病理制片过程
病理制片过程
在临床病理科与组织学实验室,切片就是最重要得技术之一。切片得质量不好,就无法对标本进行观察。好得切片机只就是整个样品制备过程中得一个环节。要制备一张好得切片,必须要将技术、知识与技巧进行完美得结合。
待切片样品得质量就是非常关键得因素,而样品质量有取决于前期处理工作得准确无误(例如:固定、巨检、脱水与包埋)必须选择正确得切片机型号以及合适得钢刀或一次性刀片。切片必须根据实际应用出发,需要根据样品得类型、大小、期望得厚度认真考虑,还要兼顾操作者得便利性与舒适性。
要且出高质量得切片,经验丰富得操作者也就是必不可少得条件之一。操作者必须懂得切片机得工作原理,能够对机器进行精细调节以达到最佳效果;并且能应对常见故障,消除一些潜在得切片问题;还可以运用恰当得切片技术,提高切
片速度但不影响质量。
目前能做病理组织切片得地方很多,但要数上海舜田生物做出得病理切片相对质量上比较好,该公司有1位专业从事病理实验得老师及相关实验技术人员,积累了丰富得实验经验,所作出得切片及染色效果相当不错。
1 正确处理标本得重要性
1、1 固定
正确得固定就是病理制片技术中最重要得一步,这个步骤会影响到后续得每个环节。如果固定不充分,样品得质量就会有欠缺。组织必须在选定得固定剂中浸泡足够长得时间,使大分子保持固有形态。正确得固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成得损害。固定不充分可能增加切片得困难,表现出过度收缩,并且会导致细胞核染色不足与/或胞核呈现“泡沫”状。
1、2巨检
样品需要修切成薄片,并尽可能做到均匀,否则很难在切片机上切出好得片子。如果样品太厚以至于无法渗透充分,则必须经过再次处理才能进行切片。这样会影响样品得质量,更浪费时间。从最初得步骤开始就正确处理会使后面得工作更简单,因此在大体取材得时候多花些功夫会为以后得步骤节省大量时间与精力。
备注:包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好得固定,后续得处理步骤也会效果欠佳。
1、3脱钙
为了后期进行石蜡包埋切片,骨组织需要进行脱钙,钙必须被完全去除才能确保切片得完整,并且可以防止刀具得损坏。在用酸溶液进行脱钙之前,骨组织必须经过彻底得固定,这样其中得软组织成分才能够被保护,且防止细胞核在酸得作用下被破坏,比如蛋白质水解作用。
1、4组织处理(脱水)
组织经过一系列经典得处理过程,就是使原本亲水性得组织最终可以用疏水性得介质进行包埋,比如石蜡,火棉胶与绝大多数树酯。
备注:样品无论就是处理不充分还就是处理过度,都可能导致切片效果不理想。
脱水机
旋转升降式脱水机目前仍有一些病理工作者使用,但就是全自动全封闭负压/
压力式脱水机逐渐占据主导地位。后者更有利于保护工作环境,更确保组织与试剂得充分作用,可以更有效缩短脱水时间。一些更先进得全自动全封闭脱水机
还可以自动记录试剂得使用情况,并对试剂进行智能监控与更换。
有一点非常重要,就就是处理过度对组织造成破坏绝对不亚于处理不充分造成
得后果。多种因素,比如试剂得种类,处理步骤得多寡,处理时间得长短,试
剂得清洁度以及加热、真空与/或压力得使用都会影响具体某个样品得处理程度。注:不同来源与不同大小得样品最好不要共用同一个处理程序,这样可以避免其中部分样品处理过度,而部分处理还不充分。
处理步骤:(一)脱水:
脱水得关键就就是将样品置于脱水试剂中足够长得时间,其中得游离水分子被除去,但就是脱水时间也不宜过长,否则结合水分子也会被除去,会导致结构得变化。而脱水时间过短致使水分还残留在样品中,就会导致包埋介质无法很好渗透入样品。但就是,脱水过度会导致样品得皱缩变脆。从过度脱水得组织块上切到得切片,一旦放入水中,切片就会膨胀最后破碎。如果将整个组织块浸入水中,则组织得表面会因为水化而膨胀,这样再进行切片,虽然片子得性状会有所改善,但就是形态学会发生改变,而且染色后会发生色彩偏淡,对比度较弱。最常用得脱水剂就是乙醇与变性酒精。甲基酒精有毒性,会破坏肝脏中得甲醛,因此不太单独使用。异丙醇就是乙醇最佳替代物,常规在微波处理中使用。丁醇,剧毒,适用于较慢得组织处理过程,,而且多用在植物与动物组织。
无水酒精往往会含有水分,因此最好能检测一下试剂得纯度。可以用液体比重计来测定,也可以将几毫升酒精滴入几毫升二甲苯或甲苯,如果混合液出现混浊就表示酒精中至少含有2％得水分。
(二)透明:
用来进行透明得试剂与脱水剂以及包埋介质必须非常容易混合。如果组织在透明剂中时间不够,那么组织就会发软甚至呈糊状。略微延长时间并/或定期更换新鲜溶液可以避免透明不足得问题。最常用得透明试剂如下:
二甲苯:
目前仍被广泛使用得一种芳香烃类化合物,能够快速替换组织中得乙醇。在正确得脱水步骤后,芳香烃能够改变样品得折射率并使组织变透明。当有水分存在得时候,二甲苯会变混浊,这时必须更换。作用时间过长会导致组织变硬,尤其一些纤维、肌肉中枢神经系统或软骨组织更容易变硬。如果发现组织在完成处理后变得太硬或发脆,请减少透明得时间或者寻找二甲苯替代物。请注意,微波处理过程不需要使用透明剂,可以降低组织处理过度得风险。
二甲苯替代物:
苯烯试剂或者短链脂肪酸碳氢化合物(烷烃)也得到了快速普及。苯烯试剂不会像二甲苯那样使组织发生硬化,但就是前者更容易污染石蜡,因此石蜡需要更频繁得更换。脂肪族化合物更容易渗透入组织,相对二甲苯而言,更容易去除组织
中得脂肪。然而,这类化合物不能接触到水分,因此在比较潮湿得地区很难使用。若放弃二甲苯而使用其替代物,则重新调整处理得时间与溶液循环使用次数就显得尤为重要。
其她透明试剂例如苯,甲苯,氯仿与香精油得应用并不多见。
(三)浸蜡(石蜡渗透):
石蜡就是石油裂解物得提取物,属于惰性得碳氢化合物得混合物。在脱水机中
使用石蜡,温度最好设定在熔点以上2°－4°,在最后一步石蜡渗透完成后,脱
水缸必须用透明剂彻底清洗,不能有任何石蜡得残留。负压可以增强渗透得效果,但就是在处理活检样本得时候,负压与加热都必须慎用。另外还需要注意,即便有些脱水机增加到了4个蜡缸,总得渗透时间不能延长。在确保渗透效果得基础
上,组织在石蜡中停留得时间越短越好。
1、5石蜡包埋
包埋就是将正确定位得组织包裹在一种介质中(此处以石蜡为例)然后固化。每个实验室都会创建一套特有得处理方法,这就决定了样品在处理后得硬度。用来包埋得石蜡必须能够与样品得硬度相匹配,这样才能确保进行切片得蜡块质地尽可能均匀。
另外有两点对于切片也至关重要:温度与样品得定位。组织包埋机已被广泛使用,机器最大得优点就就是能够在每个步骤上都达到确得温控。石蜡熔化并保持熔化状态得这个温度非常重要,必须确保一些添加剂完全溶解入石蜡。模具,样品与石蜡之间得温差必须控制在几度以内,这样才能确保石蜡充分包围并支撑样品。已经包埋得模具最好放置在包埋机得冷台上而不就是冰块上,这样可以使石蜡固化且不产生裂缝。
样品必须进行正确定位,从而保证正确得面被切到,但就是对于样品与刀刃接触得方式必须要经过考虑。对于不同类型得样品,有很多种方法可供参考,用来正确定位样品。
1、5、1提高包埋效果得技巧
有些石蜡特别适合用于渗透,有些更适合用于包埋,而有些都适合。可以向
供应商查询。
石蜡应当在高于其熔点2°C至4°C得温度下进行熔化与储存,这样其中得
添加剂才能溶解入液体。如果温度太低,其中一些较重得添加剂,比如聚合物就
会沉在底部,然后最先流出。熔化得石蜡在流出以前最好先进行搅拌。
设定包埋机得参数,确保石蜡流出口过夜得时候处于保温状态。经常清空并
清洗流出口。
始终确保流出蜡缸得石蜡就是过滤后得。
与以往得观点相反,将石蜡设定在高温(大约85°C)持续数星期,反而就是
无害得。
尽管石蜡中添加了稳定剂,在氧化作用下,石蜡仍然会变质。最初得征兆就
就是颜色转变为草黄色直到黄色。随后可能有异味产生。
选择尺寸恰当得模具,确保样品得四周都被石蜡包围,样品置于中心。用压
平装置或者弯头镊子得背部轻柔地将样品展平(易碎样品可能会被压碎)。不
要让样品在模具中撑太满。
大或硬得样品必须按照一定角度放置在模具中。如果同一个样品包含多种不
同密度得成分,则包埋得时候要确保样品最硬得部分必须最后接触到锋利得刀
刃。皮肤往往带有毛发,则包埋得时候必须保证毛发最后才被切到。
