人参皂苷的提取
第一章综述
人参皂苷的简介
人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。
人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。
人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。
人参皂苷成分
人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。
Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复.
Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。
Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。
Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。
Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。
Rb1：西洋参(花旗参)的含量最多，具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用.
Rb2：DNA, RNA 的合成促进作用、脑中枢调节具有抑制中枢神经，降低细胞内钙，抗氧化，清除体内自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用.
Rc：人参皂甙-Rc是一种人参中的固醇类分子。具有抑制癌细胞的功能。可增加精虫的活动力.
Rb3：可增强心肌功能，保护人体自身免疫系统。可以用于治疗各种不同原因引起的心肌收缩性衰竭.
Rh：具有抑制中枢神经、催眠作用，镇痛、安神、解热、促进血清蛋白质合成作用.
Rh1：具有促进肝细胞增殖何促进DNA合成的作用，可用于治疗和预防肝炎、肝硬化.
Ro：具有消炎、解毒、抗血栓作用，抑制酸系血小板凝结以及抗肝炎作用活化巨噬细胞作用.
人参的药理作用
对中枢神经系统的作用
人参能调节中枢神经系统兴奋过程和抑制过程的平衡。通过人参对动物脑电活动影响的研究，结果表明：其对兴奋和抑制两种神经过程均有影响，但主要加强大脑皮层的兴奋过程。由于同时作用于抑制过程，故使抑制趋于集中，使分化加速且更完全。人参可调节神经功能，使紧张造成紊乱的神经过程得以恢复。
人参皂甙 Rb 类有中枢镇静作用，Rb1、Rb2、Rc 混合皂甙具有安定作用；Rg 类有中枢兴奋作用。人参皂甙对中枢的影响为小剂量兴奋，大剂量抑制。人参水浸剂5g/kg 腹腔注射能明显减少小鼠的自发活动。人参水浸剂亦能对抗可卡因、士的宁及戊四氮所致惊厥，并能降低惊厥死亡率。有报告指出，人参粗制中性皂甙既有镇静安定作用，亦有镇痛、肌松和降温作用。人参对学习记忆的影响有双向性及成分依赖性。大鼠口服人参浸膏20mg/kg，连续3天，易化了大鼠Y-迷宫实验中30分钟学习获得和24小时记忆保留，但是剂量加大至100mg/kg，则学习记忆不但没有改善，反而损害了某些学习记忆指标。人参提取物可防止应激所致的小鼠学习能力的下降。有报告认为，人参提取物对樟柳碱和戊巴比妥钠造成的记忆获得不良有拮抗作用，亦能改善环己酰亚胺和亚硝酸钠造成的记忆巩固障碍及40％乙醇造成的记忆再现缺陷。用人参茎叶皂甙200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg 给小鼠腹腔注射，可明显对抗樟柳碱的作用和改善小鼠的记忆，增加脑内的RNA，但对DNA和蛋白质含量无明显影响。人体实验证明：人参能提高工作能力，减少疲劳，并认为这是其兴奋中枢的结果。其作用强度超过苯丙胺，但无苯丙胺的缺点。服用人参，可提高思维能力和劳动效率。动物实验表明：人参能显著延长小鼠游泳的持续时间。先用各种方法使小鼠体力衰竭，然后给服人参，证明人参能明显加速其体力的恢复，增加运动能力。人参可使兴奋过程的疲惫性降低，表现为神经兴奋过程的灵活性加强，使神经疲惫程度降低，从而可消除各种无力综合征，显示抗疲劳作用。亦有报告认为，人参抗疲劳作用的机制可能与其升高血脂和促进蛋白质、RNA 合成有关。人参中含有的多种皂甙、人参多糖及人参挥发油具有抗肿瘤作用。红参中人参皂甙能使癌细胞再分化、诱导逆转为非癌细胞。人参茎叶总皂甙可抑制体外培养人胃癌细胞的生长速度和分裂能力，增加细胞内糖原含量，降低细胞内粘多糖和酸性磷酸酶活性，起到一定的阻碍胃癌细胞生长及增殖的作用。人参花、叶二醇组皂甙在体外亦有一定的抗肿瘤作用。人参地上部分挥发油成分能使体外培养的胃癌和肝癌细胞数减少、生长受到
抑制、死亡癌细胞数目增加。长期口服红参浸膏可减少乌拉坦、N-甲基-N-亚硝基-N-硝基胍、黄曲霉素等化学物质对大、小鼠的致癌作用。长期口服朝鲜红参粉能减低用 DMBA、乌拉坦、AFF、MNNG和黄曲霉素等致癌物接触的动物中肿瘤发生率，并能抑制其生长。人参皂甙对小鼠肉瘤 S180 有抑制作用。实验表明：人参可明显减慢癌前病变或早期癌的发展速度，保护癌旁肝组织尤其是线粒体、内质网等亚微结构，减少癌前病变的发生，从而明显延长癌鼠生存期。体外试验表明：人参花、叶二醇组皂甙能明显抑制小鼠腹水型网状细胞肉瘤（ARS）细胞的DNA合成。人参茎叶皂甙、花皂甙和人参多糖对S180亦有明显的抑制作用。人参多糖还能抑制小鼠艾氏腹水癌细胞增殖，延长S180小鼠存活时间。人参须糖浆对二甲基奶油黄诱发的大鼠肝癌有预防和控制作用。
1．其他作用
人参皂甙有多方面的抗吗啡耐受和成瘾作用。肝脏中有一种吗啡6-脱氢酶，此酶能催化吗啡转化为吗啡酮。人参皂甙能抑制吗啡 6-脱氢酶，有效地阻断吗啡酮的生成，并且提高肝中谷胱甘肽的水平，解除吗啡对脑内释放神经递质的抑制，防止吗啡的耐受性和成瘾性，缓解戒断症状疗效显著。同时对吗啡的镇痛作用无影响。
不同浓度的人参提取浓缩液对福氏痢疾杆菌、乙型溶血性链球菌、产紫青霉菌均有抑制作用。较高浓度对金黄色葡萄球、大肠艾希杆菌、炭疽杆菌、肺炎球菌、黑色曲霉菌、产黄青霉菌有抑制作用。人参茎叶皂甙对单纯疱疹病毒Ⅰ型感染细胞有保护作用。实验证明：人参茎叶总皂甙对细胞的保护作用主要是明显抑制病毒复制，而不是直接杀伤病毒。人参提取物对感染森林病毒的动物有保护作用，具有增强干扰素诱导产生的抗病毒能力。人参碱溶性多糖部分对盐酸/乙醇诱导的胃黏膜损伤有显抑制作用，其抑制率分别为％和％；如预先给予消炎痛，该多糖部分对胃黏膜的保护作用不被消除。人参皂甙有促进鼠和猴肾皮质细胞DNA的合成、促进肾脏代偿性生长的作用。实验提示，临床上随意增加人参的用量不一定都能达到相应提高疗效的目的。
人参皂苷的三种类型
