虎杖中白藜芦醇提取分离研究
虎杖中白藜芦醇提取分离研究
【摘要】目的考察虎杖中白藜芦醇苷的最佳提取分离工艺。方法研究酶法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件，从酶的种类、温度、ph值、酶解时间等方面分析。结果最佳提取工艺为：采用植物水解酶，提取温度40℃，酶解ph值3.0，酶解时间7h，为最佳提取条件。结论酶处理后，可显著提高虎杖中白藜芦醇的得率，且该提取工艺稳定性好且简便易行。
【关键词】
虎杖；白藜芦醇；提取分离；研究
虎杖为蓼科植物虎杖的根茎，主要含有[1]蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份。白藜芦醇和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分。白藜芦醇作为一类亲脂性多酚物质，具有抗血小板凝聚，保护肝脏，抗肿瘤活性等药理作用，特别是对心脑血管系统具有较强的药理活性。本实验采用酶法实验，对虎杖中的白藜芦醇进行提取分离，本研究旨在为虎杖开发利用提供科学依据。
1仪器与试药
1.1仪器agilent1100高效液相色谱仪；ag285分析天平；ks-600d 超声清洗器；delta320ph计；hhw420型三用恒温水箱。
1.2试药虎杖粉末，批号：20060829；纤维素酶，批号：f20071116；植物水解酶、植物提取酶；白藜芦醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号：1535-200001，纯度：99.5%；甲醇、乙醇、磷酸、磷酸二氢钾（分析纯）；乙腈（色谱纯）；蒸馏水。
白藜芦醇的提取工艺
白藜芦醇的提取工艺 专业:化学工程与技术学号:2010001220班级:生研1004班姓名:刘珊珊 摘要:从虎杖等植物中提取的白藜芦醇具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、保护肝脏、保护心血管等功能，鉴于白藜芦醇的多种重要的应用价值，本文综述了白藜芦醇的提取方法，其中包括有机溶剂提取法、超声波及微波辅助萃取法等。通过对各种方法的综合比较，找出了最佳优化条件。 关键词：白藜芦醇；提取；正交实验 1.1白藜芦醇的理化性质 白藜芦醇分子式是C14H12O3，相对分子质量为228.25，化学名称为3，4，5’—三羟基—1，2—二苯乙烯，是一种蒽醌萜类化合物，熔点为256~257℃。它主要存在于葡萄、虎杖、花生、朝鲜槐等植物中，尤其在种皮中含量较高[1]。白藜芦醇易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂中。其存在形式主要有四种，分别是顺式-白藜芦醇、反式-白藜芦醇、反式-白藜芦醇糖苷及顺式-白藜芦醇糖苷，但只有反式异构体具有生物活性[2]。 图1反式白藜芦醇的结构式 白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用。抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。它既是肿瘤疾病的化学预防剂，也是对降低血小板聚集，预防、治疗动脉粥样硬化，心脑血管疾病的化学预防剂。20世纪90年代，我国科技工作者对白藜芦醇的研究不断深入，并揭示其药理作用：抑制血小板非正常凝
聚，预防心肌硬塞、脑栓塞，对缺氧心脏有保护作用，对烧伤或失血性休克引起的心输出量下降有效恢复，并能够扩张动脉血管及改善微循环。 1.2白藜芦醇的提取方法 1.2.1溶剂提取法 溶剂法是国内外最广泛应用的提取方法。常用溶剂主要有水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等。溶剂法对设备要求简单，产品得率较高，但缺点是成本高，杂质含量也高。常见报道的溶剂法有三种：浸提法、渗漉法、回流法[3]。浸提法对温度要求不高，但费时较长，效率不高；渗漉法由于保持一定的浓度差，所以提取率较高，浸液杂质较少，但费时较长，溶剂用量大，操作麻烦；回流法较前两种方法效率高，速度快，但容易对受热敏感的原料造成破坏，因此根据不同的原料应采取不同的提取方法。 1.2.2碱性水或碱性稀醇提取法 白藜芦醇具有弱酸性，在碱性条件下酚羟基可以被转变成盐而使水溶性显著增加。碱提取法的原理是利用白藜芦醇这一性质，使其在一定条件下和某些无机碱、碱性盐形成酚盐而从体系里溶解出来；再通过调节溶液pH值的方法使之沉淀而得以分离，从而富集提取白藜芦醇。常用的碱性溶液为NaOH、KOH、Na2CO3、NaHCO3 。 1.2.3超声波提取法 超声技术对中药有效成分提取分离有许多优点，如提高提取率、缩短提取时间、需求温度低等。超声波提取是一种物理破碎过程，对媒质主要产生独特的机械振动作用和空化作用，用超声波辅助提取白藜芦醇，有利于保持较高的白藜芦醇的相对含量[4]。 超声波提取的工艺流程：样品处理→加入适量的提取试剂→热水浸提→超声波提取→离心分离样液→浓缩过滤→固相萃取，富集白藜芦醇→提取物样品[5]。 1.2.4酶解法 近年来文献对白藜芦醇的提取工艺报道较多，但白藜芦醇的提取率和提取物中白藜芦醇的含量较低，生产成本高。如果直接提取，白藜芦醇苷不易转化为白藜芦醇；其次白藜芦醇包裹在细胞壁内，若直接用有机溶剂提取，白藜芦醇难以溶出，酶解作用可以使细胞壁疏松、破裂，减小传质阻力，加速有效成分的释放，从而
高中生物必修一实验八 叶绿体中色素的提取和分离
