超氧化物歧化酶活性的测定
植物组织中超氧化物歧化酶和平测定方法
【实验目的】
1. 了解还原法测定抗氧化酶活性测定的原理方法。
2. 熟悉植物叶片中ROS 去除机制。 【实验原理】
超氧化物歧化酶（SOD ）普遍存在于动植物与微生物体内。SOD 是含金属辅基的酶。高等植物有两种类型的SOD ：Mn-SOD 和Cu/Zn-SOD 。SOD 能够清除超氧阴离子自由基 （O 2—），它与CAT 、POD 等酶协同作用来防御活性氧或其他过氧化物自由基对细胞膜系统的伤害，从而减少自由基对机体的毒害。
超氧阴离子自由基（O 2—）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。SOD 能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧阴离子自由基，生成H 2O 2和O 2。生成的H 2O 2可被过氧化氢酶分解为O 2和H 2O ：
2 O 2—+ 2H + H 2O 2+O 2 2 H 2O 2 O 2+H 2O
超氧自由基非常不稳定，寿命极短，一般用间接方法测定SOD 活性。本实验依据SOD 抑制氮蓝四唑（NBT ）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。有氧化物质存在时，核黄素可在光照条件下还原。被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O 2—。当加入NBT 后，在光照条件下O 2—又可将NBT 还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大光吸收。
当加入SOD 时，SOD 可通过清除O 2—，而抑制NBT 的光还原反应，使蓝色甲腙生成速度减慢。于是，进行光还原反应后，反应液蓝色越深，说明酶的活性越低，反之酶的活性越高。抑制NBT 光还原的相对百分率与酶活性在一定范围内呈正相关关系，据此可以计算出酶活性的大小。常常将抑制50%的NBT 光还原反应时所需的酶量作为一个酶活性单位（U ）。
【器材与试剂】 1. 实验仪器与用具
研钵、高速冷冻离心机、分光光度计、微量移液枪、刻度移液管、离心管、光照箱（光照度为4000lx ）、容量瓶（10ml ）、试管
2. 实验试剂
50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）； 130mmol/L 甲硫氨酸（MET ）溶液； 750μmol/L 氮蓝四唑（NBT ）溶液； 100μmol/L EDTA- Na 2溶液；
CAT
SOD
20μmol/L 核黄素溶液；
SOD 提取介质：50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）内含1% PVP 。 3. 实验材料
正常生长或经逆境处理的小麦叶片 【实验步骤】
1. SOD 提取：称取植物材料0.5g 于预冷的研钵中，加入2ml 预冷的提取介质，在冰浴条件下研磨成匀浆，转移至10ml 容量瓶中，用提取介质冲洗研钵2～3次（每次1～2ml ），合并冲洗液于容量瓶中，定容至10 ml 。取5ml 转入到离心管中，于4℃、10000 r/min 离心15min ，收集上清液，即为SOD 粗提液。
2．活性测定：取透明度好、质底相同的试管4支。测定管2支，光下对照1支，暗中对照1支（调零）。按下表所列内容加入各种溶液（注意最后加入核黄素溶液）。
表 测定SOD 活性时各试剂加入量
试剂/ml
测定管 光下对照
暗中对照
1
2 3 4 50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8） 1.5 1.5 1.5 1.5 130mmol/L MET 溶液
0.3 0.3 0.3 0.3 750μmol/L 氮蓝四唑（NBT ）溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 100μmol/L EDTA- Na 2溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 20μmol/L 核黄素溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 粗酶液 0.1 0.1 0 0 蒸馏水
0.5
0.5
0.6
0.6
4号试管加入核黄素后立即用黑布套遮光，全部试剂加完后摇匀，将试管置于4000 lx 荧光灯下显色反应15～20min （要求各管照光一致，反应温度控制在25～35摄氏度）。反应结束后用黑布罩遮盖住试管终止反应。以4号管作空白（调零），在560nm 下测定吸光度，记录测定数据。
3．结果计算
SOD 活性(U ·g -1FW ·h -1) =
t
V FW A V A A S t S ??????-5.060
)(00
式中，A0：光下对照管吸光度；A S ：样品测定管吸光度；Vt ：样品提取液总体积（ml ）；V S ：粗酶液量；t ：显色反应光照时间（min ）；FW ：样品鲜重（g ）。
【实验结果】 1. 测定数据记录
1（逆境测定管）
2（CK 测定管）
3（光下对照管）
4（暗中对照管）
吸光度A 0.076
0.087
0.437
0.000
反应时间
20 min
2. 计算
逆境下：SOD 活性=
20
1.05.05.0437.060
10)076.0437.0(??????-=991.3 U ·g -1FW ·h -1
正常环境下：SOD 活性=20
1.05.05.0437.060
10)087.0437.0(??????-=961 U ·g -1FW ·h -1
可以看出，逆境下的SOD 活性升高。 【注意事项】
1．线粒体内SOD 酶浓度较高，因此研磨要充分。
2．要求各管受光情况一致，所有反应管应排列在与日光灯管平行的直线上。反应温度控制在25℃，视酶活性高低适当调整反应时间。温度较高时，光照时间应缩短；温度较低时，光照时间相应延长。
超氧化物歧化酶(SOD)的研究、应用和展望