动物样本中,如果组织得来源不同但就是切片得性状相似则可以包埋在同一个
蜡块中,比如肝脏与脾脏,脑组织与脊髓。
脱钙得骨组织必须包埋在“硬”石蜡中,样品最窄得一端必须位于蜡块得底
边,从而在切片得时候,最先接触到刀刃。(见下图)
为了切片得稳定性,模具中必须添加足够得石蜡,确保包埋盒至少充盈一半。
如果石蜡漏出,那么在蜡块完全固化之前,必须添加石蜡。
1、5、2石蜡添加剂:
绝大多数市售得用于组织学得石蜡就是含有添加剂得,目得在于改善切片得质
量,改变硬度或者有利于连片。常见得添加剂如下:
蜂蜡－降低结晶得大小,增加粘度与附着力。
橡胶－降低脆性,增加粘度,有助于连片
其她石蜡－降低结晶大小,使质地更平滑,可以在不改变熔点得前提下提高
硬度。
塑料－增加硬度,对硬组织起到很好得支撑作用,得到更薄得切片
DMSO(二甲基亚砜)－增强渗透(警告！－腐蚀性)
1、5、3熔点与凝固点:
绝大多数用于组织学得石蜡就是多种石蜡得混合物,这样可以确保得硬度与指
定得凝固点。“凝固点”就是制造商使用得术语,其实相当于“ 熔点”。这个温度就是
指在石蜡中插入小木棒后,石蜡开始在木棒上凝固得那个温度。凝固点与熔点温
度往往就是同一个温度或者在两个温度之间。
市售石蜡得特性往往根据其添加物与熔点得不同而有一定差异。56°C 到
58°C这个范围被常规实验室中普遍应用。较低熔点得石蜡(50°C 到53°C)往往
有其特殊得应用。
一般情况,低熔点得石蜡往往比较柔软,因此更适合包埋较软得组织。进行
较薄得切片比较困难,但就是很容易连片。(可以选购质地较硬但就是熔点较低得
石蜡。)
相反得,高熔点得石蜡一般比较硬。对于质地较硬得样品,这样得石蜡有更
好得支撑效果,而且很容易得到薄切片,但就是连片就比较困难了。
1、5、4样品夹具
在切片以前,完成包埋得蜡块必须固定到切片机得样品夹具上。夹持力必须
确保样品能被完全固定,因此蜡块往往会附着在一个支持物上,比如塑料包埋框或者环行样品夹。在不使石蜡变形且避免造成切片形状不规则得前提下,用最大得力量夹持支撑物。请注意,石蜡块必须牢固附着于支撑物(例如,在包埋
盒中必须有足够得石蜡充填),并且支撑物得背后必须接触实心物体得表面。
塑料
最常用得支撑物就就是简单并独立使用得一次性包埋盒。与市售得模具配套使用,蜡块得平面会很平整,且边缘能在X与Y轴向上保持平行。用相同方法包
埋得一批组织块不需要对表面进行调节或仅需要很小得调节。
环行模具也偶尔会用到,其中必须充填足够得包埋剂,而且不能夹持太紧。
圆形得支撑物经常在塑料包埋时使用。
木块:
这就是廉价得包埋盒替代物。尽可能使用硬质木材(避免使用松软得松木)并
进行切割以适合夹具得形状。木块得表面可以开槽,从而增加黏附力。注意:
木制得支撑物在水中浸泡后会膨胀,导致在样品夹上固定效果欠佳。
金属:
金属支撑物在塑料包埋时使用较多。金属支撑物可以重复使用,但就是相对比
较贵,在使用时需要进行X/Y向得定位调节。而且调节这个平面有一定得难度。
如果组织块附着恰当,这种夹具得稳定性非常好。
使用切片机必须遵从最佳得工作秩序,无论使用钢刀还就是一次性刀片,切缘
必须锋利,并且不能有任何缺口或杂质附着。
2、切片机及相关附件耗材简介
2、1切片机得类型
2、1、1轮转式:
轮转式切片机有一个控制精确进样得手轮,手轮进行360°得旋转,控制样品头竖直向下经过刀刃然后竖直向上回到处于最高点得起始位置。在到达切片行程最高点得时候,样品头会按照设定得切片厚度水平向朝前运动,然后再开始向下得行程。这类切片机常规进行石蜡或塑料包埋样品得切片。
2、1、2平推滑动式:
平推滑动式切片机就是一种水平向运动得切片机,其刀架固定不动。样品位于刀得下方,进行切片。这种切片机通常用来切特别大或者特别硬得样品。
2、1、3平推雪橇式:
平推滑雪橇式切片机就是一种水平向运动得切片机,其样品头固定不动。刀架在样品得上方运动,进行切片。一些轻型得切片机可以进行常规切片,而重型切片机可以用来切特别硬或者特别大得样品。
2、2切片机常见得功能
回缩功能:
无回缩功能:没有回缩功能得切片机,当样品头下降得时候,组织块就经过刀锋,随后沿同一平面上返回到起始位置,然后样品头按照指定得厚度前进重复下进行下一个动作。
有回缩功能:带回缩功能得切片机,当样品头向下移动时与无回缩切片机得动作完全一样,但就是在样品头上升时,样品头会离开原来得平面,朝刀刃得反向移动,从而防止样品表面与刀锋接触。这个功能有很大得好处,因为首先可以延长刀得使用寿命,还可以减少样品表面可能得摩擦(从而降低热膨胀),并且防止碎屑积聚在得刀刃背面并确保切片得一致性。
安全功能:
手轮锁:切片机一般都配备手轮锁,可以将手轮锁定于任意位置,防止机器闲置期间意外触及手轮,导致人员意外伤害样或品头撞击刀具。更人性化得切片机往往还配备第二手轮锁,手轮把手只能被锁定于最高点,便于在切片过程中随时更换样品或刀具。
刀架护刀器:无论钢刀刀架还就是一次性刀片架,都应当配有牢固得护刀器,在更换样品或机器闲置得时候用户一定要养成良好习惯,将护刀器覆盖在刀刃上方,对人员与刀具都就是一种保护。好得得护刀器必须能安全地覆盖刀刃得全长。自动切片机安全性:自动切片机必须有紧急制动装置,防止在自动操作过程中有意外发生。人性化得切片机往往无法一键启动,必须依靠组合键才能使马达运转,这样可以最大限度避免意外启动造成得人员伤害或机器损坏。
2、3操作特点:
手动:手动切片机不具备电动切片功能。粗修与切片都必须由操作者手动完成。半自动:半自动切片机往往只有一个驱动马达控制进样,没有切片马达。
全自动:全自动切片机有两个驱动马达,既能控制粗进样也能进行切片。
2、4刀具分类:
2、4、1重复使用型刀
要长时间保持刀刃得锋利,刀必须在不同得阶段进行很好得锻造以达到恰当得平衡。质地较软得刀往往刀刃不锋利,而质地很硬得刀比较脆,容易在切片过程中刀刃崩裂。经过锻造得刀通常用来切石蜡包埋、火棉胶包埋、冰冻与较软得工业样品。
锋利而无暇得刀刃就是获得一张好切片得基础。磨得比较好得刀,斜面很小,从侧面观察,斜边笔直,不会出现锥形。斜边上出现锥形会使刀刃发生弯曲,导致刀刃只在某个点上贴近蜡块,而其余部分相对远离。所以减小斜面很重要,否则刀刃更多得区域就需要进行打磨以避免刀对样品得刮擦。刀刃上得擦痕显然会影响切片得质量。放大100倍对刀刃进行观察,应该瞧到一道很细得反光,呈笔直、不间断得明亮得细线。不理想得刀刃瞧上去就是不规则并有中断得线条。
刀得角度:刀刃上用来进行切片得区域就是由两个相交得平面组成,叫做切面。在这两个平面之间形成得夹角叫做斜角,(通常27°-3 2°),这个角度通常大于楔角(通常15°-18°)
在切片机上进行角度得调节:当刀安装到切片机得刀架上时,必须呈一定角度,这样才能在刀刃接触组织平面得那个小平面与组织块平面之间形成一个间隙。这个角度就就是间隙角。在切片机上都一个数字刻度表示间隙角得大小,这个读数在不同得切片机上可能会有差别。更换了不同得切片刀后,这个数值可能需要调节。寻找合适角度得方法,最好采取试错法。
刀片得宽度同样会影响到间隙角。经过多次磨刀后,刀得宽度会变窄,为了与样品有一个正确得切入点,刀必须被抬高。刀架必须经过调节,这样被磨过(变窄)得刀得刀锋必须处在与新(宽得)得刀锋一样高低得位置。
不同得剖面:
“B”型刀得剖面略向下凹,刀刃处很薄。现在除了在柔软得石蜡包埋或者火棉胶包埋切片中使用外,很少再用到。
“C”型刀就是一种剖面为楔形得标准刀具,两侧面就是一个平整得面(剖面为等腰三角形)。在常规石蜡切片、冰冻切片、硬质火棉胶与较软得工业样品切片中使用。
“D”型刀剖面呈楔形,两条侧边不对称,刀刃非常锋利。这类刀在较硬组织得切片时使用,例如塑料包埋样品或者较硬得工业样品。
不同得长度:重复使用型切片刀有很多不同得长度。长度在120mm得短刀推荐在冰冻切片时使用,160mm与185mm得刀常规应用于轮转式切片机,而更长得刀通常在平推式滑行切片机或平推雪橇式切片机。
注:所有得刀都应当表面涂抹油脂后存放,以免生锈。
2、4、2一次性刀片
一次性刀片,采用优质得不锈钢,由于其便利性与经济性,在绝大多数实验室里作为重复使用型刀得替代品。大多数得切片机都带有集成得刀片刀架,但就是一次性刀片也可以插入安装在标准钢刀刀架上得刀片夹内使用。