根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型（Panaxdiol）-A型，②人参三醇型（Panaxtriol）-B型，③齐墩果酸型（Oleanolicacid）-C型。A型和B型皂苷
均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolic acid)。
第二章人参皂甙的提取及甙元的分离鉴定的实验
目的要求
①通过实验掌握人参皂甙的提取、精制方法，进一步巩固和熟悉人参皂甙的性质。
②熟悉和掌握人参皂甙的水解条件和方法。
③熟悉和掌握柱层析分离人参皂甙元的原理方法及基本操作技术。
人参中人参皂甙元的提取和甙元的分离鉴定
1.原理：人参皂甙元与多个分子糖结合成甙，具有较强的亲水性，易溶于水和低级醇类，实验室采用热水提取人参皂甙，提取液加碱（CaO）除杂。再用酸调至中性，上大孔树脂柱，先用水洗去色素至无色，再用70％的氨性醇洗至无色，人参皂甙便溶于乙醇洗脱，回收乙醇，便得到人参总皂甙。
人参总皂甙和稀HCl在醇液中进行温和酸水解，可得到三种皂甙元，齐墩果酸、人参二醇和人参三醇。而不能得到原人参二醇和原人参三醇，这是因为在酸水解过程中侧链的20－位碳原子上的羟基（－OH）与该链上的双键（C＝C）易闭环，而形成带有三甲基四氢吡喃环的人参二醇和人参三醇。水解后，除去醇、氯仿萃取物经硅胶柱层析分离即可得到三种单体皂甙元，经重结晶获得纯品，分别与已知皂甙的红外光谱相一致。
2.人参皂甙提取和甙元分离工艺流程
①人参皂甙提取工艺：
人参茎叶粗粉20g
热水提取1小时，粗滤，（棉花）
提取液药渣
加0.6g是会乳沉淀，并调至PH9－10，放置10分钟，抽滤
沉淀物滤液
浓硫酸调PH7，放置10分钟。
中性提取液
回收后，上大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用
70％氨性醇洗至绿色。
乙醇洗脱液
回收乙醇
人参总皂甙（黄白色）
a)人参皂甙元的水解和甙元的分离流程
人参总皂甙
加含5％HCl的50％乙醇液，
加热回流2小时
沉淀水解液
（酸性皂甙元部分）加水稀释，水浴蒸去醇，氯仿萃取
3次（10，5，5ml）
水层氯仿层
干燥，
无水NaSO
4
回收氯仿
总皂甙元
少量苯溶解，硅胶柱
层析，用苯－乙酸乙脂
（8：2）洗脱组分Ⅰ组分Ⅱ组分Ⅲ95％乙醇重 95％乙醇重丙酮结晶
结晶3次结晶3次2次
齐墩果酸人参二醇人参三醇
mp299-301℃mp245-250℃mp244-246℃
1.操作方法
（1）人参总皂甙的提取：取人参茎叶粗粉20g ，放入烧杯用热水（80℃－90℃）提取1小时，然后用棉花粗滤，在所得滤液中加入0.6g 水石灰乳除杂并调PH9－10放置10分钟左右，过滤，再将滤液用浓硫酸（少量）调PH7，放置10分钟左右，回收提取液至少量（5－10ml ），再上大孔树脂柱（注：此柱应提前洗好，清洗办法略）先用蒸馏水洗至无色，再用70％的乙醇洗至无色，分别用小瓶接收。便得到了乙醇洗脱液，回收乙醇，便得到了人参总皂甙（黄白色）。
（2）人参皂甙的水解
称取人参皂甙4－5g （不足时由老师提供），加20倍量含5％HCl 的50％乙醇溶液，加热回流2小时，放冷，加倍水，水浴去醇，转入分液漏斗中，用氯仿萃取3此（10，5，5ml ），合并氯仿层，加少量无水硫酸钠干燥，回收氯仿即得总皂甙元。
（3）甙元柱层析分离
称取100－200目硅胶（105℃活化30分钟）50g ，用苯做洗脱剂湿法装柱，柱顶放一层脱脂棉，压上数个玻璃球，放出多余的苯（至高于吸附剂1cm ），计算保留体积。总皂甙元用少量苯溶解上柱，用苯－乙酸乙脂（8：2）洗脱，薄层检识（与甙元标准品对照）相同组分合并，回收溶剂。齐墩果酸、人参二醇用95％乙醇重结晶，人参三醇用丙酮重结晶，纯品80℃干燥，收集于小瓶中。
注：由于人参花、叶中人参皂甙含量高且廉价，所以本实验可用人参地上部分作原料进行实验，脱脂3－4次，由绿变棕红即可，其它操作同前。如果用人参根总皂甙元进行柱层析，要求学生精制人参二醇进行红外光谱鉴定。若用人参花、叶总皂甙元进行柱层析分离，则要求学生精制人参三醇进行红外光谱鉴定。
人参皂甙的检识
（一）显色反应
1.醋酐—浓硫酸反应（Liebermamm-Burchand 反应）取人参皂甙样品少许，溶于冰醋酸中，加醋酐—浓硫酸试剂（19：1）数滴，混匀，呈红紫色。
2.泡沫反应：取人参皂甙样品少许于试管中，加水2－3ml 溶解，密塞，用力振摇1分钟，产生大量持久泡沫。
（二）薄层层析
1.人参皂甙TLC ：
吸附剂：硅胶G 板
展开剂：Ⅰ正定醇—乙酸乙脂—水（8：2：10）上层。
Ⅱ氯仿—甲醇—水（13：7：2）下层。
对照品：根x R 、叶x R 、花x R 甲醇液(10mg/ml)
显色剂：10％42SO H 乙醇液（V/V ），110℃加热10分钟，至棕红色斑点出现。
2.人参皂甙元TLC
吸附剂：硅胶G 板
展开剂：苯—乙酸乙脂（1：1）
对照品：人参二醇、人参三醇、齐墩果酸甲醇液
显色剂：同皂甙
（三）光谱数据
齐墩果酸：
IR 1
m ax -cm L KBr ：3301，1700
NMR(3CDCl )δ：，，，，，
人参二醇：
IR 1m ax -cm L KBr ：3301，1626
NMR(3CDCl )δ：，，，，，
人参三醇：
IR 1m ax -cm L KBr ：3340，1617
NMR(3CDCl )δ：，，，，，，，，， 实验说明及注意事项
1.萃取操作时，注意振摇不能过度剧烈，以防产生乳化现象。
2.在使用旋转蒸发器进行甲醇提取液减压浓缩时，因含皂苷易产生大量泡沫发生倒吸现象。故应注意观察随时调整水浴温度及旋转蒸发器转速，避免事故的发生。
3.在连续回流提取过程中，水浴温度不宜过高，应与溶剂沸点相适应。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。
4.回收乙醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增加至高虹吸管顶部弯曲处1cm 处，暂停回收，取下提取器，将其中乙醚移置另外容器中，如此反复操作，即可完成回收乙醚的操作。
5.在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液数滴，滴于白瓷皿中，挥散溶剂，观察有无残留物，或滴于滤纸片上，然后进行醋酐－浓硫酸反应或三氯化锑氯仿饱和溶液反应。若反应呈阴性，示已提尽。
6.大孔树脂在使用前应按说明书处理好，加乙醇浸泡24 h 后，再用乙醇洗脱至流出液与3倍水混合后不呈混浊，继续用蒸馏水洗至无醇为止备用。
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人参皂苷的提取教学文稿
人参皂苷的提取