实验八叶绿体中色素的提取和分离 教学目的 1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。 2．探索叶绿体中有几种色素。 实验原理 1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。 2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 实验程序 （1）称取5g绿色叶片并剪碎 提取色素 （2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口 （1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时 到达滤液细线）制滤纸条 （2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线 （1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线 滤液划线 （2）干燥后重复划2-3次 （1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准） 纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中 （3）用培养皿盖盖上烧杯 观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图） 最宽：叶绿素a； 最窄：叶绿素b； 相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b； 相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。 实验关键 1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。 3．层析时不要让滤液细线触及层析液。 注意事项 1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。 2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。 3．分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
(完整版)《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计
《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计 一．教材分析 本实验是高中生物必修一第五章第四节《能量之源-----光与光合作用》中的基本实验，加之此节是生物三大必修模块《分子与细胞》的核心内容。所以在展开光合作用的相关学习内容之前通过教师适当的引导，学生的动手操作完成对绿叶中色素的提取与分离的学习，增强了学生探究学习的欲望和学习光合作用的兴趣，也为后续光合作用内容的学习打下了坚实的基础。并以此提高了学生的生物科学素养和科学探究的能力。 二．学情分析 我所带的是职业中学的体育班，全班29位学生，其中只有3名女同学，以男生居多的这个班级学生学习的重视度，自觉性都比较差。而且学生学习目标不明确，态度不端正，文化课的底子薄，对课堂教学兴趣不浓厚。但学生比较好动，具有很大的好奇心和探究欲望，往往他们对实验课具有很高的兴趣，这样对开展生物实验课很优势。以此来激发学生学习生物课的兴趣和培养学生的实际动手操作能力。 三、教学目标 知识目标：理解色素的提取和分离实验目的、实验原理，探索叶绿体有色素的种类。 能力目标： （1）初步学会提取、分离叶绿体中色素的方法和技能。 （2）使学生掌握科学探究的程序和方法，培养学生创造性思维能力和动手实践的能力。（3）提高学生口头表达、相互交流的能力及思维的严密性。 情感态度目标：提高学生的学习兴趣，初步培养了学生科学探索的欲望和能力。 培养学生实事求是的科学态度，增强学生关心爱护绿色植物，关心发展农业的意识，进行生命科学价值观的教育。 四、重点难点： 重点：叶绿体中色素的种类和作用 难点：对实验原理的理解；对照实验的设计和色素的提取。 五、实验原理： 提取原理：叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以可以用丙酮提取叶绿体中的色素。当没有丙酮时，也可以用其他有机溶剂替代，如酒精。 分离原理：分离色素的方法叫纸层析法。分离色素与色素的溶解度有关，而与色素的浓度、
葡萄籽中白藜芦醇提取和检测方法的研究现状
葡萄籽中白藜芦醇提取和检测方法的研究现状 黄德成 李 华 王 华 (西北农林科技大学葡萄酒学院,杨凌,712100) 摘 要 介绍了白藜芦醇的理化性质及其提取和检测方法的研究现状,并对这些方法的优缺点作出简要总结,为葡萄籽功能性食品中白藜芦醇的检测提供参考。关键词 葡萄籽,白藜芦醇,理化性质,提取,检测 第一作者:硕士(李华教授为通讯作者)。收稿日期:2006-08-14 白藜芦醇(resveratrol ),化学名称为3,5,4′2三羟 基21,22二苯乙烯(trans 23,5,4′2trihydroxy 2stilbene ),是一种含有茂类结构的多酚化合物;少量以游离态的形式广泛存在于葡萄、虎杖和花生等天然植物或果实当中,到目前为止至少己在21科、31属的72种植物中发现了白藜芦醇[1]。多年来人们对白藜芦醇研究结果表明,白藜芦醇具有抗癌、抗菌、抗氧化、降血脂和抗诱变等作用[2]。在日本,已将含白藜芦醇植物提取物作为食品添加剂使用;在我国,也有将白藜芦醇提取物制成降脂、美容、减肥和抗癌天然保健食品及胶囊[3]。但是目前国内外对白藜芦醇的检测还没有统一的方法标准[4],本文从白藜芦醇的理化性质、提取和检测方法3个方面作出简要综述,为葡萄籽功能性食品中白藜芦醇检测提供参考。 1 白藜芦醇的理化性质 白藜芦醇为无色针状结晶,分子式为C 14H 12O 3,相对分子质量228125,其结构式有顺、反2种,并各自可以与葡萄糖结合形成顺、反式白藜芦醇苷(其结构见图1),白藜芦醇常与葡萄糖结合以糖苷的形式存在;白藜芦醇熔点256～257℃,261℃升华,易溶于乙醚、甲醇、乙醇、丙醇等。在366nm 的紫外光照射下能产生荧光,并能和三氯化铁2铁氰化钾起显色反应[5]。其反式异构体的生物活性强于顺式异构体,在紫外光照射下反式白藜芦醇能够转化为其顺式异构体。纯白藜芦醇对光不稳定,在完全避光条件下,反式白藜芦醇可在乙醇中稳定数月,仅在高p H (≥10)下稳定性差一些;顺式白藜芦醇在避光条件下只有中性p H 下较稳定。反式与顺式白藜芦醇在紫外光(UV )210nm 处有强吸收,其第二吸收峰分别在305～330nm 和280～295nm 。在乙醇中,反式在308nm 的摩尔吸收系数为30000,顺式于288nm 的摩 尔吸收系数为12600[6] 。 R =H.trans resveratrol R =H.cis resveratrol R =G lu.trans piceid R =G lu.cis piceid 图1 白藜芦醇及其苷的化学结构 2 白藜芦醇的提取 目前,国内外大多采用葡萄皮、葡萄籽和虎杖等 植物为原料提取白藜芦醇。