β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞的免疫刺激作用
β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞的免疫刺激作用
汪蕾[1]; 张秀霞[2]; 王冬梅[2]; 李军涛[2]; 鲁耀鹏[2]; 郑佩华[2]; 冼健安[2]
【期刊名称】《《南方农业学报》》
【年(卷),期】2019(050)004
【摘要】[目的]明确β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞免疫力的影响,为开发β-1,3-葡聚糖作为红螯螯虾饲料免疫增强剂提供理论依据。[方法]向红螯螯虾注射不同剂量(1和5μg/g)的β-1,3-葡聚糖,以注射生理盐水为对照,于注射后的0、6、12、24和48 h采集红螯螯虾的血淋巴,测定血细胞总数(THC)、活性氧(ROS)含量、一氧化氮(NO)含量、非特异性酯酶活力、吞噬活力及血清酚氧化酶(PO)活力。[结果]β-1,3-葡聚糖可刺激红螯螯虾血细胞THC、ROS和NO含量、酯酶和血清PO活力显著提高(P<0.05,下同),注射5μg/g的β-1,3-葡聚糖剂量还可显著提高血细胞的吞噬活力;β-1,3-葡聚糖对各类免疫应答的影响存在一定的剂量和时间效应,THC、ROS含量、NO含量及血清PO活力对β-1,3-葡聚糖的刺激更敏感;ROS含量、酯酶活力和血清PO活力呈先上升后下降的变化趋势,其指标达峰值时,处理时间在24.72~28.20 h范围内。[结论]注射β-1,3-葡聚糖能提高红螯螯虾的循环血细胞数量及其细胞免疫力,表明β-1,3-葡聚糖可开发为红螯螯虾饲料免疫增强添加剂。
【总页数】8页(P.883-890)
【关键词】红螯螯虾; β-1;3-葡聚糖; 血细胞; 免疫刺激; 流式细胞术
【作者】汪蕾[1]; 张秀霞[2]; 王冬梅[2]; 李军涛[2]; 鲁耀鹏[2]; 郑佩华[2]; 冼健安[2]
【作者单位】[1]华南师范大学生命科学学院广州510631; [2]中国热带农业科
阿拉伯木聚糖对于免疫系统的刺激和癌症预防作用
注：文中所提MGN-3 其核心有效成分为阿拉伯木聚糖。 免疫刺激和癌症预防 Mamdooh Ghoneum，Ph.D Chief，研究部门Charles Drew University Los Angeles， California 到目前为止，一些研究已经证明接触工作场所化学物质的工人患癌症的巨大风险。本研究旨在探讨暴露于有毒化学物质的免疫变性，以及用MGN-3中和化学有毒物质的可能性。MGN-3是一种新的生态反应调节物质(BRM)，含有MGN-3化合物。MGN-3是含半纤维素-B的多糖。 在工作场所接触化学物质的11人参加了研究。被试验者们根据以下的症状明确了免疫功能不全；即，与对照标准的反应相比，自然杀伤(NK)细胞活性值降低（10.2±4.2Lus），T细胞有丝分裂促进剂（PHA，39060±12517cpm，CONA，36224±11922cpm）和对B细胞有丝分裂促进剂（PWM，16550±6330cpm）的淋巴细胞胚胎生成反应降低。受试者在4个月内以15mg/kg/d的摄入量接受了MGN-3的投药。使用MGN-3治疗后，NK细胞的活性在2个月后增加了4倍，4个月后增加了7倍。另一方面，T细胞和B细胞的功能比标准值高出130～150%。 MGN-3的NK细胞免疫调节功能，对具有各种类型恶性肿瘤的90名患者（前列腺癌22人，乳腺癌20人，多发性骨髓瘤16人，卵巢癌5人，其他脏器癌27人）进行了调查。在参加本研究之前，患者已经接受了手术，化疗，放射治疗，激素治疗等现有的治疗。NK细胞的活性是使用人红白细胞靶细胞的K562按月连续测量的。患者按45mg/kg/d摄入MGN-32?5年。在MGN-3的临床试验中，95.5%的患者（90人中有86人）在给药1-2周后NK活性增加（标准值的2-10倍）。其活性率在高水平上保持了最高5年。 以下内容作为结论进行叙述。 1）MGN-3是通过NK细胞活性的上升来增加宿主抗肿瘤应答，从而成为癌症的新免疫疗法的方法的BRM 2）暴露在化学物质中引起的NK活性的降低，可以通过MGN-3完全恢复。 3）作为目前的结果，认为应激反应在MGN-3的治疗中也会引起免疫力的下降。如果每月测定NK活性，就能 发现需要改善的活性降低，但如果不这样做，就会成为以后治疗的分歧点。
葡聚糖检测方法
葡聚糖检测方法（试剂盒方法翻译） 一．提供试剂 瓶1：exo-1,3-β-Glucanase (100 U/mL) plus β-Glucosidase(20 U/mL) suspension, 2.0 mL 瓶2：Amyloglucosidase (1630 U/mL) plus invertase(500 U/mL) solution in 50 % v/v glycerol, 20 mL 瓶3：GOPOD Reagent Buffer. Buffer (48 mL,pH 7.4), p-hydroxybenzoic acid and sodium azide(0.4 % w/v). 瓶4：GOPOD Reagent Enzymes. Glucose oxidaseplus peroxidase and 4-aminoantipyrine. Freeze-dried powder. 瓶5：D-Glucose standard solution (5 mL, 1.00 mg/mL) in0.2 % w/v benzoic acid 瓶6：Contr ol yeast β-glucan preparation ( 2 g, β-glucan content stated on the bottle label). 二．提供试剂的处理 1.向瓶1中加入8ml醋酸钠缓冲液，分装-20℃存放。 2.直接使用瓶2中的试剂，稳定在4°C ~ 2年或者-20°C > 4 年。 3.将瓶3的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，稳定在4°C > 2年。 4.将瓶4的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，黑暗环境存放， 稳定在4 °C 2 - 3个月,在-20°C或> 12个月。
