3-磷酸甘油醛脱氢酶
货号：QS2205-25 规格：25管/24样
3-磷酸甘油醛脱氢酶
(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理：
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。
自备实验用品及仪器：
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体×1支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟；现配现用。
（2）在试剂三中加入500μL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂4℃保存一周。
（3）在1mL石英比色皿中加入30μL样本、20μL试剂三和950μL工作液，混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
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GAPDH活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=1072×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=2.14×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.03 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC2215 规格：100T/96S 产品内容： 提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存。 试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体12uL×1支，4℃保存。临用前加入0.4mL蒸馏水充分混匀，或根据比例现配现用；用不完的试剂4℃保存一周。 产品说明： GAPDH（EC1.2.1.12）催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。 3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD+，340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 血清（浆）：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，根据需要取一定的量置于37℃(哺乳动物) 或25℃(其它物种)预热10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 3、操作表：在微量石英比色皿或96孔板中分别加入下列试剂： 试剂名称空白管测定管 样本（μL）6 蒸馏水（μL）6 试剂三（μL）44 试剂五（μL）190190在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值 A1，迅速置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴或培养箱5min（酶标仪有控温功能可将温度调至37℃或25℃），拿出迅速擦干测定5min10s时的吸光值A2，计算△A测定管=A2测定-A1测定，△A空白管=A2空白-A1空白，△A=△A测定管-△A空白管。空白管只需做一次。 三、GAPDH酶活计算： 1、按微量石英比色皿计算： （1）按蛋白浓度计算 酶活定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GAPDH酶活（U/mg prot）=△A÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T =1072×△A÷Cpr （2）按样本质量计算 酶活定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GAPDH酶活（U/g鲜重）=△A÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称：乳酸脱氢酶 英文名称：lactate dehydrogenase;LDH 定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于L-乳酸； D-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于D-乳酸，两者均以NAD＋为氢受体。在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。 应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶（LDH）实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介
编辑本段基本信息 英文名称：LDH（lactate dehydrogenase） 序列信息：1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围：血清～L； 尿560～2050U/L； 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.
3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)试剂盒说明书
货号：MS2205 规格：100管/96样 3-磷酸甘油醛脱氢酶 (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。 测定原理： 3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。 自备实验用品及仪器： 分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液一：液体100mL×1瓶，4℃保存。 提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存； 试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：液体14uL×1支，4℃保存； 组织样本的前处理： ①总GAPDH酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。 ②胞浆和叶绿体GAPDH酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆GAPDH酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g 离心10min，取上清测定叶绿体中GAPDH酶活性。 建议测定总GAPDH酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的GAPDH，则按照步骤②提取粗酶液。 细菌或培养细胞的前处理： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 测定步骤： 第1页，共2页
3-磷酸甘油醛脱氢酶
货号：QS2205-25 规格：25管/24样 3-磷酸甘油醛脱氢酶 (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书 分光光度法 正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。 测定原理： 3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。 自备实验用品及仪器： 分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：30mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存； 试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：液体×1支，4℃保存； 样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 （1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟；现配现用。 （2）在试剂三中加入500μL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂4℃保存一周。 （3）在1mL石英比色皿中加入30μL样本、20μL试剂三和950μL工作液，混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。 第1页，共2页
3- 磷酸甘油酸激酶(3- Phosphoglycerate kinase ,PGK )试剂盒说明书
货号：MS2208 规格：100管/96样 3-磷酸甘油酸激酶 （3-Phosphoglycerate kinase，PGK）试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义； 3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。 测定原理； 3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。 自备实验用品及仪器； 天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。 试剂组成和配制； 提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存。 试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加4 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 酶液提取； ①总PGK酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定。 ②胞浆和叶绿体PGK酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液），冰浴匀浆后于4℃，500g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定叶绿体中PGK酶活性。 建议测定总PGK酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK，则按照步骤②提取粗酶液。 测定操作； 1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 第1页，共2页
3- 磷酸甘油酸激酶
货号：QS2208 规格：50管/48样 3- 磷酸甘油酸激酶 （3-Phosphoglycerate kinase，PGK）试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义: 3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。 测定原理: 3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。 自备实验用品及仪器: 天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。 试剂组成和配制: 提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2.5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2.5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加10 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 酶液提取： ①总PGK酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定。 ②胞浆和叶绿体PGK酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液），冰浴匀浆后于4℃，500g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定叶绿体中PGK酶活性。 建议测定总PGK酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK，则按照步骤②提取粗酶液。 测定操作： 1.分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 第1页，共2页