D-二聚体测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求lepu
D-二聚体测定试剂盒（荧光免疫层析法）
适用范围：用于体外定量测定全血、血浆中D-二聚体的含量。
1.1规格
卡型：1人份/袋、10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒。
卡盒型：20人份/卡盒×1、20人份/卡盒×2、20人份/卡盒×3、20人份/卡盒×4。
1.2组成
卡型：每盒含1/10/20/50人份检测卡、1份批号卡（二维码，含标曲信息）和1/10/20/50份样品缓冲液（150uL/支）。其中，每人份检测卡包括1份D-二聚体检测卡和1包干燥剂。卡盒型：每盒含1/2/3/4个20人份/卡盒和1/2/3/4
瓶样品缓冲液（15mL/瓶），20人份/卡盒包装含1卡盒（附有标曲信息芯片），其中1个卡盒中包括20支检测卡和11片干燥剂。
D-二聚体检测卡由样品垫、硝酸纤维素膜（T线包被鼠抗人D-二聚体单克隆抗体；C线包被羊抗鼠多克隆抗体）、荧光垫（含有荧光标记的鼠抗人D-二聚体单克隆抗体）、吸水纸、塑料载板组成。样品缓冲液由0.1%的表面活性剂和0.1mol/L 的Tris（pH7.0）溶液组成。
2.1物理性状
2.1.1膜条外观
检测卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。
2.1.2膜条宽度
检测卡的膜条宽度≥2.5 mm。
2.1.3液体移行速度
液体移行速度应不低于10 mm/min。
2.1.4样品缓冲液
样品缓冲液体积应不少于标示值，pH值 6.5～8.0 。
2.2空白限
空白限应不高于200ng/mL。
2.3重复性
CV(%)应不高于15.0%。
2.4批间差
极差应不高于15.0%。
2.5线性
在 [200，5000]ng/mL的范围内，用线性拟合公式拟合，剂量-反应曲线相关系数应不低于0.990。
2.6准确度
样本回收率应在85%～115%范围内。
2.7分析特异性
检测浓度为1000ng/ml的纤维蛋白原，检测结果应小于200ng/mL。
2.8稳定性
将检测试剂盒在2℃～30℃的环境中放置18个月后，分别检测2.1、2.2、2.3、2.5、2.6、2.7项，结果应符合各项目的要求。
2.9 溯源性
应根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所有校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准信息可溯源至本公司工作校准品，工作校准品与已上市试剂盒比对赋值。
量子点免疫层析检测技术
量子点免疫层析检测技术方兴未艾 免疫层析技术是一种快速、简便、灵敏、直观、价格低廉、可真正实现现场检测的检测方法。具有很多气相色谱、高效液相色谱、气质联用色谱、液质联用色谱、毛细管电泳等仪器检测方法以及其他传统方法无法企及的优点。在检测领域中处于特殊重要的地位，同时也是传统检测和仪器检测的良好补充。尤其在经济高速发展，生活水平提高的今天，人类重大疾病，环境污染，食品安全等问题日益受到极大的关注，让免疫层析检测技术更具有巨大的潜力和蓬勃的生命力。 目前，免疫层析产品主要为胶体金免疫层析试纸条，其最早应用于医学检验，在早孕检测中的应用取得了极大的成功，随后在各个领域迅速渗透漫延，其在毒品检测、环境检测、以及食品安全检测领域得到了迅速的发展，但是又出现新的问题，在很多方面，尤其是食品安全检测领域，有些农兽药残留限度极度苛刻，甚至要求0.1 ng/ml的检测限度，同时食品类物质如肉类、禽类、果蔬、谷物等成分复杂，前处理难度也很大，造成胶体金免疫层析检测灵敏度无法胜任。除了进一步提高前处理方法以外，寻求高灵敏度的免疫层析方法也显得尤为重要。 量子点是近20 年来发展起来的半导体纳米晶材料，因为它的优良特性，受到了很大的关注，并且已经显示出一定的潜力，近几年来从细胞标记等应用已逐渐开始向多个领域的检测与诊断方向渗透。 一、量子点特性 量子点(简称QDs,又称半导体纳米粒子)是由Ⅱ～Ⅵ族或Ⅲ～V族元素组成的，半径小于或接近于激光玻尔半径，能够接受激发光产生荧光的一类半导体纳米颗粒，其中研究较多的主要是CdX(x=S、Se、Te)，直径约为2nm-6nm。量子点由于存在显著的量子尺寸效应和表面效应，从而使它具有常规材料所不具备的光吸收特性，使其应用领域越来越广泛，特别是其在免疫生物学和临床检验学等研究中的潜在的应用价值，已引起了广大科学工作者的极大关注，发光量子点作为荧光试剂探针标记生物大分子，正是近年来迅速发展的纳米材料在生物分析领域的重要应用之一。与普通的荧光染料相比较，量子点具有以下特点： (1) 有机染料荧光分子激光谱带较窄，每一种荧光分子必须用合适能量的光来激发，而且产生的荧光峰较宽，不对称，有些拖尾。这给区分不同的探针分子带来困难，很难利用有机染料分子同时检测多种组分。量子点由于量子限域效应使其激发波长的范围很宽，可以被波长短于发射光的光(一般短10nm以上)激发，并产生窄(半波宽约13nm)而对称的发射光谱，从而避免了相邻探测通道的串扰。 (2) 量子点具有“调色”功能，不同粒径大小的量子点具有不同的颜色，激发量子点的激发波长范围很宽，且连续分布，所以可以用同一波长的光激发不同大小的量子点而获得多种颜色标记，是一类理想的荧光探针。 (3)量子点的荧光强度强，稳定性好，抗漂白能力强，Chan和Nie通过实验证明ZnS包覆的CdSe比罗丹明6G分子要亮20倍和稳定100-200倍，可以经受多次激发，且标记后对生物大分子的生理活性影响很小，因此为研究生物大分子之间的长期作用提供了可能。
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法 免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应， 应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。 一、免疫 免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。 特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制，针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体，只能对同一种抗原发挥免疫功能。而对变异或其他抗原毫无作用。 1、抗原 1.1抗原的定义 抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答(免疫原性) ，并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质(免疫反应性)。 抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上。 1.2抗原的分类