先将原料粉碎,采用有机溶剂(如甲醇、乙醇、乙酸乙酯等)进行提取,经过滤后将滤液浓缩,即得白藜芦醇粗品。有机溶剂提取方法主要分为回流法、浸渍法、索氏法、超声波法等。211 回流法 加热回流提取白藜芦醇的溶剂主要有甲醇、乙醇和乙酸乙酯,对提取液萃取分离的萃取剂有石油醚、氯仿、乙酸乙酯等。朱鸿津[7]利用加热回流提取虎杖中白藜芦醇的方法是称取虎杖粉末(过40目筛)50g ,用体积分数95%乙醇水浴回流提取3次,第1次用4倍质量乙醇回流提3h ,第2、3次分别用3倍质量乙醇回流提取各1h ,合并提取液,冷却,过滤,滤液减压浓缩,得到白藜芦醇粗品溶液。回流法有着提取率较高,成本低的优点;然而由于提取时间较长,导致白藜芦醇的氧化,使检测结果失真。212 浸渍法姚宝书[8]等人以乙酸乙酯为提取剂,考察浸提时间、浸提温度、浸提次数、料液比对提取效果的影响,确定的最适的浸提条件:提取时间40min ,温度 综述与专题评论 2006年第32卷第10期(总第226期) 113
冲刺2020高考生物实验突破专题：绿叶中色素的提取和分离(附答案及解析)
绿叶中色素的提取和分离 1.提取绿叶中的色素 ①原理：绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中。 ②步骤 取材：称取5 g 新鲜绿叶 ↓ 研磨：剪碎叶片，放入研钵中，加少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10 mL 无水乙醇， 迅速、充分研磨 ↓ 过滤：漏斗基部放一块单层尼龙布，将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤 ↓ 收集：用小试管收集色素滤液，及时将试管口用棉塞塞严 2.分离绿叶中的色素 ①原理：不同色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢。 ②步骤 制备滤纸条????? 剪滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与直径的 滤纸条，并在一端剪去两角 ↓ 铅笔画线：在距滤纸条去角的一端1 cm 处用铅笔画一条细的横线 ↓ 画滤液细线????? 取滤液：用毛细吸管吸取少量滤液 ↓画线：沿铅笔线均匀地画出一条细线 ↓重复画线：待滤液干后，重复画细线1～2次 ↓ 分离绿叶中的色素：将适量的层析液倒入试管中，将滤纸条(有滤液细线的一端朝下) 轻轻插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口 ↓ 观察并记录结果：滤纸条上出现4条色素带
3.实验中的材料试剂及操作目的 考点一：实验的基本原理和过程分析 例一、甲、乙、丙、丁四位同学，在利用新鲜绿色菠菜叶为实验材料，用层析法进行叶绿体中色素的提取和分离实验时，由于操作不同，得到了四种不同的层析结果(如图所示)。下列分析错误的是()
A．甲可能误用蒸馏水作提取液和层析液 B．乙可能是因为研磨时加入无水乙醇过多 C．丙可能是正确操作得到的理想结果 D．丁可能是研磨时未加入CaCO3 考点二：实验异常现象分析 例一．在做提取和分离叶绿体中的光合色素实验时，甲、乙、丙、丁四位同学对相关试剂的使用情况如下表所示(“＋”表示使用，“－”表示未使用)，其余操作均正常，他们所得的实验结果依次应为() A．①②③④B．②④①③ C．④②③①D．③②①④ 易错点一收集到的滤液绿色过浅的原因分析 ①未加石英砂(二氧化硅)，研磨不充分。 ②使用放置数天的绿叶，滤液色素(叶绿素)太少。 ③一次加入大量的无水乙醇，色素溶液浓度太低(正确做法：分次加入少量无水乙醇提取色素)。 ④未加碳酸钙或加入过少，色素分子被破坏。 易错点二滤纸条色素带重叠：没经干燥处理，滤液细线不能达到细、齐、直的要求，使色素扩散不一致。
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
反相高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量 白祖海，文刚，张艳 （长沙市疾病预防控制中心，长沙410001） 摘要：采用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量。以聚酰胺柱对样品进行 预处理，排除其它成分的干扰，获得较好分离度和高回收率。选用自填 装ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)，以乙醇-水(2：3,v/v)作流 动相，流速为0.6 ml/min，紫外光检测波长304nm，柱温为25℃。白藜 芦酵在0.05-0.40μg/mL 范围内具有良好的线性关系。r=0.9996，平均回 收率为98.51%(n=5)。结论：该方法简便、准确可靠，适合于中药材虎 杖中白藜芦醇含量的测定。 关键词：白藜芦醇；虎杖；反相高效液相色谱法 Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum by Reversed-Phase HPLC BAI Zu-hai, WEN Gang, ZHANG Yan (Changsha Municipal Center for Prevention and Control of Diseases, Changsha 410001, China) Abstract：A simple and sensitive Reversed-Phase HPLC method for the determination of resveratrol in the roots of Polygonum cuspidatum was described，including the pretreatment of samples by poamide colutah. The separation was performed on an ODS column(200 mm×4.6 mm，5μm)，with the mobile phase of