葡甘露聚糖
性状 白色或奶油至淡棕黄色粉末。可分散于PH值为4.0~7.0的热水或冷水中并形成高粘度溶液。加热和机械搅拌可提高溶解度。如在溶液中加中等量的碱，可形成即使强烈加热也不熔融的热稳定凝胶。淡黄至褐色粉末。基本无臭、无味。其水溶液有很强的拖尾（拉丝）现象，稠度很高。对纤维物质有一定分解能力。主要成分为多糖。 用途 食品；保健品；医药用品；美容器具；胶凝剂；增稠剂；乳化剂；稳定剂；成膜剂。KGM在保健品中的运用机理葡甘露聚糖是自然界分子量最大、粘度最高的膳食纤维，具有极高的浓度。众所周知，可溶性膳食纤维最重要的品质在于其粘度，粘度是降低饭后所增加的血糖浓度指数并保持其总体稳定最重要的因素。粘度越高，功效越好。葡甘露聚糖具有最强的持水能力，能吸附其自身体积200倍的水分子形成粘稠的溶液。由于其特殊的葡萄糖和甘露糖的β-1-4链式结构，它不被人体的消化酶所影响，并不会产生热量。不含有糖份，脂肪，淀粉和蛋白质等具有热量的物质
●魔芋葡甘露聚糖的营养保健功能 由于魔芋葡甘露聚糖特殊的性能，现代医学证明，作为一种医药添加剂，它能够有效地降低胆固醇、血糖和减肥，在医药行业将有广泛的应用前景，可用于治疗高血脂、糖尿病、肥胖和便秘等 1.降血糖，增加胰岛素敏感度糖尿病患者通常需要检测食物的升糖指数（食物在体内转化成葡萄糖的能力）来控制饮食的健康。例如，软饮料中的糖和淀粉能够相对快速地转化成葡萄糖进入血管。糖尿病患者必须选择低升糖指数的食品，这是因为血糖的急速增加会加剧胰腺产生胰岛素，并导致胰岛素抵抗，这两个因素都会使饭后血糖浓度快速上升。葡甘露聚糖与低升糖指数食物效果相当。在消化过程中，营养物质通过食物流到达小肠的表面进而被吸收。葡甘露聚糖在溶解后形成的胶凝体在捕获到营养物质后将其包裹在胶体内，并能减缓食物在消化道内流动的速度。被包裹起来的营养物质因接触不到消化酶无法被小肠所吸收，魔芋葡甘露聚糖能够捕获膳食糖份中的营养物质如多糖和淀粉。因此，血液吸收糖的速度减缓了，糖尿病患者也能明显地体验到饭后稳定的血糖了。血糖的平稳使其对胰岛素的作用更敏感，从而避免血糖的高低波动给胰腺带来大的压力，同时对糖尿病患者和预防类型Ⅱ糖尿病（不能产生足够
真菌(1-3)-β-D葡聚糖测定试剂盒(显色法)产品技术要求kehe
真菌(1-3)-β-D葡聚糖测定试剂盒（显色法） 适用范围：用于体外定量测定人血清样本中真菌(1-3)-β-D葡聚糖的含量。1.1 规格 24人份/盒、48人份/盒 1.2 主要组成成分 校准品靶值批特异，详见靶值单 质控范围批特异，详见靶值单 2.1 外观 反应主剂为白色冻干块状物，样品处理液、溶解液和主剂复溶液为无色透明液体。 2.2 装量 处理液、溶解液和主剂复溶液装量不小于标示量。 2.3 准确度
试剂盒的回收率须在85%～115%范围内。 2.4 重复性 检测浓度为125pg/mL的溶液，重复检测10次，其变异系数（CV）值应不大于10％。 2.5 线性 2.5.1在浓度[31.25,500]pg/mL范围内，其线性相关系数的绝对值r≥0.990; 2.5.2在浓度[31.25 ,125）pg/mL范围内，其线性绝对偏差的绝对值不大于12.5 pg/mL；在浓度[125 ,500]pg/mL范围内，其线性相对偏差的绝对值不大于10%。 2.6 空白限 试剂盒的空白限不大于16 pg/mL。 2.7 溯源性 根据GB/T21415的有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定等内容，溯源至企业工作校准品。 2.8 质控品赋值有效性 检测质控品，检测结果应在质控范围内。 2.9 批内瓶间差 同一批号的10个待检试剂盒对浓度为250pg/mL的标准溶液进行测试，重复10次，瓶间差的变异系数不得大于10%。 2.10 批间差 3个批号的试剂盒检测结果的变异系数应不大于15％。 2.11 稳定性 2.11.1 2℃～8℃保存，有效期12个月，取过有效期3个月以内的试剂盒进行测定，应符合2.3、2.3、2.5、2.6、2.7、2.8的要求； 2.11.2校准品溶解后，-20℃保存10天后进行测定，应符合2.3的要求； 2.11.3质控品溶解后，-20℃保存10天后进行测定，应符合2.8的要求； 2.11.4反应主剂溶解后，立即冻存至-20℃保存7天后进行测定，应符合2.3、2.5的要求。
葡甘露聚糖怎么吃
葡甘露聚糖是从魔芋根中提取的一种天然膳食纤维，它被认为是一种有助于形成“大块粪便”的通便成分。我们在一些食品中会添加这样的一种物质，那么对于它的用量和食用方法也有一些规定。我们需要合理来使用它。 葡甘露聚糖之所以不同于其他类型的可溶性纤维，主要因为它具有较高的粘性。葡甘露聚糖除了可以制作成魔芋面，魔芋根，还可以制作成一种凝胶，将其切碎，加入蘸料即可食用建议剂量是1-4 克之间。对于食用量您可以咨询专业人员，根据每个人情况食用量有所差别。 葡甘露聚糖有粉剂和胶囊形式的补充剂可供选择。它也可以添加至面食或面粉中，并且也是魔芋面的主要成分。由于葡甘露聚糖没有无色无味，它可以与任何一种饮料或食物混合。但需要注意的是，它会导致食物和液体变得浓稠。 需要说明的是，它并非减肥药——相反，这种纤维的作用原理是通过吸收腹部的水分，给人以饱腹感。它可以促进形成更大快、更多的粪便，并且让其在没有压力的状态下轻松穿过直肠，而不需要过度地挤压才能将其排出。 葡甘露聚糖之所以不同于其他类型的可溶性纤维，主要因为它具有较高的
