生物制品考试复习题

第一章：生物制品概述

1.生物制品：生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术（以基因工程、细胞工程）制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。

生物制品的分类:根据不同的标准有不同的分类

（一）按照其用途分为以下三大类

1、预防用生物制品：这类主要是疫苗

2、诊断用生物制品

3、治疗用生物制品：包括抗血清、抗毒素、微生态制剂、免疫制剂如干扰素、细胞因子等。

（二）按制备方法及物理性状分类：

1、粗制品（普通制品）：未经浓缩纯化的生物制品，如普通的结核菌素，用的较少。

2、精制品：将粗制品用物理或化学方法除去无效成分，进行浓缩提纯制成精制品。如精制破伤风类毒素及抗毒素、精制人白细胞干扰素、提纯的结核菌素（PPD）等。

3、多联多价制品：一种剂型的成分包括几个同类制品者称多联制品；一种剂型的成分包括同一制品的不同群、型别者称多价制品。如犬六联苗可预防犬瘟热病、犬细小病毒病、犬钩端螺旋体病、传染性肝炎、传染性支气管炎和副流感病。

4、液态制品：一些疫苗、诊断试剂如血清等是液体状的生物制品。如大多数灭活疫苗、新型疫苗等。

5、冻干制品：是将液体制品经真空冷冻干燥制成的固体制品。这类制品有利于保存、运输和使用，几乎所有活菌苗、减毒活疫苗都为冻干制品。

6、吸附制品（佐剂制品）：在液体制剂中加入氢氧化铝或磷酸铝等佐剂后制成。这类制品具有延长刺激时间（使抗原缓慢释放持续刺激机体）、增强免疫效果和减少注射次数及剂量等优点。

3.生物制品的发展前景

1、改善和提高现有传统疫苗的质量，改进品种结构

2.研制针对新疫病的疫苗

3、研制高效的新型疫苗

4、与疫苗直接相关的新型佐剂、免疫增强剂、活疫苗耐热保护剂的研究开发将成为热门

5.随着新技术、新材料、新方法的出现，诊断制品的研制将进入异常活跃的时代

第二章：生物制品的菌种与毒种

1.菌、毒种系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、立克次体或病毒，以下简称菌、毒种

2.LD50（半数致死量）:是指能够引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表示。原代培养：也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞，组织和器官进行的第一次的培养物

传代培养：当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容

器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养。

SPF动物:无特定病原体动物：不带有指定的致病性微生物和寄生虫的动物。带有非特定的微生物和寄生虫。

3.强毒株选育流程路线

选育目的：强菌（毒）种广泛用于灭活疫苗、诊断试剂、抗血清、攻毒试验。

4.弱毒株选育目的及流程

1）目的：弱毒菌（毒）种主要用于弱毒活疫苗、部分诊断制品和抗血清的制造。

5.鸡胚接种途径

1）卵黄囊接种，用6～8日龄鸡胚；在气室中心，胚胎对侧刺入3cm（先用三棱针钻孔）。用于病毒，立

克次氏体，衣原体接种。

2）尿囊腔接种，用9-11日鸡胚，在气室边缘下2cm，避开血管，40°进针0.5-1.5cm。适应鸡新城疫，鸭肝炎，鸡传染支气管炎病毒接种。

3）羊膜腔接种：用10-12日鸡胚，在胚胎对侧进针，有抵抗时注入病毒。

4）绒毛尿囊膜接种：选11-13日鸡胚，先造人工气室，然后在人工气室内注射，适合痘病毒，疱疹病毒等。

6.病毒细胞培养的优点：

（1）没有隐性感染的危险：直接用动物培养病毒，动物可能带有某些病毒的隐性感染，往往有干扰作用和假阳性出现。细胞培养一方面是来源于动物部分组织，减少了隐性感染的机会，另一方面组织培养细胞可进行预先检查而加以克服。

（2）没有免疫力：动物经隐性感染获得免疫力，对接种病毒会发生抵抗，但由于后天免疫一般不表现在细胞抵抗力的增加，因此离体细胞无免疫力，利于病毒生长。

（3）容易选择易感细胞：

细胞来源方便，可供作病毒敏感性的筛选，可以从中选择最敏感的细胞以满足实验要求，同时还利于从单一细胞水平上研究病毒的繁殖过程和病毒一细胞的相互关系。

（4）接种量大：动物和鸡胚的接种均受数量、年龄、途径的限制，细胞不仅可以大量生产，而且还可较久地持续培养，便于病毒生长，特别是对那些生长缓慢或需在新环境中逐渐适应的病毒更为有利。

