实验二愈伤组织的诱导与分化
实验二 愈伤组织的诱导与再分化
一、目的
掌握外植体的消毒方法和接种技术；了解愈伤组织诱导的过程及再分化。
二、原理
以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养都能形成愈伤组织。愈伤再经分化培养，通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生成植株。
外植体如果是带菌的，在接种前都必须消毒。对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用；对于多茸毛表面粗糙不平的材料，要加展著剂（吐温20）以增强消毒效果。
三、实验材料
水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）；
四、仪器设备及用具
（一） 仪器设备
超净工作台 培养室
（二） 用具（每组5人用量）
量筒：100ml ×2
培养皿：￠9cm ×1
三角瓶：50ml ×2(无菌)，1000ml ×1
枪形镊：×4
无菌滤纸：（10cm ×10cm ）×5
五、试剂及培养基
（一） 试剂
75%酒精，2% NaCLO ，无菌水(每组1瓶400ml)
(二) 培养基
1、诱导培养基：N 6+2,4-D2mg/1+蔗糖30g/l+琼脂8g/l
2、分化培养基：N 6+ CuSO 4·5H 2O 1.25mg/l+BA 2mg/l+NAA 1mg/l+蔗糖30g/l+琼脂8g/l
六、实验步骤
1、接种室、培养基及用具表面消毒
用75%酒精棉球试擦超净工作、镊子，将培养基及用具放工作台，打开紫外灯，照射20分钟以表面消毒。之后关紫外灯，打开工作台风机，通风30分钟后可进行无菌操作。
2、消毒剂的配制
（1）、75%酒精：每组配95ml 。量取95%酒精75ml ，加蒸馏水至95ml 即可.
（2）、2%NaCLO ：每组配100ml.
x ：应吸取的NaCLO 原液的毫升数；
y ：NaCLO 原液的有效氯浓度。
3、种子去壳
用自制的脱壳砂纸脱去谷壳，注意保持胚完整。每人准备30粒去壳种子。
4、外植体消毒（以下工作在超净工作台内进行）
将米粒放入50ml 无菌三角瓶→无菌水洗一次→弃水，倒入75%酒精，搅拌，30秒→弃酒精，倒入2% NaCLO ，不时搅拌，30分钟→弃NaCLO ，用无菌水洗3次，每次停留10.5%×100 y X= (ml)
分钟→倒去无菌水，种子放在带无菌滤纸的培养皿中吸干。
5、接种与观察
愈伤组织诱导
将吸干的种子接入培养基，注意使胚朝上。每瓶接10粒，每人2瓶。写上日期、接种人、放入培养室25℃暗培养。1周后调查计算污染率，2周后调查计算愈伤组织诱导率。
6、愈伤组织的再分化观察
在无菌条件下将诱导获得的愈伤组织（从约3周后安排此实验），从原材料中用镊子剥离后，接种到分化培养基中，每瓶接种4粒，每个同学接种3瓶，后置于光照条件下控制培养（25℃，2000lux 每天光照10小时下培养），观察分化出苗的状况（一般需要2-3个星期的培养时间）。1个月后调查计算分化率。
七、结果与分析
1． 如何降低污染率？
2． 愈伤组织的形成、愈伤组织再分化与哪些因素有关？
分化率(%)= ×l00 分化植株的愈伤块数 ×100
形成愈伤组织的种子数
污染率(%)=
×100 污染的种子数 接种的总种子数 诱导率 (%)=
接种的总种子数 接种的总块数
愈伤组织诱导及观察
实验二愈伤组织诱导及观察 一.实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二.实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照
小麦愈伤组织的诱导
小麦愈伤组织诱导与其再生培养体系的建立 前言：小麦属于禾本科植物，麦粒在植物学上称为颖果，在种子学上则称为种子，通常称为小麦。麦粒皮色有红白之分，红皮的叫红麦，白皮的叫白麦。由于品种和受环境影响不同，红皮小麦又有深红色和红褐色；白皮小麦又有白色、乳白色或黄白色之分。 一：目的及意义 我国小麦目前的状况有以下几点：1 我国是农业大国，小麦面积4亿亩、产量9000万吨左右，分别占世界总量的 12%和18%，均居世界第一位。2 我国春小麦主要分布在东北、西北及华北北部。据中国粮油信息中心的数据显示，预计中国 03/04市场年度（7月至次年6月）春小麦播种面积仅为190万公顷，较上年度减少5％，这是多年来中国春小麦种植面积首次低于200万公顷；预计03/04年度春小麦产量为580万吨，较02/03年度下降7.48%。我国的小麦种植面积不断的减小，总产量也在不断减少。由于我国目前存在的状况，农业大国，主产小麦，但小麦的产量的质量都不是很好，种植面积又在减少，本研究主要是提高小麦的产量和质量。 二：综述国内外对小麦的研究状况 2.1 小麦愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化张小红，闵东红，邵景侠（西北农林科技大学，陕西杨凌712100） 试验方法：以普通小麦的幼穗和幼胚为外植体进行了愈伤组织诱导，及由幼胚愈伤组织进行了原生质体分离和纯化试验，研究了幼穗和幼胚外植体及低温预处理等因素对愈伤组织诱导的影响，在原生质体分离中研究了酶浓度和配比、酶解时间及蔗糖浓度等因素对幼胚愈伤组织原生质体游离和纯化的影响。