血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳,是一种分析和测定蛋白质的方法。下面将介绍一些相关的参考内容,以帮助您更深入了解这一方法。

1. 应用和原理

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳(SER-PAGE)是一种常用的蛋

白质电泳分析方法,可以用于分离和检测血清蛋白及其亚类。其原理是基于蛋白质在电场中的迁移速率与其电荷质量比有关。在薄膜电泳中,蛋白质样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离,然后通过染色等方法进行定量或定性分析。

2. 薄膜电泳装置和操作步骤

薄膜电泳装置包括电源、原电极、测电极、薄膜和样品槽。操作步骤通常包括制备样品和电解液,加载样品和电解液到薄膜中,接通电源,进行电泳分离,然后进行染色和分析。

3. 应用领域

SER-PAGE广泛应用于生物化学、生物医药和临床诊断等领域。在生物化学中,SER-PAGE可用于研究蛋白质结构与功能的关系。在生物医药中,SER-PAGE可用于血清蛋白分析、监测蛋白质药物的纯度和一致性。在临床诊断中,SER-PAGE可用于检测血清中的异常蛋白质,辅助癌症、心脏和免疫系统相关疾病的诊断。

4. SER-PAGE与其他电泳方法的比较

相比较传统的PAGE方法,SER-PAGE具有操作简单、不需

要注入胶、迁移速度快等优点。与SDS-PAGE相比,SER-PAGE适用于纯化量较小的样品,并且对样品中的蛋白质亚基分离效果更好。与凝胶电泳相比,SER-PAGE不需要特殊仪器设备,成本较低。

5. 发展趋势与进展

SER-PAGE作为一种传统的电泳技术,仍在不断发展和改进。比如,一些新的薄膜材料和成像技术的引入,使得分离和检测的灵敏度得到提高。同时,一些研究也在调整电解液组成和pH值,以优化蛋白质的分离和迁移。

总结起来,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的方法。通过了解其原理、操作步骤和应用领域,可以更好地理解和应用这一技术。随着技术的不断进步和改进,SER-PAGE有望在生物化学、生物医药和临床诊断等领域发挥更大的作用。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨 论及注意事项 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异,可以实现对蛋白质的定性和定量分析。在进行这种实验时,需要注意一些实验操作步骤和技巧,以确保实验结果的准确性和可靠性。 实验步骤 1.准备样品:从血清中提取要分析的蛋白质样品。可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。 2.制备凝胶:将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割,将膜放入电泳槽中,加入足够的电泳缓冲液。 3.电泳条件:确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度,根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件,如电场强度、电泳时间等。 4.上样:在预定位置上样,可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。

5.打开电源:连接电极,通电进行电泳。电泳时间根据分析的需要进行调整。 6.固定凝胶:停止电泳后,将凝胶取出,固定和染色。 7.分析:在透明胶支架上对凝胶进行扫描,记录下蛋白质的电泳迁移图像。 实验结果讨论: 1.蛋白质的分离:根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置,可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。根据蛋白质之间的迁移时间差异,可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。 2.蛋白质的鉴定:可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。也可以通过进一步的染色技术,如银染、荧光染色等,增强或显示蛋白质带的清晰度,从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。 3.实验重复性和稳定性:为了保证实验结果的可靠性,一般需要对实验进行多次重复操作,计算其平均值和标准差。同时也需要控制

实验七 醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白

实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白 一.目的 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。 二、原理 蛋白质是两性电解质。当PH>PI时,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动;当PH

3、漂洗液:95%乙醇45ml,冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。 五、实验步骤 1、准备:用镊子取薄膜一条,浸入缓冲液中,完全浸透后(大约3-5分钟),用镊子取出,将无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,将滤纸对折,吸取多余的缓冲液(注意不要吸的太干)。 2、点样:取盖玻片一块,用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上,直直的在薄膜一端1/3处点样。 3、电泳:将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上,无光泽面要向下放置,点样端放在阴极,进行电泳。电泳条件:电压90-110V,电流0.4-0.6A,通电60分钟。 4、染色:电泳完毕,将薄膜浸入染色液(回收)中10分钟,进行染色。 5、漂洗:染色完毕,将薄膜取出,放入漂洗液中漂洗至背景无色,在浸入蒸馏水中。 6、图谱观察:观察图谱,将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。 注意事项 请带试验的老师试验结束后,将镊子回收。 醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。 电泳槽中间为正极,两端为负极。 染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。 漂洗薄膜时,请做到“少量多漂”,即用少量的漂洗液去漂洗薄膜,多漂几次,这样既不浪费漂洗液,还达到了漂洗的效果。 六.实验结果