超氧化物歧化酶(SOD)的研究、应用和展望 作者：李敬玺， 王选年， 银梅， 唐海蓉， 王新华 作者单位：河南科技学院，河南 新乡 453003 本文读者也读过(10条) 1.时沁峰.曹威荣超氧化物歧化酶(SOD)的研究概况[期刊论文]-畜禽业2009(4) 2.曹淑华.查向东超氧化物歧化酶研究综述[期刊论文]-安徽农业科学2003,31(4) 3.杨卫健.张双全超氧化物歧化酶的研究及应用前景[期刊论文]-淮阴师范学院学报(自然科学版)2002,1(4) 4.陈鸿鹏.谭晓风.CHEN Hong-peng.TAN Xiao-feng超氧化物歧化酶(SOD)研究综述[期刊论文]-经济林研究2007,25(1) 5.李敬玺.刘继兰.王选年.银梅.葛亚明.唐海蓉.LI Jing-xi.LIU Ji-lan.WANG Xuan-nian.YIN Mei.GE Ya-ming. TANG Hai-rong超氧化物歧化酶研究和应用进展[期刊论文]-动物医学进展2007,28(7) 6.王岚超氧化物歧化酶的研究及应用概况[期刊论文]-武汉工业学院学报2002(1) 7.盛良全.郑晓云.闫向阳.肖厚荣.厦炳乐.刘少民.SHENG Liangquan.ZHEN Xiaoyun.YAN Xiangyang.XIAO Hourong .XIA Binle.LIU Shaomin生命体中的超氧化物歧化酶(综述)[期刊论文]-安徽卫生职业技术学院学报2002,1(2) 8.杨东升超氧化物歧化酶的研究与应用[期刊论文]-化学与生物工程2004,21(3) 9.于平.Yu Ping超氧化物歧化酶研究进展[期刊论文]-生物学通报2006,41(1) 10.沈良.郭洪超氧化物歧化酶及其模拟研究[期刊论文]-杭州师范学院学报(自然科学版)2002,1(3) 本文链接：https://www.360docs.net/doc/209580397.html,/Conference_7003085.aspx
超氧化物歧化酶资料
超氧化物歧化酶 超氧化物歧化酶，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 SOD（超氧化物歧化酶）是国际上公认的具有人体垃圾“清道夫”、“抗衰王”、“美容骄子”之称，是对抗“百病之源”活性氧自由基最有力的物质，是近半个世纪以来社会科学界、医学界、生物界最举世瞩目的价值发现，它的研究与发展代表着生物医药的高科技技术发展的前沿，在科技成果及学术领域占据重要的国际地位。SOD（超氧化物歧化酶）被国家列入生物医药“国家十一五规划”重点项目。2011年是“国家十二五规划”的第一年，SOD行业将再次跻身国家当前优先发展的高科技产业化项目，标志着中国健康产业链SOD新兴行业的崛起, 使全人类迈入健康经济时代。利用超氧化物歧化酶（SOD）产业化建设，一方面可架构生物医药、保健食品、日用美容化妆品、化工化学、农业五大版块经济支柱的绿色产业链循环经济圈发展。另一方面打造SOD科技应用成果转化的孵化器平台引领生化医药美容化妆品食品等行业的新型健康原料的应用，有利于促进再生资源利用，产生巨大的社会效益和经济效益。 一、反应机理 超氧化物岐化酶,它催化如下的反应： 2O2-+2H+→H2O2+O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 SOD属于金属蛋白酶，按照结合金属离子种类不同，该酶有以下三种：含铜与锌超氧化物歧化酶（Cu-ZnSOD ）、含锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD ）和含铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD ）。三种SOD都催化超氧化物阴离子自由基，将之歧化为过氧化氢与氧气。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推陈出新动一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。如，超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基，等等。在细胞由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体内的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代谢失常等，最终使机体发生病变。因此，自
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定 氮蓝四唑法 一、原理 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)普遍存在动、植物的体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下面的反应： o 2.-+H O 2 22+O H ＋ 反应产物H 2O 2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易被氧化而产生超氧阴离子，超氧阴离子可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大吸收。而SOD 可清除超氧阴离子，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶的活性愈低，反之酶的活性俞高。据此可计算出酶活性的大小。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料 植物器官(花瓣、叶片等) (二)仪器设备 冰箱、低温高速离心机、微量加样器 (1mL 、20μL 、100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子、荧光灯(反应试管处照度为4000Lux 或Lx) (三)试剂 (1) 0.05mol/L 磷酸缓冲液(PH7.8)。 (2) 130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称1.9399gMet 用磷酸缓冲液定溶至100mL 。 (3)750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT 用磷酸缓冲液定溶至100mL ，避光保存。 (4)100μmol/LEDTA -Na 2溶液：称取0.03721g EDTA-Na 2，用磷酸缓冲液定溶1000mL 。 (5)20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g 核黄素用蒸馏水定溶到1000mL ，避光保存。 三、试验步骤 (一)酶液的提取 (1)称取植物材料(去叶脉)0.2g ，加1ml 预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲
超氧化物歧化酶的现状研究进展(一)
超氧化物歧化酶的现状研究进展(一) 关键词：超氧化物歧化酶;生理功能;特性;应用摘要:超氧化物歧化酶是生物体内清除超氧阴离子自由基的一种重要酶，具有重要的生理功能，在医药、食品、化妆品中有广泛的应用前景。现从分类、分布、结构、性质、催化机理、制备、应用等方面探讨了超氧化物歧化酶的基础研究进展。 关键词:超氧化物歧化酶;生理功能;特性;应用Advanceincurrentresearchofsuperoxidedismutase. Abstract:SuperoxideDismutase（SOD）isanimportantenzymeinorganism，whichcanremovesuperoxidefreeradical.Itiswide-lyusedinclinicaltreatment，food，andcosmeticindustryforitsimportantphysiologicfunction.Thisreviewpresentsabasicreseachoutline ofSOD，includingclassification，distribution，structure，property，thecatalysemechanism，preparationandapplication. Keywords:Superoxidedismutase;Physiologicfunction;Property;Application 1938年Mann和Keilin〔1〕首次从牛红细胞中分离出一种蓝色的含铜蛋白质（Hemocuprein），1969年Mccord及Fridovich〔2〕发现该蛋白有催化O2，发生歧化反应的功能，故将此酶命名为超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD，EC1.15.1.1）。该酶是体内一种重要的氧自由基清除剂，能够平衡机体的氧自由基，从而避免当体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的不良反应，同时SOD是一种很有用途的药用酶。有关SOD的研究受到国内外学者的广泛关注，涉及到化学、生物、医药、日用化工、食品诸领域，是一个热门研究课题。通过多年努力，在SOD的基础研究方面取得了巨大成果。目前，SOD临床应用主要集中在抗炎症方面（以类风湿以及放射治疗后引起的炎症病人为主），此外对某些自身免疫性疾病（如红斑狼疮、皮肌炎）、肺气肿、抗癌和氧中毒等都有一定疗效;在食品工业主要用作食品添加剂和重要的功能性基料;在其它方面也有相关应用。现就有关SOD的基础研究进展及应用方面作以简述。 1SOD的种类与分布 SOD是一类清除自由基的蛋白酶，对需氧生物的生存起着重要的作用，是生物体防御氧毒性的关键。迄今为止，科学家已从细菌、真菌、原生动物、藻类、昆虫、鱼类、植物和哺乳动物等生物体内都分离得到了SOD。基于金属辅基不同，这些SOD至少可以分为Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD三种类型〔3〕。 表1不同种类型的SOD分布（略） 一般来说，Fe-SOD是被认为存在于较原始的生物类群中的一种SOD类型;Mn-SOD是在Fe-SOD 基础上进化而来的一种蛋白类型，由于任何来源的Mn-SOD和Fe-SOD的一级结构同源性都很高，均不同于Cu/Zn-SOD的序列，可见它们来自同一个祖先;Cu/Zn-SOD分布最广，是一种真核生物酶，广泛存在于动物的血、肝和菠菜叶、刺梨等生物体中。 除以上三种SOD外，Sa-OukKang等人最近又从链霉菌Streptomycesspp.和S.coelicotor中发现了两种新的SOD，一种是含镍酶即Ni-SOD，另一种是含铁和锌的酶即Fe/ZnSOD，它们均为四聚体，表观分子量分别是13KD和22KD，它们之间没有免疫交叉反应〔4～6〕。 2SOD的催化机理 超氧化物歧化酶作用的底物是超氧阴离子自由基（O·-2），它既带一个负电荷，又只有一个未成对的电子。在不同条件下，O·-2既可作还原剂变成O2，又可作氧化剂变成H2O2，H2O2又在过氧氢酶（Catalase，CAT）的作用下，生成H2O和O2，由此可见，有毒性的O·-2在H2O2又在过氧氢酶（Catalase，CAT）的作用下，生成H2O和O2，由此可见，有毒性的O·-2在SOD和CAT共同作用下，变成了无毒的H2O和O2。其作用机理如下:SOD+O·-2SOD-+O2SOD-+O·-2+2H+SOD+H2O22O·-2+2H+SODO2+H2O2H2O2CATH2O+O2
锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒说明书
货号: QS3110 规格：50管/24样锰过氧化物酶（Manganese peroxidase，Mnp）试剂盒说明书 可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。 测定原理： 锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器: 天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。 试剂组成和配制: 试剂一：液体75mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存。 酶液提取: 1.组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试 剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 2.细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细 胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 3.培养液或其它液体：直接检测。 测定操作: 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至465nm，蒸馏水调零。 2、测定前将试剂一、二、三、四在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上。 465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。 注意：若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液，在37℃（哺乳 第1页，共2页
