安捷伦氨基酸柱前衍生分析方法
第31章 氨基酸及其重要衍生物的转化
第31章氨基酸及其重要衍生物的转化 一、判断题 （）1. 芳香族氨基酸都是通过莽草酸途径合成的。 （）2．丝氨酸能用乙醛酸为原料来合成。 （）3．限制性内切酶的催化活性比非限制性内切酶的催化活性低。 （）4．莽草酸途径是所有生物所共有的氨基酸代谢方式。 （）5．肝细胞浆中的氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ是合成尿素的关键酶。 （）6．嘧啶核苷酸的合成伴随着脱氢和脱羧反应。 （）7．脱氧核糖核苷酸的合成是在核糖核苷三磷酸水平上完成的。 （）8. 合成芳香氨基酸的前体物质是糖酵解和三羧酸循环的中间产物。 （）9. Ser和Thr的分解代谢有相似的地方，他们脱氨后都产生酮酸，都是生糖氨基酸。 （）10. 微生物对Phe和Tyr的分解代谢作用，与动物对这两种氨基酸的分解作用完全相同。 二、选择题 1．转氨酶的辅酶是： A．NAD+ B．NADP+ C．FAD D．磷酸吡哆醛 2．下列哪种酶对有多肽链中赖氨酸和精氨酸的羧基参与形成的肽键有专一性：A．羧肽酶B．胰蛋白酶 C．胃蛋白酶D．胰凝乳蛋白酶 3．参与尿素循环的氨基酸是： A．组氨酸B．鸟氨酸C．蛋氨酸D．赖氨酸 4．γ-氨基丁酸由哪种氨基酸脱羧而来: A．Gln B．His C．Glu D．Phe 5．经脱羧后能生成吲哚乙酸的氨基酸是： A．Glu B．His C．Tyr D．Trp 6．L-谷氨酸脱氢酶的辅酶含有哪种维生素： A．VB1 B．VB2 C．VB3 D．VB5 7．磷脂合成中甲基的直接供体是： A．半胱氨酸B．S-腺苷蛋氨酸C．蛋氨酸D．胆碱 8．在尿素循环中，尿素由下列哪种物质产生： A．鸟氨酸B．精氨酸C．瓜氨酸D．半胱氨酸 9．需要硫酸还原作用合成的氨基酸是： A．Cys B．Leu C．Pro D．Val 10．下列哪种氨基酸是其前体参入多肽后生成的： A．脯氨酸B．羟脯氨酸C．天冬氨酸D．异亮氨酸 11．组氨酸经过下列哪种作用生成组胺的： A．还原作用B．羟化作用 C．转氨基作用D．脱羧基作用 12．氨基酸脱下的氨基通常以哪种化合物的形式暂存和运输： A．尿素B．氨甲酰磷酸C．谷氨酰胺D．天冬酰胺 13．丙氨酸族氨基酸不包括下列哪种氨基酸： A．Ala B．Cys C．Val D．Leu
9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)
9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生 法） 2013-09-05 方法： HPLC 基质： 标准溶液 应用编号： 103087 化合物： Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘 氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙 氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋 氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸) Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖 氨酸) 固定相： Endeavorsil C18 色谱柱/前处理小柱： Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm 样品前处理： 1 溶液配制：氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准 品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标 浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨 基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量 取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰 酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙 腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液三 乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得 到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量 取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准 溶液衍生化：量取200 μl氨基酸混合使用液，置于 1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙 胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈 溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μ l，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μ