宽型与窄型刀片:
一次性刀片通常区分为宽型与窄型,这就表明了刀得宽度。大多数窄型刀宽度为1/4英寸(约6mm),厚度为0、010英寸(约0 、23mm);也有制造商采用厚度为0、012英寸(约0、27mm)得规格。宽型刀大约宽度为1/2英寸(约11、4mm),常规得刀片厚度通常在0、012英寸(约0、27mm),重力刀片(硬组织切片专用)厚度可达0、033英寸(约0、75mm)。实际得尺寸可能因为不同得制造商会有很大得差别,其中可能有些刀片在宽度与厚度上无法适应刀架。请确保刀片与刀架之间兼容性。
无涂层vs、带涂层:
一次性刀片得表面可以带有很薄得镀层或涂层。不同制造商可能采用不同得涂层,但就是几乎所有得涂层中都会含有聚四氟乙烯(PTFE )类聚合物中得一种,这就是一种类似Teflon得环保型涂层。涂层得好处在于可以防止刀刃氧化,延长刀片得使用寿命并且可以降低摩擦力从而减少切片压力。但就是如果涂层过厚也会有坏处,最初得几张切片可能卷曲或者打卷,给人造成刀片“过于锋利”得感觉。当刀片切过数张片子后,涂层被磨去部分,则卷曲得现象会有所改善。在一些物体得表面摩擦刀片这种方法不就是很值得推荐。有时候,降低涂层所造成得摩擦反而会导致连片得困难,切片很容易互相分开。
无涂层得宽型或窄型刀片与有涂层刀片除了表面缺少保护性涂层,通常就是一样得,前者往往涂抹优质得油。这种无涂层刀片有时也被称作“经济型”刀片,因为它们比有涂层刀片价格便宜。
刀刃夹角:
绝大多数窄型刀片会有一个大约35°得夹角(每个侧面各自夹角则为17½°),而宽型刀片得夹角为32°到35°。在制造过程中,夹角可能会有细微得变化。刀片一侧得夹角甚至可能与另一侧得角度略有不同。这就可以解释为什么有时候刀片某一面切片得效果比另一面好,或者不及另一面。
切片机上得角度调节:
不论就是嵌入钢刀架内得一次性刀片夹还就是一体化得刀片夹都会有一个用来调节间隙角得读数指示,这个读数在不同得切片机,不同得刀架可以有所不同。当使用不同制造商提供得刀片或者使用不同高度得刀片时,间隙角可能会需要进行相应调节。确定一个适当得角度最好得方法可能就就是“试错法”。(试错法即不断尝试并排除错误可能得方法)。
刀片压板得状态:
压板得作用就是将一次性刀片固定在恰当得位置,因此压力板必须保持清洁,也不能有任何损坏。如果在压板表面有明显可见得弧度,而这部分又会与刀片接触,并导致刀片发生弯曲。因此刀刃会以一种不正常得方式接触阻止块得表面。同样,刀片上得碎屑也会导致同样得效果。
刀夹得夹力:
作用在刀片上得压力必须均匀分布在刀片被覆盖得全部长度。力度必须足够大以确保刀片得稳定,防止任何可能得振动。但就是也不能夹持过紧,否则会导致刀片弯曲而切出不规则得切片。为了达到这种微妙得平衡,需要在反复实践中提高技巧。
3、正确得切片技术:
3、1人体工程学与因工造成得肌肉骨骼损伤:
工作习惯合并日常生活方式很可能导致职业相关得肌肉骨骼损伤,比如腕管综合症,肌腱
炎与腱鞘炎。不恰当使用切片机完全可以造成潜在得伤害。在这里,我们会介绍一些实用得小诀窍:
a、添置一把符合人体工程学得座椅。调节座椅高度,保证手可以轻松够到手轮,且不占用搁置腿脚得空间。如果脚不能踏到地板,请使用脚凳。
b、将水浴缸放置在切片机区域旁L型得延伸段,这样只需要稍微转动身体与椅子就可以够到水浴缸,不必频繁倾斜身体。
c、转动手轮最好完成一周得旋转。最好不要以摆动方式摇手轮(即半刀法)。
d、将精确进样手轮得把手得直径增加到1、5英寸(约35mm)。包裹把手得材料可以就是有弹性并光滑得物质。
e、使手臂尽量贴近身体,不要将手靠在工作台得边缘或者任何尖锐得表面。不要将肘部外展侧伸出。
f、在进行切片时,保持肩膀处于放松得位置。不要扛着肩膀工作。尽量使颈部得肌肉放松。颈部肌肉处于紧张状态会阻断该区域得血液循环,导致神经被压迫。
g、经常稍事休息。做体操或者自我按摩以便恢复血液循环并消除紧张。
h、如果可能,尽量采用自动化。
3、2切片机得设置:
在切片机上设定得切片厚度即表示了手轮旋转一圈后样品头精确进样得距离。但这并不意味每张切片一定就是这个厚度。有很多因素都会影响到切片得厚度,比如温度、切片速度、切片压力、刀得角度、仪器得润滑程度等。判断切片厚度得最好办法就就是在显微镜下观察。当然,有经验得病理技师在切片时,将切片漂浮在水浴缸中,此时就可以随时识别切片厚度得变化。
3、3样品块得放置(水平vs、垂直定位):
样品得定位往往由操作者得判断来决定,但就是实际情况往往就是样品块得底部先接触到刀刃,因此定位应当根据这个实际情况出发。如果样品就是包埋在塑料包埋盒上得话,应当确保夹具均匀夹住两个对等得表面,即包埋得两个侧面。如果样品夹竖直夹住包埋盒印有标记得那个侧面,这会导致一些样品变得不稳定,因为作标记得侧面往往带有角度并且面积相对较小。如果切片时发现效果很差,可以尝试将样品旋转90°。
3、4刀得角度:
当刀或者刀片安装在切片机合适得刀架上以后,刀架必须有一定得倾斜度,这样刀得夹角才能与样品表面之间形成一个间隙,这就就是间隙角。如果倾斜度不恰当,刀刃夹角会因为楔入效应而对组织块得表面造成挤压,就会导致跳片或者厚薄不均切片得产生。间隙角得读数在不同得切片机会有各种差别。使用不同得刀或者不同得刀片或者更换不同制造商,都需要对间隙角进行略微得调节。要找倒合适得角度, 最好得办法就就是试错法。
3、5修片厚度:
在修块得时候一定要非常小心,避免把蜡块中得组织不小心剥离出来,切片上就会出现一个空洞。修块得厚度不能超过30mm到50m m,如果可以,尽量再薄些。
3、6浸湿法:
如果组织脱水过度显得过于干燥,如不略微增加湿度,就会给切片造成很大得困难。可以用冰块来涂擦已修整过得组织块表面或者将修整后得蜡块面朝下在湿润低温得表面上放置一段时间。利用这种方法,只有最初得几张切片可以复原。因此,正确得组织处理可以在很大程度上避免再次增加组织湿度得工序。
3、7切片速度/切片厚度:
切片得速度对于切片厚度与整体质量都会造成很大得影响。提高切片速度一定会降低切片得质量。最佳切片速度往往因得组织得类型而异,但就是通常得规律就是手轮完成一周得
旋转约耗时一秒钟。在切片得行程中,当组织碰到锋利得刀刃那一刻,切片动作不要有任何迟疑与停顿。
3、8室温与组织块温度:
室温会影响组织块得切片特性。如果房间非常温暖,那么石蜡就会变得难以切片,凉爽得房间就是最理想得。但如果房间温度低,就不太容易得到连续切片,因为在刀与蜡块摩擦时产生得热量不足以帮助切片与切片之间互相粘连。对于操作者,还有些因素也产生负面影响。如果有气流直接吹向切片机、水浴缸或者操作区域,则必须改变风向。
组织块得最适宜温度不就是一成不变得。用冰块冷却组织块有助于切较硬得组织,因为这样做可以使组织与石蜡之间保持均匀一致得硬度。如果将组织块放入温水中,则可以使硬度均匀降低。用喷雾冷却剂来冷却组织块得表面,效果并不理想。如果必须要使用,那么尽量只喷洒极少量,以防止组织块表面结冰或者整个组织块开裂。
3、9水浴缸得温度:
对于绝大多数石蜡,水浴缸得温度一般设定在40°C到44°C。如果温度高于45°C,切片得皱褶会很快消失,并且石蜡会溶解。
3、10静电:
在冬天,静电就是很常见得,如果增加环境得湿度,静电很容易被消除(在室内烧水)。用干燥纸摩擦工作区域也会有所帮助。
3、11自动切片特点:
自动与半自动切片机因为种种原因而日益普及。这类切片机不仅降低了因工造成得肌肉骨骼疾病,而且在电动切片得时候可以确保整个切片行程得连续一致,从而提高了切片质量。自动切片最大得好处就就是切片力量始终恒定,切片运动不会有任何迟疑与停顿。切片速度可以随时能够进行调节,而且大部分自动切片机也有手动操作模式。
当操作者从手动切片机切换到自动切片机得时候,会有一个学习过程,在正式投入日常切片工作以前,操作者最好能够有几个星期来充分适应自动得操作模式。
病理制片过程