完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。 半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性， 1.3抗原的性质 决定簇是指抗原分子表面的基团，它直接决定免疫学反映的特异性。 抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。 因此，抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。 2、抗体 2.1抗体的定义 抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。 2.2抗体的结构 抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。 人免疫球蛋白有五类，分别为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。 3、抗原抗体的结合
D二聚体测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求meigaoyi
D二聚体测定试剂盒（胶乳免疫比浊法） 适用范围：用于体外定量检测人血清中D二聚体的浓度。 1.1包装规格 a) 试剂1：1×18ml，试剂2：1×6ml； b) 试剂1：1×30ml，试剂2：1×10ml； c) 试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml； d) 试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml； e）试剂1：2×150ml，试剂2：2×50ml； f）试剂1：1×16.8ml，试剂2：1×5.6ml。 1.2主要组成成分 试剂1主要组成成分 试剂2组成成分 2.1 外观和性状 2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损， 标签完好、字迹清晰。 2.1.2试剂1应为无色透明液体;试剂2应为乳白色溶液。 2.2 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.3 试剂空白吸光度
测定试剂空白吸光度，应≤1.70； 2.4 分析灵敏度 测试18mg/L的被测物时，吸光度变化率（△A）应不低于0.05。 2.5 准确度 在样品中加入一定体积的纯品，计算回收率，应在80%～120% 范围内。 2.6 精密度 2.6.1重复性 重复测定正常值和高值浓度的样本，变异系数（CV）应不超过5％。 2.6.2.批间差 用两个不同浓度样本分别测试3个不同批号的试剂盒，变异系数（CV）应不超过10％。 2.7 线性 2.7.1 在（0.5，48.0）mg/L范围内，线性回归的相关系数应不低于0.990； 2.7.2（2.5，48.0）mg/L范围内，相对偏差≤15%。 2.7.3（0.5，2.5]mg/L范围内，绝对偏差≤0.5mg/L。 2.8 稳定性 该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为18个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7之规定。
关于荧光免疫分析技术的专题报告
福州大学专题报告姓名/学号：王佳婕/10112010517 学院：物理与信息工程学院 专业：通信与信息系统 导师：洪蛤畔副教授 研究方向：生物医学信息的检测与处理
荧光免疫分析定量检测技术 免疫分析(immunoassay , IA)是基于抗原和抗体特征性反应的一种分析技术。根据标记技术手段的不同，免疫分析主要分为放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析等[1]。 1941年，Cons等用荧光素和抗体的结合来定位组织中的抗原，提出了荧光免疫分析法（Fluorescence Immunoassay，FIA）的概念[2]。荧光免疫分析法常用试剂是荧光素，荧光素一直是分析领域中常用的有机荧光分子标记物。在特定波长的激发光作用下，某些有机荧光分子很容易被激发至饱和状态并发出荧光，而这些荧光分子还能在很短的时间内进行多次的重复激发和测量。荧光免疫分析法就是根据荧光分子的这种特性进行定量分析的。 一、荧光免疫分析 荧光免疫分析的方法有很多,常见的有以下几种：荧光偏振免疫分析、荧光猝灭免疫分析、荧光增强免疫分析。 荧光免疫分析在国内外被广泛地应用在临床检测中，如内分泌疾病检测（甲状腺、糖尿病及生长素类的检测）、传染病检测（肝炎、艾滋病等）、妇产科疾病检测（HCG、FSH、Testosterone等）、肿瘤标志物检测（AFP、PSA、CA系列）、遗传科疾病检测（产前筛查、新生儿筛查及基因杂交检测等）、血液及细胞学检测（贫血、白血病及细胞试验与分析等）[3]。免疫组织化学、微阵列、多标记物的免疫分析等新应用也不断地涌现出来[4]。 荧光免疫分析技术的基本原理是将抗原抗体反应的高度特异性 与荧光的可测量性结合起来，以荧光物质作为示踪剂标记抗体（或抗原）制成特异性试剂，可用于检测特定的抗原抗体浓度，以便进一步进行病理学或免疫组织化学的免疫分析[4]。 相对于定性检测和半定量检测，定量检测在临床应用中更具有实际意义。它可以直接读出待测物质的浓度，为临床诊断提高可靠依据，可应用于疾病的早期诊断。 二、荧光免疫定量检测 1.荧光检测机理 某些物质经紫外光的照射，吸收了一定波长的入射光（紫外光）后，即可发射出较入射光波长稍长的光，这种光称为荧光。由于物质的分子结构不同，所能吸收紫外光的波长及发射荧光的波长也有所不同，利用这个特性可以对待测物质进行有针对性的检测。在一定条件