超氧化物歧化酶(SOD)
超氧化物歧化酶（SOD） 超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase）简称SOD，是一种广泛存在于自然界的生物酶，按所含金属种类不同可分为铜锌SOD、锰SOD和铁SOD三种。现在市场上出售的SOD大多都从血液中提取，属铜锌SOD（Cu，Zn-SOD）。Cu，Zn-SOD 分子由两个亚基组成，每个亚基含有一个铜离子和一个锌离子，分子量在32000左右。SOD是一种生物酶，其化学本质是蛋白质，国内外对其毒性进行了广泛的研究。实验表明，它对人体无毒副作用，是一种纯天然的生物活性物质。 SOD的抗氧化作用 1969年发现SOD 能催化清除超氧阴离子自由基的反应。自由基是具有不配对价电子的原子或原子团, 分子或离子构成。在正常生理状况下, 生物体内不断地产生自由基, 自由基的产生与清除处于平衡状态。但在某些病理情况下, 自由基产生量多时, 就会对DNA、蛋白质和脂类等生物大分子造成损伤, 导致机体疾病的产生。由于自由基具有高度的化学活性, 是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物, 自由基攻击生物大分子导致组织损伤是许多疾病发生发展的根源。因而SOD在防御生物体免受超氧阴离子自由基损伤, 抗辐射, 抗肿瘤及延缓机体衰老等方面具有重要的作用。 1、清除机体代谢过程中产生过量的超氧阴离子自由基 延缓由于自由基侵害而出现的衰老现象, 即延缓皮肤衰老和脂褐素沉淀的出现。衰老自由基学说认为衰老是来自机体正常代谢过程中所产生的自由基随机附带破坏性的作用结果, 自由基引起机体衰老的主要机制可概括为以下三方面。 （1）减少生物大分子的交联聚合和脂褐素的堆积； （2）减缓器官组织细胞的损伤与减少； （3）防止免疫能力的降低。 2、提高人体对自由基损伤而诱发疾病的抵 抗力自由基损伤而诱发疾病的抵抗力主要包括肿瘤、炎症、肺气肿、白内障和自身免疫疾病等当SOD作为功能性食品基料加入食品中时, 可有效抑制许多疾
超氧化物歧化酶(SOD)
简介 超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD)是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。 SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。 SOD类型：超氧化物歧化酶按其所含金属辅基(活性中心)不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 耐热SOD是国家“十五”、“十一五”863计划重大课题项目（课题编号：2004AA214080、 2007AA100604），由中国科学院国家重点实验室采用先进技术，历时八年开发出来的新一代SOD酶产品（专利号：ZL200510005207.9）。 SOD是Super Oxide Dismutase 缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！ SOD是是一种含有金属元素的活性蛋白酶，是目前生物学、医学和生命科学领域中世界级的高、尖、精课题。超氧化物歧化酶（SOD）目前世界范围内的开发，大都从动物血里提取，不但代价昂贵，而且动物性SOD的排他性、不易常温保存，有艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险，故国际卫生组织呼吁：立刻停止动物性SOD的使用。SOD是中国卫生部批准的具有抗衰老、免疫调节、调节血脂、抗辐射、美容功能的物质之一，法定编号为ECl.15.1.1；CAS[905489]1。 (一) 简介 超氧化物岐化酶(SuperoxideDismutase)，简称SOD，ECl.15.1.1，它催化如下的反应： 2O2-+2H+→H2O2+O2 ;O2-+H+→HO2.(过氧羟自由基)、HO2.+HO2.→H2O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD) 会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 自由基 自由基（Free Radical）是一类非常活跃的化学物质，是个有不成对（奇数）电子的原子、原子团、分子和离子。其中最重要的是氧自由基，它可聚集在体表、心脏、血管、肝脏和脑细胞中。如果它沉积在血管壁上，会使血管发生纤维性病变，导致动脉管硬化，高血压，心肌梗塞；沉积在脑细胞时，会引起老年人神经官能不全，导致记忆、智力障碍以及抑郁症，甚至老年性痴呆等，是造成人类衰老和疾病的元凶。 氧自由基可分为两类： (1)无机氧自由基：超氧自由基、羟基自由基
超氧化物歧化酶(SOD)的发现及其应用
超氧化物歧化酶（SOD）的发现及其应用 早在1930年，Keilin和Mann就发现了SOD，不过，当时他们仅认为是一种蛋白质，并命名为血铜蛋白。直到1969年，McCord和Fridovich在研究对黄嘌呤氧化酶时，发现SOD具有酶的活性，并正式把它命名为superoxidedismutse，中文名即为超氧化物歧化酶。 超氧化物歧化酶 一、超氧化物歧化酶（SOD）分类及作用 根据分子中所含的金属辅基不同，SOD可分为Cu，Zn-SOD，Fe-SOD，Mn-SOD 和Ni-SOD四类。其中Cu，Zn-SOD主要存在于真核细胞的细胞浆中，如猪血、鸭血、猪肝等动物血液和内脏器官等组织中；Mn-SOD存在于真核细胞的线粒体、细菌中；Fe-SOD只存在于原核细胞中，如海藻中的螺旋藻、铁钉叶等；Ni-SOD 是最近发现只存在于某些极少数原核细菌中。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢和氧气，生成的过氧化氢会被过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)分解为完全无害的水。因而SOD是机体内防止自由基损伤的第一道防线，，是生物体内最重要的抗氧化酶。SOD作为机体内最有效、最重要的抗氧化酶之一，能有效清除老年机体代谢过程中所产生的超氧自由基，延缓衰老。 二、自由基 自由基是一类非常活跃的化学物质，是个有不成对（奇数）电子的原子或原子团。其中最重要的是超氧自由基，它可聚集体表、心脏、血管、肝脏和脑细胞中。如果沉积在血管壁上，会使血管发生纤维性病变，导致动脉管硬化，高血压，心肌梗塞；沉积在脑细胞时，会引起老年人神经官能不全，导致记忆、智力障碍以及抑郁症，甚至老年性痴呆等，是造成人类衰老和疾病的元凶。而在衰老的皮肤和脑中存在的脂褐素和蜡样质,可使皮肤变黑和粗糙，这两种物质也是由自由
