鼠疫相关标本检测结果分析

鼠疫相关标本检测结果分析

分析2007-2010年德格县鼠疫自然疫源地相关标本的检测结果，为四川省喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地防治提供科学依据。方法对鼠疫常规监测中的喜马拉雅旱獭等材料进行鼠疫菌分离培养、鼠疫间接血凝实验（IHA）和鼠疫反向血凝实验（RIHA）。结果2007-2008年，细菌培养活体喜马拉雅旱獭223份，分离鼠疫菌2株，细菌培养自毙喜马拉雅旱獭汉89份，分离鼠疫菌27株；IHA检测喜马拉雅旱獭血清229份，阳性血清4份，IHA检测牧犬血清105份，阳性血清7份，IHA监测藏系绵羊血清117份，阳性血清0份；RIHA检测喜马拉雅旱獭脏器悬液89份，阳性32份，阳性率36.00%。结论2007-2010年每年都分离出鼠疫菌，说明四川省德格县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地处于活跃期，应加强人间鼠疫监测，防止人间鼠疫发生。

德格县位于四川省西北部，2007年该县发生喜马拉雅旱獭鼠疫并确定为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地[1～2]。2007-2010年在德格县展开常规鼠疫监测，现将标本检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源2007-2010年，旱獭标本来自德格县更庆、柯洛洞、龚亚、汪布顶、八帮和阿须6个乡镇；旱獭、牧犬和藏系绵羊血清来自德格县更庆、柯洛洞、龚亚、汪布顶、八帮和阿须6个乡镇；蚤、硬蜱等媒介昆虫为旱獭体表检获。

1.2 主要试剂及培养基鼠疫F1抗体IHA试剂盒、鼠疫F1抗原RIHA试剂盒由中国疾病预防控制中心和青海省地方病预防控制所生产，赫氏干燥培养基由北京陆桥生产，效期内按说明书使用。

1.3 检测方法

1.3.1 细菌培养无菌条件下解剖旱獭，将肝、脾等脏器切面直接点种于平板内，用接种环三线法划线，放入培养箱，培养温度为28℃。每只动物的肝、脾各接种1个平板。平板连续观察3d，每天记录，无可疑鼠疫菌生长即为阴性。

1.3.2 脏器悬液制备将旱獭肝脾组织以无菌剪刀取大约1g于离心管内，加3%甲醛兔血清生理盐水1ml研磨，然后加甲醛兔血清生理盐水稀释制成1：10脏器悬液，1000 r／min离心5min，取上清供试验用。

1.3.3 血清学检查IHA和RIHA按常规方法进行[3]，阳性判定标准按中华人民共和国卫生诊断标准鼠疫诊断标准（WS 279-2008）[4]执行。

2 结果

2.1 病原菌分离培养2007-2010年鼠疫细菌学检验活体旱獭223份，分离鼠疫菌2株，阳性率为0.90%；细菌学检验自毙旱獭89份，分离鼠疫菌27株，阳性率为30.33%。细菌学检验谢氏山蚤、斧型盖蚤和草原硬蜱等昆虫媒介材料2076只，均未检获鼠疫菌（表1，表2）。

2.3 反向血凝试验RIHA检测旱獭材料89份，阳性32份，阳性率为36.00%，其中2007年RIHA检测阳性结果共10份1:200、1:400、1:800、1: 3200、1:6400、1:51200各1份，1:1600和1: 25600各2份；2008年RIHA检测阳性结果共9份1: 12800和1: 204800各1份，1: 51200和1: 409600各2份，1:6400 3份；2009年RIHA检测阳性结果共9份1:819200、1: 409600、1:1600、16400和1: 3200各1份，1: 12800和1: 51200各2份；2010年RIHA检测阳性结果共4份1:81920、1: 20480、1:163840、1:5120各1份。

3 讨论

鼠疫是严重危害人类健康的烈性传染病[5～8]。四川省于1997年判定为青藏高原青海田鼠鼠疫自然疫源地[9]。2007年四川省德格县又判定为青藏高原喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地，该疫源地的主要宿主为喜马拉雅旱獭、牧区和藏系绵羊，主要寄生蚤为谢氏山蚤、斧

型盖蚤。疫源地的面积扩大，防治难度加大，鼠疫防治工作任务越来越艰巨[10]。

2007-2010年每年都有鼠疫菌检出，鼠疫细菌学检验活体旱獭223份，分离鼠疫菌2株，阳性率为0.90%，细菌学检验自毙旱獭89份，分离鼠疫菌27株，阳性率为30.33%，分离的鼠疫菌都来自旱獭，而且活体旱獭和自毙旱獭体内都分离出鼠疫菌，动物间鼠疫每年都发生，分离出鼠疫菌的乡镇由2007年的更庆镇扩大到2009年的更庆镇、柯洛洞乡和八帮乡[11]，更庆镇每年都分离出鼠疫菌，说明鼠疫疫源地非常的活跃，加大鼠疫疫源地的监测力度，防治人间鼠疫的发生。细菌学检验谢氏山蚤、斧型盖蚤和草原硬蜱等昆虫媒介材料2076只，均未检获鼠疫菌，这也许是因为蚤感染鼠疫菌到蚤类消化道形成菌栓之前宿主就已经死亡，感染蚤又继续寄生在其他活体旱獭，未在自毙旱獭体表检获染疫蚤，所以未分离出鼠疫菌。IHA检测旱獭血清229份,阳性血清4份，检测牧犬血清105份，阳性7份；检测藏系绵羊血清117份，全部阴性，旱獭滴度最高为1:10240，牧犬最高滴度为1:2560。说明当地牧犬已经染疫，这主要与牧犬捕食自毙和活体旱獭有关系，而且牧犬与当以农牧民群众接触密切，加强宣传教育，严防传入人间。IHA检测绵羊血清，未检获阳性血清。但是2008年应用胶体金技术检测动物标本140份，阳性19份，其中32份藏系绵羊血清中检查出鼠疫阳性抗体8份说明绵羊已经染疫[12]。

RIHA检测旱獭材料89份，阳性32份，阳性率为36.00%,有些自毙旱獭的RIHA检测阳性，但未分离出鼠疫菌，也许与被检材料过于腐败、鼠疫菌量极少，细菌培养时没有取到有鼠疫菌的组织或者鼠疫菌已经死亡有关[13]。

通过对2007-2010年德格县鼠疫自然疫源地检测结果分析，动物鼠疫每年都有发生，说明四川省德格县鼠疫自然疫源地处于活跃期，应当提高警惕，加强监测和健康教育力度，严防止人间鼠疫鼠疫发生。

4 参考文献

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[12] 汪立茂，毛素玲，杨长虹，等.2007-2009年四川省旱獭鼠疫流行病学监测[J]．预防医

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[13] 刘谊，罗志丹巴，汪立茂，等.2008年德格鼠疫自然疫源地实验检测结果分析[J]．预防医学情报杂志，2010,26(1):1-3.