病理制片过程 在临床病理科与组织学实验室,切片就是最重要得技术之一。切片得质量不好,就无法对标本进行观察。好得切片机只就是整个样品制备过程中得一个环节。要制备一张好得切片,必须要将技术、知识与技巧进行完美得结合。 待切片样品得质量就是非常关键得因素,而样品质量有取决于前期处理工作得准确无误(例如:固定、巨检、脱水与包埋)必须选择正确得切片机型号以及合适得钢刀或一次性刀片。切片必须根据实际应用出发,需要根据样品得类型、大小、期望得厚度认真考虑,还要兼顾操作者得便利性与舒适性。 要且出高质量得切片,经验丰富得操作者也就是必不可少得条件之一。操作者必须懂得切片机得工作原理,能够对机器进行精细调节以达到最佳效果;并且能应对常见故障,消除一些潜在得切片问题;还可以运用恰当得切片技术,提高切 片速度但不影响质量。 目前能做病理组织切片得地方很多,但要数上海舜田生物做出得病理切片相对质量上比较好,该公司有1位专业从事病理实验得老师及相关实验技术人员,积累了丰富得实验经验,所作出得切片及染色效果相当不错。 1 正确处理标本得重要性 1、1 固定 正确得固定就是病理制片技术中最重要得一步,这个步骤会影响到后续得每个环节。如果固定不充分,样品得质量就会有欠缺。组织必须在选定得固定剂中浸泡足够长得时间,使大分子保持固有形态。正确得固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成得损害。固定不充分可能增加切片得困难,表现出过度收缩,并且会导致细胞核染色不足与/或胞核呈现“泡沫”状。 1、2巨检 样品需要修切成薄片,并尽可能做到均匀,否则很难在切片机上切出好得片子。如果样品太厚以至于无法渗透充分,则必须经过再次处理才能进行切片。这样会影响样品得质量,更浪费时间。从最初得步骤开始就正确处理会使后面得工作更简单,因此在大体取材得时候多花些功夫会为以后得步骤节省大量时间与精力。 备注:包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好得固定,后续得处理步骤也会效果欠佳。 1、3脱钙 为了后期进行石蜡包埋切片,骨组织需要进行脱钙,钙必须被完全去除才能确保切片得完整,并且可以防止刀具得损坏。在用酸溶液进行脱钙之前,骨组织必须经过彻底得固定,这样其中得软组织成分才能够被保护,且防止细胞核在酸得作用下被破坏,比如蛋白质水解作用。 1、4组织处理(脱水) 组织经过一系列经典得处理过程,就是使原本亲水性得组织最终可以用疏水性得介质进行包埋,比如石蜡,火棉胶与绝大多数树酯。 备注:样品无论就是处理不充分还就是处理过度,都可能导致切片效果不理想。
病理技术的发展与现状
病理技术的发展与现状 病理学是研究疾病发生的、发病原理和疾病过程中发生的、组织和的结构、功能和代谢方面的改变及其规律。 研究方法 病理学的研究方法多种多样，研究材料主要来自自患病（人体病理材料）和实验动物以及其他实验如组织培养、细胞培养等（实验病理材料）。 （一）尸体剖检 对死亡者的遗体进行病理剖检（尸检）是病理学的基本研究方法之一。尸体剖检（autopsy）不仅可以直接观察疾病的病理改变，从而明确对疾病的诊断，查明死亡原因，帮助临床探讨、验证诊断和治疗是否正确、恰当，以总结经验，提高临床工作的质量，而且还能及时发现和确诊某些、地方病、流行病、为防治措施提供依据，同时还可通过大量尸检积累常见病、多发病、以及其他疾病的人体病理材料，为研究这些疾病的病理和防治措施，为发展病理学作贡献。显然，尸检是研究疾病的极其重要的方法和手段，人体病理材料则是研究疾病的最为宝贵的材料。 （二）活体组织检查 用局部切除、钳取、穿刺针吸以及搔刮、摘除等手术方法，由患者活体采取病变组织进行病理检查，以确定诊断，称为活体组织检查（biopsy），简称活检。这是被广泛采用的检查诊断方法。这种方法的优点在于组织新鲜，能基本保持病变的真像，有利于进行组织学、组织化学、细胞化学及超微结构和组织培养等研究。对临床工作而言，这种检查方法有助于及时准确地对疾病作出诊断和进行疗效判断。特别是对于诸如性质不明的肿瘤等疾患，准确而及时的诊断，对治疗和预后都具有十分重要的意义。 （三）动物实验 运用动物实验的方法，可以在适宜动物身上复制某些人类疾病的模型，以便研究者可以根据需要，对之进行任何方式的观察研究，例如可以分阶段地进行连续取材检查，以了解该疾病或某一病理过程的发生发展经过等。此外，还可利用动物实验研究某些疾病的病因、发病机制以及药物或其他因素对疾病的疗效和影响等。这种方法的优点是可以弥补人体观察之受限和不足，但与人体之间毕竟存在种种差异，不能将动物实验的结果直接套用于人体，这是必须注意的。 （四）组织培养与细胞培养 将某种组织或单细胞用适宜的培养基在体外加以培养，以观察细胞、组织病变的发生发展、如肿瘤的生长、细胞的癌变、的复制、染色体的变异等等。此外，也可以对其施加诸如射线、药物等外来因子，以观察其对细胞、组织的影响等。这种方法的优点是，可以较方便地在体外观察研究各种疾病或病变过程，研究加以影响的方法，而且周期短、见效快，可以节省研究时间，是很好的研究方法之一。但缺点是孤立的体外环境毕竟与各部分间互相联系、互相影响的体内的整体环境不同，故不能将研究结果与体内过程等同看待。
病理制片技1
病理制片技术——常用特殊染色 一、六胺银染色 1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。 2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。 3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。 4．注葸事项 (1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。 (2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。 二、黏液卡红染色 1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。 2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。 3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．
病理制片技术——常用试剂及染液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制 一、Harris氏苏木精染色液的配制 1．试剂准备：苏木精10 g，硫酸铝钾80 g，无水乙醇200 ml，蒸馏水2000 rnl，氧化汞 3 g，冰乙酸40ml。 2．配制步骤 (1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内，加入80 g硫酸铝钾后置电炉或 电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。 (2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内，加入10 g苏木精摇动使之完全溶 解。 (3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体 中，继续加热至液体沸腾关闭电源。此时液体应呈透明的玫瑰红色。 (4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中， 边加氧化汞边搅拌。此时苏木精被氧化，液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。 (5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。 (6)用湿毛巾保护，将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。 (7)密封瓶口室温避光直射储存备用，临用前每100 ml苏木精液加入2～3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制 l. 试剂准备；伊红Y 20 g，蒸馏水1500 ml，95％乙醇500 ml，冰乙酸lml。 2．配制步骤 (1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中，用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀，液体呈深红色。 (2)加入500 ml 95％乙醇并搅匀，此时液体由深红色转变为荧光绿色。 (3)加入lml冰乙酸并搅匀，密封瓶口室温储存备用。 三、HE染色分化液的配制 0.5％盐酸乙醇液：蒸馏水300 ml与95％乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。 四、HE染色返蓝液的配制 0.5％氢氧化氨液：在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀
病理组织切片制作过程详解
病理组织切片制作过程详解 -森贝伽生物实验代做中心 公司中心实验室建设有病理学，分子生物学，细胞生物学，免疫学，蛋白质组学，实验动物模型构建，生物芯片，生物信息学等实验技术服务平台。此外，还提供技术咨询培训，课题合作设计与申报，论文翻译润色等实验技术服务。 1．取材 取材的好坏，直接影响切片的质量。取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm 为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中还应十分注意组织内是否有缝线或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，一定要非常小心。在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。 (1）材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2）组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm ×2.0cm ×0.2cm ，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm ，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 （3）勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 （4）规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 （5）选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 南京森贝伽生物科技有限公司 实验技术服务，代做实验
病理科优化制片及染色流程
1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。 2、蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为3～8度，以免刀刃面将组织刮坏。 3、修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。 4、切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。常规切片厚3～5μm。 5、切下的蜡片相连成带状。待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离。 6、将蜡片较光滑的一面朝下臵于温水中（通常捞片水温在42℃左右），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。 7、附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。玻片一端应留有1/3的位臵贴号码标签用。将蜡片附贴在另外2/3的中心位臵。 8、切片放入62℃烤箱中约30～60分钟烤片，以免发生脱片。为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。比较常用的挂胶片有明胶片，APES 胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。
1、选取适当的新鲜组织块，放在冷冻托上，放入冷冻切片机中冻透。 2、修块、切片。冷冻切片通常厚6～8μm并把切片贴于载玻片上。 3、在酒精灯上轻烤片刻，放入固定液中2分钟。 4、然后快速HE染色（可在酒精灯上加热进行，以缩短时间）。 5、封片、贴标签后，送诊断室（15分钟之内完成）。
石蜡切片常见问题及优化解决方法
HE染色操作常规流程 切好的片子应在60~70℃左右的烤箱中烘烤30分钟以上才能进行染色。HE染色手工程序： 脱蜡 1、二甲苯Ⅰ（AR）5分钟 2、二甲苯Ⅱ（AR）5分钟 3、100%酒精Ⅰ（AR、无水乙醇）1分钟 4、100%酒精Ⅱ（AR、无水乙醇）1分钟 5、95%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟 6、80%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟 7、自来水浸洗1分钟 以上3~7称为进水过程。 染色 1、苏木素染液6分钟 2、水冼1分钟 3、0.5-1%盐酸酒精分化片刻（上下三次颜色由蓝变红） 4、自来水冲冼15分钟以上 （然后95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精，此步可免） 5、1%伊红酒精浸染1~2分钟 6、水冼1分钟 脱水、透明、封固
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片的制作流程 1．取材 组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。
病理制片中固定液的选择-2019年精选文档
病理制片中固定液的选择 由于病理学诊断是诊断的金标准，是辅助临床诊断的主要把关口，也是最后的宣判性诊断。做好病理诊断，层层步骤就显得尤为重要，包括组织的取材，固定，脱水，浸蜡，包埋及染色。 组织的固定是一个关键的过程，因为没有好的固定就没有好的制片，没有好的制片就不会有好的成品，一张好的切片与固定有着密切的关系。 1固定的目的 固定的概念是将采取的活体组织置于化学性溶媒（固定液） 中，使其不发生自溶与腐败，保持被采取时的形态。 固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。其固定液的量一般小于组织块总体积的4 倍以上。 2固定液的选择 固定液必需要有较强的渗透能力，能迅速地渗入组织内部，不会使组织过度收缩或膨胀，并且能使组织内易观察的成分可以凝固为不溶性物质，能使组织达到一定的硬度，获得较佳的折光 率和对染料具有较强的亲和力。组织细胞中不至于因固定引起人为的改变，因为在凝固原生质以后，增加了细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形，并尽可能地避免使组织膨胀或收缩，使细胞内的成分（蛋白质）凝固沉淀 下来，由正常的半液体状（胶体）变为半固体状（凝胶），增加媒染 作用和染色能力，使组织能够得到充分的固定，便于以后的蜡块保存。 固定液的种类很多，分为单纯固定液和混合固定液，其中混合固定液比较常用。
浅谈病理制片中固定液的选择(一)