分析化学中常用的分离和富集方法教案
第8章 分析化学中常用的分离和富集方法 教学目的：学习各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用，掌握复杂体系的 分离与分析；分离法的选择、无机和有机成分的分离与分析。 教学重点：掌握各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用。 教学难点：萃取分离的基本原理、实验方法和有关计算。 8.1 概述 干扰组分指样品中原有杂质（溶解）或加入试剂引入的杂质，当杂质量少时可加掩蔽剂消除干扰，量大或无合适掩蔽剂时可采用分离的方法。 分离完全的含义：（1）干扰组分少到不干扰；（2）被测组分损失可忽略不计。 完全与否用回收率表示 100?分离后测得的量回收率＝％原始含量 对回收率的要求随组分含量的不同而不同： 含量（质量分数） 回收率 1％以上 >99.9％ 0.01－1％ >99% 0.01%以下 90－95％ 常用的分离方法：沉淀、挥发和蒸馏、液－液萃取、离子交换、色谱等。 8.1.1沉淀分离法 1.常量组分的分离（自己看书：5分钟） （1） 利用生成氢氧化物 a. NaOH 法 b. NH3法（NH 4＋存在） c. 有机碱法 六次（亚）甲基四胺 pH ＝5-6 d. ZnO 悬浮液法 pH ＝6 （2） 硫化物沉淀 （3） 有机沉淀剂 2.痕量组分的共沉淀分离和富集 （1） 无机共沉淀分离和富集 a. 利用表面吸附进行共沉淀 CuS 可将0.02ug 的Hg 2＋从1L 溶液中沉淀出 b. 利用生成混晶 （2） 有机共沉淀剂 灼烧时共沉淀剂易除去，吸附作用小，选择性高，相对分子质量大，体积也大，分离效果好。 a. 利用胶体的凝聚作用进行共沉淀：辛可宁，丹宁，动物胶b. 利用形成离子缔合物进行共沉淀：甲基紫，孔雀绿，品红，亚甲基蓝c. 利用“固体萃取剂”进行共沉淀。 8.1.2挥发和蒸馏分离法 挥发法：选择性高 As 的氢化物，Si 的氟化物，As 、Sb 、Sn 、Ge 的氯化物 蒸馏法：N －NH 4＋－NH 3↑（酸吸收） 利用沸点不同，进行有机物的分离和提纯。 8.2 液－液萃取分离法 8.2.1萃取分离法的基本原理 萃取：把某组分从一个液相（水相）转移到互不相溶的另一个液相（有机相）的过程。 反萃取：有机相→水相
HPLC柱前衍生和柱后衍生
HPLC柱前衍生和柱后衍生 1、为什么要衍生？ 衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性；对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的相应。 2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物；柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。 3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素（聚醚类抗生素多见）和氨基酸类。 4、衍生化要求？ 1）衍生剂必须过量且稳定；不过量反应不完全，检测不充分。不稳定，重现性差。 2）衍生物、衍生产物和衍生副产物至少是好分离的。当然如果只能检测到衍生产物最好。3）衍生反快速完全。反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。 5、两种衍生比较 柱前衍生优点是，对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。缺点是，引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物（当然这个是检测需要的）和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。 柱后衍生优点是，重现性好，认为因素少，引入物质比较少。缺点是，可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢（必然流速低）、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。 仪器管路的清洗 Agilent的液相，反相柱，想用异丙醇清洗下系统.用纯异丙醇,流速一般在0.2~0.4ml/min 先用甲醇-水，甲醇洗，再用异丙醇洗，流速低一点，根据你的压力决定，不要超过平时使用压力就可以了,洗完了，再用甲醇洗 把流通池拿掉，看基线，基本可以确定，问题在哪个方向，如果基线稳定，那就是流通池或者流动相或者泵什么的问题了.再有，检测器光路透镜老化什么的也会有这个情况，光电倍增管是否老化等 基线走不平一般是1.流动相脏，2.灯能量不够（流通池），3.系统有气泡，4.泵压力不稳。5.系统有杂质等。 10%异丙醇作用 冲洗泵头的，防止含盐流动相中的盐分结晶损毁宝石杆 开机就要用，控制一定的流速，不能太快也不能太慢 带缓冲盐的流动相一定要用,每分钟2-3滴的速度，虹吸，保持泵的宝石杆湿润，起保护作用的 安捷伦1200，灯使用时间大概半年，今晚把紫外灯关闭后冲洗柱子，两小时候开灯老显示紫外灯打开失败。怎么回事啊？ 1.如果只是关2小时的话实际上就是浪费灯能量了 关一次一般就是8小时的能量损失