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法 一、原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电 颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电 点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之,则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及 大小有关,所以,可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。血清中含有 多种蛋白质,它们的等电点都在pH 7.5以下。将血清放于pH 8.6的缓 冲液电泳时,所有的血清蛋白都带有负电荷,在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等,分子颗粒大小不一,因而泳动速度不同,经电泳被分离开来。血清蛋白质的等电点和分子 量见下表。 本实验以醋酸纤维素薄膜(简称CAM)为支持物分离血清中的不同蛋白质。它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜,厚约120μm具有一定的 吸水性。 二、实验材料、仪器及试剂 1.材料:健康人血清或鸡血清 2.仪器:电泳仪电泳槽 3.试剂: (1)醋酸纤维素薄膜; (2)pH8.6 巴比妥缓冲液(离子强度0.06~0.07):取巴比妥0.83克,巴比妥钠6.38克,加蒸馏水加热溶解后,定容至500ml。 (3)染色液:取氨基黑10 B 0.5克,溶于50ml甲醇中,再加冰醋酸10

ml,蒸馏水40ml混匀。 (4)漂洗液:95%乙醇4.5ml,冰醋酸 5ml,蒸馏水50ml混合。 (5)透明液:95%乙醇80ml,冰醋酸20ml混合。 三、实验方法 1.准备薄膜:将切割整齐的2.5×6cm的薄膜条,浸入巴比妥缓冲液 中浸透后,取出,用吸水纸吸去多余缓冲液。 2.点样:仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面,在粗糙面距离薄膜一端1. 5cm处,用铅笔轻轻划一条直线。用玻棒蘸上血清样品,涂于盖玻片边 缘处(边缘长度应比膜条宽度窄),将此边缘按压在直线上。注意: 样品应点在薄膜的粗糙面一侧。待血清完全渗入薄膜后,将膜面翻转,点样面(粗糙面)朝下,置电泳槽中,薄膜点样端放于负极一侧。 3.电泳:打开电源,调节电压 110~130V,电流0.4~0.6m A/cm宽, 电泳时间45~60分钟,电泳完毕后,关闭电源。 4.染色漂洗:将薄膜从电泳槽中取出,直接浸入染色液中约5分钟, 再转入漂洗液中反复浸洗3~4次,直至背景颜色脱净为止。此时,正 常血清蛋白在薄膜上显示出五条区带。从前端至点样处的方向分别为 清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白。 5.定量测定:时可将膜条用滤纸压平吸干,按区带分段剪开,分别浸 在体积 0.4mol/L氢氧化钠溶液中,并剪取相同大小的无色带膜条作空 白对照,进行比色。或者将干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡2~ 3分钟后,取出贴于洁净玻璃板上,干燥后,即为透明薄膜图谱,可用 光密度计直接测定。 四、注意事项 1.点样好坏是电泳图谱是否清晰的关键,点样量要适当。 2.漂洗时应多漂洗几次,直至无蛋白区底色脱净为止。

血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 一、目的要求 1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。 2.了解猪血清蛋白质的各种成分。 3.熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。 4.熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。 二、实验原理 1.电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。 2.醋酸纤维素薄膜 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜,待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小。本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。 3.蛋白质 蛋白质是由氨基酸组成的,其分子中除两端的游离氨基和羧基外,侧链中尚有一些解离基,作为带电颗粒它可以在电场中移动,移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷,既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量,又受所处溶液的pH影响。当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质游离成正、负离子的趋势相等,即成为兼性离子,此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。处于等电点的蛋白质颗粒,在电场中并不移动。蛋白质溶液的pH大于等电点,该蛋白质颗粒带负电荷,反之则带正电荷。各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同,因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质,等电点就偏碱性。反之,凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质,等电点就偏酸性。蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。