浅谈病理制片中固定液的选择(一) 论文关键词]病理；固定液；甲醛；乙醇论文摘要]在病理组织诊断中制片过程尤为重要，而在病理制片的过程中组织的固定更为关键，故而对于石蜡切片，组织的固定则是必不可少的重要步骤。在多年的临床经验中，笔者对AF、AAF及甲醛一生理盐水三种混合固定液的优劣进行仔细分析、对比，从而认为混合固定液与其他固定剂固定效果相比之下较为优越。由于病理学诊断是诊断的金标准，是辅助临床诊断的主要把关口，也是最后的宣判性诊断。做好病理诊断，层层步骤就显得尤为重要，包括组织的取材，固定，脱水，浸蜡，包埋及染色。组织的固定是一个关键的过程，因为没有好的固定就没有好的制片，没有好的制片就不会有好的成品，一张好的切片与固定有着密切的关系。 1固定的目的 固定的概念是将采取的活体组织置于化学性溶媒(固定液)中，使其不发生自溶与腐败，保持被采取时的形态。 固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。其固定液的量一般小于组织块总体积的4倍以上。 2固定液的选择 固定液必需要有较强的渗透能力，能迅速地渗入组织内部，不会使组织过度收缩或膨胀，并且能使组织内易观察的成分可以凝固为不溶性物质，能使组织达到一定的硬度，获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲和力。组织细胞中不至于因固定引起人为的改变，因为在凝固原生质以后，增加了细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形，并尽可能地避免使组织膨胀或收缩，使细胞内的成分(蛋白质)凝固沉淀下来，由正常的半液体状(胶体)变为半固体状(凝胶)，增加媒染作用和染色能力，使组织能够得到充分的固定，便于以后的蜡块保存。 固定液的种类很多，分为单纯固定液和混合固定液，其中混合固定液比较常用。 2.1常用单纯固定液 2.1.1甲醛(formaldehyde)为非沉淀性固定剂，是一种约有40％重量溶于水的气体，易挥发，市售的为40％的甲醛水溶液，也称为福尔马林液(formalin)。此液久存自行分解，形成白色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。用于组织固定的浓度为10％，实际浓度含甲醛为4％。其固定液渗透能力很强，固定均匀，对组织收缩小，故而对于免疫组织化学标本的制作常用此液。 2.1.2乙醇(alcoh01)即乙醇，为还原剂，无色液体，可与水无限相溶，固定兼脱水，用于固定的浓度为80％－95％。用于糖原、纤维蛋白及弹性纤维的固定，乙醇的渗透力较甲醛弱，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白。缺点为渗透能力相对较弱，且易挥发和吸收空气中的水分，故而使用时应盖好容器；并对色素有破坏。 2.1.3醋酸(aceticacid)又名乙酸，为带有刺激气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸，可溶于水，能沉淀核蛋白，可较好地保持染色体结构，把未分裂细胞核的染色质沉淀为块状体，从而更清楚地显示细胞核结构。5％的醋酸pH2－8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶，缺点为组织膨胀较明显，对于胶原纤维与纤维蛋白尤其明显。一般很少单独使用。 2.2常用混合固定液 2.2.1AF液(乙醇+甲醛液)配方：95％乙醇或无水乙醇90ml+40％甲醛10ml。此液不但有甲醛的固定作用，并兼有脱水作用，用于固定肥大细胞和糖原，效果较好，米粒大小的胃镜等标本需要4－6h，其余外检的大块组织需用12－24h，其优点是固定后可不经水洗，直接放人
4.16.4.4.1细胞病理学技术制作规范及质量控制标准
细胞病理学技术制作规范及质量控制标准 一、细胞学标本的接收 1.细胞学申请单和标本的验收 （1）细胞病理学室应有专人负责细胞病理学标本及申请单的验收，并严格执行标本验收签名责任制。 验收工作包括以下内容。 ①认真核对每例送检标本和申请单，确保标本和申请单一致。发现疑问应及时与送检科室联系并在申请单上注明情况。 ②认真检查送检标本及内容物是否完整，盛具是否洁净干燥，识别的标签是否牢附于容器上。 ③申请单是否注明送检标本的目的和要求（包括特殊检查要求，如免疫细胞化学染色、分子病理学检测等）。 ④仔细查阅申请单上各项是否按要求填写清楚：包括患者的基本情况、送检单位、送检日期、送检标本类别、患者的临床资料、化验室及影像学检查结果、既往细胞病理学检查情况和临床诊断等。 ⑤申请单上要详细记录患者或家属的明确联系方式，以便必要时与患者或家属联络。 （2）用于细胞病理学检查的标本必须新鲜，力求有足够数量，临床取材后应尽快送达细胞病理学室。 （3）申请单中由临床医师填写的各项内容不得擅自进行
改动。 （4）下列情况者，标本不予接收。 ①申请单与相关标本未同时送达细胞病理学室。 ②申请单中填写的内容与送检标本不符。 ③标本上无患者姓名、科室等标志。 ④申请单上填写的内容自己潦草难以辨认。 ⑤申请单中漏填重要项目。 ⑥没有按照规范的方法进行采集、运送或保存的标本。 ⑦出现泄漏、损坏、碎裂，液体标本干涸等不符合送检要求的标本。 （5）细胞病理学室对不能接收的标本及申请单一律当即退还送检人，不予存放。 2.申请单和标本的编号、登记 （1）验收标本的人员应在已验收的申请单上注明收到标本的日期，及时准确地进行细胞病理学编号，并逐项录入登记薄或计算机。 （2）细胞病理学标本、申请单、涂片、标本登记薄或计算机内的编号必须完全一致。 二、细胞病理学基本技术操作 1.取材和制片 标本一定要新鲜，接收标本后应立即涂片、固定和染色。不能立即涂片时，应将标本置于低温或加入适量95%乙醇，
病理科工作流程范文
病理科工作流程
病理室工作程序规范 病理科工作制度 一、全科人员要热爱本职工作，坚决执行医院提出的各项承诺。 二、工作人员必须服务热情，态度和蔼，耐心解答病人的疑问。各项工作均应体现“以病人为中心”的宗旨，互相协作，上下团结。 三、工作人员本着高度认真负责的态度干好本职工作。外检工作要认真、细致、负责。标本处理必须严格执行“三查”、“三对”原则。发报告必须经复验严格把关，杜绝一切差错。建立差错登记制度，如发现有由于粗心大意造成的差错，则视情节轻重扣除当事人当月奖金，并督促改正。 四、严格执行本院作息制度，按时上下班
病理科查对制度 一、收集标本时，所负责的技术人员要注意查对病人的姓名、性 别、年龄、病案号、送检单位/科室。 二、取材前，技术人员应将当日取材标本的申请单编号，标本排 序，并与申请单、工作单顺序一致。取材医生应与技术员再次核对标本的姓名、联号及送检标本数量。 三、标本取材时，要做好大致标本的描述及记录取材块数，并在 工作单上作好记录，取材过程中及取材后，取材医师与技术人员再次核对取材的标本编号及标本总数。 四、技术人员包埋组织蜡块后，蜡块编号及蜡块总数应与申请单 及工作单再次核对。 五、制片后，切片与申请单及工作单核对无误后交与诊断医师， 如有脱片等特殊情况，在工作单上注明，由技术人员负责重新制片。 六、诊断医师在书写报告时，应认真复核患者姓名、性别、年 龄、科室及病案号、临床诊断、送检部位及送检日期，如项目不全者，可用“？”号表明。
病理科住院医师职责 一、在科主任和上级医师指导下进行工作。 二、负责外检标本的检查、描述、取材及初步诊断。 三、认真执行查对制度，如发现问题及时与临床联系并向上级医师汇报。 四、发现疑难问题及时请示上级医师复验，复验要有记录和上级医师的签字。 五、参加临床病理讨论会，做好讨论记录并整理存档。 六、认真学习专业知识及国内外先进技术，参加科研和教学工作。 七、定期清理标本，保存典型及有科研价值的标本，负责指导标本处理和资料积累。 八、认真执行各项规章制度，严防差错事故，若发现问题及时向上级医师请示报告。
病理制片技术
