细胞房使用细则

细胞间使用：

1.进细胞间作业要穿实验服，戴口罩，换鞋，随手关闭玻璃门；（口罩使用完毕后可自行

留着，以备下次使用，佩戴时间不超过10小时）。

2.在细胞间作业请保持安静，切勿高谈阔论；

3.严禁对着培养箱讲话；培养箱要轻开轻关，切勿产生剧烈震动；

4.显微镜使用完毕要立即关掉；

5.细胞实验所用实验服每两个月清洗一次；拖鞋每两个月更换清洗一次；

6.细胞间超净台负责人一个月负责清理一次；培养箱负责人每两个月负责清理一次，随时

查看水盘以确保水位不低于2/3；

7.里屋超净台切勿长时间照紫外（紫外时间不超过40分钟）如若超过将会被关闭；做完

实验照紫外半小时后主动关闭超净台以节约用电。此超净台在使用过程中确保不报警的情况下再进行操作，严禁在报警情况下作业；

8.细胞间的垃圾筒满后，实验人员请自觉清理；

9.血清，胰酶以及双抗的融化在4度冰箱内完成。

细胞房使用：

10.细胞房每两个星期大扫除一次，由做细胞实验人员完成，包括：扫地，拖地（含桌椅等

摆放物品下面），擦桌子（细胞房所有桌子）以及所放物品的摆放，最后开紫外灭菌1 小时；

11.细胞房值日生星期一早上给液氮罐中加液氮，清洗恒温水浴锅并换水，值日期间要保证

恒温水浴锅无异味，细胞房整洁；注意：配制PBS缓冲液时要换新瓶子，切勿重复利用！移液管清洗：84液及铬酸浸泡时间均不低于6小时，冲洗时间不低于4小时，如若发现有破碎及尖嘴部位极度发白的移液管请及时清理！

12.细胞房冰箱使用完毕后要确保门是关闭状态；严禁放置除细胞实验以外的所有物品，一

经发现一律清除，后果自负！处理完的实验物品切勿长时间放置于冰箱，如若两天后仍发现没人处理将会被清除，后果自负！

13.非做细胞实验时间，闲杂人等切勿在细胞房内逗留。

14.非细胞实验请勿使用细胞房离心机以及移液器。

实验室是我家，爱护靠大家！望大家尽力克服一切困难，为科研顺利进行尽自己的一份绵薄之力！

细胞房注意事项和管理范文

细胞房注意事项和管理

员清洗回收培养器皿；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况；至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情：星期五全方位打扫细胞房。包括拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换（一个月更换一次）！ 5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞能够暂存于其它细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。 .6.9培养箱使用注意事项 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。 * 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精

细胞房注意事项和管理

细胞房注意事项与管理一、常规操作 1、穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套,可脱在门外的衣帽架上。 2、穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子,穿着绿色拖鞋进入缓冲间;再在缓冲间换红色拖鞋。尽量避免在缓冲间走动、停留。３、细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。 4. 离开细胞房前,要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头(离心机、水浴锅、日光灯),超净台开启紫外灯照射2h后关闭。二、值日生工作职责 1、每周值日生时间从周一开始,至周日结束。 2、值日周开始时需做的事情:配制消毒用的７5%的酒精,制作酒精棉球,给细胞房内添加足够的9５％工业乙醇供酒精灯使用。＊ 75％的酒精可用750ｍl９5%的酒精加去离子水至950ｍl配制而成。 3、值日周内每天需做的事情:开大紫外灯消毒细胞房15-3０miｎ后才能投入一天的使用,晚上开启紫外灯灭菌,第二天及时关闭;检查灭菌物品的储备情况,以便及时补充;及时安排人员清洗回收培养器皿;检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况;至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋;检查培养箱内水量就是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情:星期五全方位打扫细胞房。包括拖地,擦桌子、柜子、清洁与整理抽屉,擦超净台、冰箱及桌上的仪器,给水浴锅加水或换水,洗细胞房专用的实验服与拖鞋,紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液就是否需要更换(一个月更换一次)！ 5. 每２周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内,对于比较敏感的细胞可以暂存于其她细胞房的培养箱;将培养箱内的不锈钢板取出,包括4块横板与左右2块立着的架子,用酒精棉球清洁钢板与培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命;用紫外灯照射培养箱内部15min,手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。２０１4、6、９

