人参中人参皂苷的提取分离及鉴定
实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定
人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。
人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。
根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型-A 型，②人参三醇型-B型，③齐墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolic acid)。
[目的要求]
1.通过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分离和检识方法。
2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。
[实验原理]
人参的主要成分为人参皂苷，总皂苷含量约4％，人参皂苷大多数是白色无定形粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。人参皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大量的泡沫。人参总皂苷无溶血作用，分离后，B型和c型人参皂苷有显著的溶血作用，而A型人参皂苷有抗溶血作用。
人参中除含有皂苷外，还含有脂溶性成分如挥发油，脂肪、甾体
化合物及大量的糖类等，这些类成分对人参皂苷的分离和精制有干扰，所以必须除去，方可得到纯度较高的皂苷。
本实验以人参根为原料提取分离人参总皂苷，利用人参总皂苷易溶于甲醇，不溶于乙醚性质采用溶剂法进行初步提取去杂；然后根据皂苷在含水丁醇中有较好的溶解度的性质采用萃取法进行分离；再用沉淀法或大孔吸附树脂法进行进一步分离精制；对提出的总皂苷采用检测三萜类化合物通性的理化检识方法——泡沫试验及显色反应进行初步定性检识；最后根据人参总皂苷中各单体皂苷分子结构中糖基个数和羟基数不同而极性大小不同的性质，通过薄层色谱法对人参总皂苷进一步分离和专属定性检识。
[实验内容]
一、人参总皂苷的提取分离
任选一种方案
方案(1)
人参根粗粉（60目10g）
用滤纸筒包好，置索氏提取器中，
加甲醇加热回流提取至三氯化锑氯仿饱和溶液反应呈阴性，
提取液
减压回收甲醇
浸膏
用10倍量蒸馏水溶解
水溶液
用乙醚在分液漏斗中，
振摇脱脂4次
乙醚液（脂类）水层
用水饱和的正丁醇萃取6次，
合并
正丁醇液
减压回收正丁醇，蒸干
残留物（总皂苷粗品）
方案(2)
60目10g）
用滤纸筒包好，置索氏提取器中，
加10倍量乙醚回流脱脂至无色，
乙醚液（脂类）残渣
加甲醇加热回流提取至三氯化锑氯仿饱和溶液反应呈阴性
甲醇提取液
减压回收甲醇
浸膏
用10倍量蒸馏水溶解
水溶液
用水饱和的正丁醇萃取6次，合并
正丁醇液
减压回收正丁醇，蒸干
残留物（总皂苷粗品）
二、人参总皂苷的分离精制
将人参总皂苷粗品分为两份
方法（1）沉淀法
1份总皂苷粗品
10倍量丙酮，
黄白色沉淀母液
过滤回收溶剂，用少量甲醇溶解，再倾入约10倍量丙酮
过滤
60℃下真空干燥，称重计算收率
精制总皂苷
方法（2）大孔树脂柱色谱法
大孔树脂色谱是近年来用于分离和富集天然化合物的一种常用
方法，应用大孔树脂分离皂苷，主要用于皂苷的富集和初步分离。将含有皂苷的水溶液通过大孔树脂柱吸附后，先用水洗脱除去糖和其他水溶性杂质，然后改用不同浓度的甲醇或乙醇进行梯度洗脱。极性大的皂苷可被低浓度的甲醇或乙醇洗脱下来，极性小的皂苷则被高浓度的甲醇或乙醇洗脱下来。
1份总皂苷粗品
用少量水溶解，加样于处理好的D101型大孔树脂柱上，
吸附1小时后，用3倍柱体积蒸馏水洗脱除杂质
继用60%乙醇洗脱至三氯化锑氯仿饱和溶液反应呈阴性
洗脱液
减压回收溶剂
残留物
减压60℃下真空干燥，称重计算收率
精制总皂苷
三、人参皂苷的鉴定
（一）理化检识
1．泡沫试验
取人参根粗粉1g，加水浸泡（1：10）1小时或置80℃水浴上温浸30分钟，过滤得滤液供以下试验。
取供试液2ml于试管中，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则产生大量的持久性的似蜂窝状泡沫（示有皂苷）。
注：含蛋白质和粘液质的水溶液虽也能产生泡沫，但不持久，放置很快消失。
2. 显色反应
（1）醋酐－浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）
取样品适量，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，观察并记录现象。
（2）三氯甲烷－浓硫酸反应（Salkowski反应）
取样品适量，加三氯甲烷1ml使溶解，沿试管壁加等量的浓硫酸，
分别置可见光及紫外灯下，观察并记录现象。
（3）五氯化锑反应（Kahlenberg reaction）
取样品适量，加五氯化锑的氯仿溶液反应呈紫色。或将样品的氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷20％五氯化锑的氯仿溶液(或不含乙醇和水的三氯化锑饱和的氯仿溶液)，干燥后60℃~70℃加热，显色，观察并记录现象。
(二)色谱检识
1. 薄层色谱
吸附剂：硅胶-CMC薄层板
样品溶液：称取由沉淀法及大孔吸附树脂法制得的精制总皂苷各一份，加甲醇制成
1ml含2mg的样品溶液。
对照品溶液：称取人参皂苷Rb1、Re、Rg1对照品，加甲醇制成1ml含2mg的对照品混合溶液。
