胶回收方法全攻略
胶回收方法全攻略
说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而
烦恼。到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如
酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。
一、胶回收的关键参数
胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。
回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：回收得率，是我们考虑的另一个重要参数。由于上电泳的样品量通常都很少，电泳的过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低;又比如说，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。值得注意的是，由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响，所以回收率并非是一成不变的。
其他：操作方面，相信大家都会比较喜欢操作简单，快速，应用起来方便的方法或者产品。比如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计;离心过柱就比离心沉淀要简单方便。载量，就是每次回收最多能回收的产物的量。这个自然是越大越好了，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质，过量的产物吸附不了就是被浪费掉的。难免有时你需要回收比较大量的产物，大载量就很有优势——同一个片断你要用2个柱子，多郁闷啊。
二：胶回收方法和分类
20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambrook和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA和EB染料
观测DNA相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。生物通将在后面另文讨论聚丙烯酰胺凝胶电泳片断
回收的方法，这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法：
1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。但是这个方法不适合用于大片断的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，Buffer 溶解，(区别在于这里)加入纯化填料填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来，离心，取上清，就是回收的产物。这个方法适合各种不同大小的片断，特别是大片断的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，现在用的人已经不多了。想当年经费紧张的时候，低熔点琼脂糖贵，不舍得这么浪费的，比较取巧省钱的法子就是常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔点琼脂糖区域再将那块家伙切出来，就可以非常非常节约了。除了直接酚抽低熔点琼脂糖凝胶，还有人用琼脂糖酶来消化琼脂糖凝胶，条件也相当温和，只是那酶价格并不便宜(光那酶的成本就少
5-6块，还不算其他的麻烦事)，多数的酶只适合用低熔点琼脂糖，问题是我不用酶也可以直接酚抽，费时间还特长，所以，并不觉得特别好用。后来据说T
家的琼脂糖酶可以用于常规琼脂糖，前提是你有办法在65度把那胶化了。但那需要极好的耐心。我们后面会有介绍。后来有老师从美国回来了，才有机会尝试更好的低熔点琼脂糖—— FMC(现在叫做Cambrex了)的GTG级别低熔点琼脂糖!那才是最简单的方法呀!洗的超级干净的电泳槽灌胶，电泳后，直接将条带切下65度保温融化，就可以直接在融化的琼脂糖—DNA混合物中加酶进行后继实验——所谓的GTG就是遗传技术级，可以在凝胶中进行各种酶反应的哦!实验条件非常温和，非常适合大片断的回收。
4.透析带电洗脱法。烦，简直不堪回首。切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间，让DNA走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。由于绑透析带非常难搞，只有在万不得已的非常大的片断时才会考虑的。也是丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一。后来看到以色列的一个小公司GeBA有出简易透析管(生物通早在02年就有新技术专栏文章介绍的)，就是将小指管两边各开一小窗，贴上透析膜，把胶块放在管中再电泳。由于不需要绑透析带，使用方便;而且管中溶液体积小，容易处理;膜的面积也小吸附也少;顿时觉得是救星。后来貌似Pierce也推出了类似的东西，买起来更方便一点。
5.DEAE纤维素膜纸片法和其他改良法。早期实验室最常用方法之一。将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的 DEAE 纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳一会儿，条带上的DNA被膜片截留，取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保温洗脱，直到膜上没有 DNA了，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。这个方法不适合做较大的DNA，因为洗脱比较困难。曾经常用的另一方法是在电泳胶前挖小槽，加入缓冲液，电泳一小会儿，手提紫外监视，等条带进入槽中，还没在另一头上岸时停止电泳，吸出溶液酚氯仿抽提(加点甘油可降低DNA在溶液中的移动速度，防止那边还没全部下水，这边就已经上岸了的情况。当然也可以挖大点的孔或者多吸几次，反正是要沉淀的，体积大些不要紧)。不过这些方法在柱回收试剂盒推出后都渐渐要淘汰了。毕竟比较麻烦费时间，而且回收的产物纯度也不比试剂盒——前者是纯化介质吸附DNA 后彻底除去溶液，经过洗涤残留在纯化介质上的杂质，最后洗脱;手工的方法多是用酚氯仿抽提溶液后乙醇沉淀，由于有些多糖沉淀属性和DNA相似时就容易共沉淀下来。鉴于竞争的日趋激烈,纯化试剂价格逐渐向下,连核酸纯化领域的顶级名牌Qiagen也开始大幅度的折扣优惠,所以,有条件还是选择试剂盒,比自己慢慢摸索要更能节约宝贵的青春。所以，这里准备将回收片断按照大小不同来分别介绍不同用途的产品：
常规片断级(DNA片段为100bp-10kb)：主流方法是柱回收试剂盒
大片段级(DNA片段>7kb)：可选方法是玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒，电洗脱
小片段级(DNA片段<100bp)：柱回收试剂盒
三、常规片断级的选择指南：所谓常规级，即回收片段大小介于100bp和10kb 之间，在这个范畴内包含了
一般的质粒或者克隆片段的回收。主流方法是柱回收试剂盒。
1. Qiaquick Gel Extraction Kit
品牌：Qiagen
回收范围：70bp-10kb
推荐指数：
价格指数：(50包装1,350，250包装6,372，约27元/反应，现有半价活动，价格非常
可亲!)