细胞房管理规章制度

细胞房管理规章制度细胞房是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度。第一章总则第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人和细胞房负责人同意。第二条新养细胞的同学，需先跟随由负责人指定的人员学习，同时学习并熟记细胞房管理条例，最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备。第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。实验用品应尽量一次带入，严禁将和实验无关的物品带入实验室，在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。第二章条例第一条常规操作穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。穿着专用拖鞋。在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。细胞房最多可4个人同时使用。实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出培养室。离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记。第二条培养箱使用规则 1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。更换隔离服、戴口罩更换拖鞋进入细胞房

3.培养瓶/皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 4.普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。第三条显微镜使用规则 1.倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2.短时间内需再次使用显微镜时，为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源，但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。第四条超净台相关操作规则 1.超净台使用遵循预约原则。在细胞房入口处预约，细胞房内填写使用登记。 a ：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。 b ：预约内容请包括：预约时间、姓名、使用日期、使用时间段、实验内容。 2.使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。 3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。 4.超净台中应摆放废液缸，用于暂时存放废弃物，实验结束后将废液缸带走，废液垃圾倒入水池并同时用水冲释，固体垃圾倒入垃圾桶中注：液缸应及时处理，严禁长时间放置，以免留有大量培养液滋生细菌。 5. 细胞实验后任何含有细胞培养污物的培养瓶，离心管，移液管等必须及时带出细胞房。第五条器具的清洗规则预约超净台检查酒精灯酒精消毒（超净台+实验物品）使用超净台酒精消毒超净台带走废品

细胞房注意事项和管理

细胞房注意事项和管理一、常规操作 1. 穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。 2. 穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子，穿着绿色拖鞋进入缓冲间；再在缓冲间换红色拖鞋。尽量避免在缓冲间走动、停留。 3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。 4．离开细胞房前，要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头（离心机、水浴锅、日光灯），超净台开启紫外灯照射2h后关闭。二、值日生工作职责 1. 每周值日生时间从周一开始，至周日结束。 2. 值日周开始时需做的事情：配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够的95%工业乙醇供酒精灯使用。 * 75%的酒精可用750ml95%的酒精加去离子水至950ml配制而成。 3. 值日周内每天需做的事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min后才能投入一天的使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天及时关闭；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充；及时安排人员清洗回收培养器皿；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况；至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情：星期五全方位打扫细胞房。包括拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换（一个月更换一次）！

5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于其他细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。 2014.6.9培养箱使用注意事项 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。 * 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。 * 频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。超净台操作规则 1. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。

细胞复苏步骤和注意事项

细胞复苏步骤注意事项：【材料】 1. 常规细胞培养仪器设备恒温水浴振荡器。 2. 培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】 1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。 2. 培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱370C预热20min，备用。 3. 二甲基亚砜（DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，备用。 4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。 5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。 6. 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。 7. 记录复苏日期。【注意事项】 1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。 2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min 内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）最好选择进口产品。 3. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。 4. 离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。 5. 细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。 6. 复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。 7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。一、原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

细胞房工作守则及注意事项

细胞房工作守则及注意事项细胞房工作守则及注意事项一、?常规操作 ??1.?穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。 2.?穿着专用拖鞋。在缓冲间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。 3.?细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。二、?培养箱使用规则三、??1.?从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。四、注：?培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。五、 2.?培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。六、 3.?2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。七、 4.?普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。八、注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。九、十、?显微镜使用规则十一、??1.?显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。十二、 2.?离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。十三、十四、?超净台相关操作规则

