醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项
醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项
一、实验前的准备
1.1 仪器设备的检查与准备
在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验前，需要检查仪器设备是否完好，包
括电泳仪、电源、恒温槽等。同时，需要根据实验要求选择适当的试
剂和材料，并对其进行准备。
1.2 实验环境的准备
为确保实验结果的可靠性和精确性，需要在干净整洁、无尘无噪的实
验室环境中进行实验。此外，还需要注意保持适宜的温度和湿度条件。
二、样品制备
2.1 样品的选择
醋酸纤维素薄膜电泳可以用于分离和检测各种生物大分子，如DNA、RNA、蛋白质等。在进行样品制备前，需要根据实验要求选择合适的
样品，并对其进行处理。
2.2 样品制备方法
样品制备方法应根据不同的生物大分子类型和目的来确定。例如，在
进行DNA电泳时，需要将DNA片段加入到琼脂糖溶液中并混匀；在进行蛋白质电泳时，则需要将蛋白质样品加入到聚丙烯酰胺凝胶中。
三、电泳条件的设置
3.1 电泳缓冲液的配制
不同类型的生物大分子需要使用不同的电泳缓冲液。在进行电泳实验前，需要根据样品类型和实验要求配制适当的缓冲液，并调整其pH 值和离子浓度。
3.2 电泳条件的设置
在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验前，需要根据样品类型和实验要求设置合适的电泳条件，包括电场强度、运行时间、温度等。此外，还需要注意保持恒定的温度和湿度条件。
四、实验操作
4.1 样品加载
在进行样品加载时，需要注意避免气泡产生，并确保样品均匀地分布在凝胶中。同时，还需要根据实验要求调整加载量和位置。
4.2 实验过程中的观察与记录
在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验时，需要及时观察和记录凝胶上分离
带的出现情况，并根据结果进行进一步分析。
五、实验后处理
5.1 凝胶染色
在进行凝胶染色时，需要根据实验要求选择适当的染料，并按照说明
书进行操作。此外，还需要注意避免染料过度渗透和过度染色。
5.2 分析结果的处理
在进行分析结果的处理时，需要根据实验要求选择合适的方法，并对
数据进行统计和分析。此外，还需要注意避免误差和偏差的产生。
总之，在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验前，需要仔细准备、认真操作，并根据实验要求设置合适的条件和方法。同时，还需要注意保持实验
环境的干净整洁，并遵守相关安全规定。
醋酸纤维素薄膜电泳指导
醋酸纤维素薄膜电泳指导
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白目的和要求? 目的和要求? 掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方法原理? 原理? 带电质点在电场中向着反向电极移动的现象称为电泳其移动方向及速度取电泳，电泳决于本身所带电荷的性质和数量、电场强度以及溶液pH 等因素。蛋白质分子在溶液中的电泳是因其分子具有一些游离的可解离基团如-COOH、-NH2、-OH 等，因而在某种pH 值溶液中蛋白质分子带有一定的电荷。混合蛋白样品中由于各蛋白质的等电点不同，在同一pH 溶液中所带的电荷性质及电荷数目不同，因此在电场中各种蛋白质泳动的方向和速度也不同，从而使蛋白质混合样品得以分离。血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等，其氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状等均有所不同。由下表可见，血清中 5 种蛋白质的等电点大多低于pH7.0，pH8.6 的缓冲液中都电离成负离子(羧基解在离)，故在电场中均向阳极移动。蛋白质种类清/白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白等电点(pI) 4.88 5.06 5.06 5.12 6.85~7.50 相对分子量(Mr) 69 000 200 000 300 000 90 000~150 000 156 000~300 000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/L NaOH 溶液浸洗下来，通过比色法或将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，以测定特定电泳区带的蛋白质相对含量。本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物。醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化后形成的纤维醋酸酯，将其溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后于聚乙烯材料上涂
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨 论及注意事项 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。 实验步骤 1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。 2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。 3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。 4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。