病理制片技术 一、方法 石蜡切片，苏木精—伊红染色 二、试剂配制 苏木精和伊红染液：配制方法很多，现介绍一种既省染料又比较耐用，而且染色效果较稳定的配制方法 Gili苏木精配方： 甲液：苏木精……………………………………2g 碘酸钠……………………………………0.2g 乙二醇……………………………………250ml 乙液：硫酸铝铵…………………………………17.6g 蒸馏水…………………………………730ml 将甲、乙液混合后加冰乙酸20ml，即可使用。1%酸性伊红染液：称取伊红20g，加入蒸馏水500ml，溶解后加HCL110ml，用蒸馏水反复洗3次，过滤，渣烤干，溶于95%酒精1000ml备用。可长期保存，用时取备用液和95%酒精等量混合。 三、操作步骤 1、固定 手术活检下的组织应立即放入固定液中固定。常用的固定液为10%甲醛。配方如下：40%甲醛…………………………………1份 自来水……………………………………9份 2、脱水 将固定好的组织，根据检验要求，切成适宜制作切片的小组织块，经流水冲洗后放入各级酒精脱水，一般从70%酒精开始→80%酒精→95%Ⅰ酒精→95%酒精Ⅱ→100%Ⅰ酒精→100%Ⅱ酒精。时间各为1-3小时。 3、透明 组织经脱水后，入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各30~60分钟透明。 4、浸蜡 组织从二甲苯中出来后，入石蜡2次或3次，以熔点较低的作为石蜡Ⅰ，然后再换熔点较高的。整个浸蜡过程约3-4小时。 5、包埋 将已熔化的石蜡倾入金属的组织包埋框内，随机将浸蜡组织块用加温的镊子送置于包埋框内，将切面朝下，放平放正。等石蜡凝固，用刀片把已经包好组织的石蜡块的周边修切完整。组织外围的石蜡不宜留的过多。 6、切片 将包埋好的石蜡组织块的底部加热固定在金属的或木制的支持器上，然后放入冰箱冷冻室内稍冻片刻，增强硬度。再将组织块固定在切片机上进行修整，真正组织全部暴露在切面时，即可进行切片。切片时应根据需要调整切片的厚度。 7、贴附 将切下的切片先放入50%左右的酒精中，再用玻片将其捞入45℃左右的温水中，使切片伸展于水面上，如仍有细小的皱褶，可用镊子细心地将皱褶拨开。选择切面最完整、最薄的、没有皱褶的、没有破碎的部分贴附于载玻片略微偏右的中间。切面贴附后需在60℃左右的温箱内放置30分钟以上或放于温度较高一些的烘片器中10分钟左右。 8、染色 苏木精—伊红染色法（H.E染色法）
组织病理切片制备流程
组织病理切片制备流程 组织病理切片按照制备方法的不同分为石蜡切片、冰冻切片和振动切片。 石蜡切片制备过程包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般从取材固定到封片制成玻片标本需要数日。 冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。制作过程不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续，避免组织细胞中可溶性物质的分解，并能保存细胞形态的原。与石蜡切片相比，在抗原完整性的保存上有其不可取代的优势，尤其在免疫组化方面。因此冷冻切片也是脂肪染色、酶组织化学染色以及某些免疫组织化学染色和原位分子杂交的理想制片方法。不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。 振动切片在文献中讨论较少。制备方法是采用的专用振动切片机，利用刀片振动原理，将新鲜的活体组织，直接固定在切片槽中切片。该方法能保持样品活性和细胞良好形态，给免疫细胞化学研究及脊髓和脑薄片神经生物学研究提供了良好条件，适合做组织电生理学等研究。 不同切片方法由于制作的工艺流程不同，所需的仪器设备和工具有差别。 一、石蜡切片的制作 根据文献报道石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1.固定 用适当的固定液浸渍新鲜材料，凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，使组织硬化，尽可能保持活体时的结构。固定时间从1小时至数天，通常为数小时至24小时。 2.洗涤与脱水 组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去，否则留在组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。 固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水。脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入。常用用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。 脱水步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。 3.透明 组织脱水后，因乙醇不溶于石蜡，为使石蜡能浸入组织块，必须经过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂的替代过程，通过这种溶剂的媒介作用替换出组织内的酒精，而
病理工作流程
病理工作流程 一）活组织病理检查与快速石蜡病理诊断工作流程 活组织病理检查包括病灶局部穿刺、咬取、切取活检和手术切除标本，通过活检为临床活佥组织从患者病灶处取下后，到获得最后病理诊断结果过程中，主要工作 提供定性诊断。 流程如下： 者按 病灶处取下活检组织标本 J 临床医师详细填写病理诊断申请单 （包括病史、体征、术中所见、其它辅助结果、申请要求等） J 临床支持中心送达病理科 J 病理标本的接收与确认 J 病理医师取下检测组织块 J 组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋 J 石蜡组织切片、染色 J 病理医师阅片，分析病变特征，确定诊断结果 J 采集病理改变特征性图象，描述病变特征，填写病理诊断报告 J 上级病理医师审核病理报告后签发 快速石蜡切片病理诊断工作流程与活组织病理检查类似。快速石蜡切片因组织脱水时间短，不适合于大组织块制片，常用于粘膜钳取的小块组织病变诊断，如胃、肠粘膜病变活检组织，呼吸道粘膜病变组织，体积较小的肿瘤（直径小于0.5cm）。快速石蜡病理诊断常安 排专人、使用专用设备与试剂进行处理组织与病理制片，一般情况下，可以在 3 小时内得到 病理诊断报告。特殊情况下，如需进一步进行免疫组化染色、组织化学染色、PCR佥测等， 则需推后一至两天发出确定诊断报告。 病理诊断需要经过多个环节的处理与校验，病理制片与阅片诊断工作时间跨度长。一般情况下，活佥组织在每天下午五时之前送达病理科，在第三天下午四时能够得到确定的病理报告，但需要应用以下佥查技术之一者需要在第四天或第五天才能得到病理报告： （ 1）免疫组织化学（免疫组化）佥查：
免疫组化佥测的主要目的有两个方面： ①确定肿瘤的组织发生和肿瘤分型：主要用于一些疑难疾病的确认，如胃肠道平滑肌瘤与间质瘤、神经鞘膜细胞瘤、间皮瘤的鉴别，恶性淋巴瘤的组织学分型。 ②肿瘤预后评估与治疗方案相关免疫组化检测：免疫组化检查可用于疾病的预后评估、治疗方案的选择、可能出现的肿瘤耐药基因，如P53、 Ki-67 检测评价恶性肿瘤的预后， PR、 ER Her-2、VEGF佥测选择治疗方案，gplOO、GS「n检查是否表达肿瘤耐药基因。 免疫组化检查制片通常需要一天时间，因而需要进行免疫组化检测的病理诊断结果，通常在第四天后才能发出病理诊断报告。 （2）组织化学检查：组织化学检查实际上就是在常规石蜡切片基础上，需要进一步进行相应的特殊染色技术才能明确疾病性质，通常进行的特殊染色技术与免疫组化可以相互补充，但有些染色项目不能被免疫组化替代，如PAS与六铵银染色用于检测是否出现真菌感染， 艾尔辛蓝染色检测细胞内粘液，苏丹川染色检测细胞内脂质或脂滴，网状纤维染色判断骨髓组织网状纤维增生情况等，这些是不能被免疫组化染色所替代的。 组织化学染色需要重新进行切片、染色后，再行阅片，通常需要数小时才能完成，因此应在第四天才能得到病理诊断报告。 （3）其它特殊检查：在有些情况下，需要结合PCR与原位杂交检查结果才能得到正确 的病理诊断结果，如结核杆菌PCR与HPV- DNA佥查是否出现结核杆菌感染与人乳状状瘤病毒感染。淋巴瘤组织 T细胞受体与免疫球蛋白基因单克隆性扩增PCR佥测是否为B细胞性或T 细胞性恶性淋巴瘤。原位杂交检测肿瘤细胞是否表达 Epstein-Barr 病毒。 分子病理学检测需时长，为避免出现假阳性与假阴性结果，需要重复一次得到进一步确认，因此应在第四天或第五天才能得到病理诊断报告。 （二）术中冰冻切片诊断工作流程术中冰冻切片诊断，主要用于术前诊断不明确，术中明确肿瘤的良、恶性，根据良、恶的判定来决定手术方案。要求快速有效地得到肿瘤的良、恶性结果，便于配合外科手术的顺利实施。其主要工作流程如下： 手术前一天临床医师申请预约术中冰冻快速诊断，填写申请单 病理医师术前探访病人、熟悉病史与可能的手术方案 病人及其家属签署《术中冰冻诊断知情同意书》 术中取下病灶处活检组织标本 临床医师根据术中所见情况补充或重新填写冰冻病理诊断申请单 临床支持中心快速送达病理科 病理标本的接收与确认 病理医师取下检测组织块 冰冻组织、组织切片、染色 阅片，签署冰冻诊断报告