超氧化物歧化酶SOD1
一、超氧化歧化酶(SOD)简介 超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 超氧化物歧化酶Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，是一种新型酶制剂。能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。 二、超氧化物歧化酶（SOD）的化学修饰 1、SOD修饰的原因 超氧化物歧化酶（SOD）广泛存在于自然界一切生物体内，通过催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，减轻或消除?O-2对机体的氧化或过氧化损害。研究表明，机体的衰老、病变及辐射伤害都与自由基的形成和损伤有关，故SOD的应用有抗衰老、抗辐射、抗炎症、抗自身免疫性疾病、抑制肿瘤和癌症的功能。研究还表明，SOD与胃病、帕金森综合症、老年痴呆症、心血管疾病等有着密切关系。目前，在医药、食品、保健品、化妆品、美容等行业也已开始使用SOD。SOD 具有许多独特的生物学特性和生理学功能，但天然的SOD稳定性较差，分子量较大，半衰期短，细胞膜通透性差，且多来源于异源性，具免疫原性，而限制了其在相关领域的应用。 2、SOD修饰改造的方法 目前国内外已有很多的研究，化学修饰、基因重组、SOD模拟化合物,而以下则重点介绍的为化学修饰法.
超氧化物歧化酶活性的测定
植物组织中超氧化物歧化酶和平测定方法 【实验目的】 1. 了解还原法测定抗氧化酶活性测定的原理方法。 2. 熟悉植物叶片中ROS 去除机制。 【实验原理】 超氧化物歧化酶（SOD ）普遍存在于动植物与微生物体内。SOD 是含金属辅基的酶。高等植物有两种类型的SOD ：Mn-SOD 和Cu/Zn-SOD 。SOD 能够清除超氧阴离子自由基 （O 2—），它与CAT 、POD 等酶协同作用来防御活性氧或其他过氧化物自由基对细胞膜系统的伤害，从而减少自由基对机体的毒害。 超氧阴离子自由基（O 2—）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。SOD 能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧阴离子自由基，生成H 2O 2和O 2。生成的H 2O 2可被过氧化氢酶分解为O 2和H 2O ： 2 O 2—+ 2H + H 2O 2+O 2 2 H 2O 2 O 2+H 2O 超氧自由基非常不稳定，寿命极短，一般用间接方法测定SOD 活性。本实验依据SOD 抑制氮蓝四唑（NBT ）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。有氧化物质存在时，核黄素可在光照条件下还原。被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O 2—。当加入NBT 后，在光照条件下O 2—又可将NBT 还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大光吸收。 当加入SOD 时，SOD 可通过清除O 2—，而抑制NBT 的光还原反应，使蓝色甲腙生成速度减慢。于是，进行光还原反应后，反应液蓝色越深，说明酶的活性越低，反之酶的活性越高。抑制NBT 光还原的相对百分率与酶活性在一定范围内呈正相关关系，据此可以计算出酶活性的大小。常常将抑制50%的NBT 光还原反应时所需的酶量作为一个酶活性单位（U ）。 【器材与试剂】 1. 实验仪器与用具 研钵、高速冷冻离心机、分光光度计、微量移液枪、刻度移液管、离心管、光照箱（光照度为4000lx ）、容量瓶（10ml ）、试管 2. 实验试剂 50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）； 130mmol/L 甲硫氨酸（MET ）溶液； 750μmol/L 氮蓝四唑（NBT ）溶液； 100μmol/L EDTA- Na 2溶液； CAT SOD
超氧化物歧化酶的现状研究进展
关键词：超氧化物歧化酶;生理功能;特性;应用摘要:超氧化物歧化酶是生物体内清 除超氧阴离子自由基的一种重要酶，具有重要的生理功能，在医药、食品、化妆品中有广泛 的应用前景。现从分类、分布、结构、性质、催化机理、制备、应用等方面探讨了超氧化物 歧化酶的基础研究进展。关键词:超氧化物歧化酶;生理功能;特性;应用Advanceincurrentresearchofsuperoxidedismutase. Abstract:SuperoxideDismutase（SOD）isanimportantenzymeinorganism，whichcanremovesuperoxidefreeradical.Itiswide-lyusedinclinicaltreatment，food，andcosmeticindustryforitsimportantphysiologicfunction.Thisreviewpresentsabasicre seachoutlineofSOD，includingclassification，distribution，structure，property，thecatalysemechanism，preparationandapplication. Keywords:Superoxidedismutase;Physiologicfunction;Property;Application 1938 年Mann和Keilin［1］首次从牛红细胞中分离出一种蓝色的含铜蛋白质（Hemocuprein），1969 年Mccord及Fridovich［2］发现该蛋白有催化O2，发生歧化反应的功能，故将此酶命名为 超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD，EC1.15.1.1）。