实验二 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 【实验目的】 学习醋酸纤维素薄膜电泳的原理,掌握有关操作技术。 【实验原理】 本实验以乙酸纤维素薄膜作为血清蛋白电泳的支持介质。血清蛋白分子的大小、形状以及在同一pH下所带电荷的差异将导致它们在电场中的移动速度不同,从而使得它们在膜上能够分离开,染色后呈现出电泳图谱。 血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同(见表),在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5 种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在缓冲液(pH值8.6)中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。 在一定范围内,蛋白质的含量与结合的染料量成正比,故可将各蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来,进行比色测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。 测定血清中蛋白质含量有一定的临床意义。肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。 【器材与试剂】 器材:1.电泳仪2.电泳槽3.载玻片(厚约1mm)4.滤纸5.竹镊子6.可见光分光光度计或光密度计7. 乙酸纤维素薄膜(2cm×8cm)8.人血清(新鲜无溶血现象) 试剂:1.巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6,离子强度0.075)2.染色液(氨基黑 10B:)3.漂洗液4.透明液5.浸出液 【实验步骤】 1.准备:取一条大小为2cm×8cm 的醋酸纤维薄膜(可根据需要选择薄膜的大小),鉴别薄膜的光滑面和非光滑面,并用铅笔作标记,浸入缓冲液中,20分钟后,用镊子轻轻取出,将薄膜无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,薄膜上再放一张干净滤纸,吸去多余的缓冲液。 2.点样:用盖玻片(玻片宽度应小于薄膜)蘸取少量血清,将此血清均匀地涂在距纤维薄膜一端1.5cm 处接触,样品即呈一条状涂于纤维膜上。待血清透入膜内,移去载玻片。3.电泳:将薄膜平贴于已放在电泳槽上、点样面朝下,光面朝上,点样端为阴极。调电压100—120V或电流0.4---0.6 mA/cm,时间为45分钟。 4.染色:将薄膜浸于染色液氨基黑10B中3~5 分钟,取出,用漂洗液漂至背景无色(约4~5 次),再浸于蒸馏水中。 5、定量:剪下薄膜上各条蛋白质色带,另取一条与各区带近似宽度的无蛋白附着的空白薄膜,分别浸于4.0ml 0.4mol/L NaOH37℃水浴5~10 分钟,色泽浸出后,用722 分光光度计在590nm处比色,以空白膜条洗出液为空白调零,测定各管的吸光度。 6.观察结果 【实验结果】 1.依据所给的参数,分析哪种蛋白质电泳的距离最远,哪种蛋白质色带最深 复习思考题、作业题: 1.为什么将薄膜的点样端放在滤纸桥的负极端? 2.用乙酸纤维素薄膜作为电泳支持物有何优点?

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种新兴的蛋白质分离和分析技术。它将血清蛋白作为示踪物,通过电泳运动在醋酸纤维素薄膜上进行分离,从而实现对血清蛋白的分离和定量分析。本篇文章将介绍血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的原理、方法和应用,并提供相关的参考内容。 1. 原理: 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳基于电荷和大小的差异,通过电场作用将血清蛋白分离开来。在醋酸纤维素薄膜上,血清蛋白会在电场的作用下向阳极或阴极迁移,从而在薄膜上形成条带。不同类型和含量的血清蛋白具有不同的迁移速度和位置,可以通过分析条带的移动距离和形态来定量分析不同的血清蛋白。 2. 方法: (1)样品准备:将血清样品离心,取上清液即可。 (2)制备醋酸纤维素薄膜:将醋酸纤维素溶液均匀涂覆在电 泳盒上的玻璃或硅胶片上,待溶液干燥后形成醋酸纤维素薄膜。(3)电泳操作:将样品在醋酸纤维素薄膜上加载,设置适当 的电压和时间进行电泳操作。 (4)染色和测量:电泳结束后,将醋酸纤维素薄膜染色,然 后用影像扫描仪或相似设备测量分离和形态信息。 3. 应用: 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳已在医学和生物学研究中得到广泛应用。 (1)疾病诊断:通过分析血清中的特定蛋白质,可以判断某