（5）培养条件易于控制：由于细胞培养可以用人工控制温度、气体、pH、培养基成分，因此可采用大规模生产方式来生产细胞和病毒及其细胞产物。

（6）提高了疫苗的产量和质量：细胞的大量生产可满足疫苗产量的需求，而且异性蛋白少，引起变态反应机会少。疫苗中污染菌少或无，可随制随用，成本低，来源方便，便于贮存，且效力均匀，易标准化。（7）加速病毒分离过程：病毒分离采用细胞培养不仅阳性率高，而且分离过程可显著加速早出结果，但应用对该病毒敏感的细胞。

第三章：预防用生物制品

1.疫苗：一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱导机体产生针对特定致病原的特异性抗体或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭该致病原能力的生物制品，统称为疫苗。包括: 蛋白质、多糖、核酸、活载体或感染因子等

2.灭活剂：灭活是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能不影响其免疫原性，用以制备灭活疫苗。广义的灭活还包含灭能，即使一些活性物质丧失活力的过程。来灭活的药物称为灭活剂，又称化学灭活剂。

3.佐剂的概念：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强抗原物质的免疫原性，增强机体的免疫应答，或者改变机体免疫应答类型，这种物质称为佐剂，也称免疫佐剂或抗原佐剂。最新的概念为凡是可以增强抗原特异性免疫反应的物质均称为佐剂

4.疫苗的基本成分：抗原、佐剂、防腐剂、稳定剂、灭活剂、缓冲液、盐类

5.疫苗的分类

1）按所用材料分类：细菌性疫苗、病毒性疫苗、类毒素

2）按疫苗研制技术分类：1）传统疫苗：灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗2）新型疫苗：基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗

3.按其基本特征分类：活疫苗、灭活疫苗

6.疫苗灭活方法：物理方法:一般常用热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和γ射线灭活等方法杀死微生物或消除其毒性。

化学方法:利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变，从而丧失生命力、感染性、毒性或活性。

7.常用灭火剂及灭活机理

1）甲醛甲醛的灭活机制是还原作用，低浓度时能破坏微生物的生命链，从而丧失活力或毒性而保存抗原性；高浓度时与微生物蛋白质的氨基结合形成另一种化合物，从而破坏、杀死微生物。

2）苯酚苯酚的灭活机制是使微生物蛋白质变性和抑制特异酶系统的活性(如脱氨酶、氧化酶等)，从而导制微生物死亡。生物制品的常用量为0 3％～0 5％。

3）β-丙内酯

β-丙内酯的灭活机制是破坏病毒的核酸，但不损害衣壳蛋白，因此能保持良好的免疫原性，

4）结晶紫

结晶紫的灭活机制主要是它的阳离子与微生物蛋白质带负电的羧基形成弱电离化合物，妨碍了微生物的正常代谢，扰乱微生物的氧化还原作用，使电势太高而不适合于微生物的增殖。

5）硫柳汞

用作生物制品的防霉和消毒剂，对霉菌、细菌和病毒都有一定的灭活作用。常用浓度为0.01％～0.02％。

6）烷化剂

灭活机制是烷化微生物DNA分子中的鸟嘌呤（G）或腺嘌呤（A），引起单链断裂、双螺旋链交联及干扰酶系统和核蛋白作用，从而破坏核酸代谢、合成，导致病毒核酸芯子破坏而达到灭活目的。烷化剂灭活，可使病毒丧失感染力而不损害蛋白壳，得以保留其抗原性

8.理想的佐剂的标准

1）佐剂物质应安全、无毒、无致癌性，也不应是辅助致癌物，不能诱导、促进肿瘤形成。通过肌肉、皮下、静脉、腹腔、滴鼻、口服等各种途径进入动物体后无任何副作用。

2）佐剂物质应有较高的纯度，有一定的吸附力，最好吸附力强。

3）佐剂物质应具有在动物体内降解吸收的性质，不宣长时期留存而诱发组织损伤。

4）佐剂物质不应诱发自身超敏性，不含有与动物有交叉反应的抗原物质。

5）佐剂物质应稳定，佐剂抗原混合物储存1年以上不分解、不变质和不产生不良反应。

9.灭活苗、活疫苗、类毒素的制作过程

1）灭活苗的制作过程：军中的选择→菌液的培养→灭活→浓缩→配苗

（一）菌种与种子

1.菌种

制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个品系，均由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、冻干保存和供应。