第一章综述 1.1 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始 载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢 冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、 心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究 证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约 有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为 Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其 他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱 导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤 发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机 制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 1.2 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止， 文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、- Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50 余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。 对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制 血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的 合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促 进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。 Rb1：西洋参(花旗参)的含量最多，具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎 发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用.
西洋参中皂苷类成分的研究
西洋参中皂苷类成分的研究 作者：鲍建材、刘刚、郑友兰、张崇禧 西洋参（Panax quinquefolius L.）系五加科人参属植物，原产于加拿大和美国，由于其具有广泛的生物活性和独特的药理作用，多年来一直深受世界各国人民的喜爱。西洋参中的化学成分比较复杂，包括皂苷类、挥发油类、氨基酸类、糖类和聚炔类等，但主要是皂苷类成分。人类对西洋参的研究可追溯到19世纪，早在1854年美国一学者便从西洋参中分离得到了第一个皂苷类成分，但对西洋参全面深人的研究却始于20世纪70年代。迄今为止，中外学者已从西洋参中分离鉴定出的皂苷类成分有3种：达玛烷型（Dammarane），齐墩果烷型（Oleanane），奥克梯隆醇型（Ocotillol）。而分离出的人参皂苷40余种。 根中皂苷的研究 1976年，李向高从美国产西洋参中分离得到3种皂苷元，即人参二醇、人参三醇和齐墩果酸皂苷元。1978年日本学者真田修一等从日本长野引种的西洋参中分离出人参皂苷Ro、Rb1、Rb2、RC、Rd、Re。1982年Besso，H．等分离出7种皂苷，即Rg1、Rg2、Rb3、Rb1、F2，绞股蓝皂苷Ⅺ和西洋参皂苷R1（quenquinoside-R1）。张崇禧从国产西洋参中分得人参皂苷RO、Rb1、Rb3。Rc、Rd、Re等。1983年魏均娴等从西洋参根中分得Ro、Rb1、Rg1、Re和pseudo-ginsenoside-F11（简称P-F11），P-F11是西洋参中的特有成分，是鉴别西洋参和人参的显著标志。1985年松浦等从西洋参根中分离出13种皂苷，包括人参皂苷Rb1。Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、F2。拟人参皂苷F11（pseudoginsenoside-F11），绞股蓝苷XVⅡ（gynostenoside-XV Ⅱ）和一种新的皂苷，即西洋参皂苷R1。1987年徐绥绪等从辽宁栽培的西洋参根中分得：RO、Rb1、Rb2、Rd、Re、Rg1。Rg2、Rg3、Rh1和一种新皂苷，命名为人参皂苷Rao。印度学者报道从美国引种栽培的西洋参中发现9种皂昔，主要为人参皂昔Rb类。LeMen-OlivierL等从法国产西洋参中分得:Rb1、Rd，Re、PF11、Gy－XVⅡ。1994年李向高等从西洋参根中分离鉴定出丙二酰基人参皂苷Rb1、Rb2、Rd。1998年周雨等从西洋参中分得丙二酸单酰基人参皂苷-Rb1（简称M-Rb1）、Rb1、Re。1997年李铣等从加拿大西洋参中分得两个新的齐墩果酸型皂苷，命名为quin-quenoside-R3,R4（简称Q-R3，Q-R4）及Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re。Rg2、Rg1、Rg3、Rhl、20R-Rh2。MaYuanchun等采用反相高效液相色谱法对西洋参中主要皂苷进行了测定，找到了主要皂苷在根中的分布和比例情况，为产品的质量控制打下了基础。吴广宣等也用高效液相色谱法对吉林与美国产西洋参中主要皂苷的含量进行了比较测定。 孙文基等对西洋参的不同部位，根。茎、叶、花和果中总皂苷采用比色法进行了测定，采用薄层扫描法对西洋参不同部位中的P－F11含量进行了考察。杨崇仁等采用高效液相色谱法对云南丽江引种的西洋参中10种皂苷成分（M-Rb1、M-Rb2、M-RC和Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Ro）进行了分析鉴定，并讨论了不同的栽培年代。采收季节、不同的地下部位及不同商品等级中皂苷含量的变化。西洋参根不同组织部位中皂苷的含量测定表明人参皂苷主要分布于韧皮部和周皮中，特别集中于树脂道中，木质部中含量较少，西洋参中的人参皂苷含量与韧皮部的面积呈正比；西洋参不同生育期限的增长动态及人参皂苷含量变化的研究表明，休眠期人参皂苷的含量较高，展叶后至盛花期含量明显下降。根中人参皂苷的积累随着参龄的增长而逐年增加，生长第4年参根中人参皂苷含量可达6.36％，与原产美国同年生的参根中人参皂苷含量没有明显差异。闻平等对西洋参总皂苷测定方法进行了改进，提出用超声波处理提取西洋参中的总皂苷，简化了样品的前处理过程，减少了取样量和溶剂量，方法简便易行，初步认为本法可代替部颁方法。