特点：
. 高达80%回收率
. 操作快速简单，3步完成70bp-10kb片段的回收
. 提供三色指示剂的电泳上样loading Buffer,方便判断和操作
. 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注
射、体外转录等后继实验
使用心得：
Qiaquick最引以为傲的就是非常稳定的质量，高回收率和方便的步骤。产品质量的稳定可靠，一向是实验首要条件。毕竟，实验步骤是环环相扣的，每一步出现问题都会导致后患无穷，费时费力，还更费钱，对心情更是一种折磨。用试剂盒不就图省事和可靠吗?从核酸纯化领域起步的Qiagen，在全球实验室都享有极好的口碑，是值得信赖的选择。因为Qiagen有强大的研发队伍，精益求精优化实验操作的每一环节，绝非普通临摹制品、仿制品可比。以回收率为例，我们前面提到，由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响，所以回收率并非是一成不变的。所以Qiagen以严谨的态度提供多种条件下的详细介绍：使用QIAquick回收之前和回收之后再混合的DNA片段 (大小已指出) 。对所有尺寸的片段均获得了接近80%的回收率。
A 1–5: 回收之前; P: 回收之后再混合。样品使用 1.5% 琼脂糖凝胶分析(TAE buffer)。
B 1–3: 回收之前; P: 回收之后混合。样品于 3.5% 高分辨琼脂糖凝胶上分析( TAE buffer)。M: pTZ-HinfI marker。
记得《分子克隆II》里曾经说少于500ng的DNA几乎没有回收价值，看看上表就可以发现，现在的技术发展，即使是少到100ng的DNA还有70%的回收率呢!而且操作方法还很简单。虽然是几乎不需要实验技巧的简单操作，如果你注意到一些小技巧还是很有帮助的。DNA回收纯度取决于纯化介质对DNA吸附的特异性、洗涤杂质是否彻底。而DNA回收率和浓度则与elution buffer的体积，以及buffer在柱子上停留的时间有关。较大的洗脱体积可以提高回收率，充分洗脱，但是会造成产物浓度太低不好用。比如 100-200ul的洗脱液可以彻底洗脱
纯化柱吸附的DNA，不过考虑到后继实验的方便，Qiaquick建议使用50ul的洗涤液，正对加入膜中央(避免加在管壁上而不能充分接触纯化介质)，可以完全浸润回收柱上的纯化膜。最低建议采用30ul洗脱液，但是可能会降低回收率。有人试过用15—25ul洗脱2次，觉得这样第一次浓度高第二次比较充分，其实没有必要，只要适当延长在柱上停留的时间，就有助于提高得率——Qiagen的Protocol说明，30ul停留1分钟要比50ul停留1分钟回收浓度高1.7倍。充分离心(保证速度和时间)有助于提高得率和纯度，减少残留对后继实验的影响(这个方法要注意不是所有试剂盒都可以使用，因为有些试剂盒的纯化柱填料松一些，离心有时可能导致少量填料脱落，而Qiagen的这个产品是膜式的，结合非常牢固，据生物通线报，中大有人用这个柱子高温消毒后重复使用，效果不赖，可见皮实。当然这是厂家绝对不推荐的)。其他的技巧也是大家熟知的，比如切胶的时候要尽量减少切胶体积(不超过400mg)，由于Qiaquick柱子的载量达到10ug，如果胶块实在太大而预期DNA总量不超过10ug，可以用大一点的管溶解，分几次上柱离心吸附后再洗涤。注意的是紫外照射时间不要太长，因为紫外线对DNA(特别是对于较大的片段)有影响。还有就是溶胶要彻底，用枪头把胶块弄碎一点有助于50度下快速溶解。溶解完全后溶液的颜色指示溶液的pH 值，如果变色需要调pH值以防止实验失败。需要用ddH2O或者TE洗脱的，注意pH在7.0—8.5之间的回收率最高。回收率和片断大小、多少有关，较大的片断(7kb以上)回收率会有所降低，洗脱液预热到50度再加入纯化柱膜中央，有助于提高产率。除了比较适合个人使用的传统离心式，Qiagen还提供抽滤式的胶回收试剂盒，用抽滤的方法替代离心，使得实验可以连续进行，特别适合批量进行的需要——想象看，你只要将溶胶液加入装配好的抽滤管中，哗一下就抽干了，再加洗涤的试剂，哗一下又好了，多快呀!节约很多时间和功夫，不需要在离心机前面拿进拿出。以后的全自动操作模式就是这样的啦!
看到这里可能大家都会说Qiagen的东西好是好，但是就是贵，一般的实验室都舍不得平时用，往往留着关键时刻做，不错，好东西自然不便宜，不过想要吃到便宜的午餐也不是不可能.