2.种子培养

将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定的培养基进行增殖培养，经纯粹检查、活菌计数达到标准后即为种子液，用于菌苗生产。种子液通常保存于2-8 C冷暗处，不得超过规程规定的使用期限。（二）菌液培养

大量生产的细菌培养方法甚多，既有手工式的，也有机械化或自动化的培养方式。

机械化或自动化的培养方式通称为反应缸培养法，可供选择的菌液培养法有：液体静置培养法、液体深层通气培养法、透析培养法及连续培养法等。

菌液培养也可采用固体培养法，该方法易获得高浓度的细菌悬液，易稀释成不同浓度，且含培养基的成分较少，所以比较适用于制备诊断用的抗原。

（三）灭活

灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取最适当的灭活条件进行

（四）浓缩

为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高菌数的基础上，再通过浓缩方法达到目的。常用的浓缩方法：氧化铝胶吸附沉淀法、离心沉降法、羧甲基纤维沉淀法。以上方法可使菌液浓缩一倍以上。

此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。

（五）配苗与分装

由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。

配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字。

2）活疫苗的制作过程：菌种与种子→菌液培养→浓缩→配苗与冻干

（一）菌种与种子

弱毒菌种多系冻干品，由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、保存与分发，少数由国家指定单位鉴定、保存与供给。

菌种使用前应按规程规定进行复壮、挑选，并作形态、特性、抗原性和免疫原性鉴定，符合标准后方可用于制苗。

将检定合格的菌种接种子于规定的培养基，按规定的条件增殖培养，经纯粹检查及有关的检查合格者即可作为种子液。

种子液通常在0～4︒C可保存2个月，在保存期内可作为菌苗生产的批量种子使用。

（二）菌液培养

按1%～3%量将种子液接种于培养基，然后依不同菌苗要求进行培养。如猪丹毒弱毒菌须在在深层通气培养中加入适当植物油作消泡剂，通入过滤除菌的热空气进行培养制造菌液。如人用炭疽活疫苗、卡介苗经固体表面培养完成后须按规定要求将菌苔洗下制成菌液。菌液于0～4︒C暗处保存，待抽样经纯粹、活菌数等检查合格后使用。

（三）浓缩

为提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可进行浓缩，以提高单位活菌数，常用的浓缩方法有吸附剂吸附沉降法、离心沉降法等，如于猪丹毒菌液内加入0.2% ～0.25%羧甲基纤维素(CMC)进行浓缩，也可用离心沉淀浓缩。浓缩菌液应抽样作纯粹、活菌数等检查。

（四）配苗与冻干

经检验合格的菌液，按规定比例加入保护剂配苗，充分摇匀后随即进行分装，分装量必须准确。

分装好的菌苗迅速送入冻干柜进行预冻、真空干燥，冻于完毕后立即加塞、抽空、封口，移入冷库保存，并由质检部门抽样检验。

3）类毒素的制作过程：种毒与毒种继代细胞制备接毒与收获配苗

10.病毒性鸡胚苗的制造过程：

一：鸡胚选择：受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用抗生素药物的非免疫鸡群，以免受母源抗体的干扰和残留抗生素的影响。

二：种毒与毒种继代

目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保存，保存的种毒多为冻干毒。

冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通常继代3代以上，经检定符合标准后方可作力生产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、毒价测定和其他项目的检定等。

三：接毒与收获 1.接毒：鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。

2.培养收获

鸡胚接毒后培养增殖的时间和温度、湿度以及收获的标准与内容物依不同的病毒和不同的疫苗而异。

4）配苗

按规定收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进行配苗。

第四章

免疫标记技术：免疫标记技术是将某种可微量测定或超微量测定的物质(如放射性核素、荧光素、酶、化学发光剂等)标记于抗原(抗体)上制成标记物，加入到抗原-抗体的反应体系中与相应的抗体(抗原)反应，以检测标记物的有无及含量来间接反映样品中待检抗原或抗体的存在与多少。

