巴氏染色液册产品标准
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医 疗 器 械 注 册 产 品 标 准
YZB/皖
巴氏染色液试剂盒
2013-11-10发布 2014-03-01实施
前言
巴氏染色试剂盒是以分泌物中的脱落细胞含有多种氨基酸，具有酸碱化学物质，且带有不同的电荷，与巴氏染色液中的酸碱化学物质起化学反应，与巴氏染色液中不同电荷的染料结合，从而使分泌物中的脱落细胞染成不同的颜色为原理，用于脱落细胞涂片染色，方便观察诊断。目前尚无国家标准或行业标准，为了规范生产，确保产品质量，特制订本注册产品标准。
本标准的编写遵循了GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写、第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》和《医疗器械注册产品标准编写规范》中的有关医疗器械注册产品标准编写的基本规定，并参照YY 0466-2003《医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号》，本标准于2014年3月首次发布。
本标准由合肥华今生物科技有限公司提出并起草。
本标准主要起草人：万士林梁锋
巴氏染色液试剂盒
1 范围
本标准规定了巴氏染色液试剂盒的分类、要求、试验方法、检验规则、标志、标签、使用说明书和包装、运输、贮存。
本标准适用于本公司生产的巴氏染色液试剂盒（以下简称试剂盒）。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 191-2008 包装贮运图示标志
GB/T 13385-2008 包装图样要求
GB2828.1—2003 记数抽样检验程序第1部分：按接受质量限（GQL）检索的逐批检验抽样计划
GB2829—200 《周期检查计数抽样程序及抽样表》
3 分类
3.1预期用途
巴氏染色是临床检验最基本的染色方法之一，适用于各种脱落细胞的形态观察前的染色（涂片
染色），方便观察诊断。
3.2检验原理
分泌物中的脱落细胞含有多种氨基酸，具有酸碱化学物质，且带有不同的电荷，与巴氏染色液
中的酸碱化学物质起化学反应，与巴氏染色液中不同电荷的染料结合，从而使分泌物中的脱落细
胞染成不同的颜色。
3.3主要组成。
主要由苏木精染液、EA50染液、橘黄G染液构成。
3.4包装规格：
4 要求
4.1外观
苏木精染液为紫红色液体，无沉淀，上清液无絮状物。
橘黄G染液为橙黄色，无沉淀，上清液无絮状物。
EA50染液为蓝绿色，无沉淀，上清液无絮状物。
4.2准确度
脱落细胞染色后，细胞核呈紫色，非角质化细胞的细胞质呈蓝绿色，角质化细胞的细胞质呈粉红或橘红色。
4.3 装量
每个容器装量应不少于标示量95%。
4.4 稳定性
试剂盒在常温保存，自生产之日起有效期为12个月。在有效期末用待检试剂重复“4.2准确度”，应符合4.2准确度的要求。
5 试验方法
5.1外观
目测，结果应符合4.1的要求。
5.2 准确度
通过对脱落细胞的染色，染色结果应符合4.2的要求
5.3装量
用通用量具测量，结果应符合4.3的要求。
5.4 稳定性
试剂盒在常温保存。有效期为12个月，检验结果应符合4.4要求
6 检验规则
6.1试剂盒须经公司质检部门检验，合格后方可出厂。检验分出厂检验与型式检验。
6.2 出厂检验
6.2.1出厂检验以每一配制批为一检验批。
6.2.2检验项目为4.1、4.2、4.3、4.4。
6.2.3抽样：
每批产品抽样，其量不得少于4盒产品，其中1盒用于检验，其余3盒用于留样。
6.2.4判定规则：
出厂检验所有检验项目合格，判该批产品合格。若出现不合格项，可进行复检。复检需加倍抽样，若仍有不合格项，则判该批产品不合格。
6.2型式检验
6.2.1有下列情况之一时应进行型式检验：
a)新产品投产前或产品注册时；
b)材料、配方、主要工艺有较大改变时；
c)出厂检验结果与上次型+式检验有较大差异时；
d)停产半年以上，恢复生产时；
e)连续生产时间达一年时；
f)国家监督机构提出要求时。
6.2.2型式检验为全性能检验。
从出厂检验合格的产品中每批随机抽取4盒,连续3批,进行检验，检验项目应全部合格，否则判该产品型式检验不合格。
7 标志、标签、使用说明书
7.1试剂盒外包装盒上应有下列标志：
a产品名称、规格；
b)生产批号、失效日期；
c)贮存条件；
d)生产企业名称、地址、邮编、电话；
e)产品标准编号、生产许可证号和注册证号；
7.2试剂盒内半成品各成份的标识应包括以下内容：
a)产品名称、装量；
b)生产批号及有效期；
c)贮存条件；
d) 生产企业名称或标志。
7.2.1试剂盒内应盖有合格印章，印章上应有下列标志：
a) “合格”字样；
b) 检验员代号和检验日期；
7.2.2试剂盒内应附有使用说明书，使用说明书应包括以下内容：
a) 产品名称、规格、预期用途、检验原理、主要组成成份、贮存条件及有效期、样本要求、检验
方法、结果判定、检验方法的局限性、检验结果的解、试剂技术指标、注意事项、参考文献；
b) 生产企业名称、生产企业许可证编号、医疗器械注册证书编号、产品标准编号；
c)注册地址、生产地址、网址、电话、传真；
d) 说明书批准及修改日期。
8.包装、运输、贮存
8.1包装
a)试剂盒包装分为外包装和试剂盒内半成品包装。
b)试剂盒半成品包装采用硬质塑料瓶包装，其中碘液应用棕色试剂瓶密封包装，每瓶配有滴盖，
外包装用白纸板盒。
8.2运输
包装好的试剂盒在常温温度下运输时间应不超过7天。
8.3贮存
试剂盒贮存于2℃～25℃,有效期为12个月。
巴氏染色液试剂盒产品企业标准
编制说明
一、任务来源及背景
染色的好坏是细胞学诊断的重要前提，巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法，在诊断宫颈病变方面，巴氏染色法仍是主要方法。巴氏染色关键在于巴氏染色液的配制。巴氏染色液中主要的部分是核染成分和浆染成分。配制好坏直接影响染色的质量，染色质量又很大程度上影响到医生看片效果进而对诊断结果造成影响。因此，提高巴氏染色液染色效果是保证准确诊断的关键因素。本公司生产的巴氏染色液，主要用于手工、半自动或全自动液基薄层细胞涂片的染色，还可用于胸腹水脱落细胞、尿沉渣、痰液脱落细胞、穿刺细胞涂片的染色，以提高细胞学形态观察质量。步骤简单，省时，操作方便，适宜临床、科研、实验普查。本产品无相应的国家标准和行业标准，根据国家食品药品监督管理局颁布的《体外诊断试剂注册管理办法》规定，于2014年3月制定本企业产品标准。