D-二聚体测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求jiuqiang
D－二聚体测定试剂盒（胶乳免疫比浊法） 适用范围：本产品与ABBOTT仪器配套使用，用于体外定量测定人血清或血浆中的D-二聚体的含量。 1.1 包装规格 表1 包装规格 1.2 主要组成成分 表2 组成成分
注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异。 2.1 外观 试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂2为乳白色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 校准品为白色或黄色粉末状物质，复溶后为无色或黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 质控品为白色或黄色粉末状物质，复溶后为无色或黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。 试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量 试剂的净含量应不少于标称量。 2.3 试剂空白吸光度 A570nm下测定空白吸光度应≤2.3000。 2.4 准确度 与已上市产品进行比对试验：在[0.5，30.0] μg/mL区间内，相关系数r≥0.975，在[0.5，10.0] μg/mL区间内测定的偏差应不超过±1.0 μg/mL，在(10.0，30.0] μg/mL区间内测定的偏差应不超过±10%。 2.5 分析灵敏度 样本浓度为8.0 μg/mL时，其吸光度变化在0.0200～0.1000之间。 2.6 线性区间 在[0.5, 30.0] μg/mL区间内，线性相关系数r≥0.990，在[0.5,10.0] μg/mL 区间内测定的偏差应不超过±1.0 μg/mL，在(10.0, 30.0] μg/mL区间内测定的偏差应不超过±10%。 2.7 测量精密度 2.7.1 重复性 对高、低两个浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。 2.7.2 批间差 随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。 2.8 瓶间精密度 校准品、质控品的瓶间精密度应≤10%。
免疫荧光非特异性染色的消除方法
免疫荧光非特异性染色的消除方法 一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。 （4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体，以致容易混淆。 （5）抗体分子上标记的荧光素分子太多，这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。 （6）荧光素不纯，标本固定不当等。 二、消除非特异性染色的方法 消除荧光抗体非特异性染色的方法应根据产生的原因采取适当的方法，常用的方法有以下几种： （一）动物脏器粉末吸收法 常用肝粉（猪、大白鼠或小白鼠），其次是骨髓粉、鼠脑粉和鸡胚粉等。每毫升荧光抗体中加入肝粉50～100mg,在离心管中充分混匀，在室温中振动2h，4℃中过夜，再搅拌10min，高速离心（3000～15000r/min）30min，1～2次后，即可使用其上清液。吸收一般应在临用前进行，吸收后之荧光抗体保存冰箱中勿超过2周。染色应作吸收前后之比较，吸收时可先用缓冲盐水将组织干粉浸湿，离心（3000～15000r/min）30min，除去上清液，再加入荧光抗体进行吸收，以免消耗过多的抗体。 肝粉或新鲜细胞吸收是一种非特异性的消除方法，对荧光抗体的荧光色素和蛋白都有吸附作用。如检查组织中的病毒抗原时，也可用相同的组织干粉或匀浆沉淀物吸收之。 用脏器肝粉吸收对荧光抗体损失较多，如果根据Hiramotos氏等的方法将组织的20%生理盐水匀浆液，用生理盐水洗2～3次，12000r/min 10min离心沉淀，用其沉淀物吸收其荧
免疫荧光技术的实验方法及其分类
免疫荧光技术的实验方法及其分类 一、免疫标记法及其分类 1.荧光免疫法 原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min 内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。 以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。 传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2.放射免疫法 放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。 RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng/ml 水平。但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。 3.酶联免疫法(ELISA) ELISA法有竞争法和夹心法两种。竞争法是基于标准或血清Mb 和微孑L板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg/L，线性范围达1 000ug/L。夹心ELISA 法与EIA具有良好的相关性(r=0.92)。ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。但不适合急诊的快速检测。
D-二聚体测定试剂盒(免疫比浊法)产品技术要求baiding