2.MinElute Gel Extraction Kit
品牌：Qiagen
回收范围：70bp-4kb
推荐指数：
价格指数：(50包装1,485，约29元/反应，现生物通有半价活动哦)
特点：
. 洗涤体积只要10ul，回收产物浓度高，方便后继实验
. 使用方便快捷(wash-and-spin)
. 高回收率
. 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注
射、体外转录等后继实验
使用心得：
如果要回收片断量本来就很少，比如只有几十个ng，用常规的试剂盒洗脱得到
将近50ul的产物，连接反应就很难做——要不体积很大，要不会觉得浓度太低。如果是用来做显微注射、标记等实验就更难受，只能再浓缩一次，不但麻烦，多一次操作也会导致产物进一步的损耗。这一点，就是快速的柱回收试剂盒比传统方法不如的地方，因为传统方法得到沉淀后可以按照需要溶解得到自己需要的浓度，柱回收就不行。MinElute就是为这个需要而诞生的。MinElute胶回收试剂盒是基于一种特殊的Silica gel menbrane的膜技术，能在高盐浓度的条件下迅速吸附DNA，在低盐或者纯水条件下释放DNA，只要短短几分钟，就能彻底除去包括引物、核苷酸、酶、矿物油、盐、琼脂糖、EB以及其它杂质，和以前QIAGEN 的Silica gel menbrane有所不同的是，它要求的洗脱体积非常小，只要10ul(当然这更要注意让洗脱液加在膜上)，纯化的DNA是高度浓缩的，回收率在80%以上。这样就非常适合用于后继实验操作，不需要再浓缩一次。MinElute为了确保高
质量和高回收率，利用了特殊的binding buffer，这种缓冲液是特别设计和优
化了的，可以增加DNA分子特异性吸收，减少杂质，不过也带来了一个问题，那就是导致MinElute的DNA吸附范围是70bp到4kb，而不是以往的10kb，因此
4kb以上的只能用Qiagen的Qiaquick或其它产品了，而10kb以上就该用QIAEX II系列。此外MinElute柱子的载量是5ug，毕竟洗脱体积这么小。体积小则小矣，可是质量并不含糊，回收的产物可以用于PCR、克隆、标记、测序、体外
转录等后继实验，也同样可以用于显微注射、芯片分析等要求非常严格的实验。你尽管可以说，我又不需要做那些严格实验，我就克隆PCR什么的就够了，哪儿要那么纯——然而你也不能否认这本来就是一种质量可靠的信心保证。特别是当遇到特价活动的时候，你还犹豫什么呢。除了以上几个方面，MinElute系列产品正如Qiagen其它产品一样：讲究精确完美，注重细节品质。MinElute有三种上样Buffer染料颜色(青、蓝和黄)，方便样品分析，并且也包含pH目测指示染料，可以在溶胶的时候帮助指示实验错误(pH值对胶回收影响较大，见下)——错误的颜色代表了凝胶 Buffer重复使用等实验配置不当导致的不正确
化合物，这种情况可通过醋酸钠进行调整。
3. Promega Wizard SV Gel and PCR Clean-up System
品牌：Promega
回收范围：100bp-10kb
推荐指数：
价格指数：(50次包装的试剂盒报价为562元，11元/次，折扣前)
Promega的产品在进口品牌中一向以价格可亲而著称。这个胶回收试剂盒也不例外。并且惊喜的发现这个试剂盒的性能参数好得令人刮目相看!首先是
100bp—10kb的回收率高达80%—95%(用于PCR产物回收时适用于100bp—3.2kb 的片断);然后是每个柱子的载量高达40ug!低至 10ng。可以容纳更多的DNA，满足一次大量片断回收的需求。另外，试剂盒推荐的洗脱体积是50ul，但是如果需要浓度高的回收产物，也可以用不少于 15ul的纯水洗脱，而且回收率也不会有太大的影响。回收产物可用于测序、克隆、标记、酶切、体外转录和芯片分析等后继实验。操作也同样非常简单，无非是溶胶吸附、洗涤柱子，最后洗脱。这样，一个试剂盒兼具了多种优点，加上价格相宜，实在是进口产品中的性价比之王。特别是大到9kb的片断，回收率可以达到 95%是难得的。这个试剂盒使用中值得注意的几个小技巧，比如如果凝胶体积大于350mg，可以分次离心(一个柱子最多可以过相当于3.5g凝胶!就是吸附10次!)，而且离心前要让溶胶液在柱子上静置1分钟让其充分吸附。对于超过5kb的片断，溶胶的时候不要振荡，胶较浓的时候溶胶时间要延长保证充分溶解。洗涤2次有助于得到更干净的产物。
4、Montage Gel Extraction Kit
品牌：millipore .html' target='_blank'>Millipore
回收范围：100bp-10kb
推荐指数：
价格指数：
特点：
. 时间短：10分钟spin
. DNA保存完整
. 试剂盒包括做为过滤装置的凝胶喷雾器(nbulizer)、离心瓶和TAE gel extraction buffer
使用心得：
这一款胶回收试剂盒不同于之前提到的凝胶回收方法——Montage利用的是从
凝胶中抽取(compression)DNA片段的方法：通过离心力解离凝胶的结构，驱使琼脂糖在gel nebulizer中穿过小孔，这样形成的胶泥就被甩进样品过滤盖中。因此无需其它多余的操作，直接将切下来的凝胶放进去，经过5000g/10min，即可得到回收DNA片段(见下)。
回收率见下：
Typical DNA Recoveries from Agarose Gels
DNA Size (bp)
Percent DNA Recoveries
100
78
700
71
1000
77
2027
47
4361
35
9416
32
23130
29
Millipore先进的膜技术使得Millipore纯化系列其实在自动化高通量领域有相当好的口碑，价格实惠质量可靠。
4.经济实惠的国产之选
在普通级胶回收中应该提及的是一些国产品牌，毕竟在现今胶回收技术成熟并得到了广泛应用的基础上，一些国产品牌也提供了经济实惠的胶回收试剂盒，比如天根，杭州维特洁，深圳天地人，等等。低廉的价格，使得平时用起来也挥洒自如不心疼，如果说进口产品打开的实验自由化之门，那么跟进的国产产品则实实在在让国内科研经费紧张的实验室也能分享简化实验的快乐，穷人的孩子也有春天。在国内，价格还是最有杀伤力的。天为时代已经被Qiagen收购并改名
天根，而在国产品牌中口碑很好的维特洁也被Axygen收购。生物通在这里列举了部分国产产品的对比，当然，要注意参数是厂家提供的，标准有差别的。
品牌
天根(天为时代)杭州维特洁(已被Axygen收购)深圳天地人Omega
产品
普通琼脂糖凝胶回收试剂盒
AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒小量胶回收试剂盒琼脂糖凝胶回收试剂盒
回收片段大小
100bp-10kb
75bp-10kb
50bp-20kb
回收率
>80%(100 bp的
DNA片段回收率为
50 %以上)
60—85%(根据长度不
同)
85%
产品描述
可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。采用优化的试剂和方便的DNA制备管，适合从各种电泳凝胶(TAE或TBE)中提取多至8 ug线性DNA。独特的缓冲液体系，在保证凝胶完全融化的同时，防止了DNA片段的损坏和降解。纯化后的DNA保持完整的生物活性，适用于多种用途:如连接、体外转录、PCR、测序、微注射等分子生物学研究。应用: 酶切,连接,PCR等用途样品: 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
时间: 15分钟
结合能力:25μg
洗脱体积:30-50μ
价格
50包装270元
200包装980元
约5元/反应
50包装350元
250包装1570元
约7元/反应
50包装160元
100包装240元
200包装380元
500包装750元
约3元/反应
50包装299
200包装1100
约6元/反应
(Q-spin)
大片段级：指的是片段大小超过10kb的DNA片断，由于越长的DNA分子和纯化膜的结合力越强，洗脱力越差，在离心过柱时可能被“扯断”，因此常规的离心过柱的方法并不适合对付这些大家伙。在凝胶电泳的大片断回收，特别是几十kb的大片断，经典方法是生物通前文提到的电洗脱。此外，低熔点琼脂糖和琼脂糖酶消化也是常常有人选用的方法，新兴的方法是用玻璃奶或者纯化填料，生物通在此一并介绍。其实无论用什么方法，在回收大片断时一定要牢记你对付的是大片断，操作时一定要小心注意，粗暴的操作，最后结果也是自己来承受的。这些方法中，速度最快的就是玻璃奶或者纯化填料珠的试剂盒了。毕竟，谁愿意为一个小小的胶回收浪费2个多小时呢?有那功夫干点别的不好?我最早用的其实是当时的Pharmacia(后来改为Amersham，现在是GE Healthcare Life
废旧塑料回收利用技术
废旧塑料回收利用技术
废旧塑料回收利用技术 范勇，邬素华 （天津科技大学材料科学与化学工程学院，天 津） 本文综合介绍了废旧塑料的各种回收利用技术及产业现状，分析了现有技术所存在的优缺点，指出了废旧塑料回收利用的重要性。 近年来，随着生产的发展和人们消费水平的提高，塑料制品消费量不断增大，废旧塑料总量也迅速增加。据统计，在大中城市，废旧塑料比例高达10%左右。因此，采用积极对策，加强对废旧塑料废弃物的处理是保护良好的生态环境，促进塑料工业健康发展，构建和谐社会的重要措施。由于经济、法律及民众意识等方面的原因，将废旧塑料用掩埋方法处理已越来越不可行。在发达国家，环保意识的增加和可用的掩埋式垃圾处理场空间的减少促进了塑料回收工业的发展，但是现在只有大约5%～25%的废旧塑料被回收，占所有材料总量的8%。大约18%的聚合物废弃物被堆在垃圾场，其中40%是塑料包装用品。由于它们随处可见、种类多、生物降解性差、使用周期短，因而倍受关注。数据表明，在欧洲，回收塑料方法包括焚烧能量回收、机械回收、原料或化学回收等。下面就介绍一些废旧塑料的回收利用技术。 1分离技术 废旧塑料回收的一个重要方法就是将其分离成单一组分，混合塑料一般价值低、产品性能差且不稳定，但分离后可用于价值高的制品。所以为了能实现其最高价值，生产厂商推广使用能识别塑料种类的材质标识，不少发达国家的塑料