结果表明：小麦幼穗离体培养时，以1.0~1.5 cm长度的幼穗有利于愈伤组织的诱导；小麦幼穗和幼胚外植体采后低温储藏时不易超过3 天，时间太长会影响愈伤组织诱导；2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶+0.6 M甘露醇分离原生质体较好，最佳酶解时间为 4~6 h，原生质体产量和活力较高。 2.2 小麦愈伤组织诱导及其植株再生研究进展王廷璞，陈荃，崔爱明，刘瑞媛，马伟超 （天水师范学院生命科学与化学学院，甘肃天水741001） 试验方法：小麦组织培养体系的建立与完善是应用植物基因工程改良小麦品质的重要基础和保证，综述了近年来小麦愈伤组织诱导及植株再生的研究情况。研究资料表明：小麦组织培养中，不同来源和不同生理状态的小麦外植体（幼胚、幼穗、花药、成熟胚、叶、根等），在愈伤组织诱导和获得再生植株的能力方面均显示了优点和不足。不足之处是在生产过程中，不断受到生物、非生物等因素的胁迫，严重影响其产量及品质。 2.3小麦愈伤组织诱导及其再生能力影响因素的研究贾海燕, 王洪刚 ( 山东 农业大学农学院, 山东泰安 271018) 试验方法：以农艺性状较好的24 份小麦品种( 系) 为材料, 筛选出了愈伤组织诱导率高且植株再生能力强的基因型材料山农995604 和F281- 10, 在此基础上对影响愈伤组织的分化能力以及较长时间保持分化能力的因素进行了研究。结果表明, 在愈伤组织的继代过程中, 保持较高浓度的2, 4- D, 或对愈伤组织进行交替继代培养有利于较长时间保持其再生能力。最佳取材时间在开花后15d 左右,
愈伤组织的诱导和培养
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223 愈伤组织的诱导和培养 一、实验目的及意义 植物愈伤组织的诱导和培养在植物科学的基础研究和应用研究中都有重要的意义。通过本次实验，可以初步掌握植物外植体材料消毒、接种的无菌操作技术，愈伤组织的诱导方法和愈伤组织继代培养的方法。 二、实验原理 植物组织与细胞培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择适当的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得植物组织培养，成功的基本前提和重要保证。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织（callus）。植物生长调节剂如2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等是诱导外植体形成遇上组织的重要因素。 三、实验仪器与药品 超净工作台，酒精灯，镊子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉 材料：烟草无菌苗，甘薯无菌苗 四、实验步骤 1.按下表分别配制培养基
将配置的四种培养基分别分装入20个培养瓶，高温灭菌后水平放置凝固 2.接种前，将实验所需器具放入超净工作台，打开紫外灯灭菌20~30min，关闭紫外灯，开启通风开关。洗手后用酒精喷洒消毒手、手臂、实验材料及培养基外部等进入超净工作台的部分。进入超净工作台，用酒精棉擦拭台面（手勿伸出工作台），台面完全风干后点燃酒精灯。 3.接种开始时，将镊子及手术刀在酒精中浸泡，并在酒精灯外焰上烧炽片刻，充分冷却。取幼嫩的烟草（甘薯）叶片，用手术刀切割成小片，再用镊子将其接种至相应的培养基上，每瓶接种3~5片，封口后取出超净工作台，标注姓名、日期、培养基和接种材料。 4.将上述培养材料常温暗培养，每隔7天观察一次，并记录培养情况 五、实验结果
实验01 基本组织(一)
实验一基本组织（一） 一、实验目的 1、了解被覆上皮组织的结构及分布特点。 2、观察上皮组织的某些特殊结构，如纹状缘和纤毛。 3、学习肠系膜平铺片的制作方法。 4、熟悉不同类型结缔组织的主要结构特点。 5、掌握疏松结缔组织的纤维及各种细胞成分。 二、材料和用具 蛙或小白鼠，载玻片，盖玻片，解剖器（镊、剪、针），1％硝酸银水溶液，亚甲基蓝，0.7％生理盐水，蒸馏水，甘油，显微镜； 甲状腺、肠、气管、食管和膀胱的切片（H-E染色）；皮下结缔组织H-E染色的平铺片；小白鼠肠系膜平铺片（苏丹Ⅲ染色）；腱、小肠及气管切片（H-E染色）；淋巴结镀银法切片（示网状纤维）；骨磨片。 三、实验方法与步骤 （一）单层扁平上皮 1．蛙或蟾蜍的体腔膜或肠系膜平铺片的制作 肠系膜的间皮和肠系膜内的毛细血管内皮是观察单层扁平上皮的较好的材料。利用蛙或小白鼠的肠系膜为材料制作平铺片，然后观察。制作方法如下： 将蛙剪头杀死，取下肠系膜，若有血液污染，可用0.7％生理盐水洗干净。把肠系膜放在一载玻片上，用解剖针将肠系膜挑开展平，晾干。加1％硝酸银水溶液数滴于肠系膜上，使其皆被溶液浸盖。立即放在日光下晒3～5min，或在灯光下照射20～40min。当肠系膜变成浅褐色时，然后倾去载玻片上的溶液，用蒸馏水洗净。加一两滴甘油，盖上盖玻片，便可用来观察。 (1)低倍镜观察选择染成淡黄色，标本最薄的部分进行观察。 (2)高倍镜观察在这种平铺片上，可以看到肠系膜的间皮细胞，也可看到肠系膜内毛细血管网的内皮细胞。它们均为单层扁平上皮。在平铺片上，从表面观，上皮细胞为多边形，细胞与细胞之间的边界由于硝酸银感光后沉淀为黑色。边界清晰，呈锯齿状，相邻细胞彼此相嵌。细胞核扁圆形，位于细胞的中央。