谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
一、实验目的
掌握茚三酮比色法测定氨基酸含量的原理和方法,测定谷物种子蛋白质中赖氨酸含量。
二、实验原理
蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。因此，用已知浓度的游离氨基酸制作标准曲线，通过比色分析（530nm）即可测定出样品中的赖氨酸含量。
亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。但由于这两种氨基酸分子质量不同，以亮氨酸为标准计算赖氨酸含量时，应乘以校正系数1.1515，最后再减去样品中游离氨基酸含量。
三、实验仪器
1．电子分析天平（1/1000）、可见分光光度计、恒温水浴箱、干燥器、移液器。
2．试管架（塑及铝）、具塞试管、具塞三角瓶、细口瓶、漏斗（或0.45um 滤膜）、吸管等。
四、实验试剂
1．0.4mol/L柠檬酸缓冲液：称取4.202g柠檬酸和5.88g柠檬酸三钠，溶于100ml蒸馏水中。
2．茚三酮试剂：称40mg二氯化锡(防腐)溶于25ml柠檬酸缓冲液中；称lg茚三酮溶于25ml 95％乙醇中；将上述两液混合摇匀，滤去沉淀，上清液置冰箱中保存备用。
3．0.02mol/L盐酸：取12mol/L盐酸0.17ml，用蒸馏水稀释定容至100ml。
4．亮氨酸标准液：准确称取20mg亮氨酸，加数滴0.02mol/L盐酸使之溶解，然后用蒸馏水稀释定容到100ml，则得浓度为200μg／ml的标准液。5．60％乙醇。
五、操作步骤
1．标准曲线的制作。
取7支具塞试管，按表进行编号、加入试剂，顺序操作。以第1管为空白，在530nm波长下比色，读取吸光度值。并以吸光度值为纵坐标，亮氨酸含量（μg）为横坐标，绘制标准曲线。
2．样品前处理
不同品种的玉米种子，用粉碎机粉碎，过 80～100 目筛子，收集过筛后的细粉，放入广口瓶中，加入沸程 60 ～ 90 ℃的石油醚，使其淹过粉面，浸泡 8 小时，不时摇动进行脱脂。然后过滤，并用石油醚淋洗沉淀若干次，弃去滤液。将脱脂玉米粉凉在干净的滤纸上，置阴凉通风处吹干石油醚。收集干粉，置于干燥器内，保存备用。
3．样品的测定
取15mg已粉碎脱脂的玉米样品于具塞干燥试管内，加2％碳酸钠1.0ml，于80℃水浴中提取20min，然后加茚三酮试剂2.Oml，继续保温显色
30min，冷却后加60％乙醇3.Oml，混匀后过滤或离心，然后在530nm 波长下比色。
六、实验结果
样品中赖氨酸的含量（%）=[从标准曲线上查得值（μg）×10-3/(样品重mg)]×1.1515×100%-C
校正系数：1.1515；C：游离的氨基酸含量
七、注意事项
1．各种作物种子中游离氨基酸含量是：玉米0.01％、小麦0.05％、水稻
蛋白质中赖氨酸（lysine，Lys）的含量是谷物品质的主要指标之一。
由于动物及人类不能合成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法（Dye Binding Lysine，DBL）测玉米种子中赖氨酸含量。
一、茚三酮显色法原理：谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的ε-NH2，它与茚三酮（ninhydrin）试剂可发生颜色反应，生成紫红色物质，其颜色与赖氨酸残基的数目成正相关。选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配成标准溶液，做出标准曲线，可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量.
二、材料、仪器设备
（一）材料：不同品种的玉米种子，用粉碎机粉碎，过100目筛子，收集过筛后的细粉，放入广口瓶内，加入沸程60～90℃的石油醚，使其淹过粉面，浸泡8h，不时搅动进行脱脂。然后过滤，并用石油醚淋洗沉淀若干次，弃去滤液。将脱脂玉米粉晾在干净的滤纸上，置阴凉通风处吹干石油醚。收集干粉，置干燥器内，保存备用。（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 水浴锅；3. 试管；4. 圆头玻璃棒（圆头大小要与试管大小配套）。
（三）试剂：1. 缓冲溶液，称取30g甲酸钠，溶解于约60ml蒸馏水中，加入10ml8％的甲酸，最后加水到100ml；2.茚三酮试剂，称取1g茚三酮和1g氯化镉（CdCl2.H2O），加入25ml上述缓冲溶
液和75ml乙二醇，室温下放置一天，第二天使用。若出现沉淀，则过滤后使用。该溶液一定要头一天配制，第二天使用，不宜
氨基酸含量测定
茚三酮比色测定氨基酸含量 一、实验原理 氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用，生成蓝紫色或黄色化合物（除脯氨酸外均有此反应），可用吸光光度法测定。生成的蓝紫色或黄色化合物颜色深浅与氨基酸含量成正比，其最大吸收波长分别为570nm或350nm，故据此可以测定样品中氨基酸含量。 二、实验试剂 （1）1.2%茚三酮溶液：称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解，加入40mg氯化亚锡（SnCl2?H2O），搅拌过滤（作防腐剂）。滤液置冷暗处过夜，加水至50mL，摇匀备用。 （2）pH 8.04磷酸缓冲液： Ⅰ、准确称取磷酸二氢钾（KH2PO4）4.5350g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀备用。 Ⅱ、准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.9380g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀备用。 Ⅲ、取上述配好的磷酸二氢钾溶液10.0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH8.04的磷酸缓冲溶液。 （3）氨基酸标准溶液：准确称取干燥的氨基酸（如异亮氨酸）0.2000g于烧杯中，先用少量水溶解后，定量转入100mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀，准确吸取此液10.0mL于100mL容量瓶中，加水到标线，摇匀，此为200μg/mL 氨基酸标准溶液。 三、实验方法及步骤 （1）标准曲线绘制 准确吸取200μg/mL的氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL （相当于0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸），分别置于25mL 容量瓶或比色管中，各加水补充至容积为 4.0mL，然后加入茚三酮溶液（20g/L）和磷酸盐缓冲溶液（pH为8.04）各1mL，混合均匀，于90℃水浴上加热至显色恒定为止（该加热过程至少需要25分钟），取出迅速冷至室温，加水至标线，摇匀。静置15min后，若生成蓝紫色化合物，在570nm波长下，以试剂空白为
(整理)6种方法测定蛋白质含量.