【CN110066834A】一种白藜芦醇的提取方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910293456.4 (22)申请日 2019.04.12 (71)申请人 长沙市惠瑞生物科技有限公司 地址 410000 湖南省长沙市芙蓉区隆平高 科技园雄天路1号湖南金丹科技创业 大厦B栋第5层505号房 (72)发明人 王中华 (74)专利代理机构 长沙中海宏图专利代理事务 所(普通合伙) 43224 代理人 罗霞 (51)Int.Cl. C12P 7/22(2006.01) C07C 37/68(2006.01) C07C 37/72(2006.01) C07C 39/21(2006.01) A01H 4/00(2006.01)A01G 22/25(2018.01)A01C 21/00(2006.01) (54)发明名称 一种白藜芦醇的提取方法 (57)摘要 本发明涉及一种白藜芦醇的提取方法，其包 括以下步骤：1）粉碎；2）煎煮；3）接种发酵；4）酶 解；5）萃取；6）脱色干燥。本发明选用高白藜芦醇 含量的虎杖为提取原料，从源头上提高白藜芦醇 的提取率；提取方法上，釆用微生物发酵＋酶解 ＋超声波萃取相结合的技术，最大限度地保持白 藜芦醇的生物活性，并使天然白藜芦醇（98%）的 得率达到了1.8%以上，并且基本实现了三废零排 放， 有效保护了生态环境。权利要求书1页 说明书6页CN 110066834 A 2019.07.30 C N 110066834 A
权 利 要 求 书1/1页CN 110066834 A 1.一种白藜芦醇的提取方法，其特征在于包括以下步骤： 1）粉碎：选择高白藜芦醇含量的虎杖为原料，经破碎后其颗粒在0.5cm以下，再经超微粒化球磨成300目左右； 2）煎煮：加水煎煮60分钟，冷却到35℃-40℃； 3）接种发酵：接种复合菌种母液，混合均匀，密封，恒温发酵24-48h； 4）酶解：先加入5‰的仿人胃消化液，消化8-12h，加热至100℃约30-60min；再调ph值为6.5-8，然后加入5‰仿人肠消化液，消化8-12h，加热至100℃约30-60min； 5）萃取：粗滤，滤液通过超声波和加有机溶剂萃取； 6）脱色干燥：萃取液经膜分离后再上柱脫色，浓缩比重为1.2-1.25，啧雾干燥即得白藜芦醇粉。 2.根据权利要求1所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于所述的高白藜芦醇含量的虎杖为白藜芦醇含量在1%以上的虎杖原料。 3.根据权利要求1或2所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于所述的高白藜芦醇含量虎杖由以下方法培育： 1）虎杖繁育培植：选择白藜芦醇含量高的野生虎杖，进行植物培育，育种挑选出白藜芦醇含量在0.9%以上的虎杖种株进行扩大栽培； 2）虎杖栽培施肥：虎杖栽培管理期间，使用专用农肥，该专用农肥是以虎杖提取加工后的废渣60-70%，配合人工合成白藜芦醇生产废渣废水30-40%，接种微生物发酵后加工而成。 4.根据权利要求3所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于所述的植物培育为植物组织细胞培育，具体操作如下： 选择野生虎杖的根或茎切段，经无菌水清洗干净，用70%乙醇浸润消毒10-30秒，在无菌室放入准备好的组培瓶内，在25℃条件下培养7-15天； 其中培育采用的培养基由以下方法制得：1）培养基制备:愈伤组织诱导培养基即SM培养基，蔗糖含量为10g/L、2,4-D含量2mg/L；2）试验培养基:在SM培养基中加入吲哚乙酸、6-苄基氨基腺嘌呤和白藜芦醇3g/L；3）培养基灭菌:将配好的培养基加入琼脂加热溶解,调至PH5.6-5.8,无菌分装于100ml组培瓶中，每瓶约30ml,冷却后盖上组培瓶盖，在1kg/C㎡压力、121℃条件下灭菌20mim。 5.根据权利要求1所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于所述的复合菌种母液为乳酸杆菌、复合酵母菌和芽孢杆菌等量混合而成。 6.根据权利要求1所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于所述的仿人胃消化液为复合食用酸、胃蛋白酶和纤维素酶构成的混合酸，其中：所述复合食用酸由浓度为10%的食用盐酸、浓度为10%的食用醋酸及浓度为15%乳酸按体积1:1:1的比例构成，该复合食用酸的ph 值为1-2；所述胃蛋白酶活力1:400，按混合酸体积每1000ml加入3g；所述纤维素酶按混合酸体积每1000ml加入3g。 7.根据权利要求1或2或4或5或6所述的任一白藜芦醇的提取方法，其特征在于所述的仿人肠消化为胰蛋白酶和木瓜酶解等量接入。 2
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量 摘要:采用高效液相色谱法测定了虎杖不同生长条件及不同部位的白藜芦醇含量?建立了以色谱柱为Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(35∶65,V/V),流速为0.8 mL/min,检测波长为306 nm,柱温为室温,进样量为80 μL 的高效液相色谱方法?结果表明,白藜芦醇浓度在2~100 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为99.1%,RSD=1.2%(n=6)?野生虎杖和组织培养虎杖白藜芦醇含量存在较大差异,虎杖不同部位白藜芦醇含量也存在较大差异,其中以野生虎杖根中白藜芦醇含量最高?虽然在不同培养条件下,虎杖的不同部位都含有白藜芦醇,但与野生虎杖根相比含量差距较大,不能代替野生虎杖根的药用价值? 