D-二聚体测定试剂盒（免疫比浊法） 适用范围：用于体外定量测定人血浆中D-二聚体的含量。 1.1 型号定制规则 试剂1：1×15mL ，试剂2 ：1×5mL；试剂1：1×30mL，试剂2：1×10mL；试剂1：3×30mL，试剂2：1×30mL；试剂1：1×45mL，试剂2：1×15mL；试剂1：1×60mL，试剂2：1×20mL；试剂1：2×60mL，试剂2： 2×20mL；试剂1：3×60mL，试剂2：1×60mL；试剂1：28×4mL，试剂2：14×2.8mL。 产品组成： 试剂1：Tris缓冲液（pH8.0），浓度20 mmol/L； 试剂2：包被羊抗人D-二聚体多抗的胶乳颗粒液，≥1.5 mg/L。 2.1外观 2.1.1 试剂1为无色透明液体，无可见不溶物。 2.1.2 试剂2为白色或微黄色胶乳液体。 2.1.3 标签内容清晰，字迹不易脱落。 2.2 试剂装量 液体试剂的净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 A≤1.5（波长600nm，光径1cm）。 2.4 分析灵敏度 2mg/L的D-二聚体样本，吸光度变化在0.010～0.100范围内。 2.5 线性范围
2.5.1 [0.5，40]mg/L。在规定的线性范围内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）不低于0.990。 2.5.2 [0.5，5]mg/L范围内，绝对偏差介于±0.75mg/L之间；（5，40]mg/L 范围内，相对偏差介于±15%之间。 2.6 测量精密度 2.6.1 批内精密度 低值控制样品，变异系数CV≤15%，高值控制样品，变异系数CV≤10%。 2.6.2 批间差 低值控制样品，变异系数CV≤15%，高值控制样品，变异系数CV≤10%。 2.7 准确度 与已上市产品进行对比试验，相关系数r≥0.975。[0.5，5]mg/L范围内，绝对偏差介于±0.75mg/L之间；（5，40]mg/L范围内，相对偏差介于±15%之间。 2.8 稳定性 原装试剂盒2℃～8℃保存，有效期12个月，有效期满后1个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1和2.7要求。
D-二聚体(D-Dimer)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求shangjing
D-二聚体(D-Dimer)测定试剂盒（胶乳免疫比浊法） 适用范围：用于体外定量测定人血浆中D-二聚体的含量。 1.1 包装规格 试剂1：1×80mL，试剂2：1×20mL； 试剂1：50×240μL，试剂2：1×3mL； 试剂1：30×240μL，试剂2：1×1.8mL。 1.2 主要组成成分 2.1 外观和性状 试剂1应为无色澄清液体，无异物。试剂2应为乳白色悬浮液，无沉淀。2.2 净含量 每瓶试剂的净含量应不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 用纯化水加入试剂作为样品测试时，试剂空白吸光度A应≤1.70。 2.4 分析灵敏度 测含已知浓度D-二聚体(D-Dimer)的样本时，吸光度差值（ΔA）应≥0.10。 2.5 线性 试剂盒在[0.5，20]mg/L的线性范围内分析性能应符合如下要求： 2.5.1 性相关系数（r）≥0.990； 2.5.2 相对偏差：（2.5，20]mg/L范围内，相对偏差不超过8%； 2.5.3 绝对偏差：[0.5，2.5]mg/L范围内，绝对偏差不超过0.2mg/L。 2.6 测量精密度 2.6.1 重复性 用高低两个浓度样本重复测试，所得结果的变异系数(CV)应≤8.0%。 2.6.2 批间差 试剂盒的批间相对极差(R)应≤10.0％。 2.7 准确度
与已上市产品比对，用线性回归方法计算两组结果，相关系数(r)≥0.975，各个浓度点中≤2.5mg/L的绝对偏差不超过±0.2mg/L。各个浓度点中＞2.5mg/L的相对偏差不超过±8%。 2.8 稳定性 2℃～8℃避光贮存，有效期为12个月，取过有效期后一个月内的试剂盒进行检测，试剂盒应仍能符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7要求。
免疫层析实验
免疫层析实验 1．原理 金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常迅速。 DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。 因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动 二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条 四，多余的金条抗体继续前移到4， 1 2 3 4 2.方法学类型 DICA多用于检测抗原，但亦可用于检测抗体。常见方法学类型有： 1)双抗体夹心法测抗原： 若图-2所示，G处为金标抗体(免疫金)，T处包被抗体，C处包被抗金标抗体，B处为吸水纸。测试时A端滴加待测标本，通过层析作用，待测标本向B端移动，流经G处时将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，移至T区时，形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被固定下来，在T区显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标记抗体移至C区被抗金标抗体捕获，呈现红色质控线条。 图-2免疫层析试验双抗体夹心法测大分子抗原 2）竞争法测小分子抗原： 若图1-3所示,G处为金标抗体，T处包被标准抗原，C处包被抗免疫金抗体，测试时待测标本加于A端，若待测标本中含有待测抗原，流经G处时结合金标抗体，当混合物移至T 处时，因无足够游离的金标抗体与膜上标准抗原结合，T处无棕红色线条出现，实验结果为阳性，游离金标抗体或金标抗体复合物流经C处，与该处的抗金标抗体结合出现棕红色的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体则与T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕
免疫分析法