对照药材溶液：取人参对照药材粉末1 g，加氯仿40ml，置水浴上回流1小时，弃去氯仿液，药渣挥干残存溶剂，加水0.5ml拌匀湿润后，加水饱和的正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液，加氨试液三倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干加甲醇溶解，使成1ml，作为对照药材溶液。
展开剂：
A.氯仿-甲醇-水(65：35：10)10℃以下放置后的下层溶液;
B.氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10) 10℃以下放置后的下层溶液;
显色剂：10%硫酸乙醇溶液
显色方式：10%硫酸乙醇溶液喷雾后，105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外灯(365nm)下检视.
[实验说明及注意事项]
1．萃取操作时，注意振摇不能过度剧烈，以防产生乳化现象。
2．在使用旋转蒸发器进行甲醇提取液减压浓缩时，因含皂苷易产生大量泡沫发生倒吸现象。故应注意观察随时调整水浴温度及旋转蒸发器转速，避免事故的发生。
3．在连续回流提取过程中，水浴温度不宜过高，应与溶剂沸点相适应。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。
4．回收乙醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增加至高虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回收，取下提取器，将其中乙醚移置另外容器中，如此反复操作，即可完成回收乙醚的操作。
5．在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液数滴，滴于白瓷皿中，挥散溶剂，观察有无残留物，或滴于滤纸片上，然后进行醋酐－浓硫酸反应或三氯化锑氯仿饱和溶液反应。若反应呈阴性，示已提尽。
6．大孔树脂在使用前应按说明书处理好，加乙醇浸泡24 h后，再用乙醇洗脱至流出液与3倍水混合后不呈混浊，继续用蒸馏水洗至无醇为止备用。
[思考题]
1．三萜皂苷可用哪些反应进行鉴定？如何与甾体皂苷区别？
2．试设计一种从人参茎叶为原料提取分离人参总皂苷的工艺流程，并说明提取、分离原理。
3．使用乙醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项？
附：[实验预习要求]
1．根据实验目的要求归纳总结实验原理，明确实验原理。
2．根据本次实验流程列出实验所需试剂、试药，仪器及装置。明确实验需要试剂及仪器，掌握提取装置原理、组成及安装）。3．解析提取工艺流程。
4．掌握提取分离过程操作要点。
5．推测实验现象及结果。
人参皂苷的提取教学文稿
人参皂苷的提取
第一章综述 1.1 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始 载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢 冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、 心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究 证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约 有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为 Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其 他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱 导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤 发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机 制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 1.2 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止， 文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、- Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50 余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。 对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制 血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的 合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促 进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。 Rb1：西洋参(花旗参)的含量最多，具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎 发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用.