分析化学习题(第7章重要分离方法)
习题 1 1. 分离方法在定量分析中有什么重要性？分离时对常量和微量组分的回收率要求如何？（参考答案）答： 在定量分析，对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰，以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定，必须采用分离富集方法。换句话说，分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果，保证分析结果的准确性，扩大分析应用范围。 在一般情况下，对常量组分的回收率要求大于99.9%，而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低，对回收率要求也降低。 2.在氢氧化物沉淀分离中，常用的有哪些方法？举例说明。（参考答案） 答： 在氢氧化物沉淀分离中，沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此，采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中，通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有： A.氢氧化钠：NaOH是强碱，用于分离两性元素(如Al3+，Zn2+，Cr3+)与非两性元素，两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中，而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 B.氨水法：采用NH4Cl-NH3缓冲溶液(pH 8-9)，可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 C.有机碱法：可形成不同pH的缓冲体系控制分离，如pH5-6六亚甲基四胺-HCl缓冲液，常用于Mn2，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn2+，Cd2+与Al3+，Fe3+，Ti(IV)等的分离。 D.ZnO悬浊液法等：这一类悬浊液可控制溶液的pH值，如ZnO悬浊液的pH值约为6，可用于某些氢氧化物沉淀分离。 3. 某试样含Fe，A1，Ca，Mg，Ti元素，经碱熔融后，用水浸取，盐酸酸化，加氨水中和至出现红棕色沉淀（pH约为3左右），再加六亚甲基四胺加热过滤，分出沉淀和滤液。试问。为什么溶液中刚出现红棕色沉淀时人们看到红棕色沉淀时，表示pH为3左右？过滤后得到的沉淀是什么？滤液又是什么？试样中若含Zn2+和Mn2+，它们是在沉淀中还是在滤液中？（参考答案）
柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述
柱前衍生和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法的进展与评述 美瑞泰克有限公司中国代表处整理 柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述 以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。 1、柱前衍生技术和反向色谱分离 氨基酸à衍生物à色谱分离 1.1 AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯)法 优点：能同时检测一级二级氨基酸，检出现1pmole 缺点：pH值和洗脱温度要求控制准确。 1.2 PITC（异硫氰酸苯酯）法 缺点：PITC试剂进入柱子使柱填料过早的老化，柱子寿命降低，因此过量的衍生剂需要真空干燥除掉，为此，仪器要附设衍生及真空干燥装置。（主要用在生物饲料及食品分析中应用） 1.3 OPA （邻苯二甲醛-巯基乙醇） 缺点：OPA只能与伯氨反应，使二级氨不能同时被检测。由于反向柱分离过程中会有部分衍生物发生裂解，致使OPA-氨基酸的稳定性很差，尤其是胱氨酸和赖氨酸衍生物信号衰减较快，灵敏度低。 1.4 DANSYL-Cl（丹磺酰氯）法 优点：同时可以检测1，2级氨基酸同时能够准确的测定样品中的胱氨酸。 缺点：衍生物在紫外光下不稳定，特别是蛋氨酸对紫外光十分敏感，收率很低，因此衍生反应必须避光进行，而且反应最好要在室温下进行40min左右，如果温度高于45度降低衍生物的产率。 