产品都有明确的材质标识。对没有标识的塑料材料，过去识别其种类最简单的方法是观其色（火焰的颜色和烟雾的颜色，外观），听其音（敲击声），闻其味（燃烧过程中产生的气味），而这些方法都需要丰富的经验，所以很难适应工业化生产的需要。因此国外开发出很多塑料分离设备，为塑料再生利用的机械化和自动化提供了良好的基础。有效分离塑料的自动鉴别技术包括：浮降法、空气分离、水旋法、近红外分光法、X射线分析法、静电分离技术、选择性溶解。 1.1浮降法（湿分离） 浮降法分离是混合塑料片材分离的最早方法之一。它通常由一种密度介于要分离塑料中间的流体介质来完成的，密度比介质小的塑料将上浮，而密度大的下沉。从理论上讲，此法不受形状和大小的影响，尤其适用于分离粉碎不均匀的、密度差较小的塑料。而且此工艺可以将废旧塑料上的残留食物有效地去除。但这种分离方法的缺点是产生大量需要专门处理的废水。 1.2空气分离（干法分离） 在干法分离中，浮降步骤将被空气分类或空气分离代替。空气分离与震动传输联用可除去大颗粒物质，如金属成分、玻璃和重的厚塑料板。分离装置有立式和卧式两种，流动空气作用于分离的物料，不同的物质按其密度的大小，分别降落在处于不同位置的装有锯齿形隔板的矩形箱内。空气分离是使用最广泛的固体废料分离方法，但其缺点是回收品可能会有食品腐烂的味道或粘附在塑料制品上脂肪腐烂的气味。 1.3水旋法（离心分离） 水旋法分离是采用离心加速器的原理使聚合物的混合物与杂质分离，它可将不同聚合物和杂质从粒状塑料组分中分离出来，而且出料量远高于悬浮分离法。德国KHD Humbold Weda设
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项 ①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。 ②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。 ③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。 ④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。 ⑤可以改用去离子水洗脱。但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。 ⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。 ⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。 ⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，
其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。 ⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。 关于胶回收切胶的一点注意事项 1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。 2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。 4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。 胶回收
promega 胶回收完整说明书
Promega Corporation ·2800 Woods Hollow Road ·Madison, WI 53711-5399 USA Toll Free in USA 800-356-9526·Phone 608-274-4330 ·Fax 608-277-2516 ·https://www.360docs.net/doc/734169425.html, Printed in USA.Part# TB308Revised 11/09Page 1 1. Description ..........................................................................................................12. Product Components and Storage Conditions ............................................33. General Considerations ....................................................................................44.Gel Slice and PCR Product Preparation .. (4) A.Preparing the Membrane Wash Solution (4) B.Dissolving the Gel Slice (5) C. Processing PCR Amplification Products (6) 5.DNA Purification (6) A.DNA Purification by Centrifugation (6) B.DNA Purification by Vacuum............................................................................76. Troubleshooting .................................................................................................97. References .........................................................................................................118.Appendix .. (11) https://www.360docs.net/doc/734169425.html,position of Buffers and Solutions (11) B. Related Products (12) 1.Description The Wizard ?SV Gel and PCR Clean-Up System is designed to extract and purify DNA fragments of 100bp to 10kb from standard or low-melt agarose gels in either Tris acetate (TAE) or Tris borate (TBE), or to purify PCR products directly from a PCR amplification. Up to 95% recovery is achieved depending upon the DNA fragment size (see Table 1). PCR products are commonly purified to remove excess nucleotides and primers. This membrane-based system, which can bind up to 40μg DNA, allows recovery of isolated DNA fragments or PCR products in as little as 20 minutes, depending on the number of samples processed and the protocol used. The purified DNA can be used for automated fluorescent DNA sequencing, cloning, labeling, restriction enzyme digestion or in vitro transcription/translation without further manipulation.?Clean-Up System All technical literature is available on the Internet at https://www.360docs.net/doc/734169425.html,/tbs Please visit the web site to verify that you are using the most current version of this Technical Bulletin. Please contact Promega Technical Services if you have questions on use of this system. E-mail techserv@https://www.360docs.net/doc/734169425.html,.