粘性，实际上，它是您可以买到的最粘稠的膳食纤维之一。如果您将一粒葡甘露聚糖胶囊掰开倒入一小杯水中，水很快就会变成凝胶状。其他可能使得葡甘露聚糖具有潜在功效的作用机制包括：含有非常低的热量，有助于延缓胃部的清空，从而增加您的饱腹感，和其他可溶性纤维一样，有助于抑制脂肪和蛋白质的吸收可以为肠道内的有益细菌提供营养，将其转变为短链脂肪酸，如丁酸盐。动物研究发现，这可能有助于防止脂肪的增加。 常见的葡甘露聚糖剂量是多少？ 对于葡甘露聚糖的理想剂量，目前还没有规定，但大部分信息来源都认为每天服用1-4 克便已足够。尽管如此，您服用这种补充剂的时间尤为重要。一些人建议您必须在饭前至少15 分钟到一小时服用，否则就不能起到任何作用。 在服用葡甘露聚糖时，您务必还要足量饮水，至少一到两杯，确保将其完全冲下。如果这种补充剂在抵达胃部之前膨胀，就可能阻塞咽喉和食道，可能会导致窒息的风险。 服用葡甘露聚糖还可能导致多种副作用。
免疫刺激和免疫抑制
免疫刺激和免疫抑制：同一硬币的两面 Joaquim. Segales 和Edward G. Clark 现在人们同意免疫系统在断乳后系统衰竭综合征（PMWS）中起着重要作用。猪圆环病毒2型（PCV2）感染一贯伴随着淋巴器官的肉芽肿炎性浸出物，并导致一定百分率病例的致死性PMWS。然而PCV2对免疫系统的效应尚未充分鉴定，许多疑问尚街澄清。对PCV2感染来讲，免疫系统似乎是一把双刃剑。一方面，用PCV2和其他病毒如猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪细小病毒（PPV）作实验性共同感染研究，表明这些病毒能刺激和激活免疫系统，从而在共同感染猪内增进了PCV2的增殖。为此，刺激免疫系统是触发PMWS的重要事件。另一方面，严重的淋巴组织病损包括淋巴细胞缺失和这些组织中免疫细胞亚群的其他变化是严重发病猪的规律性特征，推断PMWS感染猪对其他免疫原不能增进有效的免疫应答，也是本病致病机理的部分原因。换一句话说，二个明显矛盾的效应，即免疫刺激和免疫抑制，可被用于描述同一综合征的免疫学效应。这是可能的吗？这些和其他疑问是本评论要提出的，它总结了我们目前了解的有关猪免疫系统和PCV2之间复杂的相互作用。 在免疫系统细胞中PCV2的增殖 除了在许多非淋巴组织中有淋巴组织细胞浸润外，PMWS病猪的特征性病理损害为恒定地包含不同程度的淋巴细胞缺失连同淋巴器官的肉牙肿炎症。PCV2核酸和抗原主要从PMWS病猪组织浆中检出，极少在巨噬细胞、树突状细胞和多核巨细胞的细胞核内检出。病毒可从全身巨噬细胞中检出，包括肝（Kupffer细胞），肺的肺泡和间质细胞，其他任何器官系统炎症浸润液中的巨噬细胞。在另一方面。虽然在严重的PMWS病猪中看到显著的淋巴细胞缺失，但从淋巴细胞不能检出PCV2核酸或抗原，或者发现极少。在实验性PMWS 中，有关免疫系统的细胞观察到类似的病毒分布模式。在病理损害的严重程度、淋巴组织中病毒存在量和临床后果之间具有了强力的正相关。 按照定量观点，与其他类型细胞中病毒物质的分布情况作比较，单核细胞/巨噬细胞系统的细胞中含有的PCV2量最多。然而奇怪的是DNA病毒如PCV2，从所周知是在细胞内罕有发现。事实上，尚不明了这些病毒物质有多少可归因于在巨噬细胞中产生病毒感染，若其他部位产生的病毒阳性物质引起吞噬作用。如果巨噬细胞中大部分病毒标记物质代表了吞噬作用，那么猪体内那些是主要“产生”PCV2的细胞？对这个问题的明确回答尚未得到，但已经知道血细胞和其他上皮细胞或内皮细胞证明在细胞内存在的病毒标记物质，由此推断这些类型的细胞在病毒生产中起着关键性的作用。也已知道，在静止期或激活期的巨噬细胞中PCV2不增殖，虽然粒细胞群体中有一个刺激了因素刺激的巨噬细胞，它确实激励了生产性病毒感染。骨髓中巨噬细胞/单核细胞系统细胞前身在病毒增殖中的作用应该探索。
葡甘聚糖的提取工艺综述
魔芋葡甘聚糖的提取工艺综述 摘要目的:综述魔芋葡甘聚糖的提取及分离方法研究现状。方法:对国内外文献进行归纳、分析及总结。结果:魔芋葡甘聚糖是天然高分子多糖，理化性质稳定。结论:魔芋葡甘聚糖在医药、化工、食品等方面具有广泛的应用前景，在药用辅料方面值得开发。 关键词: 魔芋葡甘聚糖提取分离综述 0 前言 魔芋属天南星科, 多年生草木植物。研究表明, 魔芋精粉中约含40 %～70 %的葡甘聚糖, 还含有少量蛋白质、食物纤维、淀粉、游离还原糖、氨基酸及微量无机盐等[1 ]。魔芋的主要活性成分为葡甘聚糖,它是对魔芋进行深加工利用的重要成分。魔芋葡甘聚糖的含量高,分子量大,其精粉及其相应产品的质量就好。由于葡甘聚糖及其改性产物水溶胶的高粘度、稳定性、乳化性、高膨胀性、成膜性、凝胶性和特定的生物活性,使得它们在食品、医药、化工、日化、造纸、纺织、石油和环保等领域具有很好的应用前景。因此,研究魔芋葡甘聚糖的提取分离方法具有重要的意义。 1 魔芋葡甘聚糖(KGM)的提取[ 2 ] 1.1粗提 魔芋粉 80g→150ml石油醚→60cC-65℃加热回流0.5h→过滤斗回收石油醚后→150mL 90%乙醇→70-80℃加热回流0.5h→过滤→回收乙醇→滤渣→60℃干燥→粗魔芋葡甘露聚糖。样品重71g，产品收率为89%。用分光光度法[6.71测得葡甘露聚糖含量为74.2%o 1.2精制 1.2.1乙醇沉淀法 粗魔芋葡甘聚糖(5g)→配成1%溶胶→95%乙醇沉淀→80%乙醇洗涤两次→85%乙醇50℃洗涤30min→95%乙醇沉淀→60℃干燥→粉碎→KGM。用分光光度法16,71测得KGM的含量为90.1%，产品收率为90.5%o 1.2.2酸水解法 粗魔芋葡甘聚糖(5g) →配成1%溶胶酸→水解(10%HCI调pH2-pH3,85℃-90℃水解15h)→95%