十五、??1.?超净台使用遵循预约原则。无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。十六、??2.?超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。十七、??3.?点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。十八、注：?消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。十九、注：?酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。二十、??4.?超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内垃圾倒入水池或垃圾桶中，并冲洗晾干备用。二十一、注：?将废弃的枪头、管子内的残留液体打（倒）入废液杯后再弃入废品杯中，以免垃圾桶内留有大量培养液滋生细菌。二十二、??5.?可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。二十三、注：?可回收器皿必要时先初步涮洗后再放入桶内，尤其是培养瓶或血清管中有大量高营养的液体残留时，容易使桶内的清水长菌。二十四、保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。二十五、塑料桶内物品由值日生每天负责送去清洗，使用者实验结束后若发现桶已装满，请通知值日生或顺手将塑料桶带出细胞房。二十六、??6.?装培养液的瓶子、配培养液的器皿勿放入塑料桶内浸泡！应由使用者本人及时清洗晾干备用。二十七、注：?因桶内物品通常要浸泡几小时以上才送去清洗，此时细菌可能已在桶中生长并释放内毒素。细菌内毒素很难通过常规湿热灭菌步骤去除干净，即使干烤也不能保证其完全失活。内毒素对细胞生长及多种实验均有较大影响。二十八、?洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留，然后冲去离子水3次，再用双蒸水1次，倒置于器皿柜中晾干。关上器皿柜的门防尘。二十九、三十、?培养液、试剂等相关操作规则三十一、??1.?从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。

细胞房使用细则

细胞房使用细则细胞间使用： 1.进细胞间作业要穿实验服，戴口罩，换鞋，随手关闭玻璃门；（口罩使用完毕后可自行留着，以备下次使用，佩戴时间不超过10小时）。 2.在细胞间作业请保持安静，切勿高谈阔论； 3.严禁对着培养箱讲话；培养箱要轻开轻关，切勿产生剧烈震动； 4.显微镜使用完毕要立即关掉； 5.细胞实验所用实验服每两个月清洗一次；拖鞋每两个月更换清洗一次； 6.细胞间超净台负责人一个月负责清理一次；培养箱负责人每两个月负责清理一次，随时查看水盘以确保水位不低于2/3； 7.里屋超净台切勿长时间照紫外（紫外时间不超过40分钟）如若超过将会被关闭；做完实验照紫外半小时后主动关闭超净台以节约用电。此超净台在使用过程中确保不报警的情况下再进行操作，严禁在报警情况下作业； 8.细胞间的垃圾筒满后，实验人员请自觉清理； 9.血清，胰酶以及双抗的融化在4度冰箱内完成。细胞房使用： 10.细胞房每两个星期大扫除一次，由做细胞实验人员完成，包括：扫地，拖地（含桌椅等摆放物品下面），擦桌子（细胞房所有桌子）以及所放物品的摆放，最后开紫外灭菌1 小时； 11.细胞房值日生星期一早上给液氮罐中加液氮，清洗恒温水浴锅并换水，值日期间要保证恒温水浴锅无异味，细胞房整洁；注意：配制PBS缓冲液时要换新瓶子，切勿重复利用！移液管清洗：84液及铬酸浸泡时间均不低于6小时，冲洗时间不低于4小时，如若发现有破碎及尖嘴部位极度发白的移液管请及时清理！ 12.细胞房冰箱使用完毕后要确保门是关闭状态；严禁放置除细胞实验以外的所有物品，一经发现一律清除，后果自负！处理完的实验物品切勿长时间放置于冰箱，如若两天后仍发现没人处理将会被清除，后果自负！ 13.非做细胞实验时间，闲杂人等切勿在细胞房内逗留。 14.非细胞实验请勿使用细胞房离心机以及移液器。

细胞房房管理规章制度及细则

细胞房房管理规章制度及细则第一项、所有使用人员要严格按照无菌标准进行操作。第一条使用人员要严格执行无菌操作，保持实验室清洁。 ①每日第一个开门者，必须将开门时间记录在《细胞房预约登记表》上。 ②使用细胞房者，统一从604门口进入。一更处换鞋，脱外套。二更处穿隔离衣、戴口罩，手套和帽子（头发必须全部进入帽子）。 ③进入风淋间，必须吹满10s，不允许急停。不可携带物品进入风淋间。 ④所有进出细胞房的物品，必须由传递口出入。洁净物品和污物各有一个传递口，不允许污物放置于洁净物传递口内。洁净物、废液桶进入传递口必须先紫外照射10min。 ⑤废弃物不可留滞于细胞房。 ⑥超净台使用结束后，打开紫外灯15分钟，然后关闭。 ⑦气瓶间房门如无特殊情况，完全关闭，不允许随意打开。 ⑧如需观察气瓶供气和更换气瓶时，可打开602门，平时不允许随意打开。 ⑨每周日晚8点半之后停止使用细胞房，安排值日生打扫卫生。如有特殊情况需要使用细胞房者，请提前向管理老师报备，并通知值日生。第二条未培养过细胞的人员，不可独立使用细胞房。 ①必须在管理老师或者高年级研究生指导下进行操作。 ②考试合格后，方能独立使用细胞房。考试不合格者，不得独立使用细胞房。 ③如发现擅自使用细胞房，将追究其责任。第三条未经管理老师许可，不得私自带外来人员使用细胞房和细胞房内仪器设备。不得在细胞房做任何与细胞培养无关试验。第二项、细胞房使用实行预约制，使用人员必须提前预约。使用人员须在《细胞房预约登记表》上预约使用房间、使用人员姓名、使用时间等信息。严格按照预约登记使用细胞房。第一条如预约取消，必须及时将预约信息删除。第二条未登记预约使用细胞房；或在预约时间内，无人使用细胞房等行为将视为违规。