芦丁的提取分离及鉴定A4
2011届本科生毕业论文 题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌 作者姓名张娜娜 专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月
2011届本科生毕业论文 芦丁的提取分离及鉴定 张娜娜，胡浩斌 （陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid. Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification 引言 随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要， 1
比色法测定总皂苷含量
比色法测定总皂苷含量 1、仪器 紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0．8 cm，长20 cm)。 试剂 无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯；大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。 2、方法 2.1 对照品溶液的制备 取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml，制成 1 mg／ml对照品溶液。 2.2供试品溶液的制备 取药材粉末(过4号筛)约0．2 g，准确称定，置于150 ml具塞锥形瓶中。精密加入50 ml 甲醇后，准确称重。浸泡60 min，超声提取30 min，再次称重，补加甲醇至超声前重量。过滤，精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中，水浴蒸发至干，用5 ml水溶解残留物，所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1：5)，以水50 ml洗脱，弃去水液，之后再以50 ml 95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干。用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml)，合并正丁醇层，减压蒸干。残留物用70％甲醇溶解转移至10 ml量瓶中，定容，摇匀，即得。 2．3测定波长的选择 精密移取1．5 ml的对照品及l ml供试品溶液，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛一冰醋酸(临用新配)0．2ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。加冰醋酸5 ml，摇匀。立即在紫外分光光度计于400～800 nm波长下扫描，同时空白溶液作参比。对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm，故选取475 nm为检测波长。 2．4线性关系考察 精密量取对照品溶液0．60，1．50，2．40，3．30，4．20 ml，置具塞试管中，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛-冰醋酸(临用新配)O．2 ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。各加冰醋酸5 ml，摇匀，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在475 nm处测定吸光度。以对照品质量c(mg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，使用软件OriginPro 7．0进行回归分析，得到回归方程为：A=0．007 4+1．120 83c, r=0．999 97。在0．096—0．672 mg内线性关系良好。 2．5精密度试验 精密吸取对照品溶液1．5 ml，依“2．4”项下方法显色测定吸收度，连续测定5次，结果RSD为0．254％，说明仪器的测试性能良好。 2．6稳定性试验 取对照品和样品溶液，依“2．4”项下方法操作，按不同时间测定吸光度，结果见表1。2．7样品含量测定 取供试品溶液6份，每份精密吸取80 μ L，按“2．3”项的方法显色后，在540nm测定吸光度，计算样品含量。 2．8加样回收率试验 取供试品溶液8份，每份精密吸取80μL，加入0．2mg／mL齐墩果酸溶液50 u I。，按“2．3”项的方法显色后，在540hm测定吸光度，计算加样回收率。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定 背景知识 芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。 二、实验要求 独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。 三、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。 四、实验材料和器皿 【器皿】 烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。 【材料】 槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。 五、实验内容 操作步骤： 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 流程图：
提取人参皂苷并且检验以及在过程的一些注意事项