免疫分析法 1,熟悉免疫分析法的基础知识 ,了解放射免疫分析法,酶免疫分析法,化学发光免疫分析法,荧光免疫分析法 第一:概述 基本原理 基本条件 方法分类 免疫分析法(Immunoassay,IA):是指以特异性抗原-抗体反应为基础的分析方法. 1959年,由美国Yallow和Berson等人将放射性同位素示踪技术的高灵敏性和免疫反应的高特异性结合起来,首先测定了糖尿病人血浆中的胰岛素含量,从而创立了放射免疫分析方法(Radioimmunoassay,RIA). 酶免疫分析法,化学发光免疫分析法,荧光免疫分析法,时间分辩免疫分析方法等. 一,基本原理 (一)竞争抑制原理 实质都是抗原一抗体竞争结合反应 Ag*:标记抗原 Ag:未标记抗原 Ab:特异抗体 Ag*-Ab:标记抗原-抗体结合物, Ag-Ab代表未标记抗原一抗体结物 K:平衡常数(K=K1/K2). 抗原-抗体反应须满足以下条件: Ag*与Ag(待测物)必须是相同的生物活性物质; 所加入Ag*和Ab的量应是固定的; Ag*与Ag的量之和应大于Ab的结合位点; Ag*,Ag及Ab须处在同一反应体系中. 这种竞争抑制的数量关系成为免疫分析的定量基础 (二)竞争抑制曲线(剂量反应曲线) 用待测物的标准品配置一系列已知浓度的标准溶液,再加入一定量的标记抗原和抗体,待抗原抗体反应达到平衡后,测定系列标准溶液的Ag*-Ab的结合率. B代表结合的标记抗原; F代表游离的标记抗原; T代表总的标记抗原. B/F-[Ag] B/(B+F)×100%-[Ag] (三)抗原一抗体反应的特点 1.特异性 一种抗原分子只能与由它刺激产生的抗体发生特异性结合反应. 抗原的特异性主要取决于抗原决定簇(Cluster)的数量,性质及立体构型. 抗体的特异性则取决于抗原结合段(fragment of antigen binding,IgFab)与相应抗原决定簇的结合能力. 交叉反应(cross reaction):结构相近似的其它药物或化合物与抗体的结合. 2.可逆性
D-二聚体(DD) 测定试剂盒(免疫比浊法)产品技术要求lideman
D-二聚体（DD）测定试剂盒（免疫比浊法） 适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中D-二聚体的含量。 1.1 规格 试剂1（R1）:2×40mL、试剂2（R2）: 2×10mL； 试剂1（R1）:2×60mL、试剂2（R2）: 2×15mL； 试剂1（R1）:2×60mL、试剂2（R2）: 2×12mL； 试剂1（R1）:1×60mL、试剂2（R2）: 1×20mL； 试剂1（R1）:2×45mL、试剂2（R2）: 2×15mL； 试剂1（R1）:2×60mL、试剂2（R2）: 2×20mL； 试剂1（R1）:3×60mL、试剂2（R2）: 1×60mL； 试剂1（R1）:2×12mL、试剂2（R2）: 2×4mL； 试剂1（R1）:1×15mL、试剂2（R2）: 1×5mL； 试剂1（R1）:1×45mL、试剂2（R2）: 1×15mL； 试剂1（R1）:5×9mL、试剂2（R2）: 5×3mL； 256T:【试剂1（R1）：56mL、试剂2（R2）：18mL】。 校准品及稀释液（选配）：校准品1×1mL；校准品稀释液1×2mL。 质控品及稀释液（选配）：质控品2×0.5mL；质控品稀释2×1mL。 1.2 组成 试剂盒由试剂、校准品及稀释液（选配）和质控品及稀释液（选配）组成。 试剂1(R1)：50mmol Tris缓冲液（pH=7.4）。 试剂2(R2)：100mmol Tris缓冲液（pH=7.4），浓度＜0.5%胶乳颗粒包被的D-二聚体抗体。
校准品：一个水平的冻干校准品，在100mmol Tris缓冲液（pH=7.4）中添加D-二聚体纯品（纯度大于95%），甘露醇30g/L。定值范围：（10～25）μg/ml。校准品稀释液：50mmol Tris缓冲液（pH=7.4）。 质控品：两个水平的冻干质控品，在100mmol Tris缓冲液（pH=7.4）中添加D-二聚体纯品（纯度大于95%），甘露醇30g/L。定值范围：（1.0～5.0）μg/ml；（5.0～15.0）μg/ml。 质控品稀释液：50mmol Tris缓冲液（pH=7.4）。 2.1 外观 液体双试剂：R1：无色澄清；R2：乳白色液体。 校准品：冻干品，复溶后为无色至淡黄色澄清液体；校准品稀释液为无色至淡黄色澄清液体。 质控品：冻干品，复溶后为无色至淡黄色澄清液体；质控品稀释液为无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量：液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至D-二聚体纯品（纯度≥95%,Fitzgerald）。 2.4 空白吸光度 在37℃、（570nm+10%范围内的）波长、1cm光径条件下，用去离子水或生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度应＜2.0Abs。 2.5 分析灵敏度 浓度为（0.5±0.1）μg/ml时，吸光度变化的绝对值范围为（0.008 ～0.12）Abs。
D-二聚体测定试剂(免疫比浊法)
附件3 D-二聚体测定试剂（免疫比浊法） 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对D-二聚体测定试剂（免疫比浊法）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对D-二聚体测定试剂（免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 从方法学考虑，在本文中D-二聚体测定试剂是指以胶乳凝集免疫比浊法为基本原理，利用全自动、半自动凝血分析仪；全 —1 —
自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室对人体血浆样本中D-二聚体含量进行体外定量分析的试剂。依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号），D-二聚体测定试剂管理类别为二类，分类代号为6840。 本指导原则不适用于： （一）单独申请注册的D-二聚体校准品和质控品。 （二）免疫比浊法原理之外的其他D-二聚体测定试剂盒。 二、注册申报材料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性方面的说明、产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求，下面着重介绍与D-二聚体测定试剂预期用途有关的临床背景情况。 D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后，经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，能够反映体内的凝血功能和纤溶活性，是机体高凝状态、血栓形成、继发性纤溶亢进的指标。在深静脉血栓、肺栓塞、弥散性血管内凝血、重症肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓治疗后均可见D-二聚体水平升高，可作为溶栓治疗的有效观察指标。由于具有极高的敏感性和阴性预测—2 —