1.2本标准制定时按照GB∕T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》、GB∕T1.1-2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》中有关规定。
二、引用或参考的相关标准和资料
GB∕T191-2000包装储运图示标志
GB9969.1工业产品使用说明书总则
YY0466-2003医疗器械用于医疗器械标记、标签和提供信息的符号
医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定
体外诊断试剂说明书编写指导原则
三、主要技术指标确定依据
巴氏染色液试剂盒，主要由苏木精染色液，橘黄G染色液，EA50染色液组成，参照临床对脱落细胞的染色，染色结果应95%以上相符。
四、管理类别确定的依据
产品根据国家食品药品监管局《体外诊断试剂注册管理办法》（试行）文件规定，为第一类体外诊断试剂。
附录A
（规范性附录）
检验方法及结果判定
A.1【仪器与设备】
显微镜、载玻片、盖玻片、移液器、离心管等
A.2【检验方法】：
1、将涂片置于95%酒精固定十五分钟以上。
2、水洗后，用苏木素染液3-5分钟，直到染色明显为止后用清水冲洗。
3、置于稀碳酸锂溶液1-2分钟。使涂片反蓝后用清水冲洗
4、放入95%乙醇中脱水1分钟，水洗甩干。
5、橘黄G6染色3分钟，水洗。
6、依次放入80%、95%、100%乙醇中各10秒，脱水。
7、水洗后放入EA50染液中染色5分钟左右，至胞浆着色鲜明为止，再水洗。
8、用95%酒精冲洗2次，再置于纯酒精中脱水。
9、晾干或吹干后用树脂封片固定即可。
A.3【结果判定】：
上皮细胞核被染后呈现紫色，胞浆因分化程度不同，被染后呈现橙红色、粉红色和蓝绿色。
A.4【注意事项】：
1、涂片厚薄适宜，固定后方可染色。
2、所加染液以覆盖涂片为宜，不能过少，以免蒸发而染料沉淀。
巴氏染色法
巴氏染色液说明书 【产品名称】 巴氏染色液 【包装规格】 货号：DA0082 单瓶(盒)包装规格：100ml 、250ml 、500ml 、5000ml ； 套组(盒)包装规格：4×100ml/盒、4×250ml/盒、4×500ml/盒。 【预期用途】 主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。 【检验原理】 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法，橘黄G 与EA36或EA50联合使用可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而细胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大。巴氏染色液利用这一特性对细胞进行多色性染色，细胞经染色后能清晰地显示细胞的结构，胞质透亮鲜丽，各种颗粒分明，细胞核染色质非常清楚，从而较容易发现异常细胞。通过巴氏染色可反映出细胞在炎症刺激下和癌变后的形态学变化，对早期发现和诊断一些病变和肿瘤具有较重要意义。 【主要组成成分】 试剂组成 主要成分 l 、苏木素染色液 苏木素 2、1%盐酸乙醇分化液 盐酸、乙醇 3、橘黄G 染色液 橘黄G 4、EA50染色液或EA36染色液 EA50染色液：淡绿、伊红、磷钨酸、冰乙酸； EA36染色液：淡绿、伊红、磷钨酸 【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 新鲜标本涂片后，应尽快用95%乙醇固定，以避免细胞变形。 【检验方法】 1、固定：将细胞涂片置于95%乙醇中固定； 2、染色，按要求进行染色。 3、二甲苯透明，中性树脂封片，镜检。 【检验结果的解释】 【检验方法的局限 性】 仅供形态学初检观察染色使用。 【注意事项】 1、冬季气温较低时，苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。 细胞核 蓝紫色或黑色 非角化细胞的胞质 淡蓝色或淡绿色 角化细胞的胞质 粉红或橘黄色 红细胞 鲜红色或橙红色 粘液 淡蓝或粉红色
13.巴氏染色液
巴氏染色液说明书 【产品名称】巴氏染色液 【产品名称】巴氏染色液PAP Staining Solutions 【产品编号】PAP-500ml,PAP-1000ml,PAP-2500ml 【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml 2500ml；橘黄G6染色液500ml、1000ml 2500ml；EA50染色液500ml、1000ml 2500ml。 【预期用途】主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。 【检验原理】 巴氏染色液由3部分组成：苏木素染色液、橘红G6染色液和EA50染色液。 苏木素染色液，是一种针对正常以及变态细胞学涂片染料，对核膜、核质、核仁染色效果非常清晰。涂片标本可是妇科或非妇科的，如痰液，尿液及细胞学穿刺样本。为获得优质的染色效果，苏木素染液技术完全按照帕氏染色法，以及OG-6染液；EA 31染液；同时供应选择性多色复染染料，如EA50试剂；EA65试剂，满足细胞学染色需求。 橘黄G6染色液，是橘黄G (Orange G) 染料添加磷酸（PMA）后的酒精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为获得优质的染色效果，OG-6试剂特性与其他用于Papanicolaou染色法中染色试剂-苏木素试剂，EA 31试剂，及对比染色试剂EA50试剂，EA65试剂相符。 EA50染色液,为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为获得优质的染色效果，EA 50 Pap 3B试剂特性与其他用于细胞学涂片染色试剂（苏木素试剂，OG-6试剂）相符。 【主要组成成分】 苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；橘黄G染液：橘黄G6、磷酸、稳定剂；EA50：伊红Y、亮绿 SF、磷钨酸、稳定剂 【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C 和+25°C