1.人参皂苷提取 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参皂甙和稀HCl在醇液中进行温和酸水解，可得到三种皂甙元，齐墩果酸、人参二醇和人参三醇。而不能得到原人参二醇和原人参三醇，这是因为在酸水解过程中侧链的20－位碳原子上的羟基（－OH）与该链上的双键（C＝C）易闭环，而形成带有三甲基四氢吡喃环的人参二醇和人参三醇。水解后，除去醇、氯仿萃取物经硅胶柱层析分离即可得到三种单体皂甙元，经重结晶获得纯品，分别与已知皂甙的红外光谱相一致。 2.人参皂甙提取和甙元分离工艺流程 ①人参皂甙提取工艺： 人参茎叶粗粉20g 热水提取1小时，粗滤，（棉花） 提取液药渣 加0.6g是会乳沉淀，并调至PH9－10，放置10分钟，抽滤 沉淀物滤液 浓硫酸调PH7，放置10分钟。 中性提取液 回收后，上大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用 70％氨性醇洗至绿色。 乙醇洗脱液 回收乙醇 人参总皂甙（黄白色） a)人参皂甙元的水解和甙元的分离流程 人参总皂甙 加含5％HCl的50％乙醇液， 加热回流2小时 沉淀水解液 （酸性皂甙元部分）加水稀释，水浴蒸去醇，氯仿萃取 3次（10，5，5ml）
水层氯仿层 干燥， 无水NaSO 4 回收氯仿 总皂甙元 少量苯溶解，硅胶柱 层析，用苯－乙酸乙脂 （8：2）洗脱 组分Ⅰ组分Ⅱ组分Ⅲ95％乙醇重95％乙醇重丙酮结晶 结晶3次结晶3次2次 齐墩果酸人参二醇人参三醇 mp299-301℃mp245-250℃mp244-246℃ 1.操作方法 人参总皂甙的提取：取人参茎叶粗粉20g，放入烧杯用热水（80℃－90℃）提取1小时，然后用棉花粗滤，在所得滤液中加入0.6g水石灰乳除杂并调PH9－10放置10分钟左右，过滤，再将滤液用浓硫酸（少量）调PH7，放置10分钟左右，回收提取液至少量（5－10ml），再上大孔树脂柱（注：此柱应提前洗好，清洗办法略）先用蒸馏水洗至无色，再用70％的乙醇洗至无色，分别用小瓶接收。便得到了乙醇洗脱液，回收乙醇，便得到了人参总皂甙（黄白色）。 人参皂甙的水解 称取人参皂甙（）4－5g（不足时由老师提供），加20倍量含5％HCl的50％乙醇溶液，加热回流2小时，放冷，加倍水，水浴去醇，转入分液漏斗中，用氯仿萃取3此（10，5，5ml），合并氯仿层，加少量无水硫酸钠干燥，回收氯仿即得总皂甙元。 甙元柱层析分离 称取100－200目硅胶（105℃活化30分钟）50g，用苯做洗脱剂湿法装柱，柱顶放一层脱脂棉，压上数个玻璃球，放出多余的苯（至高于吸附剂1cm），计算保留体积。总皂甙元用少量苯溶解上柱，用苯－乙酸乙脂（8：2）洗脱，薄层检识（与甙元标准品对照）相同组分合并，回收溶剂。齐墩果酸、人参二醇用95％乙醇重结晶，人参三醇用丙酮重结晶，纯品80℃干燥，收集于小瓶中。 2.人参皂甙的检验 （一）显色反应
芦丁的提取分离和鉴定
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定 芦丁简介: 芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。 中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。 芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 补充知识:
绞股蓝总皂苷提取分离及鉴别方法
绞股蓝总皂苷提取分离及鉴别方法 该药是从植物中提取出来的，为七叶树科植物天师栗(Aesculus Wilsonii Rehd.)的干燥成熟果实(娑罗子)提取物得到的皂苷钠盐,是天然植物药，呈白色粉末或结晶性粉末,味苦涩而辣,具引湿性,符合未来用药趋势, 注射用七叶皂苷钠有什么药理作用？ ①抗炎作用。七叶皂苷可消退由卵白蛋白，福尔马林和葡聚糖诱导的大鼠爪肿胀。V ogel 等注意到七叶皂苷对正常大鼠有促进钠排泄作用，但排钾维持正常水平，注射七叶皂苷后，立即显示利尿作用。对于七叶皂苷抗炎作用的机理，一些学者认为抗炎作用在于能使炎症刺激剂所致的炎症初期的毛细血管通透性增大变为正常。另一些学者认为皮质甾类化合物的正常分泌是七叶皂苷抗炎作用所必要。 ②消肿胀作用。七叶皂苷对大鼠脑水肿有保护作用；Siering证实七叶皂苷的抗肿胀作用与改善细胞通透性有关。Mussgnug认为七叶皂苷抗水肿作用机理为：（1）表面张力活性；（2）提高红细胞与水结合的能力，随着边缘血浆流量提高，产生代谢被动钠泵的依赖；（3）使细胞内、外流体交换正常；（4）在结缔组织和细胞膜上有直接作用的位点。 ③抗渗出作用。七叶皂苷对大鼠巴豆油急性渗出和磷酸组织胺引起的小鼠毛细血管通透性增大具有显著的抑制作用，其强度分别约为氢化可的松的7倍和8倍；并能对抗紫外红斑渗出及缓激肽所致家兔后肢淋巴通透性增加。 ④促皮质甾酮作用。七叶皂苷能促进肾上腺皮质分泌皮质醇，抑制组胺所致的毛细血管通透性增加，增加前列腺素F2，减少前列腺素E1的释放量，阻滞细胞的胞苷二磷酸酯的作用，并延缓Na+交换，从而具有抗炎，抗渗出活性，提高静脉张力。 ⑤抗自由基作用。提高血浆过氧化物歧化酶活性，使抗自由基活性增强。 回答者：drinkyle 方法：分别采用无水乙醇回流提取、无水乙醇回流-正丁醇萃取、体积分数为70％乙醇回流提取、体积分数为70％乙醇回流提取-正丁醇萃取、水提取、超声波提取和超临界CO2提取方法，以人参皂苷Re作对照品，比色法测定提取液中山茱萸总皂苷的含量。结果及结论：不同提取方法对皂苷含量有较大的影响，超临界CO2提取技术无溶剂残留，操作温度低，对环境友好，提取效率高，皂苷含量是传统溶剂提取的1．5～2．0倍，有较好的应用前景 可以采用D101大孔吸附树脂用于提取人参皂甙的分离工艺。现生产工艺已成熟完善。 1、人参提取物回收乙醇后加水溶解通经预处理的吸附柱，先用水洗脱除尽游离糖等非皂甙极性成分，以60%乙醇洗脱下总皂甙，残留于柱层析上的非极性成分则用工业乙醇洗净。树脂可再生重复使用。总皂甙再通过一次吸附树脂即得以精制。 2、在PH<6.5，西洋参总皂甙的水解反应随溶液酸度的增大而加快。在PH6.5~9.00，水溶液中西洋参总皂甙几乎不水解而稳定存在。据此，人参皂甙水提液可调PH值至9上柱，将有利于极化色素等难溶于水的杂质不被吸附而被分离。但需注意采碱性溶液上柱，吸附后需强化水洗（最好仅冲一次），彻底将树脂层碱液洗净，不留死角，否则将会影响最终产品质量。
人参皂苷的提取与分离材料
人参皂苷的提取与分离 学生姓名 专业 班级