病理制片过程
病理制片过程 在临床病理科和组织学实验室，切片是最重要的技术之一。切片的质量不好，就无法对标本进行观察。好的切片机只是整个样品制备过程中的一个环节。要制备一张好的切片，必须要将技术、知识和技巧进行完美的结合。 待切片样品的质量是非常关键的因素，而样品质量有取决于前期处理工作的准确无误（例如：固定、巨检、脱水和包埋）必须选择正确的切片机型号以及合适的钢刀或一次性刀片。切片必须根据实际应用出发，需要根据样品的类型、大小、期望的厚度认真考虑，还要兼顾操作者的便利性和舒适性。 要且出高质量的切片，经验丰富的操作者也是必不可少的条件之一。操作者必须懂得切片机的工作原理，能够对机器进行精细调节以达到最佳效果；并且能应对常见故障，消除一些潜在的切片问题；还可以运用恰当的切片技术，提高 切片速度但不影响质量。 目前能做病理组织切片的地方很多，但要数上海舜田生物做出的病理切片相对质量上比较好，该公司有1位专业从事病理实验的老师及相关实验技术人员，积累了丰富的实验经验，所作出的切片及染色效果相当不错。 1 正确处理标本的重要性 1.1 固定 正确的固定是病理制片技术中最重要的一步，这个步骤会影响到后续的每个环节。如果固定不充分，样品的质量就会有欠缺。组织必须在选定的固定剂中浸泡足够长的时间，使大分子保持固有形态。正确的固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成的损害。固定不充分可能增加切片的困难，表现出过度收缩，并且会导致细胞核染色不足和/或胞核呈现“泡沫”状。 1.2巨检 样品需要修切成薄片，并尽可能做到均匀，否则很难在切片机上切出好的片子。如果样品太厚以至于无法渗透充分，则必须经过再次处理才能进行切片。这样会影响样品的质量，更浪费时间。从最初的步骤开始就正确处理会使后面的工作更简单，因此在大体取材的时候多花些功夫会为以后的步骤节省大量时间和精力。 备注：包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好的固定，后续的处理步骤也会效果欠佳。 1.3脱钙 为了后期进行石蜡包埋切片，骨组织需要进行脱钙，钙必须被完全去除才能确保切片的完整，并且可以防止刀具的损坏。在用酸溶液进行脱钙之前，骨组织必须经过彻底的固定，这样其中的软组织成分才能够被保护，且防止细胞核在酸的作用下被破坏，比如蛋白质水解作用。 1.4组织处理（脱水） 组织经过一系列经典的处理过程，是使原本亲水性的组织最终可以用疏水性的介质进行包埋，比如石蜡，火棉胶和绝大多数树酯。 备注：样品无论是处理不充分还是处理过度，都可能导致切片效果不理想。
组织制片技术原理与流程及切片机的使用
组织制片技术原理与流程及切片机的使用 组织制片的特点 组织制片是组织学、胚胎学、病理学、生物学等学科观察和研究组织、细胞的正常形态和病理变化的常用方法。其基本原理是用固定剂固定组织、细胞以及各种亚细胞器，保持组织的微细结构，制成薄片，并用不同的染色方法增加各部分的色差，在显微镜下观察组织、细胞的形态结构，或利用化学或物理方法显示组织、细胞内的某些化学成分，并可进行形态和化学成分的定量分析。随着细胞和分子生物学技术的发展，组织制片也为原位显示细胞内基因表达提供了基础。 一石蜡包埋切片制作 石蜡不溶于水而溶于二甲苯等有机溶剂，故固定好的组织须先用乙醇、丙酮、正丁醇等脱水剂脱去组织中的水，后用二甲苯等透明剂置换出乙醇，此过程即脱水、透明。再用石蜡渗入组织块，冷凝后变硬，即浸蜡、包埋，就可在切片机上切片了。 1.固定 细胞、组织离体后要迅速用相应的固定剂固定，使蛋白质沉淀、变性、凝固，保持组织原有的形态结构和抗原性。一般用多聚甲醛、FAA、丙酮或Carnoy于4℃并向固定过夜。 2.脱水与透明 固定后的组织须由低浓度到高浓度的乙醇逐级脱水，一般为50%、70%、85%、95%、和100%（3次） 3.渗蜡与包埋 渗蜡是石蜡置换组织块中透明剂的过程，一般用熔点为52-60℃的石蜡。透明后的组织块先于1/1体积的二甲苯与石蜡中37℃渗透过夜，后温度调至58℃换入纯石蜡继续渗透，一般每间隔3h换一次纯石蜡，直到无二甲苯 气味即可进行包埋。 4.切片与展片 先用刀片修去组织块周围多余的石蜡，一般保留2mm左右的石蜡，修整成梯形的组织块，以便于展片时蜡带的分离。先加热刀片，后把修好的组织块快速粘到方形的小木块上，冷凝后即可进行切片。 一般组织切片的厚度为6-12um，切片速度以40-50次/min为宜，用毛笔托起蜡带，分割后依次放到洁净的载玻片上，蜡带的光滑面朝下放，后滴上适量的蒸馏水放至展片台上于37-40℃烤片过夜。 5. 染色、脱水、透明与封片 染色一般是双重染色或单染，番红与固绿是常用双重染色法，而苏木精是最优良的核染色剂。具体流程如下所示： 番红-固绿双重染色法：纯二甲苯（20min）→纯二甲苯（20min）→1/2酒精+1/2二甲苯（2-3min）→100%酒精（2-3min）→95%酒精（2-3min）→85%酒精（2-3min）→75%酒精（2-3min）→50酒精（2-3min）→番红染液（30-1h）→50%酒精（30s）→75%酒精（30s）→85%酒精（30s）→95%酒精（30s）→固绿染液（7s）→95%酒精（30s）→100%酒精（30s）
4.16.6.4.1病理标本检查和取材的制度、流程与操作规范
病理标本的检查和取材的制度、流程与操作规范 1.取材前阅读申请单中的内容，初步判断病变的性质。 2.核对申请单的编号与标本的编号、标本的份数是否相符。 3.对于核对无误的标本应按下列程序取材： 3.1.小标本和不完整的标本通常为活检标本，应按如下标准取材。 3.1.1应描述和记录送检标本的数量（少量时精确计算，多量时进行估计）、大小（若干mm或cm；多量时聚拢测量）、形状、色泽和质地等。 3.1.2少量的小标本应全部取材制片。 3.1.3多量的小标本，原则上全部取材制片；数量过多时，可尽量多地取材制片，剩余的标本应臵于4%的中兴甲醛中妥善保存备用。 3.1.4黏膜和皮肤组织应“立埋”，即将黏膜面与包埋盒的底面垂直。 3.1.5使用镊子夹取标本时须严防挤压组织。 3.2大标本通常为手术标本，应按如下标准取材： 3.2.1记录切除标本的手术类型。 3.2.2应描述和记录送检标本的大小（三维长度，mm或cm）、形状、色泽、表面、质地等，球形或接近球形的标本可测其直径（mm或cm）。必要时称重（g或kg）。 3.2.3检查切面：通常沿标本长径切开或剪开（囊性标本时），
描述和记录其形状特点，例如囊性和实性及其所占比例、色泽、质地、纹理、坏死；囊肿壁的厚度及其内外表面、囊腔内容物及其性状等，有的脏器，例如前列腺、胰腺、甲状腺等，应间隔一定距离（甚至间距2mm左右）做多个平行切面，检查有无微小肿物。 3.2.4带有脏器的标本，应描述和记录病变处与有无脏器的毗邻关系特点。 3.2.5必要时，绘简图说明巨检病变的特点和解剖学关系，病注明取材部位的编号，以便镜检时定位。 3.2.6切取有代表性病变区域的组织制片，适量包括与病变区域毗邻的“正常”结构和坏死组织等。 3.2.7完整切除的肿瘤标本，切取的组织块应包括其包膜，较大的肿瘤应酌情多处包膜取材。 3.2.8切取组织块的刀具必须锋利，严防挤压组织。 3.2.9切取组织块的数量，依巨检病变的具体情况酌定，一般以满足诊断需要为准。组织块的面积，通常在2cmx1.5cm以内，厚度不宜超过3mm（快速包埋制片时则应尽量薄些）。 3.2.10组织块的切面应平整。需要指定组织块的包埋面时，可将其非包埋面切出凹痕作为标记。管壁和囊壁组织应立埋。 4.标本摄影，必要时酌情进行（标本固定前或固定后）。 5.切取组织块的编号、数量和取材后是否尚有标本存留等均应在活检记录单的肉眼检查描写栏内和取材工作单中注明，以便镜检时核对切片。例如，1.组织较少，全部包埋制片者，可注明