硝酸银对细胞核无镀染作用，所以细胞核为无色或淡黄色。 2．取小肠、气管或其他器官的切片（H-E染色）观察 (1)低倍镜观察寻找一个毛细血管横切面或纵切面观察。了解单层扁平上皮在切面上的形态。 (2)高倍镜观察毛细血管只由一层内皮细胞构成，细胞很薄。细胞核染成蓝紫色，长椭圆形，突向管腔。有的细胞切到核，有的没切到。细胞质染成红色，细胞界限在这种染色切片上分界不清。 （二）单层立方上皮 用猫甲状腺切片（H-E染色）观察。 1．低倍镜观察 在甲状腺切片上先找到大小不等的、内含红色胶状物质的甲状腺滤泡。 2．高倍镜观察 甲状腺滤泡壁为一层立方形上皮细胞构成。核圆，染成蓝紫色，位于细胞中央。细胞质染成粉红色。细胞界限隐约可见。 （三）单层柱状上皮 用猫小肠切片（H-E染色）观察。掌握单层柱状上皮在切面上的形状，并辨认纹状缘与杯状细胞。 1．肉眼观察 我们需要在黏膜层中观察上皮，所以，首先应辨别哪一层是黏膜? 见有突起不平整的一面即为黏膜
人体组织解剖学材料整理
第一章 上皮组织—被覆上皮 单层柱状细胞：小肠上皮有纹状缘,扩大吸收面积; 有杯形细胞,可分泌粘液，具有保护上皮的作用。 （主要分布于胃、肠、胆囊、子宫等） 假复状纤毛上皮:杯形细胞,柱状细胞（到达上皮游离面) 锥形细胞,梭形细胞(位于基底面） 杯形细胞分泌粘液，湿润上皮和吸入的空气，并黏着吸入的灰尘和细菌等异物。 借住纤毛的节律摆动,将含有灰尘和细菌的粘液向咽部推送。 (主要分布于呼吸道内表面） 单层扁平上皮：内皮：分布在心脏、血管、淋巴管内表面 间皮：分布在胸膜、腹膜、心外膜表面（游离面湿润而光滑，便于内脏器官的活动和减少摩擦。 其它:肺泡、肾小囊 单层立方上皮：甲状腺滤泡、肾小管 变移上皮:膀胱、输尿管 ※结构和功能的统一? 疏松结缔组织 成纤维细胞：内含丰富的粗面内质网、游离核糖体和高尔基体，这些结构表明成纤维细胞合成蛋白质的机能旺盛。 成纤维细胞可合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白，生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维等。 巨噬细胞:表面有许多褶皱和小泡,含有吞噬体和吞饮小泡—１、具有吞噬作用,可以吞噬异物,细菌，衰老变性细胞。 2、还有趋化性和定向运动性（趋化性:指巨噬细胞可以沿着某些化学物质的浓度梯度进行定向移动) 3、可合成多种生物活性物质 4、是一种递呈细胞，参与免疫应答的调节作用。 （电镜下区分成纤维细胞和巨噬细胞，巨噬细胞比成纤维细胞小，染色比成纤维细胞深） 胶原纤维：疏松结缔组织的主要纤维。Ｈ-E呈粉红色粗细不等。 韧性大，抗拉力强,柔软易弯曲等特点。 弹性纤维:新鲜时呈黄色，又称黄纤维 弹性大,易拉长，除去外力后能复原。 软骨 同源细胞群：有着相同来源的一群细胞，（之后可分化成不同的细胞)，在某种程度上说它们最初来源于同一个细胞，称同源细胞群。 骨 骨单位(哈弗斯系统）:骨单位位于内外环骨板之间,数量较多,呈圆筒状,与骨干长轴平行,每个骨单位由1个中央管和数层围绕它的骨单位骨板组成。 血细胞 红细胞：贫血:红细胞少于3００万/mｍ3,血红蛋白少于100g/l
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验 报告 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
水稻愈伤组织的诱导 一、实验目的 1、掌握外植体的消毒方法和接种技术； 2、了解愈伤组织诱导的过程。 二、实验原理 以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养时，在一定的诱导培养条件下都能诱导形成愈伤组织。愈伤再经分化培养，通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生成植株。 外植体源自自然环境均为带菌状态，在接种前都必须进行消毒。对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用；对于多茸毛表面粗糙不平的材料，要加展着剂（吐温20）以增强消毒效果。 三、实验材料与用具 1、材料：水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）； 2、试剂：75%酒精，2% NaCLO，无菌水(每组1瓶400mL)； 3、培养基：诱导培养基：NB+2,4-D 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L（）； 4、仪器设备：培养室、超净工作台、培养皿（￠9cm）2个、枪形镊、量筒（100mL）2个、三角瓶（50mL、无菌）2个、废液缸、保鲜膜、标签纸。 四、实验步骤