6种方法测定蛋白质含量 一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4――2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1) 2NH3+H2SO4――(NH4)2 SO4(2) (NH4)2 SO4+2NaOH――2H2O+Na2SO4+2NH3(3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret法） （一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1.试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05NaOH配制。 （2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 2.器材： 可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。 （三）操作方法 1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分
6种方法测定蛋白质含量
6种方法测定蛋白质含量 [ 文章来源： | 文章作者： | 发布时间：2006-12-25| 字体： [大 中 小] 一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nh 2ch 2cooh+3h 2so 4——2co 2+3so 2+4h 2o+nh 3 (1) 2nh 3+h 2so 4——(nh 4)2so 4 (2) (nh 4)2so 4+2naoh ——2h 2o+na 2so 4+2nh 3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret 法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg 蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris 缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定 一、实验目的 掌握茚三酮比色法测定氨基酸含量的原理和方法,测定谷物种子蛋白质中赖氨酸含量。 二、实验原理 蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。因此，用已知浓度的游离氨基酸制作标准曲线，通过比色分析（530nm）即可测定出样品中的赖氨酸含量。 亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。但由于这两种氨基酸分子质量不同，以亮氨酸为标准计算赖氨酸含量时，应乘以校正系数1.1515，最后再减去样品中游离氨基酸含量。 三、实验仪器 1．电子分析天平（1/1000）、可见分光光度计、恒温水浴箱、干燥器、移液器。 2．试管架（塑及铝）、具塞试管、具塞三角瓶、细口瓶、漏斗（或0.45um滤膜）、吸管等。 四、实验试剂 1．0.4mol/L柠檬酸缓冲液：称取4.202g柠檬酸和5.88g柠檬酸三钠，溶于100ml蒸馏水中。 2．茚三酮试剂：称40mg二氯化锡(防腐)溶于25ml柠檬酸缓冲液中；称lg 茚三酮溶于25ml 95％乙醇中；将上述两液混合摇匀，滤去沉淀，上清液置冰箱中保存备用。 3．0.02mol/L盐酸：取12mol/L盐酸0.17ml，用蒸馏水稀释定容至100ml。4．亮氨酸标准液：准确称取20mg亮氨酸，加数滴0.02mol/L盐酸使之溶解，然后用蒸馏水稀释定容到100ml，则得浓度为200μg／ml的标准液。5．60％乙醇。 6．4％碳酸钠：称取4g无水碳酸钠，溶于100 ml蒸馏水。 7．2％碳酸钠。
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法-实验报告
生物化学实验报告 姓名： 学号： 专业年级： 组别： 生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验日期实验地点 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 一、实验目的 1.1.掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作； 1.2.掌握双缩脲试剂的配制； 1.3.熟悉血清总蛋白的临床意义； 1.4.了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。 二、实验原理 2.1.两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。 2.2.蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。 三、材料与方法： 3.1.实验材料： 3.1.1.实验试剂：①小牛血清；②6.0mol/LNaOH溶液；③双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾；④蛋白质标准液（70g/L）；⑤0.9%NaCl；⑥蒸馏水。 3.1.2.实验器材：①试管；②烧杯；③容量瓶；④加样枪；⑤刻度吸管；⑥玻璃棒；⑥1100分光光度计；⑦电子天平；⑧水浴锅。
3.2.实验步骤 四、结果与讨论： 4.1.实验现象： ①选取三支洁净无损的试管，从左往右依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的小牛血清各0.5ml，分别命名为B试管、S试管和U试管，再分别向三支试管内加入4ml的双缩脲试剂，溶液均成蓝色透明状。