关键词:虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法 Determination of Resveratrol in Polygonum cuspidatum by HPLC Abstract: The contents of resveratrol in different growing condition and different part of Polygonum cuspidatum were detected by HPLC. The separation was performed on Zorbax CB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) in methanol-water (V/V=35/65)with the flow rate of 0.8 mL/min and detected at 306 nm in room temper ature after injecting 80 μL sample. The linear range of resveratrol was 2~100 μg/mL with an average recovery of 99.1% (RSD=1.2%,n=6). The content of resveratrol in wild and tissue culture of Polygonum cuspidatum were different, and the contents of resveratrol in different parts of Polygonum cuspidatum also varied. The highest resveratrol in Polygonum cuspidatum was observed in wild plants. Though resveratrol of Polygonum cuspidatum differed in different culture conditions, the highest resveratrol content was detected in the roots of wild Polygonum cuspidatum, which indicated that the medical value of wild Polygonum cuspidatum was irreplaceable. Key words: Polygonum cuspidatum; resveratrol; HPLC 白藜芦醇(Resveratrol)又称芪三酚,现代药理研究证明:白藜芦醇具有抗肿瘤?抗氧化?抗菌?抗炎?抗自由基?保护肝脏?保护心血管和抗心肌缺血?免疫调节?降血糖?降血脂等作用[1,2]?另外白藜芦醇还有抗衰老?皮肤保健和美容功效[3,4]?朱鸿津采用HPLC法测定虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)中白藜芦醇含量,测定结果表明,虎杖根中白藜芦醇含量可高达千分之一,可作为白藜芦醇的提取原料[5]?然而,由于虎杖根的野生资源有限,大量采挖使野生资源日趋减少,近年来有一些利用组织培养快速繁殖虎杖的报道?文涛等[6]测定发现虎杖愈伤组织中也含有白藜芦醇,并对虎杖不同部位白藜芦醇含量进行分析,结果发现虎杖根?茎?叶中均含有白藜芦醇,其中多年生根中含量最高[7]?综上所述,虎杖不同生长条件?不同部位均含有白藜芦醇?准确测定虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量,将
高中生物《绿叶中色素的提取和分离实验》精品课时练习试题
绿叶中色素的提取和分离实验 1．叶绿体色素的纸层析结果显示，叶绿素b位于层析滤纸的最下端，主要原因是( ) A．分子量最小 B．分子量最大 C．在层析液中的溶解度最低 D．在层析液中的溶液度最高 2.为研究高光强对移栽幼苗光合色素的影响，某同学用乙醇提取叶绿体色素，用石油醚进行纸层析，如图为滤纸层析的结果(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为色素条带)。下列叙述不正确的是( ) A．强光照导致了该植物叶绿素含量降低 B．类胡萝卜素含量的增加有利于该植物抵御强光照 C．色素Ⅲ、Ⅳ吸收光谱的吸收峰波长不同 D．画滤液线时，滤液在点样线上只能画一次 3．下图为新鲜菠菜叶中四种色素的相对含量及在滤纸条上的分离情况。下列说法不正确的是( ) A．叶绿体中的四种色素分布在类囊体薄膜上 B．四种色素均可溶于有机溶剂无水乙醇中 C．四种色素在层析液中溶解度最大的是甲 D．发黄的菠菜叶中色素含量显著减少的是甲和乙 4．下列关于绿叶中光合色素的提取和分离的叙述，不正确的是( ) A．用无水乙醇提取到的各种色素的含量不同
B．色素在层析液中的溶解度不同，导致在色素带的位置不同 C．研磨绿叶时不加CaCO3，则滤纸条上四条色素带变窄的比例相同 D．只画一次滤液细线会导致滤纸条上四条色素带的宽度变窄 5．下列关于“菠菜叶中色素的提取和分离”实验的相关叙述，错误的是( ) A．提取色素后，试管不加棉塞会导致滤液颜色变深 B．若发现菠菜严重缺乏Mg，则会导致叶绿素的含量降低 C．菠菜叶中含量最多的色素在层析液中的溶解度最小 D．光合色素的获得至少需要破坏3层磷脂双分子层 6．苋菜叶片细胞中除了叶绿体含有色素外，液泡中也含有溶于水但不溶于有机溶剂的花青素(呈现红色)。某探究小组用适量体积分数为95%的酒精提取苋菜叶片中的色素，然后用层析液分离。层析结束后滤纸条上出现了不同的色素带，对色素带由上到下分析有关叙述正确的是( ) A．第一条色素带对应的色素是叶黄素 B．第二条色素带对应的色素主要吸收蓝紫光 C．第三条色素带对应的色素是呈现红色的花青素 D．第四条色素带对应的色素在层析液中溶解度最大 7．列关于“绿叶中色素的提取和分离”实验的叙述，不正确的是( ) A．可以用无水乙醇提取叶绿体中的色素 B．叶绿体中色素能够分离的原因是不同色素在层析液中的溶解度不同 C．研钵中需加入二氧化硅、醋酸钙、无水乙醇和绿叶 D．滤液细线要画得细而直，避免色素带间的部分重叠 8．颜色变化常作为生物实验结果观察的一项重要指标，下列叙述正确的是( ) A．烘干的口腔上皮细胞经健那绿染液染色后，线粒体呈蓝绿色 B．取新鲜的菠菜叶，加人少许SiO2和无水乙醇，研磨液呈黄绿色，原因是菠菜叶用量太少C．紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞发生质壁分离复原过程中，细胞液颜色变浅是液泡里的色素渗透出细胞所致 D．吡罗红染色剂可将口腔上皮细胞大部分染成红色 9．在做“绿叶中色素的提取和分离”实验时，甲、乙、丙、丁四位同学使用相关试剂的情况如表所示(“＋”表示使用，“－”表示未使用)，其余操作均正常，他们所得的实验结果依次应为( )