真菌βD葡聚糖检测与真菌感染诊断
真菌β-D-葡聚糖检测与真菌感染诊断 一、概述 经研究表明，(1-3)-β-D-葡聚糖是一种广泛存在于真菌细胞壁的抗原成分, 占其干燥重量的80%～90%，其它微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液均不含有。深部真菌感染患者中血浆(1-3)-β-D-葡聚糖含量增高,两者存在相关性。? 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化代谢后，（1-3）-β-D葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液或其它体液中（1-3）-β-D葡聚糖含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫可迅速对其清除。而在浅部真菌感染中，（1-3）-β-D葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高，它在血液及无菌体液中的存在可以很大程度上视为IFI（深部真菌感染）的标志。 二、深部真菌感染的诊治 近年来，由于造血干细胞移植、实体器官移植的广泛开展、高强度免疫抑制剂和大剂量化疗药物的应用以及各种导管的体内介入、留置等，临床上侵袭性真菌感染(invasive fungal infections，IFI)的患病率明显上升。IFI也日益成为导致骨髓及器官移植受者、接受化疗的恶性血液病和恶性肿瘤患者、AIDS以及其他危重病患者的严重并发症及重要死亡原因之一。由于缺少有效的早期诊断手段，深部真菌感染病死率居高不下。对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断，及早用药治疗。 常规病原学诊断“微生物培养”可为临床提供直接的诊断依据，但其培养方法耗时长（4-7天），不适宜用作早期诊断。并且，随着光谱抗生素、抗菌药物的大量应用，使得培养的阳性率极低。常用的免疫学方法，也由于抗原抗体反应的特异性差，往往对某一疑似真菌感染患者要作多种真菌抗原或抗体检测，既费时又不经济，而且当所用药盒的抗原谱或抗体谱不全时也极易造成漏诊。对一些以往接触过相应真菌抗原的个体，作抗体检测时还会出现阳性反应，因而对抗体的检测往往要求作动态观察才能作出诊断，期末属性较差。 有研究报道血清葡聚糖在念珠菌血症时明显升高，将其用于念珠菌血症的早期诊断明显优于传统的培养法和血清学诊断试验。虽然检测（1-3）-β-D葡聚糖只能提示有无真菌侵袭性感染，不能确定为何种真菌，但也可能转化为一种优势。因近年来，一些罕见的条件致病真菌也可引起深部感染，这就要求一种能迅速确定有无深部真菌感染的方法。因系统抗真菌药物种类较少，抗菌谱较广，且不因真菌种类而异，当检测到标本中的（1-3）-β-D葡聚糖含量较高时，可给予以系统治疗，不必耗时等待鉴定出种属，否则会贻误最佳治疗时机。 因此，血清（1-3）-β-D葡聚糖含量检测不失为一种实用的真菌感染早期诊断方法。并且，相关研究表明，（1-3）-β-D葡聚糖水平在确诊IFI患者的血清中出现持续升高，而随着药物的使用，对药物敏感者可很快出现（1-3）-β-D葡聚糖水平下降及转阴，而药物治疗无效人群（1-3）-β-D葡聚糖值无明显改变。因此，（1-3）-β-D葡聚糖可以用来判断药物的疗效，以协助临床医师及时进行药物种类及剂量的调整。 通过对人体体液进行（1-3）-β-D葡聚糖含量检测，可帮助判断人体是否已被真菌感染。对高危患者的样本进行连续分析，可为临床检测提供入侵真菌的量值或阴性预示值，为临床诊断和
β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞的免疫刺激作用
β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞的免疫刺激作用 汪蕾[1]; 张秀霞[2]; 王冬梅[2]; 李军涛[2]; 鲁耀鹏[2]; 郑佩华[2]; 冼健安[2] 【期刊名称】《《南方农业学报》》 【年(卷),期】2019(050)004 【摘要】[目的]明确β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞免疫力的影响,为开发β-1,3-葡聚糖作为红螯螯虾饲料免疫增强剂提供理论依据。[方法]向红螯螯虾注射不同剂量(1和5μg/g)的β-1,3-葡聚糖,以注射生理盐水为对照,于注射后的0、6、12、24和48 h采集红螯螯虾的血淋巴,测定血细胞总数(THC)、活性氧(ROS)含量、一氧化氮(NO)含量、非特异性酯酶活力、吞噬活力及血清酚氧化酶(PO)活力。[结果]β-1,3-葡聚糖可刺激红螯螯虾血细胞THC、ROS和NO含量、酯酶和血清PO活力显著提高(P<0.05,下同),注射5μg/g的β-1,3-葡聚糖剂量还可显著提高血细胞的吞噬活力;β-1,3-葡聚糖对各类免疫应答的影响存在一定的剂量和时间效应,THC、ROS含量、NO含量及血清PO活力对β-1,3-葡聚糖的刺激更敏感;ROS含量、酯酶活力和血清PO活力呈先上升后下降的变化趋势,其指标达峰值时,处理时间在24.72~28.20 h范围内。[结论]注射β-1,3-葡聚糖能提高红螯螯虾的循环血细胞数量及其细胞免疫力,表明β-1,3-葡聚糖可开发为红螯螯虾饲料免疫增强添加剂。 【总页数】8页(P.883-890) 【关键词】红螯螯虾; β-1;3-葡聚糖; 血细胞; 免疫刺激; 流式细胞术 【作者】汪蕾[1]; 张秀霞[2]; 王冬梅[2]; 李军涛[2]; 鲁耀鹏[2]; 郑佩华[2]; 冼健安[2] 【作者单位】[1]华南师范大学生命科学学院广州510631; [2]中国热带农业科