5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。电泳时间根据分析的需要进行调整。 6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。 7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。 实验结果讨论： 1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。 2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。 3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。同时也需要控制
实验七 醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白
实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白 一.目的 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。 二、原理 蛋白质是两性电解质。当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PH 3、漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。 五、实验步骤 1、准备：用镊子取薄膜一条，浸入缓冲液中，完全浸透后（大约3-5分钟），用镊子取出，将无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，将滤纸对折，吸取多余的缓冲液（注意不要吸的太干）。 2、点样：取盖玻片一块，用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上，直直的在薄膜一端1/3处点样。 3、电泳：将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上，无光泽面要向下放置，点样端放在阴极，进行电泳。电泳条件：电压90-110V，电流0.4-0.6A,通电60分钟。 4、染色：电泳完毕，将薄膜浸入染色液（回收）中10分钟，进行染色。 5、漂洗：染色完毕，将薄膜取出，放入漂洗液中漂洗至背景无色，在浸入蒸馏水中。 6、图谱观察：观察图谱，将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。 注意事项 请带试验的老师试验结束后，将镊子回收。 醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。 电泳槽中间为正极，两端为负极。 染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。 漂洗薄膜时，请做到“少量多漂”，即用少量的漂洗液去漂洗薄膜，多漂几次，这样既不浪费漂洗液，还达到了漂洗的效果。 六.实验结果 醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论 醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论 引言： 醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。本实验旨在探究醋酸纤维素薄膜电泳在分离和分析中的应用，并进一步研究其影响因素以及优化条件。 实验方法： 1. 准备醋酸纤维素薄膜：将质量浓度为4%的醋酸纤维素溶液 在玻璃片上匀开，然后在60℃恒温槽中干燥30分钟； 2. 准备电泳缓冲液：将100mM的特定缓冲液配制好，保持 pH稳定； 3. 准备样品：将待测样品进行处理，如酶解、过滤等； 4. 实施电泳实验：将醋酸纤维素薄膜与玻璃片固定在电泳板上，注入电泳缓冲液至电极孔上方，然后将样品涂抹在薄膜上，按照特定电压和时间进行电泳。 实验结果： 经过实验，我们发现醋酸纤维素薄膜电泳可以有效地分离待测样品中的目标成分。通过调节电压和时间，我们发现改变这两个参数可以影响分离效果。在本实验中，我们进行了一系列实验，对不同电压和时间条件下的分离效果进行了分析。 首先，当电压在80V~120V范围内逐渐增加时，电泳分离的效果呈现出明显的改善。这是因为较高的电压可以提高电泳速度， 使目标成分在薄膜上移动的距离更短，从而加快分离过程。然而，当电压过高时，可能会发生样品电泳坍塌和电解液温升，导致分离效果下降。 其次，我们发现时间对分离效果的影响也很明显。在时间较短的情况下，目标成分无法完全分离，而在时间较长的情况下，目标成分已经移出薄膜，导致无法检测到。因此，我们需要根据待测样品的特点和所需分离程度来选择合适的时间。 讨论： 本实验结果表明醋酸纤维素薄膜电泳可以作为一种有效的分离和分析技术，同时也揭示了影响分离效果的关键因素。在进行实际应用时，我们需要根据待测样品的特点和所需分离程度来选择合适的电压和时间条件。此外，在实验过程中应注意控制电解液的pH值和温度，以保证实验结果的准确性和重复性。 总结： 醋酸纤维素薄膜电泳是一种有效的分离和分析技术，可以应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。通过调节电压和时间，我们可以优化分离效果。通过进一步研究影响因素和优化条件，这一技术有望在未来得到更广泛的应用。讨论延续： 除了电压和时间，还有其他因素也会影响醋酸纤维素薄膜电泳的分离效果。其中一个重要因素是电解液的组成。电解液中的离子种类和浓度会对分离效果产生显著影响。一般来说，较高的离子浓度会导致电泳速度减慢和分离效果下降。因此，在实际应用中，我们需要合理选择电解液的成分和浓度，以实现更 醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项 引言 醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的电泳技术，广泛应用于生物、化学等领域。在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验时，需要注意一些关键事项，以确保实验的准确性和可靠性。本文将详细介绍醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项，并提供相关建议和技巧。 实验前的准备工作 1.实验装置的准备：在开始实验之前，需要准备好醋酸纤维素薄膜电泳所需的 实验装置，包括电泳槽、电源、电极等设备。检查设备是否正常工作，并进行必要的清洁和消毒。 2.