2.诊断生物制品的分类

1、根据使用途径可以分为：体外诊断试剂和体内诊断试剂

2、根据生物制品本身的性质及反应原理可以分为生化诊断试剂、免疫诊断试剂和核酸诊断试剂。

3、按诊断对象所属学科分：细菌学诊断试剂、病毒学诊断试剂、免疫学诊断试剂和肿瘤学诊断试剂等。

4.ELISA检测抗原的方法a、双抗体夹心法b、竞争法方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。

6.基因诊断常用的技术及其临床应用

核酸分子杂交、PCR（聚合酶链式反应）、限制性酶切分析、SSCP（单链构象多态性分析）、DNA 测序和DNA 芯片技术

核酸分子杂交技术的临床应用：A疾病诊断B：DNA指纹—亲缘或法医诊断

PCR技术应用1）PCR技术可以用于病原菌检测

2）遗传性疾病的分子诊断技术A、PCR－酶解鉴定PCR-ELISA检测C：PCR-RFLP

第五章：医疗用生物制品

1.血液制品是由健康人血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞蛋白组分，可用于疾病的诊断、治疗或被动免疫预防。

2.微生态制剂是指在微生态学理论的指导下，调整生态失调保持微生态平衡（microeubiosis），提高宿主健康水平或增进健康佳态）的生理性活菌制品（微生物）及其代谢产物以及促进这些生理菌群生长繁殖的物质制品。

3.免疫血清的概念：又称高免血清、抗血清、免疫血清、被动免疫制品。利用病原微生物或其代谢产物等作为免疫原，经过反复多次注射同一动物体，促使动物不断产生免疫应答，在血清中含有大量对应的特异性抗体而制成。

4.单链抗体(ScFv) 定义：用基因工程方法，将抗体VH和VL（重链和轻链可变区）通过一个连接肽连接而成的小分子抗体

5.基因工程抗体：单克隆抗体在诊断和治疗中具有重要的作用。但是鼠源性的单抗用于临床治疗易产生人抗鼠抗体（Human anti-Mouse Antibody,HAMA)。利用基因工程技术，对抗体进行改造，减少鼠源性的成分，增加人源化的成分。利于单抗的临床应用。

6.疗类用生物制品主要包括血液制品、生物技术药物、免疫调节剂和微生态制剂

7.微生态制剂的分类：①益生菌②益生元③合生元

8.以破伤风毒素为例，叙述免疫血清的制作过程。

破伤风抗毒素1）动物的选择：选择5～12岁营养良好的马匹

2）免疫原

基础免疫：破伤风类毒素高度免疫：血毒

3）免疫程序

（1）基础免疫：第一次，注射精制破伤风类毒素油佐剂抗原1ml；第二次，注射2ml。

（2）高度免疫：基础免疫1～3个月后进行第一程高度免疫，一般注射5～8针，1～4针各针之间间隔2～

3d，5～8针各针之间间隔4～6d。抗原量每针递增1～2ml。第5次开始试血至第8次。

第一程采血后，休息14～16d后进行第二程高度免疫，一般免疫3次，间隔5～7d，最后一次免疫后7～9d 采血。

4）血液采集

第一程高免最后一次免疫后6～7d采血，第二程高免最后一次免疫后7～9d采血，隔1天再次采血，检测效价。

5）血清的纯化

破伤风血清，用胃酶消化，按次序加入15%、20%硫酸铵进行沉淀，然后加入10%的明矾使明矾含量为1%，静置使之沉淀。取沉淀后的上清加38%的硫酸铵沉淀，沉淀物经透析即成精制破伤风抗毒素。

3、鼠源单抗临床应用的障碍（局限性）及人源性改造方法

一：鼠源单抗临床应用的障碍

1）血清半衰期短，20h

2）抗原抗体结合力、亲和力不够

3）HAMA反应：8－10天出现，20－30天高峰，anti-id封闭与抗原结合位点，抗鼠抗体加速单抗清除。4）过敏休克

二：鼠单抗的人源化

1）人鼠嵌合抗体：鼠单抗的可变区序列＋人抗体恒定区序列。

构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因及表达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记等)的表达载体上，在哺乳动物细胞中表达。

2）、鼠单抗可变区的人源化

尽管嵌合抗体的免疫原性已降低很多，但有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一步降低抗体的鼠源成分，发展出CDR移植技术。