低聚苷露糖
低聚甘露糖：新型高品质益生元 2013年10月30日，低聚甘露糖被国家卫生和计划生育委员会批为新食品原料，为保健食品的研发注入了新力量。它也被称为新一代高附加值功能性食品和21世纪食品的先导。 低聚甘露糖到底是什么？对人体健康有何种功效？下面，长力元将一一为大家解答： 低聚甘露糖是什么？ 低聚甘露糖是运用先进生物技术、从魔芋根茎中提取精制而来的功能性低聚糖，同时也是一种高品质益生元。 从分子结构上看，低聚甘露糖是由D-甘露糖通过β-1, 4糖苷键连接形成主链，在主链或支链上连接葡萄糖而成，聚合度在2～10之间的寡糖。 它不仅能大量增殖肠道有益菌，抑制有害菌繁殖，调节肠道菌群微平衡；同时还能帮助清除肠道内的腐败及有毒物质，促进营养的吸收和加速人体排毒。
低聚甘露糖的独特之处 病原菌入侵人体的第一步，就是通过身上一种称为甘露糖“凝集素”的特殊物质，黏附在肠道上皮细胞表面。低聚甘露糖能够特异性地优先与病原菌的凝集素结合，形成一种更加牢不可破的“结合关系”。让病原菌无法再黏附在肠道上皮细胞表面，从根源上阻碍了病原菌的入侵。同时低聚甘露糖不被小肠消化吸收，病原菌只得随之一起被排出体外。而低聚甘露糖的这一特点是其他功能性低聚糖所没有的。 低聚甘露糖的功效 缓解胃肠炎症 低聚甘露糖通过刺激双歧杆菌等有益菌的生长，增强其活性，调节人体肠道微生态平衡；发酵后产生丁酸等短链脂肪酸，酸化结肠环境，抑制拟杆菌等腐败菌生长；并防止需氧肠杆菌入侵、定植肠黏膜而产生炎性反应，从而改善肠道炎症与肠粘膜损伤，让肠道恢复正常状态。冯莉等通过研究发现，低聚甘露糖能明显改善炎症性肠病引起的溃疡。
β-葡聚糖、甘露寡糖的测定方法
A.1原理 根据β-葡聚糖和甘露寡糖在流动相和液相色谱柱的固定相之间具有不同的分配系数，将样品注入液相色谱柱，用H2O做流动相，糖类分子流出后，经示差检测器检测，用外标法定量。 A.2试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；蒸馏水或去离子水或符合GB/T6682中规定的一级水或相当纯度的水。试验中所用制品按GB/T 603的规定制备。 A.2.1盐酸：37%。 A.2.2乙腈：色谱纯。 A.2.3氢氧化钠：40%。 A.2.4葡萄糖和甘露糖混合标液（1000mg/L）：分别称取葡萄糖和甘露糖各0.100g，用纯水定容100mL后用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。 A.3仪器 A.3.1水浴锅。 A.3.2漩涡混合器。 A.3.3电炉。 A.3.4手提式压力蒸汽灭菌锅。 A.3.5高压液相色谱仪；带示差检测器。 A.4分析步骤 A.4.1样品处理 精确称取1.000g（准确至0.0002g）样品放入一个20mL的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中，加入7.5mL盐酸（37%），小心的将小瓶盖近后用漩涡混合器混合，得到均一的悬浮液。将小瓶放入30℃水浴中处理45min，每15min用漩涡混合器震荡混合一次。然后将悬浮物定量的转移到200mL杜氏瓶中（同时用约70-80mL的水洗涤后倒入瓶中），将瓶子放入高压灭菌锅121℃处理60min。完成后马上冷却，将溶液调pH到6-7，然后定容至200mL。使用0.45微米孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。 A.4.2测定 A．4.2.1 液相色谱参考条件 A．4.2.1．1 色谱柱：Hyper REZ XP Carbohydrate Ca++，长300mm，内径7.7mm，粒径8μm。 A．4.2.1．2 柱温：70℃。 A．4.2.1．3 流动相：H2O，用前过0.22μm滤膜。 A．4.2.1．4 流速：0.6 ml/min。 A．4.2.1．5 进样体积:40μl。 A.4.3标准曲线的绘制
葡聚糖标准编制说明
《混合型饲料添加剂β-1，3-D-葡聚糖》编制说明 一、产品简介 β-1,3-D-葡聚糖为原料，啤酒酵母粉为载体经混合制成的饲用混合型饲料添加剂β-1,3-D-葡聚糖。 二、任务来源、编制原则、标准起草过程 本公司生产的混合型饲料添加剂β-1,3-D-葡聚糖，目前尚无国家标准和行业标准，为了便于公司组织生产和交货验收，特制订本标准。本标准规定了混合型饲料添加剂β-1,3-D-葡聚糖的要求、试验方法、检验规则、标志、标签、包装、运输、贮存、保质期。 三、与现行法律、法规、强制性标准、推荐性标准的关系和贯彻情况。 GB/T 191-2008 包装储存图示标志 GB/T 5917.1-2008 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法 GB/T 6435-2014 饲料中水分的测定 GB/T 6438-2007 饲料中粗灰分的测定 GB 10648 饲料标签 GB/T 10649-2008 微量元素预混合饲料混合均匀度的测定 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 13079-1999 饲料中总砷的测定 GB/T 13080-1991 饲料中铅的测定方法 GB/T 13091-1991 饲料中沙门氏菌的检验方法 GB/T 18823-2010 饲料检测结果判定允许误差 JJF 1070-2005 定量包装商品净含量计量检验规则 国家质量监督检验检疫总局令第75号《定量包装商品计量监督管理办法》 农业部公告第2045号《饲料添加剂品种目录（2013）》 农业部公告第1773号《饲料原料目录》 四、确定主要技术指标 技术指标 项目指标 β-1,3-D-葡聚糖/% ≥20.0 水分/% ≤10 灰分/% ≤15 砷（以总砷计）/(mg/kg) ≤2.0 铅（以Pb计）/(mg/kg) ≤5.0 沙门氏菌不得检出 四、试验方法和和检验规则说明 高效液相色谱检测方法，需要带示差折光检测器。 六、主要参考资料 除引用标准外，无在国家正式刊物上发表的文献资料。