试剂的准备：准备好所需的试剂和缓冲液。确保试剂的质量和纯度，并按照 实验操作要求进行稀释和配置。 3.样品的准备：根据实验的目的和要求，选择合适的样品进行电泳实验。对于 复杂的样品，需要提前进行处理和分离。 实验操作注意事项 1.醋酸纤维素薄膜的制备：制备醋酸纤维素薄膜需要一定的技巧和经验。注意 操作过程中的温度、湿度等因素，以确保薄膜的质量和均匀性。 2.样品的加载和处理：在进行电泳前，需要将样品加载到醋酸纤维素薄膜上。 注意样品的加载量和位置，避免过载和重叠导致电泳效果不佳。对于含有高浓度蛋白质的样品，可以进行预处理，如蛋白质的去盐和去气泡处理。 3.电泳条件的设定：根据实验目的和样品的特性，选择合适的电泳条件。包括 电压、电流、电泳时间等参数的设定。注意避免过高的电场强度和过长的电泳时间，以防止样品的损失和变性。 4.温度和pH值的控制：醋酸纤维素薄膜电泳对温度和pH值的要求较为严格。 应根据实验要求控制好电泳槽内的温度和pH值，以提高电泳的稳定性和分辨率。 5.实验操作的规范性：操作过程中应严格遵守实验室的操作规程和实验安全要 求。注意个人防护，如戴手套、护目镜等，并避免操作时发生意外事故。 血清醋酸纤维薄膜电泳实验常见的问题分析 电泳是带电颗粒在电场的作用下，向着与带电颗粒电性相反的电极迁移的现象。电泳法可用于分离、鉴定或提纯许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等，因此电泳法已成为开展生物化学和分子生物学研究工作的一种常规的不可缺少的工具。电泳法(血清醋酸纤维薄膜电泳分离及测定)作为一项基本方法，已成为医学生生物化学实验教学常规开设的实验内容，该法操作简便，快速、价廉，样品用量少，实验技术成熟，分辨能力强，没有吸附现象、效果直观，便于保存等优点，但影响电泳图谱的因素较多，学生在实验中操作不当等，均可导致实验失败而得不到理想的电泳图谱。因此，为了达到预期的实验效果、提高学生对电泳实验的动手能力，根据我校学生血清醋酸纤维薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis，CAME）实验的实际情况，本文对CAME实验中电泳图谱常见的问题进行分析，以期为CAME实验教学提供参考。 1.出现五条以上的区带 在CAME实验中，有的同学电泳实验结果看起来很“完美”，有“许多”区带——五条以上（实验结果应是五条区带，分别是清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白），为什么会有这种现象呢？原来出现的“许多”区带（五条以上）正是在点样中出现的，有的同学在点样过程中实施“二次”点样［１］。CAME实验包含准备、点样、平衡、电泳、染色、漂洗、定量（该步骤没要求）等步骤，其中点样成功是获得清晰电泳图谱的关键。在试验中，为了便于学生操作，我们应用玻片进行点样，有的同学没有擦干玻片两侧的血清；有的同学觉得点样量太少，又重复进行一次点样。没擦干玻片两侧的血清，导致玻片两侧有两个点样面，后者进行的“二次”点样不可能在同一个位置，在进行电泳时，有的区带“跑”得快，有的“跑”得慢，区带与区带之间 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验注意事项 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种常用的蛋白质分离和分析方法。在进行该实验时，需要注意以下几点： 1. 样品处理：在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验前，需要对样品进行处理。首先，要避免样品的污染和氧化。可以在样品中加入适量的抗氧化剂，如抗坏血酸或谷胱甘肽，以保护样品中的蛋白质不受氧化的影响。其次，要对样品进行蛋白质浓缩和去除杂质的处理。常用的方法有超滤、离心和沉淀等。最后，还需要对样品进行还原和变性处理，以使蛋白质在电泳中具有良好的分离性能。 2. 电泳条件：在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验时，需要设置合适的电泳条件。首先，要选择合适的电泳缓冲液。一般情况下，选择pH值在8-9之间的缓冲液，如Tris缓冲液或甘氨酸缓冲液。其次，要根据样品的性质和分离的要求，选择合适的凝胶和凝胶浓度。常用的凝胶有聚丙烯酰胺凝胶和聚丙烯酰胺-醋酸纤维薄膜复合凝胶。最后，要控制好电泳的时间和电流。一般情况下，电泳时间不宜过长，通常在1-2小时之间。电流的选择要根据凝胶的尺寸和样品的性质来确定，一般在10-20 mA之间。 3. 样品加载：在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验时，要注意样品的加载量。加载量过多会导致蛋白质带宽增大，分离效果不好，加载量过少则会使蛋白质带宽变窄，某些蛋白质可能无法分离出来。 一般情况下，加载量应控制在10-20 μg之间。 4. 结果解读：在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验后，需要正确解读实验结果。首先，要注意对照组的设置。可以设置阳性对照和阴性对照，以确定实验结果的准确性。其次，要根据蛋白质的迁移距离和带宽来判断蛋白质的分子量和分离效果。在解读结果时，可以参考蛋白质分子量标准品的迁移距离和带宽。最后，要注意分析结果的统计学处理。可以使用软件进行分析，计算蛋白质的相对含量和显著性差异等。 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种重要的蛋白质分离和分析方法。在进行实验时，需要注意样品处理、电泳条件、样品加载和结果解读等方面的问题。只有严格控制实验条件，才能获得准确可靠的实验结果，并为后续的研究工作提供有力支持。 前言 血清蛋白： 血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要建造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中，脂肪酸被血清蛋白获取，并被运送到需要的部位。 牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别，它不是一定的，是多聚物，有的地方测的70 000，这就是一个数据了。在做PCR的时候会用到它。 