测定次数 1 2 3 平均吸光度 ②将三支试管放入37℃水浴锅中加热20min，取出后，B试管呈淡蓝色，S试管和U 试管均成浅紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深。（如图一） 图一水浴后三支试管颜色图二分光计读数 S 0.185 0.184 0.185 0.1847 U 0.152 0.151 0.152 0.1517 结果计算：代入公式：血清总蛋白（g/L)=(Au/As)X蛋白质标准液浓度（g/L)，得出结果：血清总蛋白=57.493g/L。 4.3.结果讨论 经查阅资料得：正常成人血清总蛋白含量为60～80g/L，而小牛血清总蛋白含量比正常成人血清总蛋白含量略低一点，本次结果得出小牛血清总蛋白含量为57.493g/L，符合情况。 4.3.1.成功原因： ①本次试验的试剂混合水浴后出现了预期效果：B试管呈淡蓝色，S试管和U试管均成浅紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深。B试管呈淡蓝色是因为B试管中没有发生任何反应，所以呈现双缩脲试剂本来的淡蓝色，而S试管和U试管呈浅紫色是因为试剂中的蛋白质和双缩脲发生了双缩脲反应而呈浅紫色。 管号
蛋白质测定实验报告
蛋白质测定方法——化学报告
蛋白质的检测 酚试剂法灵敏度较高 20~250mg 费时蛋白质在碱性溶 液中其肽键与 Cu2+螯合，形成 蛋白质一铜复合 物，此复合物使 酚试剂的磷钼酸 还原，产生蓝色 化合物 酚类、柠檬 酸、硫酸铵、 tris缓冲液、 甘氨酸、糖 类、甘油等均 有干扰作用 由上表可大致了解五种检测蛋白质的方法，下面以实验的形式进行详细阐述：
1 材料与方法 1.1 仪器材料 (1)仪器:凯氏定氮仪、紫外分光光度计、可见光分光光度计、工作离心机、布氏漏斗、抽滤泵。 (2)试剂及原材料:牛奶、酸奶、豆浆、0.12mol/LpH=4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液、乙醇-乙醚等体积混合液、浓H2SO4 、40%氢氧化钠、30%过氧化氢、2%硼酸溶液、0. 050molPL标准盐酸溶液、硫酸钾- 硫酸铜接触剂、混合指示剂、标准蛋白溶液、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G- 250试剂。 1.2 实验方法 (1)凯氏定氮法测定蛋白质含量 将待测样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化) ,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。为了加速消化,可以加入CuSO4 作催化剂和加入K2SO4 以提高溶液的沸点,而加入30%过氧化氢有利于消化溶液的澄清。消化好的样品在凯氏定氮仪内经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至定量硼酸溶液中,然后用标准盐酸溶液进行滴定,记录,计算出样品含氮量。每个样品做三次重复测定,取平均值。 (2)紫外吸收法测定蛋白质含量 蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。 紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。低浓度的盐,例如, 生化制备中常用的(NH4)2SO4 等和大多数缓冲液不干扰测定,特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值。 此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差,干扰物质较多,在用标准曲线法测定蛋白质含量时,对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质有一定的误差,故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质,会出现较大的干扰。核酸的干扰可以通过查校正表,再进行计算的方法加以适当的校正。但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的,虽然经过校正,测定的结果还是存在一定的误差。 此外,进行紫外吸收法测定时,由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化,因此要注意溶液的pH值,测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。取待测样品制成蛋白浓度大约在0. 1～1. 0mgPmL的蛋白质溶液,用紫外分光光度计进行比色,对照标准曲线得出样品含氮量。每个样品做3次重复测定,取平均值。 (3)双缩脲法测定蛋白质含量
《氨基酸测定》
《氨基酸测定》 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定食物中氨基酸的方法。 本标准适用于食物中的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸等十六种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol。 本标准不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的氨基酸测定。 2 原理 食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。 3 试剂 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。 3.1 浓盐酸：优级纯。 3.2 6mol/L盐酸∶浓盐酸(3.1)与水1∶1混合而成。 3.3 苯酚：须重蒸馏。 