免疫荧光组织化学技术
免疫荧光组织化学技术 一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述…………………………………………………… 二、免疫荧光组织化学的原理………………………………………………………………… （一）直接方法…………………………………………………………………………… 1．检查抗原方法…………………………………………………………………… 2．检查抗体方法…………………………………………………………………… （二）间接方法…………………………………………………………………………… 1．检查抗体(夹心法)方法…………………………………………………………… 2．检查抗体方法…………………………………………………………………… 3．检查抗原法……………………………………………………………………… （三）补体法……………………………………………………………………………… 1．直接检查组织内免疫复合物方法……………………………………………… 2．间接检查组织内抗原方法……………………………………………………… （四）双重免疫荧光组织化学标记方法………………………………………………… （五）对照试验…………………………………………………………………………… 1．直接方法………………………………………………………………………… 2．间接方法………………………………………………………………………… 3．补体方法………………………………………………………………………… 三、荧光抗体的制备……………………………………………………………………………… （一）荧光素……………………………………………………………………………… 1．异硫氰酸荧光素………………………………………………………………… 2．四甲基异硫氰酸罗达明………………………………………………………… 3．得克萨斯红(Texas red)…………………………………………………………… 4．其它荧光素………………………………………………………………………… （二）荧光素标记抗体的方法…………………………………………………………… 1．FITC标记抗体的方法…………………………………………………………… 2．四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法…………………………………………… 3．藻红蛋白标记抗体方法…………………………………………………………… 4．蓝色荧光素标记抗体方法………………………………………………………… （三）荧光抗体的质量控制……………………………………………………………… 1．染色特异性和敏感性的测定方法………………………………………………… 2．F/P比值的测定方法……………………………………………………………… 3．荧光抗体的保存…………………………………………………………………… 四、免疫荧光组织化学染色方法………………………………………………………………
免疫层析技术
层析法概念 层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase) 和流动(Mobile Phase)相组成。固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。 免疫层析法概念 免疫层析法(immunochromatography)是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。 免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细管作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。游离物在C线处发生免疫反应。 分类 检测方法标记物质 TRFIA技术镧系稀土元素螯合物 上转换发光技术上转磷光材料（UCP） 荧光乳胶层析技术荧光胶乳颗粒 荧光微球免疫层析技术荧光微球 荧光QDS层析技术量子点 IMB层析技术免疫磁珠 新型胶体金技术纳米磁性微粒、核酸适配体
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)操作
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)是在荧光分析的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析。它利用具有长效荧光的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）作标记物，充分利用激发光与发射光之间的降移与发射光较长的半寿期，在激发光后延时测量发射光的强度。从而所测的荧光不受激发光和被检物中的非特异荧光干扰，提高了检测的特异性与灵敏度。在激发光后延时400微秒，测量400微秒，间歇200微秒后进入下一个测量周期，每一个周期为1000微秒。对每一个样品实施1秒钟的测量，意味着完成了1000个周期的测量，测量精确度极高。 （一）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪开/关程序 1 开机 1.1 依次打开样品处理器电源，微孔板处理器电源，打印机电源。 1.2 打开计算机显示器。 1.3 启动计算机。 1.4 运行系统软件：Auto DELFIA与Multicalc系统软件在Windows启动后自动运行。Auto DELFIA workstation软件用于控制Auto DELFIA的运行，MultiCalc的主要功能是与主机通讯，对测试结果进行评估和对质控及其他数据处理（可通过双击屏幕上图标不运行）。在MultiCalc Auto DELFIA环境下，只有键盘有效，鼠标无效。 2 开机后准备 1.1 清洗液准备 1.1.1 微孔板处理器洗液（250ml浓缩液＋600ml去离子水混合），每做一块板至少1升用量，洗液在密闭条件可保存2周时间。 1.1.2 准备样品处理器洗液（50ml浓缩液＋5000ml去离子水混合），每做一块板至少需要800ml洗液，洗液在密闭条件下可保存1周时间。 1.2 样品处理器准备 1.2.1 在Wash bottle（清洗液瓶）、Rinse bottle (冲洗液瓶)分别注入足够用量的清洗液和去离子水，倒空废液瓶。拧紧各瓶盖，确保废液瓶管路向下。 1.2.2 如样品需要稀释，放入稀释杯和稀释液。系统安装时已调好有71ml和190ml两种规格的稀释杯，若使用71ml的稀释杯，从最右端开始放置，如有预处理样品，则不能使用190ml 的稀释杯。不能使用多个稀释杯。 1.3 微孔板处理器准备。