塑料的回收及其利用
我国塑料瓶的消耗状况 PET材料的良好阻隔性使其成为各种碳酸饮料、果汁、奶乳制品、茶饮料、矿泉水等食品和饮料最主要的包装材料。在我国，目前所有的PET塑料瓶全部是由从石油中提炼的原生PET原料制造而成，每年高达300万吨的PET塑料瓶产量消耗了超过1800万吨的石油，同时也造成了巨大的环境压力。PET再生塑料瓶的再生利用，有利于节约资源。在北京市范围内，每年废弃的PET塑料瓶总量高达15万吨，约为60亿只废旧塑料瓶，对环境造成极大的危害。PET瓶不仅广泛用於包装碳酸饮料、饮用水、果汁和茶饮料等，是当今使用量最大的饮料包装，而且广泛用於食品、化工、药品包装等众多领域。PET塑料在包装领域中具有广泛的应用，无论是包装膜、卷材、还是啤酒瓶，都使用PET塑料。但是当这些材料被废弃时，面临着如何处理的问题。因此PET瓶的回收利用不仅可以解决环保问题，而且可以做为一种新的原料资源，缓解中国PET原料不足的矛盾。 回首中国的30年的改革开放，中国虽然在经济领域取得了举世瞩目的成就，但是也给中国的环境带来了很严重的破坏。水污染、大气污染、固体废弃物污染等等。给中国的经济的带来了缩水。人们也逐渐认识到了这一问题，相应的提出了走持续发展道路，绿色GDP 战略，循环经济战略，等等的一系列措施。有此可见，PET塑料瓶的回收利用符合中国面临的现实问题，对于环境保护，节约资源，可持续发展有大益。 （2）塑料瓶回收方法及我国回收现状 塑料瓶回收方式主要有两种：物理回收方法及化学回收方法。 物理回收方法：物理回收法是将废PET瓶经过分离、破碎、洗涤及干燥处理后进行再造粒的方法。物理回收法主要有2种。①将废PET瓶切碎成片，从PET中分离出HDPE(高密度聚乙烯)、铝、纸和胶黏剂，再将PET碎片经洗涤、干燥和造粒。这种回收方法的特点
DNA胶回收中常见问题和解答
1、如何计算提取率 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关 DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因 1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃； 3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
胶回收方法全攻略
胶回收方法全攻略 说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而 烦恼。到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如 酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。 一、胶回收的关键参数 胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。 回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。 回收率：回收得率，是我们考虑的另一个重要参数。由于上电泳的样品量通常都很少，电泳的过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低;又比如说，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。值得注意的是，由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响，所以回收率并非是一成不变的。 其他：操作方面，相信大家都会比较喜欢操作简单，快速，应用起来方便的方法或者产品。比如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计;离心过柱就比离心沉淀要简单方便。载量，就是每次回收最多能回收的产物的量。这个自然是越大越好了，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质，过量的产物吸附不了就是被浪费掉的。难免有时你需要回收比较大量的产物，大载量就很有优势——同一个片断你要用2个柱子，多郁闷啊。
废旧塑料回收方法和用途解析
废旧塑料回收方法和用途 薄膜是塑料制品中的一大烊，种类繁多，使用寿命一般较短，是回收再生利用的主要品种之一，下按用途，形态简介实例。 （1）农用薄膜，农用薄膜主要有地膜和棚膜，地膜主要为PE膜，棚模有PE，PE/EV A，PVC膜，在回收再生利用时，应将PE和PVC膜区分开来，农用薄膜一般较脏，且常夹带有泥土，沙石，草根，铁钉，铁丝等，要除去铁质杂质并清洗，回收利用的方法主要是造粒，如果，具人工分拣，清洗条件时，经清洗，干燥后的废膜即可直接用热挤压方法生产塑料制品，如盆，桶，塑料法兰等。 废农膜再生粒料用途如下 1、PE再生粒料，PE再生粒料可用来仍生产农膜，也可用来制造化肥包装袋，垃圾袋，农用再生水管，栅栏，树木支撑，盆，桶，垃圾箱，土工材料等。 2、PVC再生粒料，PVC再生粒料可用来生产重包装袋，农用水管，鞋底，等 包装薄膜，包装薄膜的材料包括玻璃纸（赛珞玢），PE，PVC，PP，EVA，PVDC，PA，PET以及各种复合薄膜。单层的一种材料的包装膜，在经分拣，清洗后，可如农用薄膜一样直接制成塑料制品或造粒后制成各种制品。复合薄膜包括不同塑料的复合薄膜和塑料与纸，铝箔，等其他材料制成的薄膜，回收后的再生处理要复杂一些如： 多层塑料复合薄膜，多层塑料复合薄膜有PE/PP，PE/EVA/PE，PE/粘合剂/PA/粘合剂/P E，PP/PVDC等，在再生利用前，首先要将不同的材料分离。分离可用溶剂分离法。 纸塑复合薄膜，纸塑复合薄膜在再生利用前需先将纸塑分离，这也是纸塑复合分离的方法，分离设备为一带有电加热的一镀铬空心料筒，料筒内装有一个带叶片的空心圆筒，料筒和空心圆筒以相反方向转动，破碎后的纸塑混合物加入料筒，在料筒中经加热的混合物上的
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法 琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambroo k和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA 和EB染料观测DNA 相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法： 1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。但是这个方法不适合用于大片断的回收。 2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，Buffer溶解，（区别在于这里）加入纯化填料填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来，离心，取上清，