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH 缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。 醋酸纤维薄膜电泳： 醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。 应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血 清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇激素及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。 特点： 1.（1）醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了测定的精确性。 （2）快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需90min左右。 （3）灵敏度高，样品用量少。血清蛋白仅需2μl血清，甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。 （4）应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。（5）醋酸纤维薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。 2、醋酸纤维薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操作简单，但分离效果不太好。如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中，只能分离出5—6条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出数10条区带。 实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 【原理】 由于不同的蛋白分子在同一环境中解离情况不同、分子大小不同等差异，电泳时可将其分离。醋酸纤维素薄膜电泳具有分离速度快，区带清晰，操作简便等优点。血清含多种蛋白质，用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带，经固定染色后不仅可看到清晰的色带，而且可定量测定，计算出各种蛋白质的百分含量，其正常值如下： A(白蛋白) 57～72% α1球蛋白 2～5% α2球蛋白 4～9% β球蛋白 6.5～12% γ球蛋白 10～20% 某些肝、肾疾病上述蛋白含量发生改变。 【仪器】 电泳仪 721型分光光度计染液盘漂洗盘镊子(或竹夹子) 【试剂】 1．巴比妥缓冲液(pH8.6，离子强度0.06)：巴比妥纳12.7g，巴比妥1.66g，先加水少量，小心加热溶解，最后用蒸馏水定容为1 000ml，4℃保存。 2．氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.5g，甲醇50ml，冰醋酸1.0ml，蒸馏水40ml，混匀。 3．漂洗液：95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，按比例混匀。 4．0.4N NaOH溶液。 【操作】 1. 点样：将醋酸纤维薄膜切成8cm×2cm条状，浸于巴比妥缓冲液，待完全浸透后，取出置于滤纸上，轻轻吸去多余的缓冲液，再于薄膜的无光泽面的一端 2.5cm处，用小玻片蘸取少许血清，垂直印于膜上，待样品浸入膜后，将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上，两端用数层浸湿的滤纸（或纱布）作盐桥贴紧。（其他样品同样处理，若需标记，只能用铅笔书写于有光泽面的两端。） 2．通电：一般电压用90～120V，电流约0.4～0.6mA／cm，通电45至60分钟，待电泳区带展开约25～35mm后关闭电源。 3．染色：通电完毕，将薄膜直接浸于染色液中，3～5分钟后取出放入另一盘中，用漂洗液浸洗数次,每次3分钟，至脱色使背景无色为止。染色完毕，将染色液倒回原瓶，漂洗液注入回收瓶。 4．定量：将漂洗完毕的薄膜吸干，剪下每种蛋白质色带，另于空白处剪一窄条薄膜，分别放入有4m1 0.4N NaOH的中试管内，振摇数次，使染料色泽浸出，30分钟后，分别于650nm处读吸光度(空白薄膜条浸出液作空白对照)。 【计算】 吸光度总和T为各种蛋白吸光度的总和：T＝A+α1+α2+β+γ。 分别计算每种蛋白的百分数 A 白蛋白（%）= 100% T α1 α1球蛋白（%）= ×100% T α2 α2球蛋白（%）= ×100% 血清醋酸纤维素薄膜电泳 一、目的要求 1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。 2.熟悉兔血清中各种蛋口质相对含量的测定原理和方法。 二、实验原理 1.电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的主物分子，如氨基酸、多肽、蛋口质、核昔酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。自山界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强, 影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。山于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变，进而影响其电泳迁移的速度, 所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行，缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。 2.醋酸纤维素薄膜 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素酷酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 nm, 有很强的通透性，对分子移动阻力很小。