些疾病的发生和发展,如癌症、心血管疾病等。 (2)蛋白质组学研究:血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳可以用 于蛋白质组学的定性和定量分析,有助于了解蛋白质组的组成和功能。 (3)药物筛选:通过血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳,可以评 估药物对特定蛋白质的影响,从而为药物筛选和设计提供参考。(4)食品安全检测:血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳可以检测 食品中的蛋白质污染,例如乳制品中的外源性蛋白质添加剂。 参考文献: [1] Ge R S, Tan B P. Determination of immunoglobulin in fish serum using cellulose acetate membrane electrophoresis[J]. Journal of chromatography, 1990, 494: 177-182. [2] Yan Z, Cao D, Lin B, et al. Identification of Cancer Biomarkers With Differential Abundance Using Statistical Analysis of High-Dimensional Proteomics Data[J]. Frontiers in Physiology, 2018, 9: 1744. [3] Fu Q, Li J, Qiu J, et al. Proteomics-based identification of a group of apoptosis-related proteins and biomarkers in gastric cancer[J]. International journal of oncology, 2016, 48(1): 343-352. [4] Zhao X, Li C, Ye X, et al. Indirect Competitive ELISA Assay for Rapid Detection of Milk Residues in Wine Using Nanomaterials to Amplify Signal[J]. Food Analytical Methods, 2009, 2(1): 18-23. [5] Kawakami T, Nishida K, Akutsu H. Blood serum protein electrophoresis on cellulose acetate film during adult Mizuneri (Jellyfish) Toxicity[J]. Journal of toxicological sciences, 1997, 22(2): 177-181. [6] Janssena

4、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳

实验四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 目的:熟悉醋纤薄膜电泳方法及其在分离血清蛋白中的应用,了解电泳技术的一般原理。 原理: 1、电泳:带电质点在电场中移动的现象称为电泳。 影响电泳泳动速度的因素:《生化实验》p.51. 内因:带电性质及电量,质点大小,质点形状 外因:电场强度,溶液pH值,溶液离子强度,电渗现象等 任何一个物质的质点,由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其它带电质点的吸附,会在电场中向一定的电极移动。例如,氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物之都具有许多可解离的酸性和碱性基团,它们在溶液中会解离而带电。一般来说,在碱性溶液中(即溶液的pH值大于等电点pI;本实验的pH值为8.6,pI不一样,样品带电荷也就不一样;选取不合适的pH,会使样品带有不同的正或负电荷,影响电泳),分子带负电荷,在电场中向正极移动。而在酸性溶液中,分子带正电荷,在电场中向负极移动。移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。 不同的质点在同一电场中泳动速度不同,常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度的定义是带电质点在单位电场强度下的泳动速度。即:p.53.《生化实验》泳动度首先取决于带电质点的性质,即质点所带静电荷的量、质点的大小和质点的形状。一般来说,质点所带静电荷越多,质点直径越小,越接近于球形,则在电场中泳动速度越快;反之,则越慢。泳动度除受质点本身性质的影响外,还受其它外界因素的影响,如溶液的粘度等。 影响泳动速度的主要外界因素有下列几种:p.53-56. 一)电场强度 二)溶液的pH值pH值距等电点越远,质点所带静电荷越多,泳动速度也越快;反之,则越慢。因此分离某一混合蛋白质样品时,应选择一个合适的pH值,使各种蛋白质所带静电荷的量差异较大,以利于分离。为使电泳过程中溶液的pH恒定,必须采用缓冲液。 三)溶液的离子强度越高,泳动速度越慢,一般最适离子强度在0.02~0.2之间。 为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性,缓冲液通常要保持一定的离子强度,一般在0.02-0.2,离子强度过低,则缓冲能力差,但如

实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 【实验目的】 (1)了解电泳的一般原理,掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。 (2)测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。 【实验原理】 带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。 血清中含多种蛋白质,当在pH这8.6时,这些蛋白质均带负电,它们在电场中向阳极移动,由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同,所以在同一电场,同一pH环境中涌动速度不同。 本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白,α~球蛋白,β~球蛋白,γ~球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分,立体构象,分子量,等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。分子量小,等电点低,相同碱性pH。 表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量 缓冲体系中,带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。例如,以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右,染色后可显示5条区带。清

蛋白泳动最快,其余依次为α1~,α2~,β~及γ~球蛋白。这些区带经洗脱后可用分光光度法定量,也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。临床医学常利用它们异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。此法由于操作简单,快速。 图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 为清蛋白,2,3,4,5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白,6为点样原点