细胞房注意事项

细胞房注意事项 1.进出细胞房必须换拖鞋，勿将细胞房内拖鞋穿出细胞房，房外拖鞋也不可进入房内。进入细胞房换上细胞房专用白大褂和专用实验服，勿将一楼动物实验的白大褂带进细胞房。 2.实验结束后及时清理台面，勿将垃圾留在实验台面。整齐摆放各类物品。实验室放置物品请写上姓名和标识。实验后及时清洗实验用品，勿将要洗的用品留在洗涤盆过夜。 3.实验后检查显微镜/酶标仪/培养箱/离心机/超净台（显微镜在关闭电源前务必将光源调至最暗）。离心时保存两端平衡。 4.实验中用到毒害物质或者有感染物质的，请先进行汇报，得到同意后才可进行实验。 5.注射器针头、玻璃等利器扔进利器盒，勿直接丢垃圾桶。丢弃到实验室规定的盒子内。 6.培养瓶等放进培养箱前用，可用75%酒精消毒培养瓶表面，水平放置。若有培养液渗出培养箱，一定要立即用75%酒精擦拭。7.培养箱内发现细菌等污染，立即将污染的培养瓶丢弃，并及时报告实验室工作人员对污染区域进行消毒。 8.在使用酒精灯过程中，手上酒精挥发干后方可靠近酒精灯操作，切勿将表面有酒精的物品靠近火苗。 9.值日人员检查：显微镜/酶标仪/培养箱/离心机/超净台。 10.写好预约本和登记本的各项登记。

细胞房工作人员职责：定期检测下列项目： 1.CO2 钢瓶之CO2 压力 2.CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。 3.无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 4.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。

细胞房工作守则及注意事项

细胞房工作守则及注意事项一、常规操作 1. 穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。 2. 穿着专用拖鞋。在缓冲间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。 3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。二、培养箱使用规则 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。 4. 普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。三、显微镜使用规则 1. 显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2. 离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。四、超净台相关操作规则 1. 超净台使用遵循预约原则。无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先

征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。 2. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。 3. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。注：酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。 4. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内垃圾倒入水池或垃圾桶中，并冲洗晾干备用。注：将废弃的枪头、管子内的残留液体打（倒）入废液杯后再弃入废品杯中，以免垃圾桶内留有大量培养液滋生细菌。 5. 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。注：可回收器皿必要时先初步涮洗后再放入桶内，尤其是培养瓶或血清管中有大量高营养的液体残留时，容易使桶内的清水长菌。保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。塑料桶内物品由值日生每天负责送去清洗，使用者实验结束后若发现桶已装满，请通知值日生或顺手将塑料桶带出细胞房。 6. 装培养液的瓶子、配培养液的器皿勿放入塑料桶内浸泡！应由使用者本人及时清洗晾干备用。注：因桶内物品通常要浸泡几小时以上才送去清洗，此时细菌可能已在桶中生长并释放内毒素。细菌内毒素很难通过常规湿热灭菌步骤去除干净，即使干烤也不能保证其完全失活。内毒素对细胞生长及多种实验均有较大影响。洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留，然后冲去离子水3次，