提取人参皂苷并且检验以及在过程的一些注意事项
1.人参皂苷提取 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参皂甙和稀HCl在醇液中进行温和酸水解，可得到三种皂甙元，齐墩果酸、人参二醇和人参三醇。而不能得到原人参二醇和原人参三醇，这是因为在酸水解过程中侧链的20－位碳原子上的羟基（－OH）与该链上的双键（C＝C）易闭环，而形成带有三甲基四氢吡喃环的人参二醇和人参三醇。水解后，除去醇、氯仿萃取物经硅胶柱层析分离即可得到三种单体皂甙元，经重结晶获得纯品，分别与已知皂甙的红外光谱相一致。 2.人参皂甙提取和甙元分离工艺流程 ①人参皂甙提取工艺： 人参茎叶粗粉20g 热水提取1小时，粗滤，（棉花） 提取液药渣 加0.6g是会乳沉淀，并调至PH9－10，放置10分钟，抽滤 沉淀物滤液 浓硫酸调PH7，放置10分钟。 中性提取液 回收后，上大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用 70％氨性醇洗至绿色。 乙醇洗脱液 回收乙醇 人参总皂甙（黄白色） a)人参皂甙元的水解和甙元的分离流程 人参总皂甙 加含5％HCl的50％乙醇液， 加热回流2小时 沉淀水解液 （酸性皂甙元部分）加水稀释，水浴蒸去醇，氯仿萃取 3次（10，5，5ml）
水层氯仿层 干燥， 无水NaSO 4 回收氯仿 总皂甙元 少量苯溶解，硅胶柱 层析，用苯－乙酸乙脂 （8：2）洗脱 组分Ⅰ组分Ⅱ组分Ⅲ95％乙醇重95％乙醇重丙酮结晶 结晶3次结晶3次2次 齐墩果酸人参二醇人参三醇 mp299-301℃mp245-250℃mp244-246℃ 1.操作方法 人参总皂甙的提取：取人参茎叶粗粉20g，放入烧杯用热水（80℃－90℃）提取1小时，然后用棉花粗滤，在所得滤液中加入0.6g水石灰乳除杂并调PH9－10放置10分钟左右，过滤，再将滤液用浓硫酸（少量）调PH7，放置10分钟左右，回收提取液至少量（5－10ml），再上大孔树脂柱（注：此柱应提前洗好，清洗办法略）先用蒸馏水洗至无色，再用70％的乙醇洗至无色，分别用小瓶接收。便得到了乙醇洗脱液，回收乙醇，便得到了人参总皂甙（黄白色）。 人参皂甙的水解 称取人参皂甙（）4－5g（不足时由老师提供），加20倍量含5％HCl的50％乙醇溶液，加热回流2小时，放冷，加倍水，水浴去醇，转入分液漏斗中，用氯仿萃取3此（10，5，5ml），合并氯仿层，加少量无水硫酸钠干燥，回收氯仿即得总皂甙元。 甙元柱层析分离 称取100－200目硅胶（105℃活化30分钟）50g，用苯做洗脱剂湿法装柱，柱顶放一层脱脂棉，压上数个玻璃球，放出多余的苯（至高于吸附剂1cm），计算保留体积。总皂甙元用少量苯溶解上柱，用苯－乙酸乙脂（8：2）洗脱，薄层检识（与甙元标准品对照）相同组分合并，回收溶剂。齐墩果酸、人参二醇用95％乙醇重结晶，人参三醇用丙酮重结晶，纯品80℃干燥，收集于小瓶中。 2.人参皂甙的检验 （一）显色反应
【2018最新】关于人参皂苷体外转化和分析方法的研究进展-word版 (4页)
本文部分内容来自网络，本司不为其真实性负责，如有异议请及时联系，本司将予以删除 == 本文为word格式，下载后可编辑修改，推荐下载使用！== 关于人参皂苷体外转化和分析方法的研究进展 人参是五加科、人参属植物，其作为药材使用己有两千多年的历史，《神农本草经》《本草纲目》等古代医药书籍都详细的记述了人参的医用价值，一直被视为中药中的翘楚。研究发现人参中含有多种化学成分，如人参皂苷、多糖、酚性化合物、多肽及氨基酸、生物碱、维生素、挥发性油、微量元素、甾醇类及酶类等成分。 其中人参皂苷是人参的主要有效成分之一，它是由皂苷元与糖结合而形成的糖苷类化合物，含量约为4%。人参皂苷一般呈白色、无定形粉末，或无色、针状结晶，味微甘苦。人参皂苷按照苷元的结构不同可分为达玛烷型( Dammarene type ) 、齐墩果酸型( Oleanolic acid type) 和奥克梯隆型( Ocotillol type) 。达玛烷型人参皂苷又根据苷元上所连有羟基不同分为原人参二醇型( Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd 等) 和原人参三醇型( Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1) ; 而齐墩果酸型皂苷则是五环三萜型皂苷，人参皂苷R0是目前发现的唯一的该类皂苷。 一般人参所含有的皂苷中，齐墩果酸类皂苷占7% ～10%，原人参二醇类皂苷45 ～60%，原人参三醇类皂苷占12 ～20%。迄今为止，科学家们已分离出来200 多种人参皂苷和非皂苷成分并确定了它们的化学结构。此外，对人参皂苷药理作用的研究也较为广泛，研究表明人参皂苷具有抗肿瘤、抗衰老、抗血栓和动脉硬化、增强机体免疫功能、降血糖等作用。此外，研究发现某些人参皂苷对心肌缺血、烧伤创面愈合、人的精子活力等具有特殊疗效。 近代研究发现，人参中所含有的低极性、稀有人参皂苷具有更强的生物活性，更易被机体吸收，大量制备次级苷和苷元具有明显的药用价值和商业价值。但其在人参中含量极少，单纯的依靠提取分离技术很难满足工业化生产的需求。因此，利用体外转化方法制备人参皂苷具有深远意义。 1 常见的人参皂苷体外转化方法 人参皂苷的体外转化方法主要有物理方法、化学方法、酶水解法以及微生物转化法，其中微生物转化法又包括液体发酵法和固体发酵法。 1. 1 物理方法
强肾片药学
强肾片 处方来源：强肾片是在六味地黄丸（山茱萸、熟地黄、牡丹皮、茯苓、泽泻、山药） 的基础上增加鹿茸、人参茎叶总皂苷、枸杞子、补骨脂、桑椹、杜仲、丹参、益母草八位中药组成的养肾、护肾的现代中成药。 处方的组成：鹿茸、山药、人参茎叶总皂苷、枸杞子、山茱萸、熟地黄、牡丹皮、杜仲、茯苓、泽泻、益母草、补骨脂、桑椹、丹参。 功能主治：补肾填精，益气壮阳。用
于阴阳两虚所致的肾虚水肿、腰痛、遗精、早泄、夜尿频数；慢性肾炎和久治不愈的肾盂肾炎。 鹿茸 性味归经：甘、咸，温。归肾、肝经。 功效：壮肾阳。益精血，强筋骨，调冲任，固带脉，托疮毒。 临床应用：1、用于肾阳不足，精血亏虚的阳痿早泄，宫寒不孕，尿频不禁，头晕耳鸣，腰膝酸痛，肢冷神疲等症。 2、用于肝肾不足的筋骨痿软，小儿发育不良，门过期不合，齿迟，行迟
等。 3、用于冲任虚寒，带脉不固的崩漏不止，带下过多。 4、用于疮疡久溃不敛，脓出清稀，或阴疽内陷不起。（温补精血） 主要化学成分：含雌二醇、雌酮等雌激素样活性成分。 药理作用：能促进生长发育、增强免疫、增强体力、抗皮劳、促进核酸和蛋白的合成、调节内分泌和新陈代谢，具有促进性激素样作用，可增加肾脏利尿功能。 山药