1、接种室、培养基及用具表面消毒 用75%酒精棉球试擦超净工作台、镊子，将培养基及用具放工作台，打开紫外灯，照射20分钟以表面消毒。之后关紫外灯，打开工作台风机，通风30分钟后可进行无菌操作。 2、种子去壳 选取饱满、无霉变、成熟的水稻种子，手工脱去谷壳（注意保持胚完整），每人准备30粒去壳种子，并按照分组放到三角瓶中。 3、操作者双手的清洗与消毒 在进入无菌室之前，各操作者先用自来水清洗干净双手并晾干，然后进入无菌室，坐在超净台前位子上后，用含75%酒精的酒精喷壶喷洒双手对双手进行消毒，在超净台风口待双手酒精风干后进入超净工作台。（注意：酒精喷壶喷洒双手时切记不要把酒精喷到超净台的有机玻璃板上！） 4、超净台面的表面消毒（以下工作在超净工作台内进行） 用枪形镊子从含75%酒精棉球的容器中取一团棉球，仔细把整个超净台面擦试一遍，尽量降低超净台面的带菌量，并将废棉球丢到废液缸中，然后点亮超净台里面放置的酒精灯。 5、外植体消毒（分组操作，每组由一位代表操作完成外植体的消毒工作） 将脱谷壳米粒转到一50mL无菌三角瓶→加适量无菌水洗一次（以没过种子为准，下同）→弃水，倒入75%酒精适量，摇动搅拌，放置30秒（过程中适当轻摇动混匀）→弃酒精→加适量无菌水洗一次→弃水→倒入适量2% NaCLO，不时摇动搅拌，共处理30分
胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心 细胞工程实验实验报告 胡萝卜愈伤组织诱导培养实验 摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。 关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养 胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。 1.材料和方法 1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。 1.2方法： 1.2.1愈伤组织的诱导培养 （1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8 （2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤） （3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次； （4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块； （5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶 （6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况 1.2.2继代培养 从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。用记号笔标注操作者、组别和日期。（3~4周后在相同培养基上继代培养1次）1.2.3愈伤组织再分化的诱导 （1）培养基： MS+2，4-D 0.5mg/L+KT 0.2mg/L （2）从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3
实验二 动物、植物基本组织观察
实验二动物、植物基本组织观察 一、实验目的与要求 1、掌握植物体各种组织的类型及其特征。 2、了解各种组织在植物体内的分布。 3、掌握动物的4类基本组织结构特点及其结构与机能的密切关系。 二、实验原理 在植物个体发育中，由具有相同来源的细胞分裂、生长与分化所形成的细胞群叫组织。植物组织分为两大类：分生组织和成熟组织。成熟组织按其功能可分为基本组织、保护组织、输导组织、机械组织和分泌结构等。成熟组织根据其性质又可分为简单组织和复合组织，简单组织是由一种类型的细胞所构成的，如：基本组织、保护组织等；复合组织是由数种不同类型、但具有共同起源的细胞结合在一起所构成的，如：输导组织、次生保护组织等。 动物组织同形态相似、机能机同的细胞及细胞间质组成。根据其起源、形态结构和机能上的共同特性可将动物组织分为上皮组织、肌肉组织、结缔组织和神经组织4大类。4类组织按照一定的空间位置和机能关系有机地联合在一起，从而构成动物的器官。因此，应该用整体的、动态的观点来认识组织的形态结构特点，同时要充分理解有机体与机能相适应的一般规律。 四、实验步骤 植物组织部分 （一）分生组织 １．顶端分生组织观察洋葱根尖纵切面可见如下特征。 ２．侧生分生组织常位于根和茎的外周部分，靠近器官的边缘。它包括形成层和木栓形成层。 ２．１形成层观察椴树属茎的横切面。 ２．２木栓形成层结合椴树属茎横切面中周皮的观察，找出木栓形成层（图4-1）。对木栓形成层和维管形成层进行比较观察。 ３．居间分生组织观察玉米节间基部纵切面。 （二）保护组织 １．表皮观察女贞叶片横切面，最外一层细胞、夹竹桃叶片的横切面、龟背竹根的横切面，注意表皮的形态与女贞叶表皮有何不同，如何解释复表皮的定
绿豆芽愈伤组织诱导培养实验报告
生物工程中游技术实验 --植物组织、器官培养的研究 学校： 学院： 班级： 姓名： 学号：
绿豆芽愈伤组织诱导培养实验 【摘要】本实验以MS＋2,4-D为基本培养基,添加NAA或6-BA,对绿豆芽材料进行体外培养,诱导形成愈伤组织。结果表明,在一定浓度范围内,NAA和6-BA对绿豆芽的诱导有促进作用。不同激素组合培养下，绿豆芽外植体形成愈伤组织的类型不同,其色泽、细胞的形态结构显著不同。其中，细胞分裂素和生长素的组合诱导芽及芽的增殖效果最好，MS+6-BA(6mg/L)+NAA(0.4mg/L)培养基最适。 【关键词】绿豆芽；组织培养；愈伤组织；6-BA；2,4-D；NAA;全能性 一、前言 细胞工程(Cell engineering) 是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。