就是回收的产物。这个方法适合各种不同大小的片断，特别是大片断的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀；另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。 3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，现在用的人已经不多了。想当年经费紧张的时候，低熔点琼脂糖贵，不舍得这么浪费的，比较取巧省钱的法子就是常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔点琼脂糖区域再将那块家伙切出来，就可以非常非常节约了。除了直接酚抽低熔点琼脂糖凝胶，还有人用琼脂糖酶来消化琼脂糖凝胶，条件也相当温和，只是那酶价格并不便宜（光那酶的成本就至少5-6块，还不算其他的麻烦事），多数的酶只适合用低熔点琼脂糖，问题是我不用酶也可以直接酚抽，费时间还特长，所以，并不觉得特别好用。后来据说T家的琼脂糖酶可以用于常规琼脂糖，前提是你有办法在65度把那胶化了。但那需要极好的耐心。
E.Z.N.A Gel Extraction Kit 琼脂糖凝胶回收试剂盒 中文 说明书
琼脂糖凝胶回收试剂盒E.Z.N.A Gel Extraction Kit 适合于D2501-**,D2500-**&D2502-** 准备工作 1. 浓缩的SPW Buffer需用乙醇按如下稀释: D2500-00&D2501-00&D2502-00 加入20ml 100%的乙醇; D2500-01/02&D2501-01/02&D2502-01/02 每瓶加入100ml 100%的乙醇; 注意:稀释后的DNA Wash Buffer需室温保存;所有步骤必须在室温下进行. 操作方案 配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段.任何类型或等级的琼脂糖都可以使用. 我们强烈的推荐使用新鲜的TAE/TBE电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量; 2. 电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA片段切下来.并尽量去除多余的凝胶. 注意:DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒,同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜. 3.称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积.一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次; 重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding Buffer混合物的pH值.如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少.观察混合物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5μl 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值.经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.一般情况下,使用新鲜的电泳缓冲液,凝胶-Binding buffer混合物的PH值的不会升高; 4.转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体. 一个HiBind DNA柱子最多可容纳700μl的溶液,如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液继续加上柱子上.但是每一个HiBindTM柱子最多可以结合25~30μg DNA.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱中. 5. 将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步. 6.将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释. 7. 将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟, 弃去滤出液;,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体. 这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的. 8. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度. 如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低. DNA的产量及质量:把纯化产物的样品稀释一定的倍数后,分别在260nm和280nm下测其光吸收值,回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算: DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量. 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率.(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记.如果此值1.8,则意味着核酸的纯度>90%.另一方面,如果纯化产物的产量较低时,可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度.载体
废旧塑料回收再生料的方法
废旧塑料回收再生料的方法 世界合成树脂的产量已达2亿吨,大量消费后塑料的处理问题已成为当今地球环境保护的热点。目前,消费后塑料的处理有下述几种途径:填埋、焚烧、堆肥化、回收再生、采用降解塑料。 一.塑料回收再生方法 塑料回收后再生方法有：熔融再生，热裂解，能量回收，回收化工原料及其他等方法。（1）熔融再生：熔融再生是将废旧塑料重新加热塑化而加以利用的方法。从废旧塑料的来源分，此法又可分为两类：一是由树脂厂，加工厂的边角料回收的清洁废塑料的回收；二是经过使用后混杂在一起的各种塑料制品的回收再生。前者称单纯再生，可制得性能较好的塑料制品；后者称复合再生，一般只能制备性能要求相对较差的塑料制品，且回收再生过程较为复杂。 （2）热裂解：热裂解方法是将挑选过的废旧塑料经热裂解制得燃烧料油，燃料气的方法。（3）能量回收：能量回收是利用废旧塑料燃烧时所产生热量的方法。 （4）回收化工原料：一些品种的塑料，加了聚氨酯可通过水解获得合成时的原料单体。这是一种利用化学分解废旧塑料变成化工原料进行回收的方法。 （5）其他：除了上述废旧塑料的回收方法外，还有各种利用废旧塑料的方法，如将废旧聚苯乙烯泡沫塑料粉碎后混入土壤中以改善土壤的保水性，通气性和排水性，或作为填料同水泥混合制成轻质混凝土，或加入粘合剂压制成垫子材料等。 二.塑料的回收再用与塑料固体废弃物的处理 用石油和煤为原料生产塑料来替代天然高分子材料，曾经历了一条艰难的历程，整整一代杰出的化学家为实现目前塑料所具有的优良理化特性和耐用性能付出了辛勤的劳动。塑料以其质轻、耐用、美观、价廉等特点，取代了一大批传统的包装材料，促成了包装业的一场革命。但是出乎人胶预料的是，恰恰是塑料的这些优良性能性制造了大量耐久不腐的塑料垃圾。用后大量丢弃的塑料包装物已成为危害环境的一大祸害，其主要原因就是这些塑料垃圾难以处理，无法使其分解并化为尘土。在现有的城市固体废弃物中，塑料的比例已达到15%－20%，而其中大部分是一次性使用的名类塑料包装制品。塑料废弃物的处理已不仅是塑料工业的问题，现已成为公害国际社会的广泛关注。 为了适应保护地球环境的需要，世界塑料加工业研究出许多环保新技术。在节省资源方面，主要是提高产品耐老性能、延长寿命、多功能化、产品适量设计；在资源再利用方面，