本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。 3.蛋白质 蛋白质是山氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和竣基外，侧链中尚有一些解离基，作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。蛋口质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，乂受所处溶液的pH影响。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动。蛋口质溶液的pH大于等电点，该蛋口质 实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法，具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点。醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理，便于照相和扫描计算结果。广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定。 【目的】 1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法。 2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义。 【原理】 带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0～7.3之间，在pH8.6的缓冲液中均带负电荷，在电场中都向正极移动。由于血清中各种蛋白质的等电点不同，因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同，又由于其分子大小不同，所以在电场中泳动速度也不同。分子小而带电荷多者，泳动速度较快；反之，则泳动速度较慢。因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区带，从正极端依次分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等，经染色可计算出各蛋白质含量的百分数。 【器材】 醋酸纤维素薄膜（2cm×8cm）、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器（可用盖玻片或或微量加样器）、直尺、铅笔、玻璃板（8cm×12cm）、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计。 【试剂】 1. 巴比妥缓冲液(pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06) 称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g，加500毫升蒸馏水，加热溶解。待冷至室温后，再加蒸馏水至1000毫升。 2. 氨基黑10B染色液 称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混匀，加蒸馏水至100ml。 3. 漂洗液 甲醇45ml、冰醋酸5ml，混匀后加蒸馏水至100ml。 4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液。 5. 透明液 实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 Serious Writing, Words in the Present 实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法;具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点..醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理;便于照相和扫描计算结果..广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定.. 目的 1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法.. 2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义.. 原理 带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳..血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0～7.3之间;在pH8.6的缓冲液中均带负电荷;在电场中都向正极移动..由于血清中各种蛋白质的等电点不同;因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同;又由于其分子大小不同;所以在电场中泳动速度也不同..分子小而带电荷多者;泳动速度较快；反之;则泳动速度较慢..因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区 带;从正极端依次分为清蛋白、α 1球蛋白、α 2 球蛋白、β-球蛋白和γ 球蛋白等;经染色可计算出各蛋白质含量的百分数.. 器材 醋酸纤维素薄膜2cm×8cm、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器可用盖玻片或或微量加样器、直尺、铅笔、玻璃板8cm×12cm、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计.. 试剂 1. 巴比妥缓冲液pH8.6;0.07mol/L;离子强度0.06 称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g;加500毫升蒸馏水;加热溶解..待冷至室温后;再加蒸馏水至1000毫升.. 2. 氨基黑10B染色液 称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml;混匀;加蒸馏水 至100ml.. 3. 