(3)优点。目前,已成为临床生化检验的常规操作之一。 【临床意义】 清蛋白62-72% α1—球蛋白3-4% α2—球蛋白6-10% β~—球蛋白7-11% γ~—球蛋白9-18% 血清蛋白电泳的病理改变多半是清蛋白降低和一种或二种以上球蛋白增加。 表2 血清蛋白的临床意义 【试剂】 1.巴比妥缓冲液(pH=8.6离子强度为0.06):称取巴比妥纳1 2.76克,巴比妥1.66克, 置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后,移置100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。 2.染色液:氨基酸B0.5克,加甲醇50ml,冰乙酸10ml,蒸馏水40ml,溶后备用。 3.漂洗液:甲醇或乙醇45ml,加冰乙酸5ml,蒸馏水50ml混匀即可。 4.洗脱液:0.4mlNaOH 5.透明液:冰乙酸25ml,加95%乙醇75ml混匀。 【操作】 1.准备点样:将薄膜条(8×2cm)侵入巴比妥缓冲液,再于薄膜的无光泽面的一端1.5cm 处,用毛细管或玻片取血清呈直线状滴加,等渗入膜内后,将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上,两端用浸湿的滤纸作桥贴紧。盖严,平衡5分钟。 2.通电:一般电压为120-140V,电流约(0.4-0.6mA/cm)通电45-60分钟,待电泳区带 展开约25-35mm后关闭电源。 3.染色:通电完毕,将薄膜直接浸于染色液中,2-3分钟后取出,用漂洗液清洗数次,脱

醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质

醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质 生物化学实验 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质 一、实验目的 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法 二、实验原理 蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。 血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在 剪下,分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。 肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。 三、实验器材 1、醋酸纤维薄膜(2cm*8cm,厚度120μm) 2、人血清;

3、烧杯及培养皿数只; 4、点样器; 5、竹镊子; 6、玻璃棒; 7、电吹风; 8、试管六只; 9、恒温水浴锅; 10、电泳槽; 11、直流稳压电泳仪; 12、7220型分光光度计; 13、剪刀 四、实验试剂 1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液:取两个大烧杯,分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中; 2、染色液,可反复使用; 3、漂洗液:取乙醇45ml ,冰醋酸10ml ,混匀; 4、浸出液:0.4mol/L NaOH 溶液; 5、透明液:取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ,混匀。 五、实验操作 1、准备和点样 取一条醋酸纤维薄膜,浸入缓冲液中,完全浸透后,用镊子轻轻取出,将薄膜无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液; 用玻棒蘸取少量血清,涂在点样器上,然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触,样品即呈一条状突于纤维膜上。待血清透入膜内,将薄膜平贴于已放在电泳槽上、并已浸透缓冲液的纱布上,点样端为阴极; 2、电泳 接通电源,设定电泳电压为100V ,通电50分钟; 3、染色

醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质

生物化学实验 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质 一、实验目的 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法 二、实验原理 蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。 血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在 剪下,分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。 肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。 三、实验器材 1、醋酸纤维薄膜(2cm*8cm,厚度120μm) 2、人血清; 3、烧杯及培养皿数只; 4、点样器; 5、竹镊子; 6、玻璃棒; 7、电吹风; 8、试管六只; 9、恒温水浴锅; 10、电泳槽; 11、直流稳压电泳仪; 12、7220型分光光度计; 13、剪刀 四、实验试剂

1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液:取两个大烧杯,分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中; 2、染色液,可反复使用; 3、漂洗液:取乙醇45ml ,冰醋酸10ml ,混匀; 4、浸出液:0.4mol/L NaOH 溶液; 5、透明液:取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ,混匀。 五、实验操作 1、准备和点样 取一条醋酸纤维薄膜,浸入缓冲液中,完全浸透后,用镊子轻轻取出,将薄膜无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液; 用玻棒蘸取少量血清,涂在点样器上,然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触,样品即呈一条状突于纤维膜上。待血清透入膜内,将薄膜平贴于已放在电泳槽上、并已浸透缓冲液的纱布上,点样端为阴极; 2、电泳 接通电源,设定电泳电压为100V ,通电50分钟; 3、染色 电泳完毕,将薄膜浸于染色液中10分钟,取出,用漂洗液漂至背景无色,再浸于蒸馏水中; 4、定量 将漂净的薄膜用滤纸吸干,剪下薄膜上各条蛋白质色带,另取一条与各区带近似宽度的无蛋白附着的空白薄膜,分别浸于4.0ml 0.4mol/L NaOH 溶液中,37℃水浴10分钟,色泽浸出后,用7220型分光光度计在590nm 处比色,以空白膜条洗出液为空白调零,测定各管的吸光度。 5、透明 另外取电泳好的薄膜,待其完全干燥后,浸入透明液中20分钟,取出,平贴于干净玻片上,干燥,即得背景透明的电泳图谱。 六、实验数据记录 设各部分吸光率为:γβααA A A A A 、、、、白21。则吸光度总合为: 总A = 白A + 1αA +2αA +βA +γA =0.774 白蛋白比率=白A /总A =0.651 α1-球蛋白比率=1αA /总A =0.049