细胞DNA定量分析在脱落细胞学诊断中的应用
细胞DNA 定量分析在脱落细胞学诊断中的应用 王永军，王 珩，刘世正，杨会钗，王小玲，王占东，郭明，杜芸 摘要：目的 探讨自动细胞DNA 定量分析系统在良恶性胸水、腹水、心包积液及乳腺包块诊断中的价值。方法 297例浆膜 腔积液（胸水185例、腹水94例、心包积液18例），经细胞采集器处理，每例制成4张薄层细胞片，2张细胞片做巴氏染色，用于常规细胞学检查。另2张经Feulgen 染色，用自动细胞DNA 定量分析系统检测。122例乳腺包块住院患者，诊断医师进行针吸穿刺后每例制成2张薄层涂片，1张涂片做巴氏染色，用于常规细胞学检查。另1张经Feulgen 染色，用自动细胞DNA 定量分析系统检测。每例均有病理结果证实。结果 297例浆膜腔积液标本常规检测138例（44.5%）异常，而同样的标本中 DNA 定量检测131例（44.1%）异常。常规细胞学诊断为癌及可疑癌细胞84例中100%出现异倍体细胞，常规诊断为找到异型细胞的54中有47例（87%）出现异倍体细胞。122例乳腺肿物经病理证实， 41例为乳腺良性肿瘤，81例为恶性。常规细胞学方法对良恶性乳腺包块的诊断阳性率分别为92.7%、91.4%，AICM 的诊断阳性率分别为100%、90.1%。结论应用自动 细胞DNA 定量分析系统可弥补常规形态学工作的不足，二者协同诊断，可发现早期癌变的细胞，提高诊断率，为临床制定治疗 方案提供有价值的信息，使细胞学检查工作更完善、客观。关键词：细胞学；DNA 分析；异倍体中图分类号：Q 24 文献标识码：A 文章编号：1001－7399（2011）02－0150－04 Celluar DNA quantitative analysis in cytology for clincal application in diagnosis WANG Yong-jun ，WANG Heng ，LIU Shi-zheng ，YANG Hui-chai ，WANG Xiao-ling ，WANG Zhan-dong ，GUO Ming ，DU Yun （Department of Pathology ，the Fouth Hospital of Hebei Medical University ，Shijiazhuang 050011，China ）Abstract ：Purpose To differentially diagnose the benign and malignant ，peritioneal effusions ，pericarditis effusions and breast masses by using automatic imaging cytometer．Methods In 297samples of serous effusions ，including 185samples of hydrothorax ，94peri-tioneal effusions ，18pericarditis effusions ）were processed with a cell collectioner ，4slides were prepared for each sample ：2sliders were stained by Papanicolaou method for cytology analysis ，and other 2sliders were stained with Feulgen method for DNA imaging cy-tometer．In 122patients with breast masses ，2smears were prepared by fine-needle aspiration puncture for each patient ：1for Papanico-laou stain for cytology analysis ，and other 1for Feulgen stain for DNA imaging cytometer．Pathological results were confirmed in each case．Results In 297samples of serous effusion ，138（44.5%）were abnormal by cytology analysis ，and 131（44.1%）were abnormal by DNA imaging cytometer．By cytology analysis 84were found as cancer cells and dubious cells ，and 100%were found heteroploid cells．By cytology analysis 54were found a few proliferating cells ，and 47（87%）were found heteroploid cells．In the pathologically confirmed breast masses ，41were classified as benign and other 81as malignant．Cytological investigation showed 92.7%sensitivity for benign and 91.4%sensitivity for malignant ，while DNA imaging analysis revealed 100%sensitivity for benign and 90.1%sensitiv-ity for malignant．