性味归经：甘，平。归脾、肺、肾经。 功效：益气养阴，补脾肺肾，固精止带。 临床应用：1、用于脾胃虚弱证。 2、用于肺肾虚弱证。 3、用于阴虚内热，口渴多饮，小便频数的消渴证。（消渴病：是中国传统医学的病名，是指以多饮、多尿、多食及消瘦、疲乏、尿甜为主要特征的综合病证。） 主要化学成分：含薯预皂苷元、皂苷、粘液质、胆碱、淀粉、糖
蛋白、游离氨基酸、维生素C等多种成分。 药理作用：有降血糖、缓解肠管平滑肌痉挛、增强雄性激素样作用。山药多糖能增强免疫功能，有抗衰老作用。 山茱萸 性味归经：酸，微温。归肝、肾经。 功效：补益肝肾，收敛固涩。临床应用：1、用于肝肾亏虚之头晕目眩，腰膝酸软，阳痿等症。2、用于遗精滑精，遗尿尿频。
人参皂甙体内代谢综述
人参皂甙体内代谢综述 方松 学号：201261930 人参又名人衔、棒锤，首载于《神农本草经》，被列为上品。系五加科植物人参Pana ginseng C．A．Mey．的干燥根。在我国的医药学中应用广泛，素有“中药之王”之称。主要产于吉林省长白山一带，是我国“东北三宝”之一。具有抗肿瘤、降血脂、促进细胞再生等多种生理活性。现就人参皂甙在体内代谢作简要综述。 1、人参皂甙分类 现代研究表明，人参中含有人参皂甙、多种氨基酸、糖类、低分子肽类、脂肪酸、有机酸、维生素B、维生素C、菸酸、胆碱、果胶、微量元素等。皂甙是人参生物活性的物质基础，从其皂甙元母核结构上主要分为以下三大类：（1）以原人参三醇为母体的糖甙，以Rg1为代表，为人参的主要成分。（2）以原人参二醇为母体的糖甙，以Rb1为代表，为西洋参的主要成分。（3）以齐墩果醇酸为母体结构的五元环皂甙Ro。 2、人参皂甙的药理活性 （1）对中枢神精系统的双向调节作用：人参能加强大脑皮质的兴奋过程和抑制过程，使兴奋和抑制二种过程达到平衡，使由于紧张造成紊乱的神经过程得以恢复，人参皂甙小剂量主要表现为对中枢的兴奋作用，大剂量则转为抑制作用。从人参所含的有效成分分折、人参皂甙Rb类有中枢镇静作用Rg类有中枢兴奋作用。 （2）人参的适应原样作用：人参对物理的、化学的、生物的各种有害刺激有非特异性的抵抗能力，可以使紊乱的机能恢复正常、主要表现为对血压、肾上腺、甲状腺机能和血糖等方面的双向调节作用。 （3）对免疫功能的用作：人参能增强机体的免疫功能。 在临床上人参主要用于休克、冠心病、心律失常、贫血、白细胞减少症、充血性心力衰竭，还常用于慢性阻塞性肺病、糖尿病、肿瘤、血小板减少性紫癜、早衰、记忆力减退等辅助治疗。 3、Rg1的体内代谢 早在1983年，日本学者Odani等在无菌大鼠灌胃实验中发现，原人参三醇型皂甙Rg1
人参皂苷的提取与分离材料
人参皂苷的提取与分离 学生姓名 专业 班级
学院 摘要 首先认识人参和人参皂苷，了解人参皂苷的详细作用和功效，接着研究了人参茎叶总皂苷含量提取方法，用详细的工艺提取人参皂苷，并且用对显色反应和薄层层析对提取物进行鉴定，为以后的人参茎叶的开发利用奠定基础。 关键词：皂苷；人参茎叶；鉴定。 Abstract The first ginseng and ginseng saponin, understanding the role and efficacy of ginseng saponin in detail, then study the effect of ginseng stem leaf total saponin extraction method, with the detailed process of extraction of ginseng saponin, and used for color reaction and thin-layer chromatography to extract were identified, for the future of ginseng stem and leaf development lays a foundation. key words: saponin; ginseng stems and leaves; appraisal;
目录 摘要 (1) Abstract ..................................... 错误!未定义书签。 1 绪论 (3) 1.1 ............................................. 人参概述 错误!未定义书签。 1.2 ........................................ 人参的化学成分 1 1.2.1人参皂苷 (1) 1.2.2人参蛋白 (1) 1.2.3人参多糖 (1) 1.2.4无机元素 (2) 1.2.5其他成分 (2) 1.3 ................................ 人参的生理功能及药理活性 2 1.3.1增强免疫功能 (2) 1.3.2抗衰老 (2) 1.3.3抗肿瘤 (3) 1.3.4增强学习和记忆能力 (3) 1.3.5保护心血管系统 (3) 2 实验部分 (5) 2.1 ............................................ 实验材料 5 2.2 人参皂苷的提取分离 (5) 2.2.1 人参皂苷的提取分离原理 (5) 2.2.2 人参皂苷提取和苷元分离工艺流程 (5) 2.3 ........................................ 人参皂苷的检识 7 2.3.1 显色反应 (7)
人参皂苷的提取
第一章综述 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。
天然产物的生物转化研究进展_冯冰
[20] Liu N F,M eng https://www.360docs.net/doc/8e4816488.html, paris on of inh ibitory effects on nonen zymatic glycosylation of in vitr o by Ginkgo biloba ex- tr act and other four drugs[J].Chin J New Dru gs Clin Rem (中国新药与临床杂志),2002,21(12):705-708. [21] Liu X S,Xu Y J,Zh ang Z X,et al.Effect of ligus trazine on protein kin as e C signalin g path way in human peripheral blood lymph ocytes[J].Chin J P athop hosiol(中国病理生理杂志), 2003,19(4):507-510. [22] Xu M B,Huang