该酶是体内一种重要的氧自由 基清除剂，能够平衡机体的氧自由基，从而避免当体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的 不良反应，同时SOD是一种很有用途的药用酶。有关SOD的研究受到国内外学者的广泛关注， 涉及到化学、生物、医药、日用化工、食品诸领域，是一个热门研究课题。通过多年努力， 在SOD的基础研究方面取得了巨大成果。目前，SOD临床应用主要集中在抗炎症方面（以类 风湿以及放射治疗后引起的炎症病人为主），此外对某些自身免疫性疾病（如红斑狼疮、皮肌炎）、肺气肿、抗癌和氧中毒等都有一定疗效;在食品工业主要用作食品添加剂和重要的功能 性基料;在其它方面也有相关应用。现就有关SOD的基础研究进展及应用方面作以简述。 1SOD的种类与分布SOD是一类清除自由基的蛋白酶，对需氧生物的生存起着重要的作用，是生物体防御氧毒性的关键。迄今为止，科学家已从细菌、真菌、原生动物、藻类、昆虫、鱼类、植物和哺乳动物等生物体内都分离得到了SOD。基于金属辅基不同，这些SOD至 少可以分为Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD三种类型［3］。表1不同种类型的SOD分布（略）一般来说，Fe-SOD是被认为存在于较原始的生物类群中的一种SOD类型;Mn-SOD 是在Fe-SOD基础上进化而来的一种蛋白类型，由于任何来源的Mn-SOD和Fe-SOD的一级结构 同源性都很高，均不同于Cu/Zn-SOD的序列，可见它们来自同一个祖先;Cu/Zn-SOD分布最广， 是一种真核生物酶，广泛存在于动物的血、肝和菠菜叶、刺梨等生物体中。除以上三 种SOD外，Sa-OukKang等人最近又从链霉菌Streptomycesspp.和S.coelicotor中发现了两 种新的SOD，一种是含镍酶即Ni-SOD，另一种是含铁和锌的酶即Fe/ZnSOD，它们均为四聚体， 表观分子量分别是13KD和22KD，它们之间没有免疫交叉反应［4～6］。[!--empirenews.page--] 2SOD的催化机理超氧化物歧化酶作用的底物是超氧阴 离子自由基（O·-2），它既带一个负电荷，又只有一个未成对的电子。在不同条件下，O·-2 既可作还原剂变成O2，又可作氧化剂变成H2O2，H2O2又在过氧氢酶（Catalase，CAT）的作 用下，生成H2O和O2，由此可见，有毒性的O·-2在H2O2又在过氧氢酶（Catalase，CAT）的作用下，生成H2O和O2，由此可见，有毒性的O·-2在SOD和CAT共同作用下，变成了无 毒的H2O和O2。其作用机理如下:SOD+O·-2SOD-+O2SOD-+O·-2+2H+SOD+H2O22O·-2+2H+SODO2+H2O2H2O2CATH2O+O2 3SOD 的结构和性质 3.1不同SOD的结构超氧化物歧化酶（SOD）从结构上可分为两族:CuZn-SOD为第一族，Mn-SOD和Fe-SOD为第二族。天然存在的SOD，虽然活性中心离子不同，但催化活性部位却具有高度的结构同一性和进化的保守性，即活性中心金属离子都是与 3或4个组氨酸（His）、咪唑基（Mn-SOD含1个天门冬氨酸羧基配位）和1个H2O分子呈畸 变的四方锥或扭曲的四面体配位。CuZn-SOD作为SOD结构上的第一族，是人们对于SOD
超氧化物歧化酶的活性测定
超氧化物歧化酶的活性测定 超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称 SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子(O2-)是人体氧代谢产物，它在体内过量积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。由于SOD能专一消除超氧阴离子(O2-)而起到保护细胞的作用，SOD作为一种药用酶，具有广阔的应用前景，并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。按金属辅基成分的不同可分成3种类型。最常见的一种含有铜锌金属辅基(CuZn-SOD)，主要存在于真核细胞的细胞质中，在高等植物的叶绿体基质、类囊体内以及线粒体膜间隙也有存在，CuZn-S0D酶蛋白的分子量约为3.2×104，纯品呈蓝绿色，每个酶分子由2个亚基通过非共价键的疏水基相互作用缔合成二聚体。每个亚基(肽链)含有铜、锌原子各一个，活性中心的核心是铜。第二种含有锰离子(Mn-SOD)，主要存在于真核细胞的线粒体和原核细胞中，在植物的叶绿体基质和类囊体膜上也有存在，纯品呈粉红色，由4条或2条肽链组成。第三种是Fe-S0D，过去一直认为只存在于原核细胞中，近来发现有一些真核藻类甚至某些高等植物中也有存在。Fe-SOD纯品呈黄色或黄褐色，由2条肽链组成，多数情况下每一个二聚体中含有一个Fe原子。 [原理] SOD的活力测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍，化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和O2 -，利用SOD分解而间接推算酶活力。在化学方法中，最常用的有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等。其中改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。化学发光法和光化学扩增法不适用于测定Mn-SOD，但对于Cu/Zn-SOD反应极灵敏。Cyte还原法用于Mn-SOD活力测定结果稳定，重复性好。但专一性和灵敏度不够理想，而且需要特殊仪器，实际应用受到限制。亚硝酸盐形成法与CN—抑制剂或SDS处理相结合，应用于Mn-SOD测定，灵敏度比Cyte还原法提高数倍，而且专一性强，重复性好，操作方便，不需要特殊仪器和设备，易于实际应用和推广，是目前较好的测定方法之一。 在一般情况下，SOD酶活性测定只能应用间接活性测定法。本实验采用邻苯三酚自氧化方法。 邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2 -，生成带色的中间产物，反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。这里测定的是邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长出有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2 -与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过计算即可求出SOD的酶活性。 酶活力单位定义：在25℃恒温条件下，每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯酚自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位。 [试剂和器材]