其常用技术手段有植物组织培养，植物体细胞杂交、动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。根据细胞类型的不同，可以把细胞工程分为植物细胞工程和动物细胞工程两大类。本文主要综述细胞工程中植物细胞工程的植物组织培养这一技术手段。植物组织培养技术的应用范围包括快速繁殖、培育无病毒植物，通过大规模的植物细胞培养来生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等。 植物组织培养，诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。在植物组织培养中，由于植物细胞具有全能性,即植物的体细胞具有母体植株全部遗传信息并会发育成为完整的个体。因而,每一个植物细胞可以像胚胎细胞一样,经离体培养再生成植株。随着细胞工程技术的不断发展,植物细胞和组织培养这一细胞工程技术也无例外地得到发展,目前已在许多植物上,特别是在农林生产实践中得到了广泛应用。尤其在林木优良品种和无性系的快速繁殖方面进展较快。统计资料显示,目前全世界已有6000多种植物细胞和组织培养成株。实验证实,植物叶肉细胞、茎尖、根尖、花粉、胚、胚乳等细胞或组织均可以再生成植株。 本试验旨在利用NAA和6-BA的组合调控来诱导绿豆芽的愈伤组织，加深对植物外植体消毒、接种的无菌操作技术，学习外植体愈伤组织诱导的方法。 6-BA为细胞分裂素，主要作用是促进芽的形成,也可以诱导愈伤组织发生。如果超过0.1毫克就会抑制发根，超过0.5毫克则完全不发根。NAA是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。2,4-D是一种人工合成的植物生长激素。
人体组织解剖学复习材料整理
人体组织解剖学复习材料整理 上皮组织—被覆上皮 单层柱状细胞：小肠上皮有纹状缘，扩大吸取面积； 有杯形细胞，可分泌粘液，具有爱护上皮的作用。 （要紧分布于胃、肠、胆囊、子宫等） 假复状纤毛上皮：杯形细胞，柱状细胞（到达上皮游离面） 锥形细胞，梭形细胞（位于基底面） 杯形细胞分泌粘液，潮湿上皮和吸入的空气，并黏着吸入的灰尘和细菌等异物。 借住纤毛的节律摆动，将含有灰尘和细菌的粘液向咽部推送。 （要紧分布于呼吸道内表面） 单层扁平上皮：内皮：分布在心脏、血管、淋巴管内表面 间皮：分布在胸膜、腹膜、心外膜表面（游离面潮湿而光滑，便于内脏器官的活动和减少摩擦。 其它：肺泡、肾小囊 单层立方上皮：甲状腺滤泡、肾小管 变移上皮：膀胱、输尿管 ※结构和功能的统一？ 疏松结缔组织 成纤维细胞：内含丰富的粗面内质网、游离核糖体和高尔基体，这些结构说明成纤维细胞合成蛋白质的机能旺盛。 成纤维细胞可合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白，生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维等。 巨噬细胞：表面有许多褶皱和小泡，含有吞噬体和吞饮小泡—1、具有吞噬作用，能够吞噬异物，细菌，衰老变性细胞。 2、还有趋化性和定向运动性（趋化性：指巨噬细胞能够沿着某些化学物质的浓度梯度进行定向移动） 3、可合成多种生物活性物质 4、是一种递呈细胞，参与免疫应答的调剂作用。 （电镜下区分成纤维细胞和巨噬细胞，巨噬细胞比成纤维细胞小，染色比成纤维细胞深） 胶原纤维：疏松结缔组织的要紧纤维。H-E呈粉红色粗细不等。 韧性大，抗拉力强，柔软易弯曲等特点。 弹性纤维：新奇时呈黄色，又称黄纤维 弹性大，易拉长，除去外力后能复原。 软骨 同源细胞群：有着相同来源的一群细胞，（之后可分化成不同的细胞），在某种程度上说它们最初来源于同一个细胞，称同源细胞群。 骨 骨单位（哈弗斯系统）：骨单位位于内外环骨板之间，数量较多，呈圆筒状，与骨干长轴平行，每个骨单位由1个中央管和数层围绕它的骨单位骨板组成。 血细胞 红细胞：贫血：红细胞少于300万/mm3，血红蛋白少于100g/l
实验1 愈伤组织的诱导
实验1 愈伤组织的诱导 1、实验目的 （1）学习植物材料表面灭菌的常规方法； （2）了解接种的无菌操作技术； （3）学习诱导植物器官形成愈伤组织的方法。 2、实验原理 植物组织培养是应用无菌操作的方法，培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得组织培养成功的前提和重要保证。 由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，可以通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织。 3、实验仪器和试剂 仪器：超净工作台、光照培养箱、酒精灯、打火机、记号笔、脱脂棉、75%酒精及棉球。 无菌器材：无菌吸水纸（定性滤纸）、灭菌培养皿、无菌水、镊子、解剖刀。 植物材料：直根胡萝卜、烟草叶片。 试剂：95%乙醇、0.1%氯化汞。 培养基：MS+1mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+10g/L琼脂,pH5.8 4、实验步骤 （1）接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种间紫外灯，照射约30 min，然后关闭紫外灯，通风20 min后，打开日光灯即可进行无菌操作。 （2）外植体预处理：将胡萝卜根用流动的自来水冲洗干净，用小刀削去其表皮1-2mm，切成大约15-20mm厚的块段。 （3）以75%乙醇棉将手擦试一遍。以下操作全部在无菌条件下进行。