Y P,Sh eng S S,et al.Th e effect of admin- istered ligus trazine for the intracellu lar free calcium ([Ca2+])concentration in pancreatic acin ar cell[J].Chin J Tr adit West Med(中华中西医杂志),2003,4(5):655-657. [23] Huang Y,Chen S Q,Zh ang G,et al.Effect of tetrom ethyl- pragin e and amin og uanidine on renal nitric oxide of diabetic rats[J].Chin J I ntegrated T rad it Wes t Nep hrol(中国中西 医结合肾病杂志),2003,4(5):265-267. [24] Xi X H,J iang D Y,T ang L S,et al.T he protection of s ily- marin and anis odamine on growth and DNA ch an ges of b ovine retinal capillary pericytes cultured in glycos ylation products [J].J T rad it Chin O p thal(中国中医眼科杂志),2000,10 (4):187-190. [25] Pu Y L,Liang X C.Effect of traditional Chinese med icine on diabetic nephropathy[J].J Chin Pr actical Med(中华实用医 学),2003,5(13):41-43. [26] Zhao T F,Den g H C,Zhao J P,et al.Effect of s odium feru- late on nonenzymatic glycation of aortic collagen in diabetic rats[J].Chin J End ocriol Metab(中华内分泌代谢杂志), 2003,19(2):139-140. 天然产物的生物转化研究进展 冯 冰,马百平X (军事医学科学院放射医学研究所,北京 100850) 摘 要:以植物细胞培养、微生物和游离酶为生物催化剂的生物转化技术,广泛用于天然产物的合成和对先导化合物的结构改造,其反应包括水解、羟化、糖基化、酯化等多种类型,在生物转化体系的筛选、转化条件的优化、转化率的提高及酶的分离纯化方面取得了一些进展。这对于增加天然产物结构多样性、寻找药物先导化合物、促进珍稀物种资源可持续利用、提高生产效率、降低成本等多个环节均有广泛的应用价值。 关键词:天然产物;生物转化;微生物;游离酶;细胞培养 中图分类号:R282.1 文献标识码:A 文章编号:02532670(2005)06094105 Advances in studies on biot ransformat ion of natural pr oducts FENG Bing,MA Bai-ping (I nstitute of R adiation M edicine,Aca demy of Military Medical Sciences,Beijing100850,China) Key wor ds:natural products;biotr ansfor mation;microorganism;free enzyme;cell cultur e 生物转化(biotr ansfor mation)是利用植物离体细胞或器官、动物细胞、微生物及其细胞器,以及游离酶对外源性化合物(exogenous substrat e)进行结构修饰的生化反应。近年来,随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善,使该项技术广泛用于天然化合物的结构修饰和合成、有机化合物的不对称合成、药物前体化合物的转化、光学活性化合物的拆分和药物代谢研究等诸多领域。 酶及酶体系能将许多天然化合物转化为具有较高生物活性的物质。近年来开展的采用植物细胞、微生物和游离酶对天然化合物如人参皂苷、三七皂苷、大豆皂苷、甘草皂苷、甾体化合物等进行结构修饰的研究已取得可喜的进展。 1 水解作用 研究显示,糖链的结构对皂苷生物活性起着非常重要的作用。如含有从黄山药中提取的8种甾体皂苷的中药制剂——地奥心血康胶囊对冠心病、心绞痛、心肌缺血等症有显著疗效,其中皂苷结构上的差异只是糖链的不同;它们的苷元与薯蓣皂苷元类似,而薯蓣皂苷元却不具有上述疗效,反而有明显的细胞毒性作用。甾体皂苷是植物中一类重要的生物活性物质,具有多种生理活性。目前对其生物活性的研究已从溶血、抗生育等方面转向更有应用前景的抗癌、抗真菌、治疗心血管疾病、调节免疫以及治疗糖尿病等方面。由于甾体皂苷结构的复杂性,合成难度较大。通过生物转化的方法得到高活性、低毒性的甾体皂苷已成为该领域的发展趋势。 人参皂苷是人参中的主要活性成分。近年来,人参皂苷以其独特的生理和药理活性,特别是在抗癌、抗氧化及抗衰老方面的疗效使其成为最有开发潜力的化合物之一。由于含有不同糖链的人参皂苷生物活性和毒性不同,因此,希望通过酶的水解作用来对其进行结构改造,以获得高活性的人参皂苷。金东史等[1]利用人参皂苷-B-葡萄糖苷酶将人参中含量较高的皂苷——R b、Rc和Rd等原人参二醇类皂苷转化,得到具有高抗癌活性的人参皂苷R h2;董阿玲等报道了利用49种微生物菌株对人参皂苷Rg1进行生物转化研究,发现 X收稿日期:2004-09-20 *通讯作者 马百平(1966—),男,山东德州市人,博士学位,现于军事医学科学院放射医学研究所从事中药有效成分研究及新药研究开发。 T el:(010)66930265 E-mail:ma bp@s https://www.360docs.net/doc/8e4816488.html,
实验六 人参中人参皂苷的提取分离及鉴定
实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型-A 型，②人参三醇型-B型，③齐墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolic acid)。