学院 摘要 首先认识人参和人参皂苷，了解人参皂苷的详细作用和功效，接着研究了人参茎叶总皂苷含量提取方法，用详细的工艺提取人参皂苷，并且用对显色反应和薄层层析对提取物进行鉴定，为以后的人参茎叶的开发利用奠定基础。 关键词：皂苷；人参茎叶；鉴定。 Abstract The first ginseng and ginseng saponin, understanding the role and efficacy of ginseng saponin in detail, then study the effect of ginseng stem leaf total saponin extraction method, with the detailed process of extraction of ginseng saponin, and used for color reaction and thin-layer chromatography to extract were identified, for the future of ginseng stem and leaf development lays a foundation. key words: saponin; ginseng stems and leaves; appraisal;
目录 摘要 (1) Abstract ..................................... 错误!未定义书签。 1 绪论 (3) 1.1 ............................................. 人参概述 错误!未定义书签。 1.2 ........................................ 人参的化学成分 1 1.2.1人参皂苷 (1) 1.2.2人参蛋白 (1) 1.2.3人参多糖 (1) 1.2.4无机元素 (2) 1.2.5其他成分 (2) 1.3 ................................ 人参的生理功能及药理活性 2 1.3.1增强免疫功能 (2) 1.3.2抗衰老 (2) 1.3.3抗肿瘤 (3) 1.3.4增强学习和记忆能力 (3) 1.3.5保护心血管系统 (3) 2 实验部分 (5) 2.1 ............................................ 实验材料 5 2.2 人参皂苷的提取分离 (5) 2.2.1 人参皂苷的提取分离原理 (5) 2.2.2 人参皂苷提取和苷元分离工艺流程 (5) 2.3 ........................................ 人参皂苷的检识 7 2.3.1 显色反应 (7)
芦丁的提取及鉴定
实验二芦丁的提取及鉴定 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求 实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。
保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究
保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究 发表时间：2014-08-26T15:20:35.077Z 来源：《医药前沿》2014年第20期供稿作者：张高飞于玥邬晓鸥李军 [导读] 本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 张高飞于玥邬晓鸥李军 (深圳市药品检验所 518057) 【摘要】目的建立保健食品中人参总皂苷含量的测定方法。方法用水提取人参总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的人参皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，在560nm下测定吸光度。结果人参总皂苷在0.0722～0.2165mg质量范围内与吸光度线呈良好的线性关系，平均回收率为95.9%。结论本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 【关键词】保健食品人参总皂苷分光光度法 【中图分类号】R93 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）20-0217-02 皂苷类成分是参类中的主要活性物质, 具有滋补强壮，增强免疫，抗疲劳的功效[1]，常用的检测方法为紫外分光光度法[2-5]。目前市售含参类的保健食品有片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等，均是以总皂苷含量来评价其产品的质量和功效。其测定方法大多都是按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的方法检测[6]，在实际应用中，主要存在以下问题：1、固定的树脂柱载样量与不确定的样品总皂苷含量之间的矛盾，部分样品存在柱容量超载的情况，测定结果偏差严重。2、部分样品经过大孔树脂柱除杂后，仍存在干扰比色测定的杂质。3、操作步骤欠规范，导致测定结果重现性差。本文针对总皂苷的提取方式、以及测定过程中的参数进行研究，建立了保健食品中人参总皂苷的测定方法。 1 仪器、材料与试药 岛津UV2450紫外分光光度计；瑞士梅特勒XS105DU电子天平；上海一恒电热恒温水浴锅；人参皂苷Re(中检所，批号110754-200822，含量88.8%)；儿童装高丽红参液，舒灵胶囊，舒慰快牌胃肠液均购自市场；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1供试品溶液的制备 固体试样：称取1 g样品，置100 mL容量瓶中，加水80 mL，超声提取30 min，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 mL，进行萃取。 液体试样：吸取试样10 mL至分液漏斗中(含乙醇的保健食品，水浴挥尽乙醇)，加水至约25 mL，进行萃取。 在已处理好的试样中加入20 mL水饱和正丁醇，振摇萃取3次，取正丁醇层(必要时可离心)，合并提取液，用20 mL氨试液洗涤3次，置蒸发皿中100℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，甲醇定容，即得。 2.