胶回收
除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点: (1)防止抽提过程中污染DNA酶 与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末 端时也会导致严重的连接困难. (2)紫外照射选择长波段 回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射. (3)实验操作要轻柔 特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离 心管等操作均应缓慢,轻柔. 综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础. 3 实验步骤 一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例) (1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率) (2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN) (3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀. (4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒. (5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟. (6)重复步骤5一次. (7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm 离心2分钟. (8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放 置2分钟. (9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA 片段. 胶回收 一. 提高胶回收量的办法： 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
PCR产物胶回收实验
实验六 PCR产物胶回收实验 一、实验目的 1. 掌握胶回收的常规操作 2. 了解胶回收PCR产物的目的 二、实验原理 利用胶回收试剂盒纯化PCR产物。本试剂盒提供一个从TBE或TAE电泳缓冲液配制的琼脂糖凝胶中提取高质量DNA的简单、快速、有效的技术，适合从浓度≤3%，高，低熔点琼脂糖凝胶中，回收长度为60bp~23Kb的DNA片段，小于100bpDNA片段回收率为10%~55%，0.1~10kbDNA片段回收率最大为99%，大于10kbDNA片段回收率为20~70%。回收的基因组DNA可以应用到克隆，测序，限制性酶切等各类下游分子生物学实验。 三、试剂及配套设备和材料 3.1 试剂 Extraction buffer Wash buffer Elution buffer 3.2 配套设备和材料 无菌1.5ml离心管各种规格移液器和无菌移液器吸头 无水乙醇异丙醇可能需要3M KAc (pH 5.0) 离心机 四、基本技术参数 五、操作步骤 1. 用干净、锋利的手术刀，将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下，并放入1.5或 2.0 ml离心管中。 请尽量切去不包含DNA片段的凝胶。一般情况下，电泳的DNA上样量≥50 ul （50ul为最终洗脱体积）。
2. 按1：3的比例（凝胶质量毫克数：融胶液体积微升数）加入Extraction buffer。 例如：100mg凝胶应加入300ul Extraction Buffer。对于每人份试剂用量，凝胶质量不能超过400mg。 3. 于恒温水浴或金属浴中50℃温育，直到凝胶融化。 一般温育时间为10分钟，温育过程中没隔2-3分钟混匀一次。如果温育后，混合液体颜色变紫，请加入10 ul 3M KAc （pH 5.0），使混合液颜色变回黄色。 4. 可选：按1：1的比例（凝胶质量毫克数：异丙醇体积微升数）加入异丙醇，并混合均匀。 如DNA片段大于500bp/小于4kb，不需要加异丙醇。 5. 将混合液全部转移到Spin column内，于6,000g离心1分钟，并弃去接液管内液体。 如混合液体积大于750ul可先转移750ul，其余的液体待离心弃液后，再转移。 6. 向Spin column内加500ul Extraction Buffer，于12，000g离心30~60秒，并弃去接液管内液体。 7. 向Spin column内加750ul Wash Buffer，于12，000g离心30~60秒，并弃去接液管内液体。 如果回收的DNA片段将用于盐浓度敏感的实验，请在加入Wash buffer后静置2~5分钟，再离心。 8. 再次于12,000 rpm离心1分钟，然后将spin column转移到无菌的1.5ml离心管中。 如不进行该步离心，则无法保证离心柱内残液被彻底清除。 9. 向Spin column内加50ul Elution Buffer、水或TE溶液，并于室温静置1分钟。 可根据实验的实际需要决定Elution Buffer用量。但不要低于20ul。 10. 于12，000g离心1分钟，微量离心管内溶液中含有目的DNA片段。 回收的DNA可直接用于各类下游分子生物学实验，如果不立即使用，请保存于-20℃。 六、注意事项 1. 为了保证没有外源DNA的污染，电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌。 2. 为了减少胶的体积，我们可以用相对比较薄的胶来跑电泳，这样可以减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
废旧塑料回收利用九大途径