[目的要求] 1.通过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分离和检识方法。 2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。 [实验原理] 人参的主要成分为人参皂苷，总皂苷含量约4％，人参皂苷大多数是白色无定形粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。人参皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大量的泡沫。人参总皂苷无溶血作用，分离后，B型和c型人参皂苷有显著的溶血作用，而A型人参皂苷有抗溶血作用。 人参中除含有皂苷外，还含有脂溶性成分如挥发油，脂肪、甾体
绞股蓝人参皂苷的提取工艺研究
收稿日期:2009-02-12;修回日期:2009-05-22 作者简介:李全良(1978-),男,河南商水人,讲师,硕士,从事有机合成方面的研究. 第26卷第5期周口师范学院学报 2009年9月Vol.26No.5Jo ur nal o f Zhoukou Normal University Sep.2009 绞股蓝人参皂苷的提取工艺研究 李全良,谢东坡 (周口师范学院化学系,河南周口466000) 摘 要:以沸水提取100g 绞股蓝茎叶,将提取液浓缩蒸干,得粗产品2107g.用95%的乙醇进行重结晶,可得纯绞股蓝人参皂苷1175g ,收率为1175%.用红外光谱、薄层色谱、熔点测定和定性分析对结果进行验证,结果表明,所得到的物质为绞股蓝人参皂苷.关键词:重结晶;绞股蓝;提取工艺 中图分类号:O 652 文献标识码:A 文章编号:1671-9476(2009)05-0076-02 绞股蓝(Gy nistemma P entap hy llum M ak in )又名七叶胆,属葫芦科植物,为多年蔓生草本植物,含有丰富的绞股蓝皂苷、黄酮、多糖、人体必需的8种氨基酸和多种微量元素[1,2].绞股蓝中所含的绞股蓝皂苷具有较高的药理性质.临床证明,它降血糖、降血脂显著,总有效率超过94%,效果超过德国进口药必降脂;治疗冠心病、心肌梗塞、心肌炎、心肌坏死显著;防治粥样动脉硬化,平衡血压效果显著;防治糖尿病显著[3].所以绞股蓝素有/小人参0的美称,因此绞股蓝有效成分的提取具有重要的意义. 目前,人们提取绞股蓝中有效成分(绞股蓝皂苷)的方法主要有:色谱柱法、回流法和超声波提取法[4-6] .这些方法虽能得到较好的收率,但是也存在明显的缺陷:色谱柱法程序多,操作复杂,浪费化学试剂等;回流法和超声波提取法对仪器的要求较高;等等.本文采用了热水溶液浸提,乙醇除杂、重结晶制得绞股蓝皂苷.该方法所用仪器简单,溶剂无毒性,提取出的人参皂苷纯度高、收率高,为以后的工业提取提供了一定的理论基础. 1 实验部分 111 实验仪器 旋转蒸发仪RE -52AA;傅立叶变换红外光谱 仪WQF -510;精密显微熔点测定仪X -6A .112 实验过程 称取绞股蓝干茎叶100g,用600m L 的沸水 浸泡3次,每次时间约为30min.将浸泡液在旋转蒸发仪上减压蒸发,得到黑色粘稠状浓缩液.向黑色粘稠状浓缩液中加入50m L,95%乙醇进行重结 晶,然后静置5h,有沉淀析出,过滤,干燥,得浅黄色粉末状物质2107g,再用95%乙醇进行重结晶,得土黄色提取物1175g ,收率为1175%. 2 结果与讨论 211 薄层检识 取适量土黄色干燥粉末,加入蒸馏水溶解,配成溶液.以氯仿-醋酸乙酯-乙醇-水(115B 4B 212B 1)作为展开剂[7] ,在薄层板上展开,对制得的土黄色物质进行纯度分析,把薄层硅胶板放入碘瓶中,所得结果显示土黄色物质为纯物质(一个点).通过薄层检识,分析所得土黄色物质为一个纯净物.212 熔点测定 取土黄色粉末状物质少许,利用X -6A 精密显微熔点测定仪测定其熔点大于380e .绞股蓝中含有十几种皂苷,其熔程比较宽,为139~303e ,而土黄色物质熔点则高于380e .由于混合物的熔点通常要低于其中任一种组分纯净物的熔点,可以分析出土黄色粉末是绞股蓝皂苷中一种熔点较高的纯净物. 213 绞股蓝人参皂苷定性分析 氯仿-浓硫酸反应法:取土黄色物质011g,放在50mL 烧杯中,加入氯仿1m L,使样品溶解,再滴加浓硫酸数滴,在氯仿和浓硫酸接触的两相界面
黑曲霉Aspergillus niger对人参皂苷Re的微生物转化
黑曲霉Aspergillus niger对人参皂苷Re的微生物转化 目的：筛选长白山人参土壤中的活性微生物，转化单体人参皂苷产生稀有人参皂苷成份。方法：从长白山人参根际土壤中分离各类菌株，对单体人参皂苷Re进行微生物转化，通过硅胶柱层析等方法对转化产物进行分离纯化，采用波谱解析及理化常数对其进行结构鉴定。结果：从长白山人参根际土壤中分离各类真菌菌株68株，3株真菌对三醇组人参皂苷Re具有转化作用，其中黑曲霉Aspergillus niger的转化活性较强，转化产物为人参皂苷Rg1、Rg2和Rh1。结论：首次报道黑曲霉能将人参皂苷Re转化为人参皂苷Rg1、Rg2和Rh1这一转化过程。 [Abstract] Objective: Samples of Ginseng root soils, collect from Changbai Mountain, are used to screen active microorganism which can transform Ginsenoside Re, so as to obtain rare anti-tumor components. Methods: The strains were isolated and screened on liquid transfer medium and yield transfer process for active strains. Then the active strains were tested for their biotransformation properties by using Ginsenoside Re. The biotransformation products were separated and purified through different column chromatographies and identified by spectral analysis and physical constants. Results: Total 68 fungal strains were isolated and 3 active strains showed positive activity on Ginsenoside Re. One strain, Aspergillus niger, was found to have the strong activity on Re. Conclusion: This is the first report on the transformation G-Re to G-Rg1, G-Rg2, and G-Rh1 by microorganism Aspergillus niger. [Key words] Ginsenoside Re; Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Rg2; Ginsenoside Rh1; Aspergillus niger; Biotransformation 人参及其制品中的主要活性成分是人参皂苷，由于人参皂苷分子结构中糖基侧链的不同而显示出不同的性质和药理活性[1-2]。