3.4 混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售)：0.00250mol/L。 3.5 缓冲液 3.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠(Na 3C 6 H 5 O 7 ·2H 2 O)和 16.5mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2。 3.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。 3.5.3 pH 4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9mL浓盐酸加水 稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 3.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠(优级纯)加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 3.6 茚三酮溶液 3.6.1 pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂(LiOH·H 2 O)168g，加入冰乙酸(优级纯)279mL，加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH 至5.2。 3.6.2 茚三酮溶液：取150mL二甲基亚砜(C 2H 6 OS)和乙酸锂溶液 (3.6.1)50mL加入4g水合茚三酮(C 9H 4 O 3 ·H 2 O)和0.12g还原茚三酮(C 18 H 10 O 6 ·2H 2 O) 搅拌至完全溶解。 3.7 高纯氮气：纯度99.99%。 3.8 冷冻剂：市售食盐与冰按1∶3混合。 4 仪器和设备 4.1 真空泵。 4.2 恒温干燥箱。 4.3 水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30mL。用去离子水冲洗干净并烘干。 4.4 真空干燥器(温度可调节)。 4.5 氨基酸自动分析仪。
最新各类赖氨酸实际有效含量
各类赖氨酸产品分子式如下： 赖氨酸分子式：C6H14N2O2 赖氨酸硫酸盐分子式：[C6H14N2O2]2·H2SO4 赖氨酸盐酸盐分子式：C6H14N2O2·HCL 既然有了分子式，那么很容易算出，赖氨酸分子量是146.1886， 赖氨酸硫酸盐分子量是390.4490，赖氨酸盐酸盐分子量是182.6495。 分子量算出来了，那么很明显，针对赖氨酸硫酸盐（[C6H14N2O2]2·H2SO4），其赖氨酸百分含量就是Lys%=（146.1886*2）/390.4490*100%=74.88%；针对赖氨酸盐酸盐（C6H14N2O2·HCL），其赖氨酸百分含量就是Lys%=146.1886/182.6495*100%=80.38%。 接下来再举发帖的楼主这个例子，拿70%的赖氨酸盐酸盐产品说事吧，------70%赖氨酸盐酸盐，就是指你所买的赖氨酸产品，是赖氨酸盐酸盐形式的，其中赖氨酸盐酸盐的纯度是70%（其余30%基本上是载体），那么折合下来其赖氨酸的实际含量就是Lys%=1*70%*80.38%=56.03%。 其它的算法都类似，不管它纯度是65%、70%、98.5%，也不管它是赖氨酸盐酸盐还是赖氨酸硫酸盐，折合出的赖氨酸实际当量，归根结底最后都是一个简单的数学换算，就不用一一列举了吧？ 相关产品赖氨酸含量换算关系一览表 品名 赖氨酸盐酸盐赖氨酸硫酸盐 分子式C6H14N2O2·HCL [C6H14N2O2]2·H2SO4 纯品赖氨酸盐之赖氨酸含量80.04% 74.88% 65%纯度赖氨酸含量52.02% 48.67% 70%纯度赖氨酸含量56.03% 52.42% 98.5%纯度赖氨酸含量78.84% 73.76% 欣赏全国名师优秀课例心得体会 王健 这几天，我非常认真的观看了几位美术老师的优秀课例，通过学习名师的优秀课堂，让我受益匪浅。我被他们精彩的课堂设计、学生与老师之间的默契互动所吸引；被她们自然大方的教态所感染。让我从中学到了不少优秀的教学经验，为我今后在课堂教学中为创建高效课堂提供了很大的帮助。 这些课堂中都有一个共同点——“实在”，授课教师在讲课中，与学生打成一片，与学生的距离可谓是近之又近，没有花架子，他们
蛋白质含量测定方法汇总
实验七蛋白质含量测定 测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。 [目的要求] 1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。 2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。 一、染料法 [实验原理] 在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。 该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 [器材] 吸量管；试管；721型分光光度计 [试剂] 1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。 2.待测蛋白质溶液。 3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。
[操作步骤] 1．标准曲线的绘制： 按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。 2．样品测定： 取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。 二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量 [实验原理] 在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量