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白 【实验目的】 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。 【实验原理】 蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。 血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在pH8.6的缓冲液中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。 表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量 蛋白质名称等电点相对分子质量 白蛋白 4.88 69000 α1-球蛋白 5.06 200000 α2-球蛋白 5.06 300000 β-球蛋白 5.12 90000~150000 γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内,蛋白质的含量与结合的染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。 肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。 【实验器材及试剂】

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验注意事项

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验注意事项 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种常用的蛋白质分离和分析方法。在进行该实验时,需要注意以下几点: 1. 样品处理:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验前,需要对样品进行处理。首先,要避免样品的污染和氧化。可以在样品中加入适量的抗氧化剂,如抗坏血酸或谷胱甘肽,以保护样品中的蛋白质不受氧化的影响。其次,要对样品进行蛋白质浓缩和去除杂质的处理。常用的方法有超滤、离心和沉淀等。最后,还需要对样品进行还原和变性处理,以使蛋白质在电泳中具有良好的分离性能。 2. 电泳条件:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验时,需要设置合适的电泳条件。首先,要选择合适的电泳缓冲液。一般情况下,选择pH值在8-9之间的缓冲液,如Tris缓冲液或甘氨酸缓冲液。其次,要根据样品的性质和分离的要求,选择合适的凝胶和凝胶浓度。常用的凝胶有聚丙烯酰胺凝胶和聚丙烯酰胺-醋酸纤维薄膜复合凝胶。最后,要控制好电泳的时间和电流。一般情况下,电泳时间不宜过长,通常在1-2小时之间。电流的选择要根据凝胶的尺寸和样品的性质来确定,一般在10-20 mA之间。 3. 样品加载:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验时,要注意样品的加载量。加载量过多会导致蛋白质带宽增大,分离效果不好,加载量过少则会使蛋白质带宽变窄,某些蛋白质可能无法分离出来。

一般情况下,加载量应控制在10-20 μg之间。 4. 结果解读:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验后,需要正确解读实验结果。首先,要注意对照组的设置。可以设置阳性对照和阴性对照,以确定实验结果的准确性。其次,要根据蛋白质的迁移距离和带宽来判断蛋白质的分子量和分离效果。在解读结果时,可以参考蛋白质分子量标准品的迁移距离和带宽。最后,要注意分析结果的统计学处理。可以使用软件进行分析,计算蛋白质的相对含量和显著性差异等。 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种重要的蛋白质分离和分析方法。在进行实验时,需要注意样品处理、电泳条件、样品加载和结果解读等方面的问题。只有严格控制实验条件,才能获得准确可靠的实验结果,并为后续的研究工作提供有力支持。

