶液。 1.4 牛磺酸标准的衍生化准确吸取标准溶液0.1 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 分析检测