超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC0170规格：50T/24S 产品内容： 提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体160μL×1支，4℃保存；使用前先离心再吹打混匀。试剂三：液体11mL×1瓶，4℃保存。试剂四：粉剂×1支，4℃保存。 试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存；临用前将试剂四加入试剂五中，并震荡溶解。试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水产品说明： SOD（EC 1.15.1.1）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H 2O 2和O 2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H 2O 2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O 2-)，O 2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm 处有吸收；SOD 可清除O 2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD 活性愈低，反之活性越高。操作步骤： 一、样品的前处理：1. 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞
（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提 取液），进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3.血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。 2.测定前将试剂一、三和五37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min以上。 3.样本测定（在EP管中加入下列试剂） 试剂名称（μL）测定管对照管空白管1空白管2样品9090-- 试剂一240240240240 试剂二6-6- 试剂三180180180180 蒸馏水480486570576 试剂五30303030充分混匀，37℃水浴30min后，置于1mL玻璃比色皿测定560nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A空1、A空2，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA空白=A空1-A空2。 注意： 1、样本和试剂二使用时在冰上放置 2、样本较多时，可按表格配置工作液（包含试剂一、二、三），试剂五必须最后加入。 3、空白管1和空白管2各只需做1~2管；每个样本有一个对照管。 4、反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。 三、SOD活性计算： 1、抑制百分率的计算 抑制百分率＝(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白×100%
超氧化物歧化酶生产方法
紫草种籽超氧化物歧化酶提取方法：属于生物工程领域，涉及一种紫草种籽ＳＯＤ及其用提取紫草种籽油后的残渣为原料，用生物工程装置提取紫草种籽ＳＯＤ的方法，迄今为止紫草种籽是植物中ＳＯＤ含量最高、质量最好、最有提取价值的唯一原料，含量为２０万Ｕ／公斤种籽，是用任何动物血提取的ＳＯＤ所不能比拟的，创下了国内外唯一的用植物提取ＳＯＤ的记录，不仅填补了国内外空白，在科学研究上也是一个重大突破，它将在人类的延年益寿、防衰抗皱、抗紫外线辐射、清除人体内氧自由基保证身体健康上做出巨大的贡献。 超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法：该方法是在提取的固体粉末状超氧化物歧化酶中加入２—８％固体状保护剂，该方法是将它们按上述比例混匀后再进行冻干处理。该技术保证了添加超氧化物歧化酶的产品，如化妆品、口服液、啤酒、牛奶等等中的超氧化物歧化酶酶活力的稳定性，并扩充了产品开发和应用范围，相对保证了含超氧化物歧化酶的产品在高温工艺中及常温储存下不易变质。 从鸡雏胴体中提取超氧化物歧化酶的方法：取雏鸡胴体将其绞碎、浸泡、过滤、离心，将上清液在一定时间和温度控制下，加入丙酮提取超氧化物歧化酶，本发明用鸡场孵化鸡雏淘汰的蛋用公雏鸡胴体为原料，变废为宝产生高附加值，雏鸡与人无共患病，避免造成如牛、羊、猪血来源的污染，其工艺简单、产率高、活性好、利润高，并可提取一系列副产物，如表皮生长因子、精细蛋白、氨基酸等，为大批量生产超氧化物歧化酶开辟了广阔的前景。 重组人源锰超氧化物歧化酶的制备工艺：属于生物工程技术领域，其特点是先进行工程菌扩增，收集菌体，然后将菌体裂解，加热处理后离心取可溶部分，经离子交换柱层析纯化。本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ半衰期长、质量稳定、单位成本低等特点，产品不仅可用于化妆品、保健品等民用领域，更适用于医疗领域。 重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺：其特点是先进行工程菌发酵，发酵后收集菌体，然后将菌体裂解，分离包含体，采用巯基乙醇尿素变性剂进行抽提，经加热处理后用硫酸铜复性，并经ＤＥ－５２离子交换层析纯化。