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 【原理】 由于不同的蛋白分子在同一环境中解离情况不同、分子大小不同等差异,电泳时可将其分离。醋酸纤维素薄膜电泳具有分离速度快,区带清晰,操作简便等优点。血清含多种蛋白质,用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带,经固定染色后不仅可看到清晰的色带,而且可定量测定,计算出各种蛋白质的百分含量,其正常值如下: A(白蛋白) 57~72% α1球蛋白 2~5% α2球蛋白 4~9% β球蛋白 6.5~12% γ球蛋白 10~20% 某些肝、肾疾病上述蛋白含量发生改变。 【仪器】 电泳仪 721型分光光度计染液盘漂洗盘镊子(或竹夹子) 【试剂】 1.巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度0.06):巴比妥纳12.7g,巴比妥1.66g,先加水少量,小心加热溶解,最后用蒸馏水定容为1 000ml,4℃保存。 2.氨基黑10B染色液:氨基黑10B 0.5g,甲醇50ml,冰醋酸1.0ml,蒸馏水40ml,混匀。 3.漂洗液:95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,蒸馏水50ml,按比例混匀。 4.0.4N NaOH溶液。 【操作】 1. 点样:将醋酸纤维薄膜切成8cm×2cm条状,浸于巴比妥缓冲液,待完全浸透后,取出置于滤纸上,轻轻吸去多余的缓冲液,再于薄膜的无光泽面的一端 2.5cm处,用小玻片蘸取少许血清,垂直印于膜上,待样品浸入膜后,将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上,两端用数层浸湿的滤纸(或纱布)作盐桥贴紧。(其他样品同样处理,若需标记,只能用铅笔书写于有光泽面的两端。) 2.通电:一般电压用90~120V,电流约0.4~0.6mA/cm,通电45至60分钟,待电泳区带展开约25~35mm后关闭电源。 3.染色:通电完毕,将薄膜直接浸于染色液中,3~5分钟后取出放入另一盘中,用漂洗液浸洗数次,每次3分钟,至脱色使背景无色为止。染色完毕,将染色液倒回原瓶,漂洗液注入回收瓶。 4.定量:将漂洗完毕的薄膜吸干,剪下每种蛋白质色带,另于空白处剪一窄条薄膜,分别放入有4m1 0.4N NaOH的中试管内,振摇数次,使染料色泽浸出,30分钟后,分别于650nm处读吸光度(空白薄膜条浸出液作空白对照)。 【计算】 吸光度总和T为各种蛋白吸光度的总和:T=A+α1+α2+β+γ。 分别计算每种蛋白的百分数 A 白蛋白(%)= 100% T α1 α1球蛋白(%)= ×100% T α2 α2球蛋白(%)= ×100%

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果 一、前言 醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法,它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来,从而便于进行后续的研究。本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。 二、实验方法 1. 样品制备 将血清样品加入到离心管中,并进行离心处理,去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。然后取出上清液,进行下一步处理。 2. 薄膜电泳 将制备好的样品加入到电泳槽中,并在两端接上电极。然后通过调节电场强度和时间等参数,使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动,并最终被分离开来。 3. 银染

将分离好的样品进行银染处理,使得其中存在的蛋白质能够被显色。 然后观察显色效果,并对其进行记录和分析。 三、实验结果 经过以上实验步骤,我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。具体结果如下: 1. 蛋白质谱图 通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示: (图片略) 从图中可以看出,我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的 条带,并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动,最终被分离开来。 2. 蛋白质种类 通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后,我们可以看到其中存在多 种不同种类的蛋白质。具体包括:

(1)白蛋白 (2)球蛋白 (3)免疫球蛋白 (4)转铁蛋白等。 3. 调整实验参数对结果的影响 在实验过程中,我们还尝试了调整一些实验参数,以观察其对结果的影响。具体包括: (1)电场强度:当电场强度较大时,不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动,并且更容易被分离开来。但是,如果电场强度过大,也会导致蛋白质的断裂和聚集,从而影响分离效果。 (2)电泳时间:当电泳时间较长时,不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来,并且条带也更加清晰。但是,如果电泳时间过长,也会导致蛋白质的断裂和聚集,从而影响分离效果。 四、结论

实验三-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法,具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点。醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理,便于照相和扫描计算结果。广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定。 【目的】 1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法。 2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义。 【原理】 带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0~7.3之间,在pH8.6的缓冲液中均带负电荷,在电场中都向正极移动。由于血清中各种蛋白质的等电点不同,因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同,又由于其分子大小不同,所以在电场中泳动速度也不同。分子小而带电荷多者,泳动速度较快;反之,则泳动速度较慢。因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区带,从正极端依次分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等,经染色可计算出各蛋白质含量的百分数。 【器材】 醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器(可用盖玻片或或微量加样器)、直尺、铅笔、玻璃板(8cm×12cm)、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计。 【试剂】 1. 巴比妥缓冲液(pH8.6,0.07mol/L,离子强度0.06) 称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g,加500毫升蒸馏水,加热溶解。待冷至室温后,再加蒸馏水至1000毫升。 2. 氨基黑10B染色液 称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混匀,加蒸馏水至100ml。 3. 漂洗液 甲醇45ml、冰醋酸5ml,混匀后加蒸馏水至100ml。 4. 洗脱液 0.4mol/LNaOH溶液。 5. 透明液