（4）外植体消毒：用0.1%的升汞消毒1min-3min（烟草叶片消毒10秒钟左右）,然后用无菌水中漂洗3次，每次2分钟。 （5）将胡萝卜片放入垫有无菌滤纸的培养皿中，一手用消毒好的镊子固定胡萝卜，一手用灭菌后的解剖刀切除胡萝卜块段截面的表面部分，余下部分切成包含形成层的长、宽约5mm，厚约5mm的小块。在完成切割后，将解剖刀和镊子放入95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后，放回原处，待冷却后即可使用。注意：在每一次使用镊子、解剖刀后，都要对其消毒一次。 （6）接种：在酒精灯焰附近处，用无菌镊子夹取胡萝卜薄片并迅速半插入琼脂培养基上，每皿放4-5片，注意将近根尖的一面接触培养基。将培养皿口在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒，立即用封口膜封好瓶口。 （7）培养：将接种后的三角瓶放到光照培养箱中，在25℃下的黑暗中培养3-4周。 5、结果记录与分析 （1）接种1周-10天后，调查、计算污染率： 污染率(%)=污染的材料数/接种材料数×100% （2）每周观察并记录胡萝卜外植体产生愈伤组织的情况，包括出现愈伤组织前培养物的形态，愈伤组织出现的时间以及愈伤组织的形态特征（愈伤组织的颜色、质地等），4周后调查、计算愈伤组织诱导率： 诱导率（%）=形成愈伤组织的材料数/接种材料数×100% 6、思考题 （1）分析影响愈伤组织诱导的主要因素。 （2）以胡萝卜为材料为什么要强调要切取含有形成层部分，胡萝卜其它部分（如茎、叶、花）能否诱导出愈伤组织？ 实验二真菌菌丝DNA提取 1实验目的 学习利用CTAB法少量提取真菌菌丝体DNA，同时掌握在DNA提取中各
实验二愈伤组织的诱导与分化
实验二 愈伤组织的诱导与再分化 一、目的 掌握外植体的消毒方法和接种技术；了解愈伤组织诱导的过程及再分化。 二、原理 以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养都能形成愈伤组织。愈伤再经分化培养，通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生成植株。 外植体如果是带菌的，在接种前都必须消毒。对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用；对于多茸毛表面粗糙不平的材料，要加展著剂（吐温20）以增强消毒效果。 三、实验材料 水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）； 四、仪器设备及用具 （一） 仪器设备 超净工作台 培养室 （二） 用具（每组5人用量） 量筒：100ml ×2 培养皿：￠9cm ×1 三角瓶：50ml ×2(无菌)，1000ml ×1 枪形镊：×4 无菌滤纸：（10cm ×10cm ）×5 五、试剂及培养基 （一） 试剂 75%酒精，2% NaCLO ，无菌水(每组1瓶400ml) (二) 培养基 1、诱导培养基：N 6+2,4-D2mg/1+蔗糖30g/l+琼脂8g/l 2、分化培养基：N 6+ CuSO 4·5H 2O 1.25mg/l+BA 2mg/l+NAA 1mg/l+蔗糖30g/l+琼脂8g/l 六、实验步骤 1、接种室、培养基及用具表面消毒 用75%酒精棉球试擦超净工作、镊子，将培养基及用具放工作台，打开紫外灯，照射20分钟以表面消毒。之后关紫外灯，打开工作台风机，通风30分钟后可进行无菌操作。 2、消毒剂的配制 （1）、75%酒精：每组配95ml 。量取95%酒精75ml ，加蒸馏水至95ml 即可. （2）、2%NaCLO ：每组配100ml. x ：应吸取的NaCLO 原液的毫升数； y ：NaCLO 原液的有效氯浓度。 3、种子去壳 用自制的脱壳砂纸脱去谷壳，注意保持胚完整。每人准备30粒去壳种子。 4、外植体消毒（以下工作在超净工作台内进行） 将米粒放入50ml 无菌三角瓶→无菌水洗一次→弃水，倒入75%酒精，搅拌，30秒→弃酒精，倒入2% NaCLO ，不时搅拌，30分钟→弃NaCLO ，用无菌水洗3次，每次停留10.5%×100 y X= (ml)
人体组织解剖学复习材料
人体组织解剖学复习材 料 文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
第一章上皮组织—被覆上皮 单层柱状细胞：小肠上皮有纹状缘，扩大吸收面积； 有杯形细胞，可分泌粘液，具有保护上皮的作用。 （主要分布于胃、肠、胆囊、子宫等） 假复状纤毛上皮：杯形细胞，柱状细胞（到达上皮游离面） 锥形细胞，梭形细胞（位于基底面） 杯形细胞分泌粘液，湿润上皮和吸入的空气，并黏着吸入的灰尘和细菌等异物。 借住纤毛的节律摆动，将含有灰尘和细菌的粘液向咽部推送。 （主要分布于呼吸道内表面） 单层扁平上皮：内皮：分布在心脏、血管、淋巴管内表面 间皮：分布在胸膜、腹膜、心外膜表面（游离面湿润而光滑，便于内脏器官的活动和减少摩擦。 其它：肺泡、肾小囊 单层立方上皮：甲状腺滤泡、肾小管 变移上皮：膀胱、输尿管 ※结构和功能的统一 疏松结缔组织 成纤维细胞：内含丰富的粗面内质网、游离核糖体和高尔基体，这些结构表明成纤维细胞合成蛋白质的机能旺盛。