Conclusions The automatic imaging cytometer can remedy insufficiency of routine cytology ，and collaboration of the two methods could improve the diagnostic rate of breast cancer ，which provides valuable information for clinical manegement and makes cytology analysis more perfective and objective．Key words ：cytology ；DNA analysis ；heteroploicl cells 收稿日期：2010－04－20 基金项目：河北省科技厅科技支撑计划（09276174）作者单位：河北医科大学第四医院病理科，石家庄050011作者简介：王永军，女，副主任技师。Tel ：（0311）86095374， E-mail ：shan_jianli@126．com 王小玲，女，硕士生导师，教授，通讯作者。Tel ：（0311）86095663，E-mail ：wangxiaoling5412@163．com 疾病的诊断，既要从整体、器官和细胞水平上认 识和分析，还应从蛋白质、mRNA 和DNA 水平上来认识和分析 ［1］ 。随着新技术的发展，肿瘤细胞DNA 含量的研究被广泛、深入的应用，使肿瘤的研究提高 到了定量研究的分子水平。细胞病理学医师除对病变作出诊断外，还应考虑到细胞学的改变与制定治疗方案和评估预后的关系，而DNA 定量分析技术能在形态学改变的基础上提供更准确、客观、重复性好 的增添信息［2］ 。因此利用脱落细胞常规检测结合细胞DNA 定量分析，可以极大的完善脱落细胞的检查工作，使其更加准确、快捷，为临床治疗提供有价值的信息。
巴氏染色的几点体会
巴氏染色的几点体会 李瑞祥熊灏靳敏 巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。 1 EA 36 染液pH值的测试 EA 36 染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36 染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。在溶媒中其发色团是负离子部分。发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。所以必须把染液pH 值调至5.2为宜［1］。EA 36 染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。当然用酸度计法最为准确。但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。本文采用一种简单方便的方法。即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。并充分混匀。直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。保证染色达到理想效果。 2 分色 分色或酸化，对染色效果也很重要。分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36 染液的着色。结果会出现该红的胞浆不红，该绿的胞浆不绿，或不红不绿的现象。看不到红蓝相间现象。因此，掌握好分色是关键。分色时间不能过短或过长。太短胞浆中苏木素除不尽，太长会把核上的苏木素也退掉。每次应在数秒内完成。盐酸浓度应偏低（0.5%为好）。这样便于掌握分色的时间。 3 蓝化或碱化 蓝化的目的是使胞核着色更具有特异性。经蓝化后的胞核紫中带蓝。这与红色的胞浆对比更鲜明。蓝化所用的碳酸锂是一种弱碱。因此，蓝化过程中碳酸锂还可中和分色时可能残留下的少量盐酸。为EA 36 的着色创造良好条件。所以蓝化时间可适当长些，以肉眼观察涂片变蓝为好［2］。 若涂片经EA 36 染色后，镜下观察效果不理想时。根据涂片着色情况，可于EA 36 染液中滴加少量10%磷钨酸或饱和碳酸锂后重染EA 36 3～5min而补救。比如:角化细胞浆不红，就滴加10%磷钨酸。若角化前细胞浆也变红，就滴加饱和碳酸锂如此边复染边镜下观察，直至获得最佳染色效果为止。
巴氏染色技术要点
巴氏染色 巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。 1 EA 36染液pH值的测试 EA 36染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。在溶媒中其发色团是负离子部分。发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。所以必须把染液pH值调至5.2为宜［1］。EA 36染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。当然用酸度计法最为准确。但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。本文采用一种简单方便的方法。即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。并充分混匀。直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。保证染色达到理想效果。 2 分色 分色或酸化，对染色效果也很重要。分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36染液的着色。结果会出现该红的胞浆不红，该绿的胞浆不绿，或不红不绿的现象。看不到红蓝相间现象。因此，掌握好分色是关键。分色时间不能过短或过长。太短胞浆中苏木素除不尽，太长会把核上的苏木素也退掉。每次应在数秒内完成。盐酸浓度应偏低（0.5%为好）。这样便于掌握分色的时间。 3 蓝化或碱化 蓝化的目的是使胞核着色更具有特异性。经蓝化后的胞核紫中带蓝。这与红色的胞浆对比更鲜明。蓝化所用的碳酸锂是一种弱碱。因此，蓝化过程中碳酸锂还可中和分色时可能残留下的少量盐酸。为EA 36的着色创造良好条件。所以蓝化时间可适当长些，以肉眼观察涂片变蓝为好［2］。
巴氏染色原理及操作步骤
巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。 巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌：灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。
巴氏染色的操作方法及注意事项
巴氏染色的操作方法及注意事项 染色染色有4个步骤：1、固定；2、核染色；3、胞浆染色；4、透明。主要达到以下要求：1、核的结构清晰；2、透明度高；3、分色恰当。 一、固定固定的目的细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步，否则会影响细胞学诊断的准确性。对于不同的标本需要不同的固定方法。最为常用的固定方法是95％酒精作为固定液的湿固定法。酒精作为一种脱水剂能够防止细胞内的酶捋蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易于着色。对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。如果酒精浓度不足引起的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。1、固定方法湿固定法：作为用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95％酒精的固定缸内。制片在固定液内至少保持15-30min。固定时间通常不超过1周。这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。如果细胞制片需要送至另一实验室或邮寄他处染色时，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。因为无论固定前或固定后的制片，如果发生干燥后都会影响染色的效果。 2、固定注意事项固定液的过滤：为了防止细胞污染，凡是
使用过的固定液，必须过滤后才能再使用。使用过长的固定液，必须用酒精相对密度计测定，酒精浓度低于90％时应该及时更换新液。湿固定的重要性：标本再新鲜时及时固定时保证染色效果的重要因素。如苏木素对细胞核的染色，巴氏染色中胞浆的特殊着色作用，均可因标本干燥后固定而大受影响。制片标本的邮寄：标本再固定15min后取出，立即加甘油数滴于制片上，装入密封的小盒中。实验室在收到标本后，先浸入95％酒精中，使甘油溶去，再进行染色。 二、核染色1、苏木素液浸染时间一般在3-5min，但是必须随气温和燃料情况而酌情改变。夏季或放置较久的苏木素染液容易着色，时间要缩短；冬季或新配制的苏木素染液和应用已久较稀释的苏木素液不易着色，时间要延长。在使用苏木素染色时，一般有2种方法：1）过染法：首先有意识地进行深染，然后通过盐酸酸化过程使核染色趋于合适。这种方法能够在酸化过程中把胞浆内黏附多余的苏木素染料去掉，使胞浆染色更为鲜艳、清晰、多用于黏液多的标本。2）淡染法：在核染色过程中，严格掌握染色时间，使核染色适宜而不用盐酸酸化，但是胞浆中少量的苏木素会影响EA 染色的质量。主要用于黏液少的标本，避免在酸化和自来水冲洗的过程中使细胞成片地脱落。在使用苏木素染色时，一定要每日进行过滤，否则苏木素结晶会影响染色的质量。一般苏木素染液可以使用较长时间，所以每日增加少量新鲜
巴氏染色液(Papanicolaou EA50)使用说明
巴氏染色液(Papanicolaou EA50)使用说明 产品简介： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain最初仅用检测于阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36或EA50联用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞胞浆呈粉红或橘红色。 巴氏染色液(Papanicolaou EA50)细胞质染色采用EA50染液，细胞核染色采用无毒改良型苏木素染色液，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。 产品组成： 规格名称 G1540 4×100ml G1540 4×500ml Storage 试剂(A):苏木素染色液100ml500ml RT避光试剂(B):蓝化液100ml500ml RT 试剂(C):橘黄G6染色液100ml500ml RT避光试剂(D):EA50染色液100ml500ml RT避光使用说明书1份
自备材料： 固定液如95%乙醇-冰乙酸固定液；系列乙醇；显微镜，盐酸乙醇分化液。操作步骤（仅供参考）： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10～15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、苏木素染液染色5～10min。 7、自来水冲洗2min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4～5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2min。 10、蓝化液中蓝化2min。 11、自来水冲洗2min。 12、70%的乙醇脱水2min。 13、80%的乙醇脱水2min。 14、95%的乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水2min。 15、橘黄G6染液染色2min。 16、95%的乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水2min。 17、EA50染液染色3～5min。 18、95%的乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水1min。 19、无水乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水1min。
巴氏染色
巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，质去氧核糖核酸（DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水变蓝。EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴
道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌：灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色
全国临床检验操作规程
全国临床检验操作规程（第3版） 精液检查 一．标本收集 1.在3个月内检查2次至数次，二次之间间隔应>7天，但不超过3周。 2.采样前至少禁欲3天，但不超过7天。 3.采样后1h内送到检验科。 4.用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套内的精液。某些塑料容器具有杀精子作用，但是否合适应事先做实验。 5.应将射精精液全部送检。 6.传送时温度应在20~40℃。 7.容器必须注明患者姓名和（或）识别号（标本号或条码），标本采集日期和时间。 8.和所有体液一样，精液也必须按照潜在生物危害物质处理，因为精液内可能含有肝炎病毒、人类免疫缺陷（病毒）和疱疹病毒等。 二．一般性状检查 一般性状检查包括记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。 1.外观正常精液呈灰白色或乳白色，不透明。棕色或红色提示出血。黄色可能服用某种药物。精子浓度低时精液略显透明。 正常精液是一种均匀黏稠的液体，射精后立即凝固，30 min后开始液化。若液化时间超过60 min考虑为异常，应记录这种情况。正常精液可含有不液化的胶冻状颗粒。 2.量用刻度量筒或移液管测定。正常一次全部
射精精液量约2~5 ml。精液量过多或过少是不育的原因之一。 3.黏稠度在精液全部液化后，用Pasteur滴管吸入精液，然后让精液依靠重力滴落，并观察拉丝长度。正常精液呈水样，形成不连续小滴。黏稠度异常时，形成丝状或线状液滴（长度大于2 cm）。也可使用玻璃棒或注射器测定黏稠度。 4.酸碱度用精密试带检查。正常人pH为7.2~8.0，平均7.8。 三．精子存活率 精子存活率（motility）用活精子比例来反映。 1.伊红染色法 【试剂】 5 g/L伊红Y染色液：伊红Y 0.5 g，加生理盐水 至100 ml。 【操作】 （1）在载玻片上加新鲜精液和伊红溶液各1 滴，混匀后，加上盖玻片，30 s后在高 倍镜下观察，活精子不着色。死精子染 成红色。 （2）计数200个精子，计算未着色（活精子）的百分率。 2.伊红-苯胺黑染色法 【试剂】 （1）10 g/L伊红Y染色液：伊红1 g，加蒸馏水 至100 ml。 （2）100 g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10 g，加蒸 馏水至100 ml。
巴氏染色液(Papanicolaou EA65)操作步骤及注意事项
巴氏染色液(Papanicolaou EA65)操作步骤及注意事项 货号：G1614 规格：4×100ml/4×500ml 有效期：6个月有效。 产品内容： 产品组成4×100ml4×500ml Storage 试剂(A):苏木素染色液100ml500ml RT避光 试剂(B):蓝化液100ml500ml RT 试剂(C):橘黄G6染色液100ml500ml RT避光 试剂(D):EA65染色液100ml500ml RT避光 产品说明： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36或EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞胞浆呈粉红或橘红色。 巴氏染色液(Papanicolaou EA50)细胞质染色采用EA50染色液，细胞核染色采用无毒改良型苏木素染色液，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。
自备材料： 1、固定液(如95%乙醇-冰乙酸固定液) 2、系列乙醇 3、显微镜 4、盐酸乙醇分化液 操作步骤(仅供参考)： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10～15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、苏木素染液染色5～10min。 7、自来水冲洗2min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4～5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2min。 10、蓝化液中蓝化2min。 11、自来水冲洗2min。 12、70%的乙醇脱水2min。 13、80%的乙醇脱水2min。 14、95%的乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)脱水各2min。 15、橘黄G6染液染色2min。 16、95%的乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)冲洗各2min。
巴氏染色液EA 染色液使用说明书
EA50染色液使用说明书 【产品名称】EA50染色液 【产品编号】EA50-OT-100，EA50-OT-500，EA50-OT-1L，EA50-OT-2.5L 【包装规格】100ml500ml1000ml2500mL 【预期用途】细胞质染色试剂，用于Papanicolaou染色法细胞学上使用的对比 染料 【检验原理】 EA50染色液,Pap3B试剂为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒 精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6试剂和 EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。 之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。 测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为 获得优质的染色效果，EA50Pap3B试剂特性与KOHYPATH其他用于细胞学涂片 染色试剂（苏木素HP，Pap1A试剂，OG-6，Pap2A试剂）相符。 