HPLC法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究
HP LC 法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究 Ξ C AO Y 曹 庸1,2,于华忠2,张 敏2,李国章2,萧浪涛1 (1.湖南农业大学省教委植物激素重点实验室,湖南长沙410128;2.吉首大学湖南省林产化工工程重点实验室,湖南张家界427000) 摘 要: 白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一。由于白藜芦醇对光、热不稳定,本研究建立了一套简单而提取率高的从虎杖中提取白藜芦醇的样品处理方法,研究了高效液相色谱法测定虎杖白藜 芦醇的条件。采用色谱柱:岛津Shim 2park C LC 2ODS (150mm ×6.0mm ,i.d.5μm ),以乙腈∶水(体积比为41∶59 )溶液为流动相,流速1.0m L/min ,检测波长306nm 。在此条件下,样品溶液进样质量浓度范围在500～1000μg/ m L 时,白藜芦醇含量与峰面积呈良好的线性关系。检出限为10ng/m L ,且回收率高。 关键词: 虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法 中图分类号:T Q91;S789 文献标识码:A 文章编号:0253-2417(2004)02-0061-04 HP LC DETERMINATION OF RESVERATRO L CONTENT IN PO L YG ONUM CUS PIDATUM AND THE ST ABI LITY OF RESVERATRO L C AO Y ong 1,2,Y U Hua 2zhong 2,ZH ANG Min 2,LI G uo 2zhang 2,XI AO Lang 2tao 1 (1.Hunan Provincial K ey Laboratory o f Phytohormones ,Hunan Agriculture Univer sity ,Changsha 410128,China ;2.K ey laboratory o f Hunan Forest Product &Chemical Industry Engineering ,Jishou Univer sity ,Zhangjiajie 427000,China ) Abstract :Resveratrol is one of the m ost feasible medicine for preventing human cancer.It is unstable against light and heat.An extracting method was established in this study ,which is simple ,and of high yield.S tudy on theconditions of high perfor 2mance liquid chromatography for the determination of resveratrol content was investigated to be as follow :Shim 2park C LC 2ODS column (150mm ×6.0mm ,i.d.5μm ),m obil phase CH 3CH 2C N ∶H 2O (14∶59),flow rate 1.0m L/min ,wavelength 306nm.The lineal correlation between content of resveratrol and peak area is g ood.The lower detection limit was 10ng/m L.K ey w ords :Polygonum cuspidatum ;resveratrol ;HP LC 虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc )为蓼科蓼属小灌木,为传统中药。其根茎有祛风利湿,散痰定痛,止咳化痰的作用[1]。白藜芦醇的化学名称为反-3,4′,5-三羟基二苯乙烯,分子式C 14H 12O 3,分子质量228.25[2]。存在于虎杖、葡萄等植物中,虎杖中白藜芦醇含量远远高于葡萄等其他植物[3]。现代药理学试验表明白藜芦醇对人体具有许多医药保健作用。主要包括降低血脂[4],抑制血小板活性[5],对动脉粥样硬化、冠心病具有保护作用[6],对癌症具有预防作用[7～8],实验证明它对5种人体肿瘤细胞模型均有抑制作用[9],并具有雌激素样作用[10]。20世纪90年代以来,国外对葡萄酒中白藜芦醇的保健作 Ξ 收稿日期:2003-09-28 基金项目:湖南省科技厅重点科技攻关资助项目(03J ZY 3020) 作者简介:曹庸(1966-),男,湖南泸溪人,副教授,博士生,从事天然产物开发及生物化学的研究。 第24卷第2期2004年6月 林 产 化 学 与 工 业Chemistry and Industry of F orest Products V ol.24N o.2June 2004
绿叶中色素的提取和分离练习题
绿叶中色素的提取和分离练习题 1．实验原理 （1）提取：绿叶中的色素能够溶于有机溶剂而不溶于水，可用无水乙醇等有机溶剂提取色素。 （2）分离：各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种色素相互分离。 2．实验步骤 观察结果：滤纸条上呈现四条颜色、宽度不同的色素带 考向一叶绿体中色素提取与分离的实验分析 1．下列与“绿叶中色素的提取和分离”实验有关的叙述，正确的是（）A．提取绿叶中的色素时只能用无水乙醇溶解色素 B．研磨叶片后立即加入碳酸钙可防止色素被破坏 C．叶绿素b在层析液中的溶解度小于类胡萝卜素 D．不同绿叶中的色素在滤纸条上的色带顺序不同 ▼