废旧塑料回收利用九大途径 有关专家指出，由于废旧塑料在我国资源丰富，回收价廉，是国家扶持项目(免税)，而且设备投资少，生产工艺简单，因此我国废旧塑料回收利用大有“钱”途。 目前国内外废旧塑料的综合利用主要有9个途径： 1、制造燃油。去年6月，一项新的实用技术－－废旧塑料回收燃油技术及工艺设备在成都获得成功。这种废旧塑料回收工厂用废塑料，如食品袋、废编织袋、饮料瓶、塑料鞋底、电线电缆皮、泡沫饭盒、塑料玩具等生产高质量90＃燃油，经四川省技术监督局检验为合格不含铅高质量燃油，公司的力量就是使用这种油料，而1吨废旧塑料可生产大约半吨油。 专家介绍，将废弃的塑料裂解加工成燃油，在技术上没有问题，但在实际生产上，包括欧、美、日本等都还没有报道和资料记载。在国内，这方面的研究在实验室能够做到，但实践中由于生产成本太高，难以产生经济效益，因此无法进行规模化生产。因而在成都诞生的该项技术成果，为我国治理“白色污染”提供了一种有效、切实可行的新技术。 2、生产防水抗冻胶。以发泡塑料废弃物为基料，在特殊配方和工艺条件下生产多品种、多用途室内外建筑装修耐水胶膏胶液系列产品，是一项投资少、见效快、有竞争力、能效消除塑料污染的理想项目。每吨废料可产数吨成品胶，按每吨胶最小包装5kg×200桶计，综合生产成本约3000元，售价在6000元左右。 3、制取芳香族化合物。日本正在进行以废塑料为原料制取化工原料新技术的实用化研制开发。其方法是把PE、PP等废塑料加热到300℃，使之分解为碳水化合物，然后加入催化剂，即可合成苯、甲苯和二甲苯等芳香族化合物。在525℃的温度下反应时，废旧塑料的70％能够转换为有用的芳香族物质，这些物质可做化工品和医药品的原料及汽油用燃料改进剂等，用途极广。其余成分可以转换为氢和丙烷。 4、制备多功能树脂胶。该产品具有附着力好、光泽度高、抗冲击性强、耐酸碱等特点，日产1吨，每吨成本2300元，市场售价5000元。工业上用于生产各种玻璃钢制品，能大大降低生产成本，另外，还可制作防水涂料、防锈漆、家具腻子胶等产品，可替代各种玻璃胶、木材胶、印刷胶使用。
琼脂糖凝胶电泳常见问题分析
琼脂糖凝胶电泳常见问题分析
DNA凝胶电泳简介 一、实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 二、琼脂糖凝胶 琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。 表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围 由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。 随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。（5）其它类型。各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。
最新切胶回收的步骤
精品好文档，推荐学习交流 切胶回收的步骤 1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul） 2．尽量切碎凝胶 3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液，55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化， 4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min， 5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4） 6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清 7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道； 8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液， 重复8，9初一语文讲义 辨析和修改病句的基本方法 辨析并修改病句是语文实际运用能力的具体表现之一，也是中考中长“考”不衰的常青树。本专题主要就是帮助学生了解句子的致病原因，掌握辨析和修改病句的基本方法，提高“诊断和施治”的能力。 “病句的辨析及修改”是近年来各地中考的重点，也是难点。这类题的主要考查方法有客观题和主观题两种。病句的辨析一般以客观选择题出现。这是一种比较传统的考察题型，它面广量大，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢1
精品好文档，推荐学习交流 以思维见长，是近年中考中常见的题型，也是学生最易失分的题目，这就要求同学们复习过程中要重视这一类题的复习和训练。 主观题多指修改性的题目，多用于对句子或文段的修改。不仅要求学生们了解这是病句，是什么样的病句，而且要求知道如何修改，难度更大。目前学生对病句尚处于感性认识的阶段，而且这种认识是分散和不完全的，往往还不能自觉地综合应用，这一专题的复习指导是非常必要的。 一、何为“病句” 如果一个句子文不从，字不顺，不合乎语法规范，那它就有语病。通俗地说就是，凡是读起来不通顺，感觉别扭、含混不清的句子都是病句。 二、如何辨析病句 （1）感读——凭语感，凡是读起来别扭，听起来含混的，就可能有语病。 如：她有一个女儿，同许多年轻的妈妈一样，愿意把孩子打扮的漂亮一些。 10． 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
PAGE胶蛋白微量回收试剂盒使用说明
PAGE胶蛋白微量回收试剂盒使用说明 货号：G7200 规格：20Assays 保存：所有试剂常温下运输，收到后所有试剂2-8℃保存，溶液B避免火源，溶液A在低温下容易形成沉淀，请在使用前30℃加热，以促进溶解。 产品组成： 产品名称规格 Buffer A10ml Buffer B60ml 干粉9.6g DTT40mg 使用前将干粉和DTT完全溶解于溶液A中，配完后4℃保存，每次使用时30℃加热，以促进溶解，混合好的溶液A尽量在一个月内使用完毕。 产品说明： SDS-PAGE不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等，本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法，本产品适用于从考染，铜染或锌染中回收蛋白质，回收效率在50-80%，能够使用20次。 产品特点： 1.简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）。 2.适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶（Native-PAGE）。
3.回收率一般在50-80%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）。 4.跟后续的实验兼容，包括1-D、2-D电泳和质谱测序等。 操作步骤： 1.用手术刀片将铜染或锌染的胶块中含有目的条带的部分胶切下，放入1.5mL的 离心管中，用相应的消除液将胶中蛋白质条带脱色到胶体接近无色，室温12000rpm （12830g），离心5min，尽量去除上清，保留胶体。 对于考染或其他考染方法，直接将不需要脱色液脱色的或经过脱色液脱色的胶块中含有目的条带部分切下，放入1.5mL的离心管中，用双蒸水洗两次，每次5min，再进行步骤2。 2.用研磨杆将离心管中的胶体研磨成细小的碎片，加入400μL的溶液A，在室温 条件下，脱色摇床上震荡过夜（16-18小时），期间取出，偶尔震荡几次。 3.室温12000rpm，离心15min，转移上清到另外一个2mL的离心管中，加入2mL 的预冷的溶液B，混匀，4℃放置30min。 4.室温12000rpm，离心15min，去除上清，再将离心管放置在通风厨中，待残 留的液体挥发干净。 也可以再次加入0.5mL的溶液B，震荡洗涤沉淀，4℃放置15min，再重复步骤4一到两次，这样得到的蛋白质更纯净。 5.选用合适的缓冲液溶解沉淀的蛋白质，以方便进行后续的电泳和质谱测序等实 验。 注意事项： 1.在保证完全切取到目的蛋白质后，尽量去除多余的胶片。 2.如果蛋白质的分子量较大，所加样的量较多，胶浓度比较大，可以适当延长温