1.5 FMOC-Cl（芴甲氧羟基氯）法 2 柱后衍生技术和阳离子交换色谱分离 2.1 OPA（邻苯二甲醛-巯基乙醇）法 优点：程序化柱后衍生，OPA以极快的速度于氨基酸反应成发荧光团物质，又在很短的时间内进入灵敏度很高的荧光检测器检测，消除了柱前手动衍生是衍生物不稳定的因素，该方法具有较高的分辨率和灵敏度。 2.2 Nin-hydrin（茚三酮）法 优点：程序化衍生，衍生反应速度快（60S），衍生物稳定性好，衍生试剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测。 缺点：衍生物只能用紫外检测器检测，使灵敏度较低而不适合微量氨基酸测定；衍生反应条件要求较高，需要附设加温衍生装置，仪器造价高；流动相与衍生液同时泵入体系，体系平和时间较长长。 综上所述：经过改进和完善的柱后衍生，离子交换色谱法，仪器已具备很高的自动化水平，被分离出来的氨基酸在特有的诸侯氧化剂衍生设备中按固定程序与衍生剂迅速反应并被检测，消除了个样品由于衍生时间，衍生温度等因素的差异带来的测试误差，实践证明该方法是继稳定性分辨率，分离度具佳的可靠的氨基酸分析方法，而衍生试剂不直接计入色谱柱，使柱寿命延长时柱后衍生法的一明显优势。 柱前——柱后衍生对照表 自动化程度衍生物的稳 定性柱子的损害前处理氨基 酸 分析的种类一次性设备 投入 柱前衍生法低低大繁琐18-26种小柱后衍生法高高小简单22-45种大
氨基酸分类
氨基酸分类一、总表
20种氨基酸密码子表 二、分类 1. 根据氨基酸分子中所含氨基和羧基数目的不同，将氨基酸分为中性氨基酸、酸性氨基酸和碱性氨基酸： 2. 根据氨基酸的极性分类：
其中，属于芳香族氨基酸的是：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸 属于亚氨基酸的是：脯氨酸 含硫氨基酸包括：半胱氨酸、蛋氨酸 3. 按其亲水性、疏水性可分为： 4. 其它的分类方法 天然的氨基酸现已经发现的有300多种，其中人体所需的氨基酸约有22种，分非必需氨基酸和必需氨基酸（人体无法自身合成）。另有酸性、碱性、中性、杂环分类，是根据其化学性质分类的。 1、必需氨基酸（essential amino acid）：指人体（或其它脊椎动物）不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。共有8种其作用分别是： ①赖氨酸（Lysine ）：促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化； ②色氨酸（Tryptophane）：促进胃液及胰液的产生； ③苯丙氨酸（Phenylalanine）：参与消除肾及膀胱功能的损耗； ④蛋氨酸（又叫甲硫氨酸）（Methionine）；参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能； ⑤苏氨酸（Threonine）：有转变某些氨基酸达到平衡的功能； ⑥异亮氨酸（Isoleucine ）：参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺； ⑦亮氨酸（Leucine ）：作用平衡异亮氨酸； ⑧缬氨酸（Viline）：作用于黄体、乳腺及卵巢。 其理化特性大致有： 1）都是无色结晶。熔点约在230°C以上，大多没有确切的熔点，熔融时分解并放出CO2；都能溶于强酸和强碱溶液中，除胱氨酸、酪氨酸、二碘甲状腺素外，均溶于水；除脯氨酸和羟脯氨酸外，均难溶于乙醇和乙醚。 2）有碱性[二元氨基一元羧酸，例如赖氨酸（lysine）]；酸性[一元氨基二元羧酸，例如谷氨酸（Glutamic acid）]；中性[一元氨基一元羧酸，例如丙氨酸（Alanine）]三种类型。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性，呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐，也能与碱结合成盐。
分析化学中常用的分离富集方法
分析化学中常用的分离富集方法 思考题 11-1 在分析化学中，为什么要进行分离富集？分离时对常量和微量组分的回收率要求如何？答：在定量分析，对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰，以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定，必须采用分离富集方法。换句话说，分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果，保证分析结果的准确性，扩大分析应用围。在一般情况下，对常量组分的回收率要求大于99.9%，而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低，对回收率要求也降低。 11-2 常用哪些方法进行氢氧化物沉淀分离？举例说明。 