常用免疫抑制剂
常用免疫抑制剂 一、激素类药物 主要为甲基强的松龙（methylprednisolone）和强的松（prednisolone），前者在术后近期及急性排斥时静脉注射，以预防和治疗急性排斥；后者为术后口服维持。 作用机制：对免疫反应的许多环节均有影响，主要是抑制巨噬细胞对抗原的吞噬和处理；也阻碍淋巴细胞DNA合成和有丝分裂，破坏淋巴细胞，使外周淋巴细胞数明显减少，并损伤浆细胞，从而抑制细胞免疫反应和体液免疫反应，缓解变态反应对人体的损害。 副作用：骨质疏松、溃疡病、糖尿病、高血压等。 二、细胞毒类药物 1.硫唑嘌呤，Azathioprine （依木兰，Imuran） 作用机制：主要抑制DNA、RNA和蛋白质合成。对T细胞的抑制较明显，并可抑制两类母细胞，故能抑制细胞免疫和体液免疫反应，但不抑制巨噬细胞的吞噬功能。 副作用：抑制骨髓使白细胞、血小板减少；肝功能损害；感染等。 2.霉酚酯酸（mycophenolate mofetil, MMF,商品名：骁悉CellCept） 作用机制：特异性抑制T和B淋巴细胞增殖，抑制抗体形成和细胞毒T细胞的分化。 副作用：1）消化道不适：食道炎、胃炎、腹痛、腹泻和消化道出血。2）血液：中性白细胞减少症、血小板减少症和贫血。 三、钙调素抑制剂 1.环孢素（ciclosporin，cyclosporinA） 作用机制：可选择性作用于T淋巴细胞活化初期。辅助性T细胞被活化后可生成增殖因子白细胞介素2（interleukin2，IL-2），环孢素可抑制其生成；但它对抑制性T细胞无影响。它的另一个重要作用是抑制淋巴细胞生成干扰素。 副作用：多毛、震颤、胃肠道不适、齿龈增生以及肝、肾毒性；亦可见乏力、厌食、四肢感觉异常、高血压、闭经及抽搐发作等。 2.普乐可复（Prograf），又称FK506或他克莫司（tacrolimus） 作用机制：作用机制与环孢素相同，主要是抑制白细胞介素-2的合成，作用于T细胞，抑制T细胞活化基因的产生（对 -干扰素和白细胞介素-2等淋巴因子的mRNA转录有抑制作用），同时还抑制白细胞介素-2受体的表达，但不影响抑制型T细胞的活化。与环孢素相比，有如下特点：1）免疫作用是环孢素的数十倍到数百倍。2）可减少肝、肾移植受体的急、慢性排斥反应。3）细菌和病毒感染率也较环孢素治疗者低，尤其是本品有较强的亲肝性，对肝移植的功效高100倍，因而大大降低了临床使用剂量，可降低原治疗费用1/3~1/2，同时不良反应也明显降低。 副作用：最常见的不良反应有震颤、思维紊乱、低磷血症、失眠、视力障碍和呕吐等，偶见中枢神经系统和感觉异常，消化系统、呼吸系统、心血管系统失调，皮肤瘙痒等。 四、生物制剂类
β-葡聚糖测定方法
β-葡聚糖酶活力测定方法(NY/T911-2004) ? 1.原理 β-葡聚糖酶能将木聚糖降解成还原性糖。还原性糖在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基水杨酸（DNS)试剂反应显色反应。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中β-葡聚糖酶的活力。 ? 2. 操作 ? 2.1.标准葡萄糖曲线的制作 2.1.1 吸取PH5.5的0.1M乙酸-乙酸钠+缓冲溶液4.0mL,加入DNS试剂5.0mL， 沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，用水定容至25.0mL,制成标准空白样。 2.1.2 分别吸取葡萄糖溶液1.00mL、2.00mL、 3.00mL、 4.00mL、 5.00mL、 6.00mL 和7.00mL,分别用PH5.5的0.1M醋酸缓冲溶液定容至100mL,配制成浓度为 0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg、0.60mg/mL和0.70mg/mL 葡萄糖标准溶液。 2.1.3 分别取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00mL（做两个平行），分别 加入到刻度试管中，再分别加入2.0mL缓冲液94.4)和5.0mLDNS试剂。电磁振荡3s-5s,沸水浴加热5min。然后用自来水冷却到室温，在用水定溶液至25mL。 以标准空白为对照调零，在540min处测定吸光度A值。 以葡萄糖糖浓度为Y轴、吸光度A值为X轴，绘制标准曲线。每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线 ? 3. 酶样测定 吸取10.0mLβ-葡聚糖溶液,37℃平衡20min。 吸取10.0经过适当稀释的酶液，37℃平衡10min。 ?吸取2.00mL经过适当稀释的酶液（已经过37℃平衡），加入到刻度试管中，再加入5mLDNS试剂，电磁振荡3s-5s。然后加入8.0g/lβ-葡聚糖溶液2.0ml，37℃保温30min,沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，加水定容至25mL，电磁振荡3s-5s。以标准空白样(2.1.1)为空白对照，在540min处测定吸光度A 。 B
常用的免疫抑制剂的使用以及注意事项#(精选.)