免疫层析各种方法法原理
双抗体夹心法原理 以HCG 为例（检测抗原） 此方法较常用，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目（HIV）是双抗原夹心检测抗体的，原理类似。HCG 金标记αHCG 金-αHCG-HCG 金-αHCG-HCG -βHCG 金-αHCG -羊抗鼠IgG(Y3) 金-αHCG-HCG 羊抗鼠IgG （Y3） 显示红色显示红色 金标记αHCG 不显色显示红色 金-αHCG -羊抗鼠IgG 阴性反应 阳性反应 βHCG
以吗啡为例（检测抗原） 此方法主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链等）的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC 膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA 等大分子物质上再固定于NC 膜上。此结果与双抗原夹心法相反，阴性CT 两条都是红线，阳性只有C 线一条红线，T 线不显色。 金-吗啡抗体-吗啡吗啡-BSA 金标记吗啡抗体显示红色不显色金-吗啡抗体-吗啡羊抗鼠尿液(含 吗啡)显示红色 显示红色金标记吗啡抗体金-吗啡抗体-羊抗鼠 阴性尿液 抗体-吗阴性反应 阳性反应金标记吗啡抗体-吗啡-BSA
乙肝E 抗体为例 金标记e 抗体e 抗原e 抗体 金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体-羊抗鼠 不显色显示红色 金标记e 抗体e 抗原金标记e 抗体-e 抗原 金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体显示红色显示红色 金标记e 抗体-e 抗原 羊抗鼠 阳性反应 阴性反应
间接法原理检测抗体 此方法主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC 膜上，标记多为蛋白A(ProteinA 或叫SPA，与抗体Fc 端结合而与其它蛋白质不结合)或者鼠抗人（如检测为IgM，则标记为鼠抗人IgM）。此方法要求胶体金过量（待测样品往往含有大量多种抗体，所检测抗体所占份额很小），一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加样品缓冲液。 一般斑点免疫渗滤法使用也是间接法。显示红色显示红色 金标记SPA 目的抗体杂抗体阳性反应抗原 杂抗体金标记SPA 抗原不显色显示红色 阴性反应
肌钙蛋白 I 检测试剂(盒)(免疫荧光层析法)
肌钙蛋白I检测试剂（盒）（免疫荧光层析法） 1范围 本文件规定了肌钙蛋白I检测试剂（免疫荧光层析法）（盒）的技术要求、试验方法、标志、包装、运输和贮存。 本文件适用于检测人血清/血浆/全血中肌钙蛋白I的含量，临床上主要用于心肌梗死的辅助诊断。 本文件适用于以双抗体夹心法为原理的免疫层析方法定量测定肌钙蛋白I的试剂。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T191包装储运图示标志 GB/T29791.2体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第2部分：专业用体外诊断试剂 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4技术要求 4.1外观 试剂各组分应齐全、完整；包装标签应清晰，易识别。 4.2膜条宽度 应不低于2.5mm。 4.3试剂量 应不低于标示量。 4.4液体移行速度 应不低于10mm/min。 4.5准确度 4.5.1总则 可选用相对偏差法和回收试验两种方法之一进行验证（如适用，优先采用相对偏差的方法）。 4.5.2相对偏差
用可用于评价常规方法的有证参考物质（CRM）或其它公认的参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应不超过±15%。 4.5.3回收试验 将已知浓度的待测物加入到临床样本基质中，其回收率应在80%～120%之间。 4.6最低检出限 应不高于0.1ng/mL。 4.7线性 在所规定的（0.1～50）ng/mL区间内，试剂线性相关系数r应不低于0.9900。 4.8重复性 变异系数（CV）应不大于15.0%。 4.9批间差 批间变异系数（CV）应不大于15.0%。 4.10特异性 分别检测1000ng/mL心肌肌钙蛋白T、1000ng/mL心肌肌钙蛋白C、1000ng/mL骨骼肌型肌钙蛋白I样本，结果均应不高于0.1ng/mL。 4.11稳定性 4.11.1总则 可对效期稳定性和热稳定性进行验证。 4.11.2效期稳定性 制造商应规定试剂（盒）的有效期。取效期末的试剂（盒）检测其试剂准确度、最低检出限、线性、重复性和特异性，应符合4.5～4.8、4.10的要求。 4.11.3热稳定性 取有效期内的试剂（盒）根据制造商所声称的热稳定条件，检测其试剂准确度、最低检出限、线性、重复性和特异性，应符合4.5～4.8、4.10的要求。 注1：热稳定试验不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。 注2：一般地，效期为1年时选择不超过1个月的产品，效期为半年时选择不超过半个月的产品，依此类推。但如超过规定时间，产品符合要求时也可以接受。 注3：根据产品特性可选择4.11.2、4.11.3方法的任意组合，但所选用方法宜能验证产品的稳定性，以保证在效期内产品性能符合标准要求。 5试验方法 5.1外观 正常视力目测检查，其结果应符合4.1的要求。