细胞实验室安全管理制度

细胞实验室安全管理制度一、实验室内严禁烟火，也不能在实验室内点火取暖，严禁闲杂人员入内。二、充分熟悉安全用具，如灭火器、急救箱的存放位置和使用方法，并妥加爱护，安全用具及急救药品不准移作它用。三、不得私自将药品带出实验室。六、有危险的实验在操作时应使用防护眼镜、面罩、手套等防护设备。七、能产生有刺激性或有毒气体的实验不能进入细胞实验室。八、浓酸、浓碱具有强烈的腐蚀性，用时要特别小心切勿使其溅在衣服或皮肤上。废酸应倒入酸缸，但不要往酸缸里倾倒碱液，以免酸碱中和放出大量的热而发生危险。九、实验中所用药品不得随意散失、遗弃，对反应中产生有害气体的实验应按规定处理，以免污染环境，影响健康。十、实验完毕后，对实验室作一次系统的检查，随时关好门窗，防火、防盗、防破坏。上海第二工业大学附属龚路中学化学实验室安全使用操作规程 19 / 1 为了顺利地做好化学实验，保证实验成功，保护实验仪器设备，特制

订本实验室安全操作防止一切实验事故，维护每个师生的安全，规程。一、未进实验室时，就应对本次实验进行预习，掌握操作过程及原理，弄清所有药品的性质。估计可能发生危险的实验，在操作时注意防范。二、实验开始前，检查仪器是否完整无损，装置是否正确稳妥。实验进行时，应该经常注意仪器有无漏气、碎裂，反应进行是否正常等情况。灯火还没熄灭时，灯火加热时要注意安全。在酒精灯快烧尽、三、千万不能注入燃料；酒精灯熄灭时，要用灯帽来罩，不要用口来吹，引起燃烧。不要用一个酒精灯来点燃，以免酒精溢出，防止发生意外；点燃的火柴用完后立即熄灭，不得乱扔。点燃氢气前必须检查氢气的纯度。要严禁烟火，四、使用氢气时，使用易燃、易爆试剂一定要远离火源。五、要注意安全用电，不要用湿手、湿物接触电源，实验结束后应及时切断电源。以防液滴飞溅造成伤害。切勿俯视容器，六、加热或倾倒液体时，给试管加热时，切勿将管口对着自己或他人，以免药品喷出伤人。七、嗅闻气体时，应保持一定的距离，慢慢地用手把挥发出来的气体少量地煽向自己，不要俯向容器直接去嗅。 19 / 2 八、凡做有毒和有恶臭气体的实验，应在通风橱内进行。九、取用药品要选用药匙等专用器具，不能用手直接拿取。十、未经许可，绝对不允许任意混合各种化学药品，以免发生意外事

细胞房管理规章制度

细胞房管理规章制度【篇一：细胞房管理规章制度】细胞房管理规章制度细胞房是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度。第一章总则第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人和细胞房负责人同意。第二条新养细胞的同学，需先跟随由负责人指定的人员学习，同时学习并熟记细胞房管理条例，最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备。第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。实验用品应尽量一次带入，严禁将与实验无关的物品带入实验室，在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。第二章条例第一条常规操作穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。穿着专用拖鞋。在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。细胞房最多可4个人同时使用。实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出培养室。离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记。第二条培养箱使用规则 1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。

3.培养瓶/皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 4.普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。第三条显微镜使用规则 1.倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2.短时间内需再次使用显微镜时，为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源，但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。第四条超净台相关操作规则 1.超净台使用遵循预约原则。在细胞房入口处预约，细胞房内填写使用登记。 a：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。 b：预约内容请包括：预约时间、姓名、使用日期、使用时间段、实验内容。 2.使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。 3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。 4.超净台中应摆放废液缸，用于暂时存放废弃物，实验结束后将废液缸带走，废液垃圾倒入水池并同时用水冲释，固体垃圾倒入垃圾桶中注：液缸应及时处理，严禁长时间放置，以免留有大量培养液滋生细菌。 5. 细胞实验后任何含有细胞培养污物的培养瓶，离心管，移液管等必须及时带出细胞房。第五条器具的清洗规则 1.可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有碱液的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的水以没过浸泡物品。注：保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。