【主要组成成分】含生物染料级别（BSC）的伊红Y和亮绿SF，并添加磷钨酸和 适当的稳定剂，两者浓度和比例不同于其他EA Pap试剂。 细胞学涂片染色： 收集和准备细胞学材料的两种方法： 收集细胞学样本后置于载玻片（Vitro Gnost）上，立即喷洒固定液（CitoSpray） 进行固定，干燥后染色备用。样本固定后可放置于95%乙醇（Histanol95） 中30min。 用液体基质的细胞学方法（LBC），刷子刷下细胞学样本，立即浸入固定液（CitoFix） 固定。染色前，从固定液中分离样本细胞（离心固定液），置于载玻片上，准备 进一步染色。 巴氏（Papanicolaou）染色法，进行性染色： 染色之前，样本材料应收集并固定于载玻片上。 如样本已经用CitoSpray固定并干燥，应放置于95%乙醇（Histanol95）中 10min，以去除聚乙二醇；若样本是经95%乙醇（Histanol95）溶液固定， 请忽略此步骤。细胞学样本染色过程中（用LBC法），包含低浓度乙醇，因此无 需用递减梯度的乙醇进行水化。后续用苏木素HP，Pap1A染色。 1.递减梯度浓度乙醇溶液（Histanol95,Histanol 4组，每次上下跌落6-8次80and Histanol70）水化，并用蒸馏水或去离 子水冲洗 2.苏木素HP，Pap1A染色2-3min 3.Scott溶液或显蓝试剂处理1min 注：若没有此试剂，可直接用自来水冲洗3-5min 4.递增梯度浓度乙醇溶液（Histanol70,Histanol 3组，每组上下跌落6-8次80and Histanol95）进行脱水 5.OG-6，Pap2A染色2-3min 6.95%乙醇（Histanol95）冲洗2次，每次上下跌落6-8次 7.EA31，Pap3A试剂染色/EA50，Pap3B试2-3min
巴氏染色原理及操作步骤
巴氏染色原理及操作步骤
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巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液,细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNＡ的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外，带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而 被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化:苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液,但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液１%盐酸酒精脱去,才能保证细胞核和细胞浆染 色的分明,把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝,也可用温水（5０度温水最佳）变蓝。EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，ＥA５０染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合,从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色,但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中,蛋白质的羧基游离增多(带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力,同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱,实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。 巴氏染色法将胞核染为深蓝色;鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色,完全角化细胞胞质呈桔黄色;细菌：灰色;滴虫:淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色;腺癌胞质呈灰蓝色。
巴氏染色原理及操作步骤
巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色法就是脱落细胞染色中最好得染色方法.苏木素染液，细胞核内得染色质主要就是去氧核糖核酸（DNA，DNA得双螺旋结构中,两条链上得磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷得苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上得染液，但就是在细胞核中结合过多得染料与细胞浆中吸附得染料必须用分化液 1 %盐酸酒精脱去，才能保证细胞核与细胞浆染色得分明，把这个过程称为染色得分化作用.因酸能破坏苏木素得醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下 处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上得细胞核变呈蓝色，称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。