成纤维细胞可合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白，生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维等。 巨噬细胞：表面有许多褶皱和小泡，含有吞噬体和吞饮小泡—1、具有吞噬作用，可以吞噬异物，细菌，衰老变性细胞。 2、还有趋化性和定向运动性（趋化性：指巨噬细胞可以沿着某些化学物质的浓度梯度进行定向移动） 3、可合成多种生物活性物质 4、是一种递呈细胞，参与免疫应答的调节作用。 （电镜下区分成纤维细胞和巨噬细胞，巨噬细胞比成纤维细胞小，染色比成纤维细胞深） 胶原纤维：疏松结缔组织的主要纤维。H-E呈粉红色粗细不等。 韧性大，抗拉力强，柔软易弯曲等特点。 弹性纤维：新鲜时呈黄色，又称黄纤维 弹性大，易拉长，除去外力后能复原。 软骨 同源细胞群：有着相同来源的一群细胞，（之后可分化成不同的细胞），在某种程度上说它们最初来源于同一个细胞，称同源细胞群。 骨 骨单位（哈弗斯系统）：骨单位位于内外环骨板之间，数量较多，呈圆筒状，与骨干长轴平行，每个骨单位由1个中央管和数层围绕它的骨单位骨板组成。 血细胞 红细胞：贫血：红细胞少于300万/mm3，血红蛋白少于100g/l
愈伤组织诱导及观察
一.实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二.实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出
愈伤组织的诱导形成及分化
第五章 愈伤组织的诱导、形成及分化 第一节愈伤组织的诱导、形成及特点 、愈伤组织的诱导和形成 愈伤组织是在离体培养条件下，经植物细胞脱分化和不断增殖所形成的无特定结构的组 织。经一段时间的生长和增殖以后，在其内部出现一定程度的分化，产生出一些具有分生组 织结构的细胞团、色素细胞或管状分子。 植物外植体在培养基和外界环境的作用下，经过一个复杂的过程形成愈伤组织，即：外植体+培养基+环境愈伤组织 愈伤组织的形成一般可分为三个时期：诱导期、细胞分裂期和细胞分化期（见图 4.1 ）。 改变原来的分化方向和代谢方式, 合成代谢加强，合成大量蛋白质和 核酸物质，为细胞的分裂和增殖奠定基础外植体外层细胞开始分 裂，细胞脱分化，愈伤组织结构疏松，缺少组织结构，颜色浅而透 明愈伤组织表层细胞分裂逐渐停止，转向内部的局部地区，并改变 分裂面的方向，出现瘤状结构外表，愈伤组织中可以发现维管组 织，但不形成维管系统 图4.1 愈伤组织的形成特点 1. 诱导期 愈伤组织诱导期又称启动期，是指外植 体组织受外界条件刺激后，开始改变原来的分裂 方向和代谢方式，合成代谢活动加强，大量合成蛋白质和核酸物质，为细胞分裂做准备。 诱导期的长短因植物种类、外植体的生理状态和外部因素而异，即使是同一种物种不同 基因型同一外植体的愈伤组织，其诱导期也不同。有的植物愈伤组织诱导期只有1天（菊芋），而有的植物诱导期需要数天（胡萝卜）。刚收获的菊芋块茎的诱导期仅22 h，但经贮藏5个 月后，诱导期延长为2天。 2. 分裂期 外植体在培养基上经过离体诱导后，外层细胞开始发生分裂，细胞脱分化。愈伤组织的 细胞分裂快，结构疏松，缺少组织结构，颜色浅而透明（见图 4.2）。分裂期的细胞分裂局限在愈伤组织的外缘，主要是垂周分裂。 图4.2 小麦幼胚愈伤组织诱导分裂期与分化期 （东北农业大学小麦研究室，李文雄，曾寒冰，胡尚连等，1994）愈伤组织进入分裂期时，外植体的脱分化因植物种类、基因型、外植体种类和生理状况 分化期分化期
愈伤组织诱导及观察
实验二愈伤组织诱导及观察 . 实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二. 实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技 术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件 下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期
起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是 成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有2，4- 二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸和细胞分裂素等。 分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。 分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2?4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。 愈伤组织的形态发生方式 经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化
龙凤竹愈伤组织诱导及再分化的试验