【参考答案】C 【试题解析】提取绿叶中的色素时，可以用无水乙醇、丙酮等有机溶剂， A错误；叶绿体色素的提取实验中，加入碳酸钙的目的是保护叶绿体色素，防止色素被破坏，应该在研磨前加入，B错误；类胡萝卜素的溶解度大，扩散速度快，位于滤纸条的上面，而叶绿素b的溶解度小，扩散速度慢，位于滤纸条的下面，C 正确；不同绿叶中的色素在滤纸条上的色带顺序相同，从上到下都是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，D错误。 【解题必备】 绿叶中色素提取和分离实验的异常现象分析 （1）收集到的滤液绿色过浅的原因分析 ①未加石英砂(二氧化硅)，研磨不充分。 ②使用放置数天的叶片，滤液色素(叶绿素)太少。 ③一次加入大量的无水乙醇(正确做法：分次加入少量无水乙醇提取色素)。 ④未加碳酸钙或加入过少，色素分子被破坏。 （2）滤纸条色素带重叠：滤纸条上的滤液细线接触到层析液。 （3）滤纸条看不见色素带 ①忘记画滤液细线或没有提取出色素。 ②滤液细线接触到层析液，且时间较长，色素全部溶解到层析液中。 2．下列对提取光合色素，进行纸层析分离的实验中各种现象的解释，正确的是（） A．未见色素带，原因可能为材料是黄化叶片 B．色素始终在滤纸上，是因为色素不溶于层析液 C．提取液呈绿色是由于其含有叶绿素a和叶绿素b D．胡萝卜素处于滤纸条最前方，是因为其在提取液中的溶解度最高
紫外分光光度法测定虎杖中白藜芦醇的含量
紫外分光光度法测定虎杖中白藜芦醇的含量作者：郑湘娟余淑娴徐晓芳万南红李玉琳张小强 【摘要】目的建立虎杖提取物中口藜芦醇含量的测定方法。 方法采用紫外分光光度法，测定波长为305 nmo结果检测浓度在3?16 Ug/ml范围内与吸光度线性关系良好(r=0. 999 0)。结论该方法 简便.快速、准确，可作为提取过程中的实时监测。 【关键词】虎杖口藜芦醇紫外分光光度法 Abstract:ObjectiveTo establish the determination method for resveratrol in extract of Polygonum cuspidatum . MethodsUV spectrophotometry was adopted with a detection wavelength of 305 nra. ResultsThere was good linear relation ship with in the range of 3?16 U g (r=0. 999 0). ConclusionThe method is simple, rapid, accurate. Key words:Polygonum cuspidatum ； Resveratrol ； UV spectrophotometry 虎杖Polygonum cuspidatum Sied. et Zucc,又名斑根紫金龙、活血龙、阴阳莲［1］,其根茎具有活血定痛、清热利湿、止咳化痰作 用。主要用于关节麻痹.湿热黄疸、经闭、咳嗽痰多.水火烫伤、跌打损伤 等症的治疗［2］。现代药理研究表明其主要有效活性成分口藜芦醇具有抗癌、抗氧化、抗血小板凝聚、抗菌、调节脂类代谢等多种功能。目前定暈 检测口藜芦醇的方法主要有高效液相色谱法(HPLC) E3L气相色谱/质谱法(GC/MS) ［4］以及气相色谱法(GC) ［5］等。 国内还未见有关用紫外分光光度法测定虎杖中口藜芦醇含量的报道。 木实验应用紫外分光光度法测定了虎杖提取液中口藜芦醇含量。现报道如下。
绿色植物中色素的提取和分离
绿色植物中色素的提取和分离
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绿色植物中色素的提取和分离 [实验名称] 绿色植物色素的提取及色谱分离 [教学目标] 知识与技能: 通过对绿色植物色素的提取与分离,了解天然产物分离提纯的方法 [教学重点] 学习柱色谱和薄层色谱分离的基本原理及操作方法 ［教学难点] 薄层色谱、柱层析实验操作要点的掌握和应用 ［教学方法] 陈述法，讲演法 ［教学过程] [讲述］【实验目的】 1. 通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法； 2. 通过对柱色谱和薄层色谱操作方法的掌握,加深了解微量有机物色谱分离、鉴定的原理。[讲述］【背景知识】 绿色植物的叶、茎中，如菠菜叶,含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素(黄）等多种天然色素。叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Ｍg)和叶绿素b(C55Ｈ70O6N４Mｇ）,其差别仅是叶绿素ａ中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素ｂ。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3 倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。胡萝卜素(C４0H56)是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即a-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。叶黄素(C4０H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。 本实验先根据各种植物色素的溶解度情况将胡萝卜素(橙）、叶黄素(黄）、叶绿素a和叶绿素b从菠菜叶中提取出来,然后根据各化合物物理性质的不同用色谱法进行分离和鉴定。 ［图示］【分离产物结构式】 叶绿素a、叶绿素b、叶黄素(黄)和β－胡萝卜素的结构式如下图所示： [讲述］【色谱法原理】 色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法。其分离原理是利用混合物中各个成分的物理化学性质的差别，当选择某一个条件使各个成分流过支持剂或吸附剂时,各成分可由于其物理性质的不同而得到分
绿叶中色素的提取和分离