本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ产量高、单位成本低等特点，产品适用于医疗领域。 从植物材料中提取超氧物歧化酶的方法：包括：ａ．称取植物材料，加入Ｋ#-[２]ＨＰＯ#-[４]溶液，捣碎匀浆，并压榨过滤；ｂ．滤液中加入乙醇∶氯仿混合溶液，搅拌均匀，离心２０分钟；ｃ．取上清液加入Ｋ#-[２]ＨＰＯ#-[４]，搅匀，再加入丙酮，离心２０分钟；ｄ．取上清液，加入丙酮，离心２０分钟；ｅ．弃上清液，沉淀溶于磷酸缓冲液（ｐＨ７．５）中，并透析；ｆ．透析液进行胶过滤，收集活性部分。该方法流程简单明了，生产出的产品具有高比活、高纯度、高稳定性。 用植物提取超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的方法：其技术方案是将植物的根、茎、叶、种子、果实任选其一，经消毒后，净水浸泡，粉碎成浆体，再用０．５—１０倍的保护液提取，然后过滤、除渣，得ＳＯＤ粗品，将ＳＯＤ粗品进行精制得营养原液，将粗品与酒液调配得保健液。本发明的优点是：从植物的根茎叶及种子、果实中提取ＳＯＤ，原料广泛，工艺简单，生产成本低，产品质量安全可靠，适合大批量生产，扩大了使用范围。 从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法：属于生物化学领域中酶的制取方法，涉及从玉米中制取超氧化物歧化酶的方法。其特征是工艺方法为：浸泡玉米；粉碎；上清液超滤浓缩；浓
超氧化物歧化酶在生活中的应用
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/209580397.html, 超氧化物歧化酶在生活中的应用 作者：王兆才 来源：《文理导航》2017年第23期 【摘要】本文综述了国内外对于超氧化物歧化酶的应用，并就应用中出现的问题给出了自己的想法。文章还提出并分析了超氧化物歧化酶在生活中的应用价值，对食品、医疗、化妆品等方面进行了系统化的论述，望有助于日后对于超氧化物歧化酶在生活中的应用研究。 【关键词】超氧化物歧化酶；氧自由基；应用 1.超氧化物歧化酶分布、分类及生理功能 SOD是Super Oxide Dismutase缩写，中文名称超氧化物歧化酶，迄今为止的研究表明， 超氧化物歧化酶广泛存在于多种生物体内，目前已经从细菌、原生动物、霉菌、植物、昆虫、鸟类、鱼类和哺乳动物等生物体内分离并得到了超氧化物歧化酶.根据它活性中心结合的微量元素离子不同，超氧化物歧化酶主要分为3种类型，Fe-SOD，Mn-SOD，Cu/Zn-SOD三种。超氧化物歧化酶具有特殊的生理活性，它是生物体内清除自由基的首要物质。 2.目前对于超氧化物歧化酶的应用 机体在正常情况下产生的超氧阴离子自由基是维持生命活动所必须的，但是其含量过高就会对机体产生影响。不但机体会产生氧自由基，外界环境的多种物理或化学的刺激都能产生氧自由基。如电离辐射，紫外线等。而超氧化物歧化酶却能够清除并维持氧自由基的这种平衡，防止生物体机体的损伤，因而使他具有多方面的应用前景。以下是目前超氧化物歧化酶在应用方面的研究进展。 2.1超氧化物歧化酶在医药临床方面的应用 超氧化物歧化酶（SOD）是一种新型的抗炎症类药物，尤其是针对关节炎和类风湿关节炎有很明显的疗效，根据超氧化物歧化酶的作用机制和毒性的试验，证实了它对治疗因O2-引起的各种疾病都有一定的疗效。为此，超氧化物歧化酶可作为抗衰老、抗炎症、治疗自身免疫疾病患者广泛应用的医药品。此外，超氧化物歧化酶对治疗贝切特氏症、心肌梗塞等血虚性心脏病、胶原病、新生儿呼吸困难综合症、防御放射性伤害等病症也可望有效，目前人们正在积极开发研究中。 2.1.1治疗心肌缺血与缺血再灌注综合症
实验十保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定(精)
实验十保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定 一、实验原理 根据GB/T5009.171-2003，将25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据SOD 抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力。 二、实验试剂 A液：pH 8.20的0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（内含1mmol/L EDTA·2Na）。称取 1.2114g三羟甲基氨基甲烷和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/l盐酸溶液中，用蒸馏水定溶至100ml。 B液：4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚56.7mg溶于少量10mmol/L盐酸溶液，并定容至100ml。 盐酸溶液：10mmol/L 蒸馏水：二重石英蒸馏水 三、实验仪器 紫外-可见分光光度计精密酸度计（0.01pH）离心机10ml比色管10ml 离心管玻璃乳钵。 四、测定步骤 ⑴取茶叶样品1.00g置于研钵中，加入9.0ml蒸馏水研磨5分钟，移入10ml 离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000r/min离心15分钟，取上清液测定。 ⑵在25℃左右，于10ml比色管中依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.00ml，B 液0.15ml。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1Min后吸光度值，二者之差为邻苯三酚自氧化速率△A325（min-1）为 0.060。 ⑶在25℃左右，于10ml比色管中依次加入20.0ul样液或酶液，A液2.35ml，蒸馏水2.00ml，B液0.15ml。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm 波长条件下初始时和1分钟后吸光度值，二者之差为样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率△A′325（min-1）。加入样液或酶液的量使抑制邻苯三酚自氧化速率为1/2△A′325（min-1），即0.030。 五、计算