常用的免疫抑制剂的使用以及注意事项 2015-03-09 环孢素(CsA)：新山地明、田可、赛斯平 作用机理 属于钙神经蛋白抑制剂，可以选择性抑制免疫应答，通过破坏使T 细胞活化的细胞因子的表达，阻断参与排斥反应的体液和细胞效应机制，防止排斥反应的发生。 目前，市面出售的环孢素A有两种：一种为进口的，为瑞士诺华制药（新山地明），其剂型主要是胶囊；另一种为国产的，其剂型有口服液和胶囊。国內已有华东医药（赛斯平）、华北制药（田可）等多家生产厂家。 药物的吸收和代谢 环孢素A依靠胆汁排泄，肝功能障碍，胆汁淤积症或严重胃肠功能障碍都会影响环保素A的吸收和代谢。只有极少部分药物经肾脏排出，且不能经透析去除，所以对于肾脏功能不全者和需透析治疗的患者，均不需调整药物浓度。 新山地明受进食和昼夜节律的影响较山地明小，所以服药时间不必将用餐考虑在内。 副作用 1、肾毒性：个体差异大，临床表现不典型，与其他原因引起的移植肾损害很难鉴别。且发生肾损害时，血药浓度可能正常，甚至偏低。
2、接近半数的患者会出现肝脏毒性，其发生率与用药量密切相关。 3、其他并发症的发生率高血压41%～82%，高胆固醇血症37%，高尿酸血症35%～52%，高钾血症55%，震颤12%～39%，牙龈增生7%～43%，糖尿病2%～13%，多毛症29%～44%。 用量 联合用药时：初始剂量为6～8mg/kg/日，分两次服用，以后根据血药浓度调整。 注意事项 1、严格按医嘱服药,禁忌自行调整用药剂量。 2、遵医嘱监测血药浓度。 3、药品储存在15～30度室温中,忌冷冻。 4、定时服药,养成良好的定时服药习惯。 5、环孢素有不同的剂型,不同的厂家，各药在同一患者体内的生物利用度不尽相同，故改换不同剂型、不同厂家的药物时一定要在医生的指导下进行,以免出现排斥反应或药物中毒。 6、接受本药治疗的母亲不应授乳。 7、过敏体质者慎用注射液。 8、因硝苯吡啶可引起齿龈增生，故在应用环孢素A期间，发生齿龈增生的患者应避免使用硝苯吡啶。 血药浓度 1、CsA谷值浓度（C0）
甘露聚糖肽特性汇总
甘露聚糖肽 一甘露聚糖肽发现 甘露聚糖肽(Mannatide)，曾用名多抗甲素(Polyactin A，PAA)。是我国首创的一种新型免疫增强剂，是从健康人口腔分离的一株α-溶血性链球菌(α-hemolytic Streptococcui)33#菌株经深层培养，发酵提取而得到的一种具有免疫活性和抗肿瘤作用的多糖类物质。它是由原西安医科大学方亮教授在克山病的研究中发现的，于1976年从链球菌的代谢产物中提取的多糖类物质，初步试验有抗肿瘤作用，临床预期有一定效果。1976年国家医药管理局安排四川抗菌素研究所，在方亮教授的指导下和初步工作的基础上，开展了菌种筛选获得了α－甘露聚糖肽产生菌33#菌株，并对菌种生理生化特性、血清型分类、深层培养和提取工艺、理化特性、化学组成、毒性和药理用量标准等方面进行了系统的研究、试验。 二甘露聚糖肽的化学构造及理化特性 α－甘露聚糖肽的化学结构式如下： 分子量为71,700kD，是具有一定均一性的混合物，不存在单糖、双糖等小分子糖类和游离氨基酸，完全由不同链长的甘露聚糖肽分子构成。α－甘露聚糖肽的总糖含量为87.7～90.3％，主要为甘露糖以及少量的葡萄糖残基，二者之比约为39∶1；蛋白质含量为4.5～6.2％主要的构成氨基酸为天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸和亮氨酸，其比例为1∶2∶2∶1∶1∶1；此外还有少量的甘氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸等。 甘露聚糖以β-(1-4)键连接组成甘露聚糖肽的糖主链, 且甘露聚糖肽的糖链还存在1-6、1-2等支链结合方式和还原末端。甘露聚糖
肽中糖链与肽链的连接有两种方式: N-糖苷键连接和O-糖苷键连接。在O-糖苷键连接的结构中, 主要是糖链还原末端的甘露糖基, 以糖苷键形式通过肽键上的羟基氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸或羟赖氨酸)的羟基氧与甘露聚糖连接, 组成聚糖肽。N-糖苷键连接的结构中, 糖链还原末端可以与肽链中的赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的氨基连接。 α－甘露聚糖肽为类白色或微黄色无定形粉末、无臭、无味；易溶于水，不溶于有机溶剂如甲醇、乙醇、丙醇、乙醚、氯仿、正己烷等；化学性质稳定。 三α－甘露聚糖肽的生物活性 由于α－甘露聚糖肽中的寡糖和氨基酸残基数变动很大，再加上其复杂的残基连接方式，使得α－甘露聚糖肽具有明显的免疫活性。 （1）当α－甘露聚糖肽通过凝集素与巨噬细胞上的受体结合后，巨噬细胞被激活，增强网状内皮系统(RES)吞噬活性，能刺激脾脏淋巴细胞增生，能直接作用于中枢免疫器官胸腺，并能诱导机体产生一系列的细胞免疫和体液免疫反应，增强动物体的非特异性免疫功能，提高各类动物对一般疾病和各种病原性细菌、病毒等的抵抗力，能最大限度地减少各种疾病和细菌病毒对动物的不利影响。 ⑵.α－甘露聚糖肽能促进免疫细胞活化增殖及特异抗体生成，提 高外周血白细胞数，显著增强动物对各种环境的应激机能。 ⑶.α－甘露聚糖肽能很好的治疗动物各种原因所致的再生障碍性 贫血，促进造血干细胞生长。 ⑷.α－甘露聚糖肽能增强粘膜免疫系统修复防御功能，显著提高
β-葡聚糖测定方法
6.2 交联β-葡聚糖含量测定 AACC 32-23 6.2.1实验目的 在大麦、麦芽、麦芽汁和啤酒产品质量控制中经常需要测定其中的β-葡聚糖含量，Megazyme方法很好的解决了测定中的系列问题，本方法能够在一天内测定50-100个样品。本方法现在也适用于燕麦产品及燕麦纤维产品β-葡聚糖含量测定。 6.2.2实验原理 样品水化后加入真菌多糖酶在pH6.5缓冲液中培养，提取液离心（或过滤）后加入β-葡萄糖苷酶，在葡糖糖氧化－过氧化酶缓冲液保护下产生葡萄糖。 图6.1 葡聚糖测定原理示意图 Megazyme测试包：（可以测定100个样品） ⑴全套测定方法；⑵真菌多糖酶；⑶β-葡萄糖苷酶；⑷葡糖糖标准液；⑸大麦和燕麦纤维标准样品。 6.2.3实验试剂： ⑴真菌淀粉酶（bottle 1）〔（1-3）（1-4）β-D-葡萄糖4-葡聚糖水解酶〕：（活力>1000U/mL） 制备：1.0mL真菌淀粉酶用20mM NaH2PO4缓冲液（pH6.5）稀释至20.0mL。将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。最终真菌淀粉酶浓度50U/mL。 ⑵β-葡萄糖苷酶（bottle 2）：（活力>40U/mL） 制备：将 1.0mLβ-葡萄糖苷酶用50.0mM醋酸钠缓冲液（pH4.0）稀释至20.0mL。将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。最终β-葡萄糖苷酶浓度2U/mL。