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取人参皂苷Re标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于10 mL具塞比色管中，水浴挥干溶剂，加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，再加入0.8 mL高氯酸，使残渣溶解，于60℃水浴加热10 min，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5 mL，摇匀，于560 nm波长处测定吸光度。取供试品溶液1 mL于10 mL具塞比色管中，自“水浴挥干溶剂”起操作。 3 方法学考察 3.1线性关系 取人参皂苷Re对照品0.01804 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为标准溶液，精密量取标准溶液0.4、0.6、0.8、 1.0、1.2 mL分别置10 mL比色管中，水浴蒸干，显色，以对照品的质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：y=4.4807x－ 0.0886，r=0.9997。结果表明，人参皂苷Re对照品质量在0.0722～0.2165 mg之间与吸光度呈良好的线性关系。 3.2 萃取次数 取舒灵胶囊、儿童装高丽红参液，按2.1制备样品水提取液，用水饱和正丁醇分别萃取3、4、5次，结果表明，萃取3次可将人参总皂苷提取完全(表1)。 表1 萃取次数比较结果 3.3热稳定性考察 由于正丁醇沸点较高，为此对人参皂苷的热稳定性进行考察，以便选取合适的水浴温度。取人参皂苷Re标准溶液0.6 mL，分别按60℃、100℃水浴蒸干、100℃水浴蒸干后继续放置30 min处理，测定结果分别为0.663、0.658、0.653，表明人参皂苷的热稳定性良好，因此水浴温度选为100℃。 3.4显色稳定性 取人参皂苷Re标准溶液0.3 mL，显色后每隔10 min测定其吸光度，结果表明，显色后的紫红色溶液不稳定，吸光度呈下降趋势，因此显色完成后需在10 min内完成测定。 3.5重复性试验 取舒灵胶囊按2.1下方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果表明本方法重复性良好(表2)。
总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法-实验流程图-李熙灿-XicanLi
总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法（香草醛法）：实验流程图2017.10 【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16. 【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中，而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。为了测定这些皂苷的总含量，便建立了总皂苷的检测方法。总皂苷的检测多使用分光光度法，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。 【溶液配制】 1.香草醛-冰醋酸溶液（测试液）配制：精密称取25mg香草醛，加冰醋酸定容至5mL。即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。 2.样品液配制：将待检测的样品用甲醇溶解，配成约5mg/mL的样品液。具体浓度视样品的溶解度而定， 但是必须有精确的数据。 3.齐墩果酸标准品溶液配制：精密称取齐墩果酸1mg，加甲醇定容至5mL，配成0.2mg/mL齐墩果酸标 准品溶液。（也可以使用其他的皂苷物质，如人参皂苷Rg3。但必须是纯的化合物） 4. 高氯酸：分析纯试剂。 5. 冰醋酸：即纯的无水乙酸（分析纯） 【检测方法与实验流程图】 【标准曲线绘制】（齐墩果酸） 取上述齐墩果酸溶液x μL （x=0，40，80，120，160，200），依“实验流程图”，在70℃水浴15mim 后呈桃红色。以第一份溶液（x=0）作为空白对照，测A540nm值。以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量，为横坐标，A540nm值为纵坐标，绘制标准曲线。以此标准曲线计算，得线性回归方程。 【样品液的测定】 将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液，进行实验，并测定其A540nm值。将此A540nm代入线性回归方程，即可计算出其总皂苷的含量（以齐墩果酸计）。 【说明】 1.此法是以齐墩果酸为标准品测得总皂苷的含量。所以，其结果应表示为，如：“某某提取物中含 有0.12mg/g的总皂苷（以齐墩果酸计）”。这并不意味着该提取物中真的就含有齐墩果酸。 2.“实验流程图”中，在“彻底挥干溶剂”一步中，如果溶剂挥干不彻底，哪怕是有一点点，都 会干扰。水也要彻底挥干。 1
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1.芦丁(Rutin) 淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。 溶解度： 水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素(Quercetin) 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。溶解度： 乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热) 可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 (1) 白桦脂醇(Betulin) 无色针晶，℃~252℃。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、
三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进