《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计 学院附中陈建志 一、教材分析 生物学是以实验为基础的科学，实验教学对提高学生的生物科学素养起着无可替代的重要作用，他是素质教育和创新教育的重要场所和前沿阵地，也是基础教育改革的基础、前提和保证。 《绿叶中色素的提取和分离》是一个探究性实验，通过本实验，可以让学生知道绿叶中色素的种类和颜色对植物叶片颜色的影响，是学习光合作用的基础。 本实验要求层次较高、操作难度较大、考查频率高的一个实验，但是按照教材的实验步骤和方法，多数学生把握不够，操作不当。分离后的色带或不全或色浅，辨认困难，实验效果皆不理想。笔者在实验教学中将有关操作作了调整。 1、教材中值得推敲的地方 实验选材和研磨教材推荐用菠菜为实验材料。菠菜生长受季节的限制，有的季节很难采集。另外菠菜叶片含水量较高，较多的水分子与丙酮分子接触，降低了丙酮对色素分子的萃取率，导致提取液中含色素分子少，进而影响实验结果。 教材中选用5克叶片．相对于仅需的几滴滤液来说，显然太多，也增加了研磨的时间和难度。相对于5克叶片，5毫升丙酮又显太少。丙酮极易挥发，实验中常出现叶片未研碎。丙酮已挥发干的情况。因为研磨不彻底，提取液中色素含量少。 研磨剂的配制学生只是按课本要求按顺序添加无水、乙醇、CaCO3、SiO2，并不能很深刻的理解添加这些物质的原理和作用。
过滤装置课本要求用放置单层尼龙布的漏斗过滤滤液，但实际操作中这个方法耗时且费力。 画线方法由于学生平时的实验操作中很少用到毛细吸管，所以采用课本要求的方法划线，很难做到滤液细线细、直、均匀的要求。 色素分离装置分离色素是将滤纸条插入到加入层析液的烧杯中，为了防止层析液挥发，还可以给烧杯加盖。而实际操作很难做到滤纸条在烧杯中保持竖直，也不能有效减少层析液的挥发。 分离色素的方法课本是让色素在长形滤纸条上扩散分离，方法单一，不能很好地激发学生的创新思维。 2 实验改进 只要是新鲜、浓绿的叶片皆可选，但要对叶片作些处理。将叶片用沸水处理，即将2克叶片置于沸水中煮20—40 秒(时间不宜过长。否则会破坏色素分子的结构)后。立即捞出置于冷水中降温，再用吸水纸吸千水分．剪碎后放人研钵。 研磨剂的配制 试验设计： 1）分别在 A、B、C 三个研钵中加入 5 克剪碎的叶片 2）A 中加少量的二氧化硅和无水乙醇，B 中加少量的二氧化硅、碳酸钙和水C 中加少量的二氧化硅、碳酸钙和无水乙醇； 3）经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液（A黄绿色、B几乎无色、C 深绿色）； 4）分析实验结果得出结论：碳酸钙可以防止色素被破坏，色素可以溶于酒精但不溶于水。 通过分组对照，让学生通过具体的实验探究，更直观更容易理解提取色素过程中所添加的各种物质的作用。 过滤装置的改进将过滤用的尼龙布改为用棉花塞住漏斗口过滤，一个人就能独立完成，而且过滤速度快，操作更为简单。
绿叶中色素的提取和分离
绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计 学院附中陈建志 一、教材分析 生物学是以实验为基础的科学，实验教学对提高学生的生物科学素养起着无可替代的重要作用，他是素质教育和创新教育的重要场所和前沿阵地，也是基础教育改革的基础、前提和保证。 《绿叶中色素的提取和分离》是一个探究性实验，通过本实验，可以让学生知道绿叶中色素的种类和颜色对植物叶片颜色的影响，是学习光合作用的基础。本实验要求层次较高、操作难度较大、考查频率高的一个实验，但是按照教材的实验步骤和方法，多数学生把握不够，操作不当。分离后的色带或不全或色浅，辨认困难，实验效果皆不理想。笔者在实验教学中将有关操作作了调整。 1、教材中值得推敲的地方 实验选材和研磨教材推荐用菠菜为实验材料。菠菜生长受季节的限制，有的季节很难采集。另外菠菜叶片含水量较高，较多的水分子与丙酮分子接触，降低了丙酮对色素分子的萃取率，导致提取液中含色素分子少，进而影响实验结果。 教材中选用5克叶片．相对于仅需的几滴滤液来说，显然太多，也增加了研磨的时间和难度。相对于5克叶片，5毫升丙酮又显太少。丙酮极易挥发，实验中常出现叶片未研碎。丙酮已挥发干的情况。因为研磨不彻底，提取液中色素含量少。 研磨剂的配制学生只是按课本要求按顺序添加无水、乙醇、CaCO、3 SiO2,并不能很深刻的理解添加这些物质的原理和作用。 过滤装置课本要求用放置单层尼龙布的漏斗过滤滤液，但实际操作中这个方法耗时且费力。 画线方法由于学生平时的实验操作中很少用到毛细吸管，所以采用课本要求的方法划线，很难做到滤液细线细、直、均匀的要求。色素分离装置分离色素是将滤纸条插入到
加入层析液的烧杯中，为了防止层析液挥发，还可以给烧杯加盖。而实际操作很难做到滤纸条在烧杯中保持竖直，也不能有效减少层析液的挥发。 分离色素的方法课本是让色素在长形滤纸条上扩散分离，方法单一，不能很好地激发学生的创新思维。 2 实验改进 只要是新鲜、浓绿的叶片皆可选，但要对叶片作些处理。将叶片用沸水处理，即将2克叶片置于沸水中煮20—40 秒（时间不宜过长。否则会破坏色素分子的结构）后。立即捞出置于冷水中降温，再用吸水纸吸千水分．剪碎后放人研钵。 研磨剂的配制 试验设计： 1）分别在A 、B、C 三个研钵中加入 5 克剪碎的叶片 2） A 中加少量的二氧化硅和无水乙醇， B 中加少量的二氧化硅、碳酸钙和水 C 中加少量的二氧化硅、碳酸钙和无水乙醇； 3）经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液（A黄绿色、B几乎无色、 C 深绿色）； 4）分析实验结果得出结论：碳酸钙可以防止色素被破坏，色素可以溶于酒精但不溶于水。 通过分组对照，让学生通过具体的实验探究，更直观更容易理解提取色素过程中所添加的各种物质的作用。 过滤装置的改进将过滤用的尼龙布改为用棉花塞住漏斗口过滤，一个人就能独立完成，而且过滤速度快，操作更为简单。 画线方法的研究这一步是本实验的一个操作难点，学生很难用毛细吸管画出细、直、均匀的滤液细线。如果用钢笔沾色素、硬币边缘压线、盖玻片或者棉线画线等，则操作起来更容易。色素分离装置的制作，用厚纸板作个烧杯盖，上面剪开 1.5 —2 厘米的缝隙，滤纸条只需要从层析缸上盖子的缝隙插入到层析液中，根据实验需要可以选择缝隙数量不同的盖子做出调整。分离色素的方法的创新1）用圆形滤纸片分离。用圆形滤纸片分离，取平面培养皿 1 只，将一干燥的圆形定性滤纸盖在培养皿中，在圆形滤纸（直径为l0 cm ）中央滴上2 ~ 3滴色素提取液，静置约1 min,在滤纸的中央点成圆形的色素