108 林业科技开发2013年第27卷第1期 doi ：10．3969/j．issn．1000－8101．2013．01．030 龙凤竹愈伤组织诱导及再分化的试验 袁云香 （渭南师范学院化学与生命科学学院，陕西渭南714000） 摘 要：以龙凤竹茎段为外植体，采用不同培养基进行愈伤组织诱导试验。将获得的龙凤竹愈伤组织转入再分化 培养基中，采用正交设计实验，添加不同浓度6－BA 、NAA 和蔗糖，组成9种不同的再生植株分化培养基，对龙凤竹愈伤组织进行再分化培养。结果表明:NMB 为最适的基本培养基;诱导培养基中添加6－BA 1mg /L +NAA 0．1mg /L 时，有利于龙凤竹愈伤组织形成，诱导率达86．67%;再分化率最高的培养基配方为NMB +6－BA 2．0mg /L +NAA 0．2mg /L +5%蔗糖。关键词：龙凤竹;组织培养;愈伤组织;再分化 Experiment on callus induction and redifferentiation of Pedilanthus tithymaloides var．nanus ∥YUAN Yun-xiang Abstract ：The stems of Pedilanthus tithymaloides var．nanus were taken as explant and induced callus formation．The dif-ferent culture media ，the proportion of different plant hormone were investigated．To add different concentration 6－BA and NAA to the medium composed of 9different plant regeneration medium by orthogonal design L 9（34）were investigated．The results showed that the suitable media NMB was in favor of the induction ，the induction medium added 1mg /L 6－BA and 0．1mg /L NAA was beneficial to the callus induction．The suitable regeneration medium was NMB containing 2．0mg /L 6－BA ，0．2mg /L NAA and 5%sucrose ，it could improve obviously the frequency of regenerated shoots．Key words ：Pedilanthus tithymaloides var．nanus ；tissue culture ；callus ；redifferentiation Author ’s address ：College of Chemistry and Life Science ，Weinan Teachers University ，Weinan 714000，Shaanxi ，China 收稿日期：2012－08－28修回日期：2012－10－29 基金项目：陕西省教育厅项目（编号：12JK0832）；陕西省教育厅项目（编号：09JK434）；国家自然科学基金项目（编号：31000410）。作者简介：袁云香（1980－），女，讲师，主要从事植物分子遗传学研究 工作。E- mail ：yuanyunxiang2006@126．com 龙凤竹（Pedilanthus tithymaloides var．nanus ）为 大戟科红雀珊瑚属红雀珊瑚的变种之一，植株小巧玲珑、通体绿色、茎肉质、叶排成两列、株型极为美观，其栽培育种技术已受到人们的高度重视。目前，关于其他变种的多肉多浆花卉的引种栽培研究已有报道，例如红雀珊瑚、玉麒麟、非洲霸王树等品种的栽培技术较为成功。由于龙凤竹种苗资源有限，常规的繁殖方 法耗时长、难以满足市场需求［1］ 。因此，组织培养技术已成为龙凤竹快速繁殖的重要途径。 在组织培养过程中，不同培养基、不同植物生长调节剂种类以及同一种植物生长调节剂的不同浓度都会影响龙凤竹愈伤组织植株的再生。因此，开展不同植物生长调节剂对龙凤竹愈伤组织植株再生的影响研究，有利于筛选出一种高效快速的龙凤竹愈伤组织植株再生方法，为龙凤竹的规模化生产研究奠定良好基础。 1材料与方法1．1 试验材料 以渭南市花鸟市场购买的龙凤竹当年生枝条的 嫩茎为试验材料。1．2试验方法 1．2．1 龙凤竹愈伤组织的诱导 剪取龙凤竹当年生枝条的新嫩枝，放入烧杯中，加入适量洗衣粉，在自来水下冲洗约2h 后，再用蒸馏水冲洗5min ，于超净工作台内，先用75%酒精处理15s ，再用0．1%升汞处理8min ，然后用无菌水冲洗5 6次，切成约0．5 1．0cm 的茎段作外植体，接种于诱导培养基上进行培养。诱导培养基基本成分为N 6、 MS 、NMB 、NB 。其中：（1）NMB 为N 6大量元素+MS 微量元素+B5有机元素；（2）NB 为N 6大量元素+B5微量元素及有机元素。4种基本培养基均添加脯氨酸500mg /L +水解酪蛋白300mg /L +6－BA 1．0mg /L +NAA 0．1mg /L +蔗糖3%+0．7%琼脂，pH 5．8（单位下同）。培养条件为24 26?光照培养，光照强度为1500 2000lx 、每天光照时间12h 。21d 后统计诱导率，并观察愈伤组织诱导及生长状 技术开发欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