⑶葡糖糖标准液：100μg?0.1mL，用0.2%叠氮化钠溶液溶解。 ⑷大麦标准样品：含量见标签。 ⑸燕麦纤维标准样品：含量见标签。 ⑹NaH2PO4缓冲液制备（20mM，pH6.5）：3.12g NaH2PO4－2H2O溶解于900ml蒸馏水中，用100mM氢氧化钠溶液（4g/L）将pH值调至6.5（大约需50mL），加0.2g叠氮化钠，将溶液定容至1L。4℃保存。 ⑺醋酸钠缓冲液（50mM，pH4.0）：饱和醋酸（2.9mL）加入900mL蒸馏水，用1M氢氧化钠调节pH值至4.0，加0.2g叠氮化钠，将溶液定容至1L，4℃保存。 ⑻葡萄糖氧化－过氧化酶缓冲液：建议使用Megazyme测试包里的高纯度葡萄糖氧化溶液和葡糖糖过氧化酶。将测试包的葡萄糖工作液（bottle 3）（50mL）稀释至1L。把测试包中的葡萄糖测定液（bottle 4）用1L葡萄糖工作液溶解（简称GOPOD）。为了保证GOPOD溶液的稳定性，应该在低温条件下在棕色瓶中避光保持。测定过程中从冰箱中取出的凉的GOPOD溶液可以直接加入测定管。 葡萄糖工作液包括：CaHPO4－2H2O（136.0g），NaOH （42.0g），酸（30.0g），叠氮化钠（4.0g）。 6.2.4仪器需求： ⑴聚丙烯具塞试管（35mL）； ⑵移液器：量程分别为100μL，200μL，5.0mL（用于Na2HPO4缓冲液和葡萄糖氧化－过氧化酶缓冲液），25mL（用蒸馏水）。 ⑶顶载天平：1/1000g。 ⑷漩涡混合器； ⑸分光光度计：510nm。 ⑹水浴锅：40℃和100℃水浴锅各一个。 ⑺秒表：一只。 ⑻离心机：离心力100g。 ⑼试验粉碎机：细度0.5mm。 6.2.5测定步骤： ⑴将燕麦用试验粉碎机粉碎成细度0.5mm的颗粒。 ⑵仔细称量燕麦粉样品（0.5g左右），放入35mL聚丙烯具塞试管。样品需要已知水分含量，以便最后转为干基。 ⑶向试管中加入1.0mL 50%（v/v）的乙醇溶液，使样品充分润湿。 ⑷加入5.0mL NaH2PO4缓冲液（20mM，pH6.5），在漩涡混合器上充分混合。
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1) 1. 原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。 （8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 粗多糖的测定方法(2) 5. 操作方法 5.1 样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/L NaOH 2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。 （4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL（V5）。准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备：
免疫抑制
器官移植与免疫抑制进展 摘要： 随着社会的进步和人们生活水平的提高，越来越多种类的人类疾病出现并被诊断出来，随着科技的进步和医疗水平的提高，也有越来越多的疾病可以被人类攻克，但还是有一部分疾病用一般的治疗手段无法治愈甚至是无法减轻病人的痛苦。器官移植逐渐成为治疗某些疾病的一个理想的有效治疗方法，但由于人类免疫系统的存在，给器官移植带来了最主要的难题——免疫抑制。近年来随着科研工作者的不断努力，在器官移植免疫抑制中取得了不小的进展，心脏移植、胰岛移植等前景可观。本文主要介绍了集中器官移植治疗不同疾病的最新进展。 关键词：器官移植免疫抑制免疫排斥间充质干细胞胰岛移植 随着社会进步和人类生活水平的提高及生活方式的改变，越来越多的疾病出现并被人类所发现，并且严重威胁着人们的健康。其中有一类疾病造成器官的功能衰竭，无法为身体正常的生理功能的维持所利用，这种情况下器官移植成为治疗器官的功能衰竭的有效办法。移植，顾名思义，就是指将一个个体的细胞、组织或器官用手术或其他方法，导入自体或另一个个体的某一部分，以替代原已丧失功能的一门技术。根据导入移植物不同，分为细胞、组织和器官移植。器官移植，就是对器官进行移植。 尽管保守方法、外科手术技术的成熟，以及免疫抑制剂的使用，使器官移植在一定程度上取得了不错的结果，但由于机体免疫机制的存在，低存活率及无法长期存活成为阻碍器官移植成功进行的最大绊脚石。 目前，临床上应用较多的抑制器官移植免疫排斥的方法主要是三种不同免疫试剂的临床应用，包括磷酸酶抑制剂（例如：环孢霉素，他克莫司等），抗恶性细胞增生药剂（例如：咪唑硫嘌呤，霉酚酸酯，雷帕霉素），还有皮质类固醇。不幸的是，尽管所有这些无论是外科手术还是药物使用的发现与进步，长期的器官移植排斥反应的大存在及由于排斥反应造成的死亡率依然很高。这就引起了科研工作者们对应对器官移植免疫抑制极大的兴趣。一系列新的治疗方法被逐渐研发并发展。新的方法包括依赖于新型干细胞移植的治疗方法，如间充质干细胞、吞噬体和外来体；免疫隔离技术，如体外光分离置换技术、完全淋巴照射技术等。接下来主要是介绍了间充质干细胞在心血管疾病治疗上的应用和胰岛移植治疗糖尿病。 间充质干细胞移植治疗心血管疾病： 心肌梗死是心血管疾病中导致死亡的主要疾病之一，虽然目前的药物，冠脉成形术以及同步起搏器的运用可以部分改善临床症状，但心肌梗死后心衰的发生率仍较高，严重影响着患者的生活质量及生存率。由于心肌细胞的丧失是导致心肌梗死后心衰的最主要原因，因此人们一直致力于寻找可能替代或修复受损坏死心肌细胞的方法。近年的研究证明了间充质干细胞具有较低的免疫原性和抑制T 淋巴细胞增殖的作用，为干细胞应用于治疗异体器官移植引起的免疫排斥反应铺垫了道路。大量的实验动物研究以及临床前期实验都显示了间充质干细胞对心肌梗死和心肌梗死后心力衰竭的治疗及预防作用。 一些研究表明：间充质干细胞有分化为内胚层和骨细胞的潜能，它们广泛存在于大部分组织和器官中，如：毛囊、牙齿、骨髓、肺脏等等。间充质干细胞低水平的表达人类白细胞主要组织相容性复合物I，不表达主要组织相容性复合物II，也不表达协同刺激因子B7-1、