实验一蛋白质含量测定
实验一蛋白质含量的测定 姓名：mangogola 一．实验原理 生物化学实验中，经常需要测定蛋白质的含量，一般常用的蛋白质含量测定方法有紫外吸收法、福林酚试剂法以及一些改进的Lowry法可以应用。 紫外吸收法测定蛋白质含量的原理是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸中的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在280nm处，且蛋白质溶液的光密度值与其含量呈正比关系。该方法具有简单、灵敏、快速和不消耗样品的优点，但易受核酸分子中嘌呤、嘧啶等的干扰，准确度较差。根据蛋白质和核酸的吸收峰不同，可通过计算适当校正核酸的干扰作用。 Lowry法的原理是：在碱性条件下，蛋白质与铜离子形成铜-蛋白质复合物，该复合物可还原磷钼酸-磷钨酸（Folin试剂）产生深蓝色的钼蓝和钨蓝混合物。该方法灵敏度较高，但较费时。 对膜蛋白或相当稀的（如<1ug/ml）蛋白溶液的含量测定，以及为减小去污剂、脂类、碳水化合物的干扰，可采用一些改进的Lowry法，如蛋白质-染料结合法。原理是：当染料考马斯亮蓝G250与蛋白质结合时，最大吸收峰从465nm移动到595nm，而且吸收值在一定蛋白浓度下线性相关，因此用标准浓度的蛋白测OD595作标准曲线，即可求得待测样品的蛋白浓度。此方法简单经济、快速、灵敏度也较高。需要注意的是，染料与蛋白质可在3min内完成结合，由于染料试剂中含有酒精成分，易挥发，所以结合生成的复合物在1h 内可比较稳定地存在于溶液中，制作的标准曲线后部会出现弯曲现象。 二．实验过程（Lowry法） 1.溶液配制 A液：2%Na2CO3，用0.1mol/LNaOH配制。（不能将NaOH和 Na2CO3干粉混合配制，这样会因释放CO2而不准确） B液：0.5%CuSO4.5H2O,用1%酒石酸钾或酒石酸钠配制。 C液：使用前将A、B液按50:1混合，当天使用。 D液：Folin试剂 标准蛋白溶液：200ug/mLBSA溶液 2.标准曲线测定 按照下表进行操作，用一系列标准浓度的BSA平行进行两组测定反应，记录A500。取两组测定的平均值，以蛋白浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线。 3.将待测样品稀释至标准曲线浓度范围内，同时按上述方法测A500，根据标准曲线读出蛋
荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究
C EREALS AN D OILS PROCESSING 荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究 南海娟刘本国高晗张磊贾蕾蕾 (河南科技学院食品学院 【摘要】本文利用四氯苯醌与赖氨酸之间的荷移反应测定食品中赖氨酸的含量。主要研究了吸收波长、反应时间、温度、硼砂用量、定容溶剂以及四氯苯醌用量等对测定结果的影响。试 验结果表明:荷移反应最优条件为:λmax=348nm,时间60min,温度60℃,硼砂用量2mL,四 氯苯醌用量2mL,水为溶剂。在0.3~1.5mol/L赖氨酸范围内测定,相对标准偏差在0.41%以内, 相对误差为0.53%~1.39%,结果令人满意。 【关键词】赖氨酸;四氯苯醌;荷移反应;分光光度法 中图分类号:TS201.2文献标识码:A文章编号:1673-7199(201005-0122-04 荷移反应是指由富电子和缺电子物质形成电荷转移络合物的反应,基于某些物质生成的荷移络合物具有特定的颜色、最大吸收波长等特性,可测定物质的含量。由于此法简便、快速,试剂稳定,重现性好,因此在食品及药物分析上有广泛的应用前景。 荷移分光光度法是在量子化学的基础上提出的荷移理论发展起来的一种定量分析方法。近年来,国内外用此方法对氨基酸和磺胺类药物含量进行分析的报道很多。
赖氨酸是人体中必不可少的八大必需氨基酸之一,在食品中的含量常常被作为衡量食品营养价值的主要指标。因此,快速、简便地分析食品中赖氨酸的含量受到了广泛的重视。目前测定赖氨酸含量的方法主要有电位滴定法、高效液相色谱法、荧光法、示波极谱法、脉冲伏安法、分光光度法等。但利用四氯苯醌与赖氨酸的荷移反应测定赖氨酸含量的方法未见报道。 1材料与方法 1.1材料 供试仪器:TU-1800紫外分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司;HH-4恒温水浴锅,金坛市杰瑞尔电器有限公司;79-1磁力搅拌器,江苏正基仪器有限公司。 供试药品:赖氨酸,生化试剂,层析纯,上海丽珠东风生物技术有限公司;四氯苯醌,国药集团化学试剂有限公司;四硼酸钠,北京化工厂;无水乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、二甲亚砜,天津科密欧化学试剂有限公司;所用试剂除赖氨酸外均为分析纯,试验用水为蒸馏水。 1.2方法 1.2.1试剂配制方法 1.5×10-3mol/L赖氨酸标准溶液:称取0.0230g赖氨酸于烧杯中用水溶解后移入100mL容量瓶中以水定容。 3.0×10-3mol/L四氯苯醌-乙醇溶液:准确称取0.0735g四氯苯醌(简称TCBQ,下同粉末在干燥烧杯中用乙醇溶解后移入100mL容量瓶中,用无水乙醇定容。 0.1mol/L硼砂溶液:准确称取9.5357g四硼酸钠,用水溶解后移入250mL容量瓶中定容。 1.2.2研究方法
赖氨酸的品质判断.