CDR移植即把鼠抗体的CDR序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体称CDR移植抗体或改型抗体，也就是人源化抗体。

经过CDR移植，抗体的免疫原性极低，而其抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原(如细胞表面受体、病毒等)的改形抗体都已有报道，到现在已有数百种人源化抗体。（美国正式上市的11种治疗性单抗中多数是改型抗体）

第六章：生物制品质量管理、包装、保存及运输

一）：安全性检验的内容及要点

①安全检验内容1.检查外源性细菌污染2.检查杀菌、灭活或脱毒状况3.检查残余毒力或毒性物质

4.检查对胚胎的致畸和致死毒性

②安全检验要点

生物制品成品的安全检验主要用动物进行，所用的实验动物应是普通级或清洁级动物，有些制品要使用SPF级动物，除禽类制品的安全检验多使用本动物外，其他制品可用小实验动物(啮齿类)代替。

1.动物：用于安全检验的实验动物除要求等级动物外，尚要求符合敏感性高的一定年龄或体重的规定品种、品系的动物

2.剂量：生物制品安全检验的剂量应大于免疫剂量，通常高于免疫剂量5～10倍以上，以确保疫苗的安全性，必要时还需要用同源动物进行复检。

3.外源性病原体检查

对一些混进疫苗内的外源性病原体，可通过鸡胚培养、细胞培养出现的病变，及血清学方法检查。4.安全检验结果判定

二）效力检验的内容及要点

1）内容1.免疫原性2.免疫产生期与持续期

2）效力检验要点

生物制品的效力检验，多数采用动物、培养或免疫血清学等方法进行，少数(如诊断抗原)也可用化学方法检查。

1.动物保护力试验

动物保护力试验为兽医生物制品特别是疫苗类制品最常用的效力检验方法，疫苗的免疫原性、免疫产生期与持续期、最小免疫量等都可通过动物进行检测或测定。

2.活菌计数与病毒量滴定

多数活疫苗的保护力和某些诊断液的效价与菌数或病毒量有直接关系，所以其效力检验应测定细菌数或滴定病毒量。

(1)活菌计数

按《规程》规定，每批冻干菌苗抽样3瓶，按原分装量加入灭菌蒸馏水充分溶解混匀，液体活菌苗用原苗进行。以肉汤或蛋白胨水作适当稀释，接种于最适宜生长的琼脂培养基，37℃培养，计算CFU。以3瓶中的最低数作为判定标准，确定每批苗的使用头剂，低于标准者判为不合格。

(2)病毒量滴定

通常利用细胞培养计算蚀斑数以测定病毒量，计量单位为PFU。

二：疫苗成品检验内容：抽样、无菌检验、安全检验、效力检验、物理状态检验、真空度检查、残余水分测定

同源疫苗是指来源于相同培养物培养的疫苗。F2、异源疫苗是指来源于不同培养物培养的疫苗。T 3、多价疫苗是指两种以上疫病的病原体制备成的一种疫苗。F4、多联疫苗是指两种以上疫病的病原体制备成的一种疫苗。T5、在生物制品中，只有活疫苗才需要冷冻干燥程序。F6、所有生物制品制备过程都需要冷冻干燥程序。F

7、病毒的保护性抗原是保护病毒不被机体的免疫系统认识的。F8、细菌的保护性抗原是指能刺激机体产生免疫作用的抗原成分。T9、经消化道会受到消化酶的作用，所以弱毒疫苗只能用注射途径免疫。F10、微生态制剂肌肉注射的效果比口服的效果好。F11、细菌和病毒均可以在体外的人工培养基上生长。F12、细菌和病毒均不可以在体外的人工培养基上生长。F13、类毒素具有与细菌外毒素相似的免疫原性。T14、类毒素具有与细菌外毒素相似的毒性作用。F15、食用疫苗就是通过口服途径接种的弱毒疫苗。T16、食用疫苗就是传统的疫苗通过口服途径接种。F

17、因为芽胞菌抵抗性好，故用作饲料添加的微生态制剂都使用芽胞菌。F18、因为芽胞菌抵抗性好，故微生态制剂常使用芽胞菌。T19、细菌疫苗菌液的制备至少要经过三代培养。T

20、常规疫苗只能用注射途径免疫。F