细胞房工作守则及注意事项

细胞房工作守则及注意事项 Last revised by LE LE in 2021

细胞房工作守则及注意事项细胞房工作守则及注意事项一、常规操作 1.穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。 2. 穿着专用拖鞋。在缓冲间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。 3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。二、培养箱使用规则三、1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。四、注：五、培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。六、 2. 七、培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。八、 3. 九、2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。十、 4. 十一、普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。十二、注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。十三、显微镜使用规则十四、1.显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。十五、 2. 十六、离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。十七、超净台相关操作规则十八、1.超净台使用遵循预约原则。无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。十九、2.超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。二十、3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。二十一、注：二十二、消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。二十三、注：

细胞培养室工作守则及注意事项

细胞培养室工作守则及注意事项一、常规操作 1. 穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。 2. 穿着专用拖鞋。在缓冲间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。 3. 细胞室最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。 4. 不允许带无关人员进入，禁止往实验室带小鼠，食物等。二、培养箱使用规则 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。 4. 普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。三、显微镜使用规则 1. 显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2. 离开细胞室时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。四、超净台相关操作规则 1. 超净台使用遵循预约原则。无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。 2. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒

精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。 3. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。注：酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发现细胞室内存放量不足时请及时通知值日生。 4. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内垃圾倒入水池或垃圾桶中，并冲洗晾干备用。注：将废弃的枪头、管子内的残留液体打（倒）入废液杯后再弃入废品杯中，以免垃圾桶内留有大量培养液滋生细菌。 5. 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。注：可回收器皿必要时先初步涮洗后再放入桶内，尤其是培养瓶或血清管中有大量高营养的液体残留时，容易使桶内的清水长菌。保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。塑料桶内物品由值日生每天负责送去清洗，使用者实验结束后若发现桶已装满，请通知值日生或顺手将塑料桶带出细胞室。 6. 装培养液的瓶子、配培养液的器皿勿放入塑料桶内浸泡！应由使用者本人及时清洗晾干备用。注：因桶内物品通常要浸泡几小时以上才送去清洗，此时细菌可能已在桶中生长并释放内毒素。细菌内毒素很难通过常规湿热灭菌步骤去除干净，即使干烤也不能保证其完全失活。内毒素对细胞生长及多种实验均有较大影响。洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留，然后冲去离子水3次，再用双蒸水1次，倒置于器皿柜中晾干。关上器皿柜的门防尘。

细胞培养的过程及注意事项

36细胞培养的过程及注意事项细胞的培养过程及注意事项；根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细；一、原代培养；（一）过程；原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种；1、组织块培养法；(1)基本操作过程；1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪；2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清 (1)基本操作过程 1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks液漂洗多次，直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。

2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养瓶皿中，并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上，量不要过多，要将组织块切面贴在培养瓶底壁上； 3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，勿使组织块与培养液接触，塞紧瓶塞； 4）、将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1 4）、为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。细胞培养过程中，胶原中的促细胞贴附因子先吸附于培养瓶底壁上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴物质的底壁附着。 2、分离细胞培养法—贴壁型细胞培养

（1）基本操作过程 1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。用筛网滤掉未消化的组织块。 2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制然但足，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。 2）原代培养时初始培养在组织分散和分离细胞时细胞可能会受到严重的损伤。适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更多的类似于在体内

细胞房管理规章制度

细胞房管理规章制度集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）

细胞房管理规章制度细胞房是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度。第一章总则第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人和细胞房负责人同意。第二条新养细胞的同学，需先跟随由负责人指定的人员学习，同时学习并熟记细胞房管理条例，最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备。第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。实验用品应尽量一次带入，严禁将与实验无关的物品带入实验室，在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。第二章条例第一条常规操作穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。穿着专用拖鞋。在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。细胞房最多可4个人同时使用。实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出培养室。离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记。

第二条培养箱使用规则 1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。 3.培养瓶/皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 4.普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。第三条显微镜使用规则 1.倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2.短时间内需再次使用显微镜时，为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源，但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。第四条超净台相关操作规则 1.超净台使用遵循预约原则。在细胞房入口处预约，细胞房内填写使用登记。 a：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。 b：预约内容请包括：预约时间、姓名、使用日期、使用时间段、实验内容。 2.使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。 3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。