漂洗液 甲醇45ml、冰醋酸5ml;混匀后加蒸馏水至100ml.. 4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液.. 5. 透明液 称取柠檬酸21g;N-甲基-2-吡咯烷酮150g;以蒸馏水溶解并稀释至500ml.. 操作 1. 准备 将缓冲液加入电泳槽的两槽内;并使两侧的液面等高..裁剪尺寸合适的滤纸条;叠成四层贴在电泳槽的两侧支架上;一端与支架前沿对齐;另 一端侵入电泳槽的缓冲液内;使滤纸全部湿润;此即“滤纸桥”图3-1.. 将醋酸纤维素薄膜切成2cm×8cm大小;在无光泽面的一端约1.5cm 处;用铅笔轻划一直线;作为点样位置..然后将无光泽面向下;置于盛有 巴比妥缓冲液的培养皿中浸泡;待充分浸透约20分钟即无白色斑点后取出;用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液.. 2. 点样 取少量血清于玻璃板上;用加样器取少量血清约2～3μl;加在点样线上;待血清渗入膜内;移开加样器..点样时应注意血清要适量;应形成均匀的直线;并避免弄破薄膜图3-2.. 3. 平衡与电泳 影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素： 【1】电泳介质pH的影响： 对于蛋白质及氨基酸等两性物质，电泳介质的pH影响蛋白质的电泳情况即可决定蛋白质的带电量(Q。 pl-pHvO,分子带正电荷，向负极泳动； pl-pH>0,分子到负电荷，向正极泳动； pI-pH=O,兼性离子,净电荷为零。 pH偏离等电点越远，分子所带净电荷越多，其泳动速度越快。 所以，当丨pl-pH丨接近零时，分子处于等电状态，不移动,影响条带清晰度，从而影响实验分离效果。 【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在 pH 4~6之间，因此，分离血清 蛋白常用pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷 (Tris缓冲液。 【2】缓冲溶液的离子强度： 离子强度低，电泳速度快,分离区带不易清晰； 离子强度高，电泳速度慢,但区带分离较清晰。 离子强度过低，缓冲溶液的缓冲量小，不易维持pH的恒定； 离子强度过高，则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。 所以，当离子强度过低时，电泳速度虽快，但易引起分离区带不清晰；当离子强度过高时，虽分离区带清晰，但点用速度过慢，所以要选择合适的离子强度。 【对应注意点】离子强度的选择要合适，一般常用的离子强速为0.02~0.2之间。 【3】电场强度的影响： 电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度一每厘米的电势差计算，也称电势梯度。电场强度越高，则带电离子的移动速度越快。随着电场强度的增高，电流强度增加,产热也增多。 产热的不良后果：①引起水的蒸发，改变溶液pH及离子强度 ②引起介质温度高，可使蛋白质变性。 另外，当电场强度过高时，电泳速度也会很快，分离区带将不清晰。 【对应注意点】电泳实验要控制在一定范围之内，进行高压电泳时，必须装备有效的冷却装置。 【4】电渗: 在电场中，由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电，在电场作用下，溶液就像一定方向移动，此种现象称作电渗。 在外电场的作用下，水向负极移动。 如果被测定样品带正电荷，则移动更快,区带分离不清晰； 如果被测定样品带负电荷，则移动减慢,区带分离较清晰。 所以，颗粒泳动所表现出来的速度决定于颗粒本身的泳动速度和溶液的电渗作用。 【对应注意点】在选用支持物时，应尽量避免高电渗作用的物质。 【5】支持物的选择: 醋酸纤维薄膜电泳实验 [关键词] 醋酸纤维薄膜；电泳；影响因素；对策 [key words] cellulose acetate membrane; electrophoresis; influencing factors; countermeasure 醋酸纤维薄膜电泳因其有快速省时、分辨能力强、操作简单、成本低廉、透明后利于扫描定量及长期保持等优点，被广泛应用于血浆蛋白、脂蛋白、糖蛋白、核酸及其他生物大分子的分析检测，已成为医学和临床检验的常规技术，血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验也成为了生物化学实验课程必开的基础实验项目之一。但该实验影响因素很多，每个环节的失误都会对实验结果产生影响而得不到理想的图谱，并且还造成很大浪费。笔者结合多年的实验教学经验对影响本实验结果的常见因素进行分析探讨，并提出了相应的解决对策。现报道如下： 1 电泳前准备的影响因素 1.1 醋酸纤维薄膜的因素 1.1.1 醋酸纤维薄膜的选择醋酸纤维薄膜如果厚度不一、粗面细孔不均、脆性不一，在电泳时会出现区带不均匀、白色斑点处蛋白质不泳动而影响图谱的效果[1]。对策：①购买知名度相对高的正规厂家生产的产品；②将干膜片漂浮于电极缓冲液表面，如漂浮20 s左右时，膜片出现白斑点或条纹，应舍去不用[2]。 1.1.2 醋酸纤维薄膜的浸泡由于醋酸纤维薄膜亲水性比较低，浸泡时间过短，不能保证膜片上有一定量的缓冲液，难以使其恢复 原来多孔的网状结构，所以浸泡时间不少于30 min。浸泡时用镊子将纤维薄膜条粗面向下平稳放入缓冲液中，使其自然湿润沉下液面或用手轻摇装液外盒，不要用镊子、玻棒等器材按压纤维素薄膜沉下液面，也不要同时将多条纤维素薄膜一起放进缓冲液盒。 1.2 标本的因素 1.2.1 血清标本的新鲜度不新鲜血清标本蛋白质电泳图谱醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项
血清醋酸纤维薄膜电泳实验常见的问题分析
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验注意事项
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
生化实验兔血清醋酸纤维素薄膜电泳
实验三-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素
醋酸纤维薄膜电泳实验