例如人参皂苷Rb1有促进神经细胞生长的作用、降低细胞内钙、抗氧化、清除自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用[3]；人参皂苷Rd能促进T细胞增殖，提高天然杀伤细胞（NK）的活性[4]；20（S）-原人参二醇苷元（PPD）具有抗癌活性[5]等。人参皂苷Re是抗心律失常有效成分，可抑制吗啡诱发小鼠产生的耐药性等作用；人参皂苷Rg1具有使中枢神经兴奋、抗疲劳、改善记忆、学习功能等作用[6]；人参皂苷Rg2可抑制兔血小板释放反应等作用。为了获得具有极高药用价值的稀有人参皂苷，从20世纪80年代始，国内外化学及生物技术工程研究人员便开始了人参皂苷的结构改造工程，并取得了很好的结果[7-13]。因此，从高含量人参皂苷成分获得稀有人参皂苷成分的工作备受关注。目前，用于人参皂苷糖基改造的主要方法有化学法、酶法和真菌代谢法[14-15]。真菌代谢法具有条件温和、不破坏皂苷结构、专属性、得率高、无污染等特点，被广泛应用。 1 材料与方法 1.1 材料
参黄消渴胶囊
参黄消渴胶囊 Shenhuang Xiaoke Jiaonang 【处方】人参茎叶总皂苷80g红参100g黄连100g 【制法】以上三味，红参、黄连分别加水煎煮三次，第一、二次分别加水8倍量，各煎煮2小时，第三次加水6倍量，煎煮1小时，分别合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30（50～60℃）的清膏；取上述红参清膏加人参茎叶总皂苷和淀粉20g，搅匀，干燥，粉碎成细粉，用75%乙醇适量制粒，真空干燥，整粒备用；另取上述黄连清膏加淀粉100g，搅匀，干燥，粉碎成细粉，用75%乙醇适量制粒，真空干燥，整粒备用；合并上述两种颗粒，加入干淀粉适量、滑石粉1.8g、硬脂酸镁1.2g，混合均匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。 【性状】本品为硬胶囊，内容物为淡黄色或棕黄色的颗粒；味苦。 【鉴别】（1）取本品内容物0.5g，加甲醇30ml浸泡4小时，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参茎叶皂苷对照品，加甲醇制成每1ml含80mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4︰1︰5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供视品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。 （2）取黄连对照药材0.05g，加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取〔鉴别〕（1）项下供试品溶液及上述对照药材溶液、对照品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7︰1︰2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。 （35g，加95%乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液减压回收至干，残渣加水20ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，减压回收至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红参对照药材2g，加95%乙醇30ml，加热回流1小时，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取供试品溶液6μl、对照药材溶液9μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（9︰1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁试液。在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
人参皂苷提取和分离纯化方法的研究进展
湖南农业大学课程论文 学院：班级： 姓名：学号： 课程论文题目：人参皂苷提取和分离纯化方法的研究进展课程名称： 评阅成绩： 成绩评定教师签名： 日期：年月日
人参皂苷提取和分离纯化方法的研究进展 学生： (湖南农业大学园艺园林学院，长沙) 摘要：人参皂苷是人参的主要活性成分之一，具有提高免疫力，抗氧化，抗疲劳，抗肿瘤等多种药理活性作用，如何提高效率得到高质量的人参皂苷现已成为研究热点。因此，本文综述了人参皂苷提取、分离纯化方法，旨在为人参皂苷开发和利用提供一定的科学依据。 关键词：人参皂苷提取工艺分离纯化 1前言 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey)的干燥根，主产于我国吉林长白山脉、辽宁、黑龙江、河北、山西等地，是我国传统名贵的中药材。现代研究表明，人参中已经分离鉴定40余种人参皂苷单体，其次还含有人参多糖、氨基酸、蛋白质、人参二醇、人参三醇等有效成分，其中人参皂苷为人参中的主要活性成分之一，具有保护心功能，降血糖，抗氧化，抗疲劳，抗肿瘤等药理活性作用[1-2]，选用合理的提取分离方法得到高质量的人参皂苷已成为研究热点。据文献报道[3-4]，传统提取分离方法，如煎煮法、渗漉法、索氏提取法、柱层析法等均在中药制药业发展过程中发挥了重大作用。但是，这些方法均不同程度的存在提取周期长，有效成分流失多，提取效率低等问题。随着现代科学技术的不断发展，出现了许多新型的提取分离技术，如超临界二氧化碳萃取技术等，运用这些技术不仅降低了生产成本，又能提高其得率，对人参产业化、确化、自动化提供了技术指导。 2提取工艺研究 2.1微波提取法 微波提取具有设备简单，节省时间，萃取率高，投资少，节省溶剂，污染小等优点。刘永练[5]等采用微波提取法对西洋参干燥根中的人参皂苷进行提取，结果发现人参皂苷得率高达5.53%，比乙醇回流提取率提高29%，提取时间是乙醇回流的2%。另有实验证实了微波提取人参皂苷的提取