赖氨酸的品质判断 1、理化特性 ▲.真赖氨酸为白色或淡褐色小颗粒或粉末。 ▲.真赖氨酸无味或微有异性酸味，假冒赖氨酸气味不正，有些带有芳香性。2、质量指标 表1.饲料级L-赖氨酸盐酸盐质量标准（NY39-1987） 3、主要检测指标及检测方法 ▲.感官检测法：纯品赖氨酸添加剂为白色或淡褐色小颗粒或粉末，无味 或微有特异气味，放入口中带有酸味，口无涩感；假赖氨酸气味不正，具有杂质样涩感，有些还有芳香气味。 ▲.简易检测法：市场流通中不断有伪劣赖氨酸出现，而且做假形式多种 多样，如用淀粉、石粉、石膏粉等冒充或在赖氨酸中掺入这类物质。所以，在没有氨基酸自动分析仪的条件下，如何快速识别赖氨酸的真假很有必 要，现介绍几种快速识别赖氨酸真假的方法： ▲.溶解性检验：赖氨酸易溶于水，难溶于乙醇、乙醚。称取1g赖氨酸样品放入烧杯中，加入50毫升左右的蒸馏水，轻轻搅拌，真赖氨酸溶解完 全，溶液澄清无沉淀物。若溶解不完全，溶液浑浊或有沉淀残渣，则是假冒或掺假赖氨酸。将烧杯再放在电炉上加热，若溶液变稠成糊状，说明样品为以淀粉类物质冒充或掺有淀粉类物质的伪劣赖氨酸。
▲.灼烧法：取1g左右赖氨酸样品放入瓷质坩埚中，在电炉上灼烧，真赖氨酸灼烧时会散发出有类似燃烧羽毛时产生的难闻气味；而假赖氨酸一般不具有这种气味，或气味较淡。当灼烧至无烟后，再移入高温炉中，550℃灼烧2-3小时左右，真赖氨酸的灼烧残渣应在0.3％以下，肉眼几乎看不见残渣。若残渣较多，则为伪劣蛋氨酸，可按根据有关方法进一步鉴别是什么掺假物。 4、判定关键点和注意事项 ▲.定性鉴别L-赖氨酸盐酸盐:L-赖氨酸盐酸盐样品水溶液中加入硝酸银溶液应产生不溶于稀硝酸，而溶于氨水的白色沉淀。 ▲.（1：9）的硝酸溶液配制：1份体积的浓硝酸与9份体积的蒸馏水混合。 ▲.（1：2）的氨水配制：1份体积的浓氨水加2份体积的蒸馏水。 ▲.鉴别方法:称取样品1g，溶于蒸馏水中，加入0.1M硝酸溶液即产生白色沉淀。取此沉淀加（1：9）的硝酸溶液，沉淀不溶解；另取此沉淀，加入过量（1：2）的氨水则溶解。 ▲.可以根据含氮量识别赖氨酸的真伪和估测赖氨酸的含量 赖氨酸分子结构中均含有氮，用饲料常规检验法中粗蛋白质的测定方法，测出其中的含氮量，根据含氮量的多少或有无可判断赖氨酸的真假，估测赖氨酸的含量。 具体方法与粗蛋白的测定方法一样。称取一定量的样品，经消化、蒸馏、接收、盐酸滴定后得出标准盐酸消耗的量，然后按以下公式计算该赖氨酸的含氮量。 N（％）=100×（V-V0）C×0.014×V1/(W×V2)
可溶性蛋白质含量测定
考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质含量 一、原理 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内（1-1000μg），蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝G-250于蛋白质结合反应十分迅速，2min左右即达到平衡。其结合物在室温下1h内保持稳定。此法灵敏度高，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。 二、材料、仪器设备及试剂 1、材料：小麦叶片、马铃薯块茎、或其他植物材料 2、仪器设备：分光光度计、研钵、烧杯、移液管 3、试剂 （1）标准蛋白质溶液：100μg·ml-1牛血清白蛋白：称取牛血清白蛋白25mg，加水溶解并定容至100ml,吸取上述溶液40ml，用蒸馏水稀释至100ml即可。 （2）考马斯亮蓝G-250溶液：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml90%乙醇中，加入100ml 85%（W/V）的磷酸，再用蒸馏水定容到1L，贮于棕色瓶中，常温下可保存一个月。 三、实验方法及步骤 1、标准曲线的绘制 取6支具塞试管，按表加入试剂。混合均匀后，向各管中加入5ml考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀，并放置5min左右，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 管号123456 标准蛋白质（ml）0 蒸馏水量（ml）0 蛋白质含量（μg）020*********
大米中蛋白质含量的测定
目的意义： 水稻是重要的粮食作物之一，其品质优劣是值得人们重视的问题。一个高产水稻品种，往往由于食味差、或营养不丰富，而不受大众的欢迎。因此，在保证高产的同时，还要改善稻米的品质。本实验将测定大米品质的几个重要生化指标，为水稻育种提供理论依据。 Ⅰ大米蛋白质含量的测定——考马斯亮兰G—250法 一、原理 考马斯亮G—250是一种染料，在游离状态下呈红色，在465nm波长处有最大光吸收。它能与蛋白质稳定结合，结合蛋白质后变为青色，在595nm处有最大吸收，在一定蛋白质浓度范围内（0～1000μg/ml），蛋白质—色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。该法反应迅速，蛋白质与考马斯亮兰G—250的结合反应能在2分钟内达到平衡。结合物在室温下1小时内保持稳定，反应非常灵敏，可测出微克级蛋白质含量，是最近新发展起来的一种较理想的蛋白质定量法。 二、实验材料、仪器及试剂 1．仪器： 721型分光光度计离心机50ml容量瓶10ml刻度试管研钵量筒移液管 2．试剂： （1）牛血清白蛋白（1000μg/ml）：称取100.00mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，配制成标准蛋白质溶液。 （2）考马斯亮兰G-250溶液：称取100ml考马斯亮兰G—250，溶于50ml 90%乙醇中，加入85%（W/V）的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容到1000ml，过滤，常温下可放置1个月。 （3）0.1mol/LnaOH：称取4g氢氧化纳，用蒸馏水溶解，并定容至1000ml。 3．材料：大米粉 三、实验方法 1．标准曲线的制作： 取6只10ml刻度试管，编号，按下表数据配制牛血清白蛋白标准溶液。准确吸取上述各管溶液0.1ml，对应放于另外6支10ml刻度试管中，加入5ml考马斯亮兰G-250溶液，盖塞，将试管中溶液给向倒转混合，放置2分钟后，用10mm光径的比色杯在595nm波长下比色。以光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度值为横坐标，制作出标准曲线。 2．样品中蛋白质提取： （1）准确称取稻米粉0.5克，放入研钵中，加2ml0.1mol/L NaOH，研磨成匀浆，转入到10ml离心管中，再用6ml 0.1mol/ L NaOH分三次洗涤研钵，洗液一并转入10ml离心管中，