作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@https://www.360docs.net/doc/9513653402.html, 三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进 冯 亮,蒋学华3,叶利民 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三 七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法 T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)～15min (45∶55);流速1.5ml ?min -1;测定波长200nm 。结 果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、 Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。其准 确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。 关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03 Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponions FE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming (West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China ) Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ?min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC. K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927 Document code :A Article I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中三七总皂苷(Panax noto 2 ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化 淤的功效。三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参 皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成 分的含量。为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定 三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测 器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μ m ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。Rb 1、Rg 1和R 1对照 品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特 安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精 华西药学杂志 W C J ?P S 2006,21(2):187～189
总皂苷的测定方法
总皂苷的测定方法（分光光度法） 本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。 本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。 一、方法提要 样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。 二、仪器 1.722分光光度计。 2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。 3.超声波振荡器。 三、试剂 1.甲醇（分析纯）。 2.乙醇（分析纯）。 3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。 4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。 5.高氯酸（分析纯）。 6.冰乙酸（分析纯）。 7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。 8.重蒸水。 四、测定步骤 1.样品处理： （1）固体样品 称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。 （2）液体样品 含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。 2.柱层析
以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。 3显色 在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。 4标准曲线的绘制： 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/mL）0、20、40、60、80、100μL（相当于人参皂苷Re0、40、80、120、160、200μg），于10mL比色管中，用氮气吹干，同4.（3）显色步骤测定吸光度。并绘制标准曲线。 人参总皂苷浓度为20～200μg/mL之间与吸光度值呈线性关系，相关系数（r）0.999。 五、结果计算 式中X——样品中总皂苷（以人参皂苷Re计）（g/kg或g/L）； m——试样质量或试液体积（g或mL）； V1——样品提取液总体积（mL）； V2——样品提取液测定用体积（mL）； m1——从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量（μg）。