答：在氢氧化物沉淀分离中，沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此，采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中，通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有： a 氢氧化钠：NaOH是强碱，用于分离两性元素（如Al3+，Zn2+，Cr3+）与非两性元素，两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中，而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 b 氨水法：采用NH4Cl-NH3缓冲溶液（pH8-9），可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 c 有机碱法：可形成不同pH的缓冲体系控制分离，如pH5-6六亚甲基胺-HCl缓冲液，常用于Mn2+，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn2+，Cd2+与Al3+，Fe3+，Ti（IV）等的分离。 d ZnO悬浊液法等：这一类悬浊液可控制溶液的pH值，如ZnO悬浊液的pH值约为6，可用于某些氢氧化物沉淀分离。 11-3 某矿样溶液含Fe3+，A13+，Ca2+，Mg2+，Mn2+，Cr3+，Cu2+和Zn2+等离子，加入NH4C1和氨水后，哪些离子以什么形式存在于溶液中？哪些离子以什么方式存在于沉淀中？分离是否完全？ 答：NH4Cl与NH3构成缓冲液，pH在8-9间，因此溶液中有Ca2+，Mg2+,，Cu(NH3)42-、Zn(NH3)42+等离子和少量Mn2+，而沉淀中有Fe(OH)3，Al(OH)3和Cr(OH)3和少量Mn(OH)2沉淀。试液中Fe3+，A13+，Cr3+可以与Ca2+，Mg2+，Cu2+和Zn2+等离子完全分开，而Mn2+分离不完全。 11-4 如将上述矿样用Na2O2熔融，以水浸取，其分离情况又如何？ 答：Na2O2即是强碱又是氧化剂，Cr3+、Mn2+分别被氧化成CrO42-和MnO4-。因此溶液有AlO22-，ZnO22-，MnO4-和CrO42-和少量Ca2+，在沉淀中有：Fe(OH)3，Mg(OH)2和Cu(OH)2和少量Ca(OH)2或CaCO3沉淀。Ca2+将分离不完全。
PITC柱前衍生HPLC氨基酸比值测定
PITC柱前衍生高效液相法测定缩宫素氨基酸比值 一．前言 目前，氨基酸检测主要应用氨基酸自动分析仪和HPLC。随着HPLC的发展，使用HPLC技术分析氨基酸获得迅速发展。HPLC已成为一种较为理想的检测氨基酸的方法。HPLC检测氨基酸时，使用不同衍生剂反应后产生不同的衍生物，不同的衍生物所需色谱条件也有差别。查阅相关的研究报告，所使用的衍生剂及色谱条件也不尽相同。每种方法各有自己的优缺点，应根据所测样品的特性和仪器、试剂条件作出选择，最后选择异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生法测定缩宫素氨基酸比值。 二．准备工作 主要设备和试剂 1.氨基酸分析专用柱（4.6×250，5um）1支 Agela公司 2.高效液相检测仪 1台安捷伦 3.十八种氨基酸 1套中检所 4.异硫氰酸苯酯 10瓶 Agela公司 5.三乙胺 2瓶 Agela公司 试剂配制 1.三乙胺乙腈溶液：取三乙胺1瓶，加乙腈8.6ml，混匀。 2.异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取异硫氰酸苯酯1瓶，加乙腈2ml，混匀。 4℃ 3天 3.流动相A：称取三水醋酸钠25.3g（或无水醋酸钠15.2g），加水1400ml，用冰醋酸调节 pH6.5，用水使成1860ml，再加乙腈140ml，使成2000ml，0.45um醋酸纤维膜过滤。 4.流动相B：80%乙腈，0.45um有机膜过滤。 5.氨基酸标准贮备液 中检所十八种氨基酸，105℃3小时。使用十万分子一天平。 半胱氨酸是以胱氨酸折算成两份半胱氨酸进行计算。用0.1mol/L盐酸溶解至250ml。
衍生方法 取标准品（样品）0.2ml，加100mmol/L异硫氰酸苯酯乙睛溶液0.1ml，加1mol/L三乙胺乙睛溶液0.1ml，混匀，室温放置1小时，加入0.4ml正己烷，振摇，放置10分钟，取下层清液过滤后进样。 三．实验部分 1.色谱条件选择 1.1精密量取2ml氨基酸标准储备液，至20ml容量瓶，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度。用以下3个方法进行检测。从而确定最佳洗脱条件。 方法1 流速：1ml/min 检测波长：254nm 柱温：40℃ 进样体积：2ul 洗脱梯度： 方法2 流速：1ml/min 检测波长：254nm 柱温：40℃ 进样体积：2ul 洗脱梯度：
现代分离分析技术整理