赖氨酸含量高的食物有哪些
赖氨酸含量高的食物有哪些 对于人的身体中的所需的元素是很多的，最多的摄入来源就是通过日常的饮食。而生活中的食物都是各种有着独特的功效的，其中就有身体所需的赖氨酸就是通过一些食物摄取的。很多的人可能会因为身体缺赖氨酸出现症状，这个时候就有很多的人想了解下在日常生活中赖氨酸含量高的食物有哪些? 赖氨酸：一般富有蛋白质的食物都含有赖氨酸，如肉类、乳制品和豆类。 黄豆、山药、银杏、大枣、芝麻、蜂蜜、葡萄、莲子，含的赖氨酸比较多。 赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。医学|教育|网搜集整理 赖氨酸可以调节人体代谢平衡。赖氨酸为合成肉碱提供结构组分，而肉碱会促使细胞中脂肪酸的合成。往食物中添加少量的赖氨酸，可以刺激胃蛋白酶与胃酸的分泌，提高胃液分泌功效，
起到增进食欲、促进幼儿生长与发育的作用。赖氨酸还能提高钙(补钙产品，补钙资讯)的吸收及其在体内的积累，加速骨骼生长。如缺乏赖氨酸，会造成胃液分沁不足而出现厌食、营养性贫血，致使中枢神经受阻、发育不良。 赖氨酸在医药上还可作为利尿剂的辅助药物，治疗因血中氯化物减少而引起的铅中毒现象，还可与酸性药物(如水杨酸等)生成盐来减轻不良反应，与蛋氨酸合用则可抑制重症高血压病。 单纯性疱疹病毒是引起唇疱疹、热病性疱疹与生殖器疱疹的原因，而其近属带状疱疹病毒是水痘、带状疱疹和传染性单核细胞增生症的致病者。印第安波波利斯Lilly研究室在1979年发 表的研究表明，补充赖氨酸能加速疱疹感染的康复并抑制其复发。 长期服用赖氨酸可拮抗另一个氨基酸――精氨酸，而精氨酸能促进疱疹病毒的生长。 综上所述，大家应也是知道了对于生活中来说赖氨酸含量高的食物最多的就是一些豆制品，同样的就是含蛋白质比较高的食物。同样的对于赖氨酸大家也是可以通过上文中了解下，对于身
几种蛋白质含量测定方法的比较
几种蛋白质含量测定方法的比较 【摘要】：蛋白质含量测定方法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析之一。目前常 用的方法有凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford），Folin —酚试剂法（Lowry）杜马斯燃烧法。其中Bradford 法灵敏度颇高，比紫外吸收法灵敏10～20 倍,比Biuret法灵敏100 倍以上。凯氏定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。过去Folin—酚试剂法法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以在本公司订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。测定农产品中全氮的凯氏定氮法在许多国家已被杜马斯然烧定氮法所代替，杜马斯燃烧法是基于在高温下(大约 900 ℃），通过控制进氧量、氧化消解样品的原理而进行氮测定的。这6种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，每种方法都有其优缺点，在选择方法时应考虑：⑴实验对测定所要求的灵敏度和精确度；⑵蛋白质的性质；⑶溶液中存在的干扰物质；⑷测定所要花费的时间 【关键词】：凯氏定氮法双缩脲法紫外吸收法考马斯亮蓝法 Folin—酚试剂法杜马斯燃烧法 一、凯氏定氮法 1.1原理 凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 个过程。其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 1.2特点 凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。凯氏定氮法样品的最佳消化条件为硫酸铜2.50 g, 硫酸钾0.10 g,浓硫酸4.00 mL；硫酸铜的用量为影响消化时间的主要因素,硫酸钾和浓硫酸用量为第二和第三主要因素；用此最佳条件做实验, 消化时间仅为12 min；与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方法对比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实验成本,也降低了对环境的污染。 凯氏定氮法适用范围广泛，测定结果准确,重现性好，但操作复杂费时,试剂消耗量大。若采用模块式消化炉代替传统的消化装置, 可同时测定几份样品，节省时间,提高了工作效率，适用于批量蛋白质的测定,具有准确、快速、简便、低耗、稳定的优点。 二、双缩脲法(Biuret ) 2.1原理 双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180 ℃左右加热,放出1 个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4 形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以1 个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
氨基酸态氮的测定