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果 引言 醋酸纤维薄膜电泳是一种常用于生物分离和分析的技术,可以通过电场作用将带电粒子在纤维薄膜上移动,实现对混合物的分离。本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术对血清蛋白进行分离,以便进一步研究其组成和功能。 实验方法 1.准备醋酸纤维薄膜:将醋酸纤维薄膜切割成所需尺寸,并在实验室条件下保 持干燥。 2.准备电泳槽:将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中,确保其与电极接触良好。 3.准备样品:采集血清样品,并将其稀释至适当浓度。 4.进行电泳分离:将稀释后的血清样品均匀地涂抹在醋酸纤维薄膜上,然后施 加适当电场使样品在薄膜上移动。 5.停止电泳:根据需要的分离程度,适时停止电泳过程。 6.分析结果:观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的分离情况,并记录相关数据。 实验结果 血清蛋白分离图谱 根据实验结果,我们观察到在醋酸纤维薄膜上成功地分离了血清蛋白。下图展示了血清蛋白分离图谱,其中纵轴表示电迁移率,横轴表示时间。 1.血清蛋白A的电迁移率为X,迁移时间为Y。 2.血清蛋白B的电迁移率为X,迁移时间为Y。 3.血清蛋白C的电迁移率为X,迁移时间为Y。 4.… 血清蛋白组成分析 根据血清蛋白分离图谱,我们可以进一步分析血清蛋白的组成。通过与已知标准品进行比对,我们确定了以下血清蛋白的组成及相对含量:

1.血清蛋白A占总蛋白的X%。 2.血清蛋白B占总蛋白的X%。 3.血清蛋白C占总蛋白的X%。 4.… 血清蛋白功能研究 根据血清蛋白的组成分析结果,我们可以进一步研究血清蛋白的功能。以下是我们对某些血清蛋白功能的初步研究结果: 血清蛋白A的功能 1.血清蛋白A在某种生理过程中起到重要的调节作用。 2.进一步研究表明血清蛋白A可能与X疾病的发生和发展有关。 血清蛋白B的功能 1.血清蛋白B与免疫系统的调节密切相关。 2.研究发现血清蛋白B在X疾病的治疗中具有潜在的应用价值。 血清蛋白C的功能 1.血清蛋白C参与了血液凝固过程的调控。 2.进一步研究表明血清蛋白C可能与X疾病的预后有关。 结论 通过醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的实验,我们成功地获得了血清蛋白的分离图谱,并对其组成和功能进行了初步研究。这为进一步深入探究血清蛋白的生物学特性和疾病相关性奠定了基础。 参考文献 [1] Author A, Author B, Author C. Title of the paper. Journal Name, Year, Volume(Issue), Page numbers.

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验 一.实验原理 1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离。 2、影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。 3、影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。 4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高,对样品无拖尾和吸附现象等优点。 5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小。 6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同,在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳,染色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快,其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。 二.实验仪器和试剂 ✧器材 醋酸纤维素薄膜(3×8cm),培养皿,载玻片,电泳仪,电泳槽,粗滤纸,镊子 ✧材料 新鲜血清(未溶血) ✧试剂 1、巴比妥缓冲液(pH 8.6,离子强度0.06): 巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g,加水至1000ml。置4℃冰箱保存,备用。(已配置) 2、染色液:氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml,蒸馏 水40ml,混匀。 3、漂洗液:含95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,蒸馏水50ml,混匀。 4、NaOH溶液:称取NaOH 16g,定容至1000ml。 三.实验过程 一.准备与点样 1.将薄膜剪成3×8cm的小条,在薄膜无光泽面距一端1.5cm处用铅笔轻轻划一条直线,表示点样位置。

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

血清醋酸纤维素薄膜电泳 一、目的要求 1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。 2.了解猪血清蛋白质的各种成分。 3.熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。 4.熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。 二、实验原理 1.电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。 2.醋酸纤维素薄膜 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜,待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小。本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。 3.蛋白质 蛋白质是由氨基酸组成的,其分子中除两端的游离氨基和羧基外,侧链中尚有一些解离基,作为带电颗粒它可以在电场中移动,移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷,既取决于其分子组成中碱性和酸性氨

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