E A50 染液得酸碱度对于巴氏染色得成功起着关键作用,EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团就是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电得氨基结合，从而就是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷得多少就是随溶液得PH值而改变得，在偏碱环境中,蛋白质得羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料得着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还就是一对弱酸弱碱，实际上就是一对缓冲剂，可中与分化及蓝化时可能留下得少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织得标本,就是阴道脱落细胞检查中最常用得染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点? 巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌:灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞与淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。 巴氏染色得操作方法及注意事项
巴氏染色液(Papanicolaou EA36)
巴氏染色液(Papanicolaou EA36) 产品简介： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36和EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞浆呈粉红或橘红色。 Jimei巴氏染色液(Papanicolaou EA36)细胞质染色采用EA36染色液，细胞核染色采用Jimei自主研发的无毒改良型苏木素染色液，EA36比EA50更适用于妇科细胞学涂片染色筛查宫颈癌和癌前病变。 产品组成： 自备材料： 1、固定液（如95%乙醇-冰乙酸固定液） 2、系列乙醇 3、显微镜 4、盐酸乙醇分化液 操作步骤（仅供参考）： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10~15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、Jimei苏木素染液染色5~10 min。 7、自来水冲洗2 min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4~5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2 min。 10、蓝化液中蓝化2 min。 11、自来水冲洗2 min。
精子形态学分析
精子形态学分析 正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一。目前，用于精子形态学分析的染色方法有：改良巴氏染色法、苏木精-伊红（HE）染色法、瑞氏染色法、瑞-吉氏染色法、Diff-Quik染色法和Shorr染色法。 1 涂片的制备 一般用新鲜的液化精液或生理盐水洗涤过的精子悬液进行涂片，通常每份标本涂双份片子，以备染色或操作出问题。载玻片应洁净，可用70%酒精洗涤并干燥后使用；涂片的厚薄应根据精子密度而定，精子密度高者涂片应薄些，而精子密度低者涂片应尽可能厚些。涂片的方法有多种，WHO推荐的方法有拉薄技术和滴管法，拉薄技术即用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液；滴管法即水平持滴管使一滴精液沿载玻片的表面展开。由于精液有一定粘稠度，这两种方法都很难涂成均匀的涂片。可建议用以下方法涂片：用滴管将一滴精液置于载玻片上，然后从液滴中央向周围循环吸净多余的精液，注意滴管的头要平整，滴管与载玻片垂直，缓慢吸去多余的液体。低密度、粘稠的、或充满碎屑的标本，建议先离心去除精浆，沉淀的精子团重新悬浮在适当体积中，以获得尽可能高的密度，但不应超过80×106/ml。正常精子密度且液化良好的精液标本亦可以洗涤后用精子悬液进行涂片，但离心操作对精子形态分析有无影响，尚需要进一步验证。 精子涂片可进行空气干燥并固定。固定程序取决于染色方法。 2 改良巴氏染色法 这是WHO手册推荐的方法。它可以使精子和其他细胞很好地染色，可使精子头部的顶体和顶体后区、胞浆小滴、中段和尾部着色。染液中的俾士麦棕为盐基性染料，伊红、亮绿、橙黄等为酸性染料，能与细胞中具有相反电荷的蛋白质结合，而染成各种不同的颜色，从而能清楚地区分各种细胞成分。以往用巴氏染色法进行染色时，操作步骤繁琐，目前已有改良的单一的巴氏染色液出售，操作非常简单，只需在自然干燥的精子涂片上滴加1~2滴巴氏染液，染15分钟即可。流水冲洗后自然晾干，显微镜油镜下观察精子形态。 3 HE染色 带正电荷的碱性染料苏木素能与细胞核中带负电荷的核酸结合而使核染成紫蓝色，伊红为酸性染料，能与细胞质中具有相反电荷的蛋白质结合，使胞质呈红色。HE染色为医院病理科的常用染色方法，操作比较繁琐，对于可以借助病理科染色的医疗单位可以选用此法对精子进行染色。 4 瑞氏和瑞-吉氏染色法 瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，细胞染色后可用于观察内部结构；吉氏染料是由天青、伊红组成的染料，天青对细胞核着色较好，结构显示更清晰。因此，瑞-吉氏染色法比瑞氏染色法效果稍好些，两种染液均可自行配制或购买，操作都比较简单。 ①瑞氏染液：取瑞氏染料0.1 g放入清洁干燥的研钵中，边加少量甲醇边磨至染料完全溶解，加甲醇到60 ml，倒入棕色瓶中，室温下放置1周以后即可用。②Giemsa染液：取Giemsa 染料0.5 g，置于33 ml甘油中，60℃水浴2小时，使其溶解，再加入60℃预热的甲醇33 ml，混匀后置棕色瓶中，室温下放置数周后方能使用（最好放置半年以上）。③30.1 mol/L pH6.9磷酸盐缓冲液：称取NaH2PO4?2H2O 1.4 g、Na2HPO4?12H2O 3.94 g，加蒸馏水至100 ml。染色时，将单独瑞氏染液或瑞氏∶吉氏（10∶1）混合染液滴加于精子涂片上，静置10秒后，滴加等量pH6.9磷酸盐缓冲液，染色10分钟后自来水冲洗，自然干燥，置于油镜下观察。 5 Shorr染色法 精子涂片空气干燥后，用苏木精染色1~2分钟；流水浸洗后置42℃温水中蓝化5分钟（或浸入乙醇铵中蓝化）；Shorr染剂（BDH Shorr粉4 g溶于220 ml 50%温乙醇中，冷却，加入