免疫层析技术的发展及在POCT中的应用
综一一述 免疫层析技术的发展及在P O C T中的应用 黄德智综述,蒲晓允?审校 (陆军军医大学新桥医院检验科,重庆４０００３７) 一一摘一要:免疫层析技术因其简单二方便二易操作二快速,价格相对低廉,已广泛应用于即时检测(P O C T).随着P O C T检测项目的增多和对已有项目检测定量二灵敏度二特异度等要求的提高,本文就免疫层析技术的最新发展及其应用,作以下综述. 关键词:免疫层析技术;一即时检测;一量子点 D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１９．０５．０２２中图法分类号:R４４６ 文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１９)０５Ｇ０５９４Ｇ０４文献标识码:A D e v e l o p m e n t o f i m m u n o c h r o m a t o g r a p h y a n d i t s a p p l i c a t i o n i nP O C T HU A N GD e z h i,P UX i a o y u n? (D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y,X i n q i a oH o s p i t a l,A r m y M e d i c a l U n i v e r s i t y,C h o n g q i n g４０００３７,C h i n a) A b s t r a c t:I m m u n o c h r o m a t o g r a p h y h a sb e e nw i d e l y u s e d i nP O C Tb e c a u s eo f i t s s i m p l i c i t y,c o n v e n i e n c e, e a s y o p e r a t i o n,r a p i d i t y a n d r e l a t i v e l y l o w p r i c e．W i t h t h e i n c r e a s eo fP O C Tt e s t i n g i t e m s a n d t h e i n c r e a s eo f t h e r e q u i r e m e n t s f o r q u a n t i f i c a t i o n,s e n s i t i v i t y,a n d s p e c i f i c i t y o f e x i s t i n g p r o j e c t s,t h i s p a p e r r e v i e w s t h e l a t e s t d e v e l o p m e n t s a n d a p p l i c a t i o n s o f i m m u n o c h r o m a t o g r a p h y． K e y w o r d s:i m m u n o c h r o m a t o g r a p h y;一P O C T;一q u a n t u md o t s １一免疫层析技术简介 一一免疫层析技术是在２０世纪６０年代在发达国家兴起并被用于检测血清蛋白的一种结合了免疫技术和色谱层析技术的快速检测分析方法,利用胶体金二胶体碳二磁性纳米材料二稀土纳米材料二量子点等着色标记物,在层析时,标记物与待测物的络合物被相应的配体捕获而浓集显色于硝酸纤维素膜上的检测线,以纤维膜上显色条带的有无二颜色深浅和反射光线来定性或定量,在即时检测(P O C T)中应用极为广泛.免疫层析试纸条由样品垫二结合垫二硝酸纤维素(N C)膜二检测线(T线)二质控线(C线)二吸水垫二聚氯乙烯(P V C)底板等部分组成,根据待检测物的大小和抗原抗体结合的方式,分为双抗体夹心法和竞争法[１Ｇ２].２一免疫层析技术发展及应用 一一免疫层析技术关键在于依靠标记抗体的免疫标记材料,而纳米材料由于优越的信号放大作用,能达到良好的灵敏度和特异度而备受青睐.下面主要从胶体碳二量子点二稀土纳米材料二上转换发光技术和超顺磁性纳米材料以及适配体等方面进行介绍.２．１一胶体碳一与胶体金相比,胶体碳的优点包括更高的颜色强度,即更高的灵敏度和标记效率,动力学检测范围更广,成本低廉,制作工艺简单,可大规模生产且更环保,但由于其标记和封闭时间长,并未体现出对胶体金的绝对优势,故其商业化程度较低[３Ｇ４].何卓等[３]利用碳纳米颗粒制作的胶体碳试纸条用于检测疟原虫,并可通过扫描检测带灰度值以定量.最近,Y U等[４]利用一种新的胶体碳材料氧化石墨烯作为标记物,成功制作出用于检测黄曲霉素B１的试纸条,肉眼最低检测限可达０．３n g/m L.材料学的进步能促进检测的进步,诸如碳量子点和石墨烯量子点等材料也是免疫层析研究中可以利用的标记材料.２．２一量子点一量子点被认为是免疫层析中最有前途的荧光半导体纳米材料,与一般荧光染料相比,量子点具有尺寸可调的荧光,发射光谱窄而对称,高量子产率,宽吸收光谱,荧光强度高,耐光漂白和稳定性好等优点[５Ｇ６].水溶性量子点表面富含羧基或氨基以用于连接蛋白质.表面是羧基的量子点被１Ｇ(３Ｇ二甲氨基丙基)Ｇ３Ｇ乙基碳二亚胺盐酸盐(E D C)和NＧ羟基琥珀酰亚胺(N H S)激活,并且这些激活的羧基和抗体的氨基相连接.这些特性使得量子点是一个可以达到高灵敏度和同时对多种检测物定量的免疫层析标记物[７].为了检测样本中不同的物质,有两种不同模式的检测方法.第一种模式是不同的T线去检测与之对应的分析物;第二种模式是一条T线去检测不同的分析物.例如,第一种模式,T A R A N O V A等[８]设计了一种 交通信号灯 式的竞争性免疫层析方法,他们 ４９５ 国际检验医学杂志２０１９年３月第４０卷第５期一I n t J L a bM e d,M a r c h２０１９,V o l．４０,N o．５ ?一通信作者,EＧm a i l:１５８０９３２０＠q q．c o m. 一一本文引用格式:黄德智,蒲晓允．免疫层析技术的发展及在P O C T中的应用[J]．国际检验医学杂志,２０１９,４０(５):５９４Ｇ５９７．