氨基酸态氮的测定 1概述 2氨基酸态氮的测定 一、概述 蛋白质可以被酶、酸或碱水解，其水解的最终产物为氨基酸。氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天然源中分离得到的氨基酸已达175种以上，但是构成蛋白质的氨基酸主要是其中的20种，而在构成的氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或通过补充而增强了新陈代谢作用。 随着食品科学的发展和营养知识的普及，食物蛋白质中必需氨基酸含量的高低及氨基酸的构成，愈来愈得到人们的重视。为提高蛋白质的生理效价而进行食品氨基酸互补和强化的理论，对食品加工工艺的改革，对保健食品的开发及合理配膳等工作都具有积极的指导作用。因此，食品及其原料中氨基酸的分离、鉴定和定量也就具有极其重要的意义。 二、氨基酸态氮的测定 （1）双指示剂甲醛滴定法：原理、试剂、测定方法、结果计算 （2）电位滴定法：原理、试剂、仪器、测定方法、结果计算 1、双指示甲醛滴定法 （1）原理 氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的-NH2基。它们相互租用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定-COOH基，并用间接的方法测定氨基酸的总量。 （2）方法特点及应用 此法简单易行、快速方便，与亚硝酸氮气容量法分析结果相近。在发酵工业中常用此法测定发酵液中氨基酸含量的变化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况，并以此作为控制发酵生产的指标之一。普氨酸与甲醛作用时产生不稳定的化合物，使结果偏高;溶液中若有存在也可与甲醛反应，往往使结果高。 （3）试剂 ①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂， 用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。 ②0.1%百里酚酞乙醇溶液 ③0.1%中性红50%乙醇溶液 ④0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液 （4）操作步骤 1）含氨基酸溶液20-30mg→250ml锥形瓶中→中性红指示剂2-3滴，滴0.01mol/lNAOH 滴定终点（红→琥珀色） 2）含氨基酸溶液20-30mg→250ml锥形瓶中→百里红酚酞3滴/中性甲醛20ml→摇匀，滴0.01mol/lNAOH滴定终点（淡蓝色） 3）分别记录两次消耗碱液的用量 （5）结果计算
含赖氨酸多的食物
含赖氨酸多的食物 鳝鱼、泥鳅、鱿鱼、 带鱼、鳗鱼、海参、 墨鱼、蜗牛， 其次有、银杏、 冻豆腐、豆腐皮 山药、鳝鱼、银杏、海参、冻豆腐、海水鱼、豆腐皮、花生、核桃、芝麻等赖氨酸是构成蛋白质的一种必需，而且是不能自己合成，只能从食物中获得的8种必需之一。 含赖氨酸高的食物有：鳝鱼、泥鳅、鱿鱼、带鱼、鳗鱼、海参、墨鱼、蜗牛，其次有、银杏、冻豆腐、豆腐皮。 谷类食物中赖氨酸的含量比较低，如100克大米中含赖氨酸295毫克，100克面粉中含赖氨酸277毫克，仅相当于100克牛肉中赖氨酸含量的1/5，或者100克大豆中赖氨酸含量的1/10。 但现在应用新的生物技术，已研制出了高赖氨酸的玉米等作物。 赖氨酸是人体无法自行生产的必需，因此必须从膳食中摄取。赖氨酸对人体具有多种功能，因为它是许多蛋白质所需的组成部分，而这些蛋白质则为人体多种功能运作所需。并没有特定的RDA限制. 一般上富有蛋白质的食物都含有赖氨酸，如肉类、乳制品和豆类。然而，谷类食品或花生并不含有现成的、人体需要的赖氨酸。 烹煮、烘烤以及过度冷冻，将造成食物中的赖氨酸流失。这也是为什么人体需要辅助品。 通常，素食者（尤指不食用蛋类和乳制品者）较易缺乏赖氨酸。一些从事激烈运动的运动员，对于必需的需求也比常人高。 赖氨酸对于骨骼疏松症具有预防和治疗的作用。增强免疫能力。 黄豆！
赖氨酸是蛋白质的组成成分，一般上富有蛋白质的食物都含有赖氨酸，如肉类、乳制品和豆类。然而，谷类食品或花生并不含有现成的、人体需要的赖氨酸。此外，、银杏、大枣、芝麻、蜂蜜、葡萄、，含的赖氨酸也比较多。富含VB1的食物主要有粮谷类、豆类、干果（如花生）、酵母、坚果类等，动物内脏（肝、肾、心）及瘦肉、蛋类中含量也较丰富，蔬菜较水果含VB1稍多，但不是膳食VB1的主要来源。不过芹菜叶及莴苣叶含量较为丰富，可以利用。 赖氨酸是蛋白质的组成成分，一般上富有蛋白质的食物都含有赖氨酸，如肉类、乳制品和豆类。然而，谷类食品或花生并不含有现成的、人体需要的赖氨酸。此外，山药、银杏、大枣、芝麻、蜂蜜、葡萄、莲子，含的赖氨酸也比较多。富含VB1的食物主要有粮谷类、豆类、干果（如花生）、酵母、坚果类等，动物内脏（肝、肾、心）及瘦肉、蛋类中含量也较丰富，蔬菜较水果含VB1稍多，但不是膳食VB1的主要来源。不过芹菜叶及莴苣叶含量较为丰富，可以利用。 红薯：含有丰富的赖氨酸 红薯今年终于占据了蔬菜榜的头名位置。专家解释说，这是因为红薯中含有丰富的赖氨酸，可以迅速增加饱腹感。而赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。 《本草纲目》、《本草纲目拾遗》等古代文献均有对红薯功效的记载，中医一般认为红薯有“补虚乏，益气力，健脾胃，强肾阴”的功效。从现代营养学的角度看，红薯中富含的赖氨酸为碱性必需氨基酸。这种物质在谷物食品中一般含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。 适当补充赖氨酸能够促进孩子的生长发育，而长期缺少赖氨酸则会使孩子生长停滞、面色苍白、皮肤干燥、肌肉松弛、抵抗力降低，严重的还会影响智力发育。需要提醒大家的是，由于赖氨酸很容易溶解在水中，因此加工红薯时应避免长时间浸泡。此外，赖氨酸不耐高温，故食用红薯时最好以蒸、煮、炖为好。所以，从这个角度说，薯条、薯片多吃也是无益的。 日本国家癌症研究中心最近公布的20种抗癌蔬菜“排行榜”中，红薯也名列榜首。美国费城医院也从红薯中提取出一种活性物质——去雄酮，能有效地抑制结肠癌和乳腺癌的发生。