细胞房的使用和操作规范 - 复件

细胞房的使用及操作制度一、操作人员制度 1.新进细胞房操作前，必须首先了解细胞培养的基本要求，进行必要的培训。培训考核合格后授予其细胞室使用权限。 2.为保持无菌室清洁，进入无菌室必须在缓冲间更换专用拖鞋、工作服、戴好帽子和口罩。 3.进入细胞间后随手关门。缓冲间拉门与无菌室拉门不能同时开放，否则失去缓冲间作用。 4.无菌室室内禁止不带口罩开口说话，禁止大声喧哗。 5.专用工作服、拖鞋禁止在室外穿用，定期清洗并消毒，请勿将其带出无菌室。 6.个人配制的试剂需标明试剂名称、配制日期及配置人，冰箱内试剂摆放位置都要固定化，并作好标记。禁止交叉乱用，乱放，造成可能的污染扩大，所有人员未经本人许可不得使用他人的物品和位置。 7.个人用灭菌物品必需注明消毒人、物品名称、消毒日期。灭菌后物品放在指定位置，高压灭菌物品可存放7-14天，过期不能再用，需重新包装灭菌。二、无菌操作 1.实验人员的无菌准备 1)实验前应用肥皂洗手。 2)更换专用拖鞋、工作服、戴好帽子和口罩。 3)75%酒精消毒手掌、手背。 2.操作台中的无菌操作(此处为操作考核中需要注意的要点内容) 1)生物安全柜使用前用经紫外照射灭菌30分钟，实验人员打开通风在通风条件下进行实验操作。 2)在通风条件下，先点燃酒精灯（点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3），再用酒精棉擦拭超净台桌面（尽可能的大于自己所用台面），同时保持工作区域的宽敞。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。 3)超净台虽经紫外照射除菌，但操作时仍应靠近酒精灯火焰。

4)操作时应尽量减少手臂的运动，尽可能避免左右手交叉（近手操作）：把需要有用的工具和试剂尽可能放在手边，以酒精灯为界，左手用的东西放在酒精灯的左边，右手用的东西放在右边。例如，一个右手操作者要从试剂瓶里吸取液体，则移液枪应放在右手，而枪头与试剂瓶都应放在左手边。 5)带入操作台中的物品，应注意：经高压灭菌烘干的物品以及各种装培养基、缓冲盐等的瓶子、试管架、胶塞等应先用75%酒精擦拭或喷洒后再放入超净台。进入操作台操作前的手掌手背以及将要放入培养箱的培养瓶，培养板和培养皿都应用喷洒75%酒精。 6)要养成用镊子操作的习惯：拿取饭盒中的各类物品，尽可能用镊子去夹取；对于小的物品，如瓶盖、枪头、EP管，应避免用手直接去拿取。 7)保持试剂瓶与桌面成约45℃时打开盖子或移取液体：这样可以尽量减少空气的污染以及在移液时产生最少的气溶胶。 8)在打开试剂瓶、拿取瓶盖、镊子及玻璃移液管等时都要用火烧下：灼烧不是为了灭菌，只需在火焰上燎1~3秒即可。灼烧一下瓶口和移液管等，使颗粒固定在表面和制造一个向上的气流，以减少掉落颗粒的数量。培养基等试剂长时间不用时需要盖上瓶盖。 9)打开的瓶子，应放在酒精灯火焰旁，瓶盖反放朝上。禁止在打开试剂瓶包括瓶盖的正上方进行实验操作（包括跨越敞开的开试剂瓶上方去拿取东西）。禁止手触碰到瓶口或瓶盖。 10)将移液枪头中的液体打入培养瓶和离心管时应是悬空打入。将培养瓶中的液体倒入废液缸以及将枪头打入废液缸时，培养瓶和枪头需要与废液缸保持一定的距离。当枪头的尖端碰触到任何非灭菌物品包括瓶口螺纹的外缘时，必须重新换取新枪头。当液体泼溅时应该立即用75%的乙醇擦拭该区域。 11)用PBS清洗细胞后需用移液枪吸净培养瓶中剩余的PBS，以免造成对胰酶的稀释；加入培养基终止胰酶消化后也需用移液枪吸净培养瓶中剩余的培养基以减少胰酶对细胞的损伤。 12)实验结束后，将操作台中的个人物品拿出操作台，并将公共物品摆放整齐，用酒精棉擦拭桌面，将废液缸中的废弃物倒入垃圾桶，向废液缸内喷