1.环境中含芳烃污染无的废水样品分析检测前科采用哪些分离方法进行组分富集?纺织厂 废水中含有的十二烷基苯磺酸及氨基蒽醌化合物如何进行检测? 参考：（1）溶液萃取、固相萃取（SPE）、固相微萃取（SPME）、毛细管固相微萃取 蒸发、减压蒸馏、水蒸气蒸馏等 浓缩富集：1L CH2Cl 萃取四次（20ml*4）,Na2SO4干燥，过滤，1m样品经N2流吹，1ml 乙腈:水=9:1溶解，最后超声震荡过滤。 （2）十二烷基苯磺酸——高效液相色谱和UV联用 以80%甲醇为流动相，在流动相中添加7mmol/L醋酸铵电解质，流速0.5ml/min，PH=9的条件下使用高效液相色谱和UV联用，可以快速检测十二烷基苯磺酸。检出限1.32μg/ml 氨基蒽醌的测定——可用高效液相色谱法或者薄层色谱法 高效液相色谱法：甲醇为流动相，用1，4—二氧六环：丙酮（4：1）溶解溶解标样和样品，采用CLC—ODS 0.46×15cm不锈钢色谱柱及UV474nm的检测器 薄层色谱法：先把样品用薄层板展开，把1-氨基蒽醌斑点用小刀刮下，乙醇洗脱，再用72型分光光度计测吸光值。 2.中草药等天然产物中的有效成分(如极性不同的热敏性有机化合物)如何进行分离分析, 应用哪些方法?中药大黄中的大黄素如何进行分离及分析检出? 传统提取中草药有效成分的方法有水蒸气蒸馏法、减压蒸馏法、溶剂萃取法等，这些方法通常是工艺复杂、耗时、产品纯度不高、对环境污染大，而且易残留有害物质。所以科研工作者们一直在试图寻找提取效率高、选择性好、污染小的方法，随着现代科学技术的不断发展，涌现出了许多新的分离提取方法，加快了提取过程，提高了提取效率。超临界流体萃取技术就是其中之一，较传统提取方法而言，该方法具有简便、快速、提取率高、无污染等特点。 超临界流体的特点超临界流体既具有液体对溶质有比较大溶解度的特点，又具有气体易于扩散和运动的特性，传质速率大大高于液相过程(超临界流体的扩散系数为～10-4cm2/s，液体的扩散系数为～10-5 cm2/s)。也就是说超临界流体兼具气体和液体的性质，即具有较低的粘度和较高的扩散力。所以超临界流体萃取率高，萃取速度快。 萃取和分离合二为一当饱含溶解物的超临界流体流经分离器时，由于压力下降使得流体与萃取物迅速成为两相（气液分离）而立即分开，不存在物料的相变过程，无需回收溶剂，操作方便；不仅萃取效率高，而且能耗较少，节约成本。 超临界流体萃取通常在较低温度下进行可以有效地防止热敏性成分的氧化和逸散，特别适合于那些对热敏感性强、容易氧化分解成分的分离提取。 超临界二氧化碳流体常态下是气体，无毒与萃取成分分离后，完全没有溶剂的残留，有效地解决了传统提取方法的溶剂残留问题。 流体的溶解能力与其密度的大小相关而温度、压力的微小变化都会引起流体密度的大幅度变化，并相应地表现为溶解度的变化。因此，可以利用压力、温度的变化来实现萃取和分离的过程。 参考：极性不同的热敏性有机化合物：亚临界萃取，“热敏性”成份不变性、不氧化，是天然产物活性成分“高效、保质”萃取的理想技术 传统分离纯化方法有：浸出提取法、水蒸气蒸馏法、升华法等； 新发展的分离方法：超临界流体提取，超声波、微波辅助提取，膜分离方法、分子蒸馏、离子交换层析、高效絮凝等。 大黄素 高效液相色谱是中药活性成分分离分析的有效技术之一，具有高效、灵敏、快速、准确、适用范围广、重现性好及自动化操作等优点，特别适合于分析高分子量、高沸点、不易挥发、
第十二章 定量分析中常用的分离方法
第十二章 定量分析中常用的分离方法 第一节 第一节 概述 一、 一、 重要性：分离也是一种科学，分离科学是自然科学和应用 科学中的一个重要分支。从本世纪开始，各种天然放射性元素的逐个发现，人工放射性核素的活的，原子核裂变现象的最终确证，各种超铀元素的制备和合成几乎都离不开运用各种化学分离技术。在应用科学方面，与能源密切相关的石油工业；原子能的利用是核燃料的铀和钚的提取，以及铀同位数分离获得成功才发展的；半导体电子器件对超纯无机料硅、锗和其他无机化合物提出了更高的净化要求；矿石中提取各种稀有金属更是需要各种先进的分离技术等等。所以说：分离科学是很重要的一门科学。 在我们的课程中（定量分析）由两种情况必须采用分离： 1、1、在组成上比较复杂的试样，靠控制分析条件或加入掩蔽剂，不能消除干扰时 2、2、微量组分（0.01~1%），痕量组分（0.01%以下）由于测定方法的灵敏度不够是测定误差太大，以至不能测定时。 采用分离并富集被测组分。 例如：一升海水中只有1~2μg U(VI) 把一升海水最后处理成10ml 溶液，等于U(VI)浓度提高100倍，再测定，方法灵敏度就达到了 二、 二、 分类： 1. 1. 物理分离法：是以被分离对象所具有的不同物理性质为依据，采用合适的物理手段进行分离，常有：气体扩散法，离心分离法，电磁分离法，质谱分离，热扩散，喷嘴射流 2. 2. 化学分离法：是按被分离对象在化学性质上的差异通过合适的化学过程使它们获得分离，常有：沉淀，萃取，离子交换，色谱四类 被测组分与干扰组分的分离或富集：达到什么程度才算合乎要求呢？通过回收因数和分离因数的大小来判断： （一）回收因数A R （回收率）：表示被分离组分回收的完全程度 ()100%0?= A A A Q Q R →A Q A 物质被分离的量 →0A Q A 物质在试样中的量 A R 越大，分离效果越好 常量组分的分析：%9.99≥A R 过去：99.0% 微量组分的分析： %0.99≥ 95.0% 0.001~0.0001% ： 90.0%~95.0% 90.0% （二）分离因数：将A,B 两物质分离开来，其分离效果可用分离因数表示，