机能实验 肾缺血再灌注
影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤
（南方医科大学广州 510515）
【摘要】目的探究影响肾泌尿功能的因素，探究肾缺血后再灌注对肾的损伤现象。方法静脉分别补充37℃的生理盐水和20%的高渗葡萄糖，观测平均动脉压，尿量；结扎左肾动脉，一段时间后松开动脉夹再灌注，观测平均动脉压，尿量，血肌酐和尿肌酐含量，计算内生肌酐清除率(Ccr)。结果补充37℃的生理盐水和20%的高渗葡萄糖尿生成量增加，缺血再灌注后血肌酐浓度增高，尿肌酐浓度降低,内生肌酐清除率(Ccr)明显降低。结论增加血容量，肾滤过血液增多，尿生成增加；注射高渗溶液增加肾小管内原尿浓度，尿生成量增加；缺血再灌注后肾排泄能力降低，肾的功能受损。
【关键词】尿生成；肾缺血再灌注损伤；尿肌酐；内生肌酐清除率
肾是机体主要的排泄器官之一，探究影响肾泌尿功能的因素有助于利尿药等干预肾脏功能药物的研发；肾缺血再灌注(Ischemic reperfusion，I／R)损伤是临床上常见的病理过程，在肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中，均可发生不同程度的再灌注损伤，它是急性肾衰最常见的原因，因此探究肾的缺血再灌注这一病理现象具有重要意义。肾缺血再灌注时，内生肌酐清除率（Ccr）明显降低，肾功能受损.本实验通过复制肾脏缺血再灌注损伤的模型，对肾脏缺血再灌注损伤后血肌酐和尿肌酐的含量，以及内生肌酐清除率（Ccr）进行测定，来探究肾脏的缺血再灌注损伤。
1 材料与方法
1.1 实验材料
动物：家兔
器材：医用计算机记录系统，家兔手术台，哺乳动物手术器械，压力换能器，动脉静脉插管，三通管，注射器，兔绳，分光光度计，恒温水浴箱。
药品与试剂：20%乌拉坦，0.2%肝素，生理盐水，20%葡萄糖溶液，速尿，肌酐测定试剂。
1.2 探究影响尿生成的因素的方法[1]
家兔称重后用20%乌拉坦耳缘静脉麻醉，麻醉后将家兔仰卧位固定在兔台上。家兔颈部剪毛，沿甲状软骨下正中剪开皮肤5cm，分离右侧颈总静脉和左侧颈总动脉。从右侧颈总静脉插入静脉导管，左侧颈总动脉插管，连接压力换能器用于记录血压。将家兔换成右侧卧位，在左肋弓下缘两指处做一斜形切口，辨认输尿管并进行输尿管插管，用有刻度的试管收集尿液并计算每分钟尿量，取此时的尿液测量尿肌酐。静脉输入30ml生理盐水，用有刻度的试管收集尿液并计算
注射后每分钟尿量。一段时间后静脉输入10ml 20%葡萄糖溶液，用有刻度的试管收集尿液并计算注射后每分钟尿量。
1.3 肾缺血再灌注损伤模型复制的方法
游离左肾动脉，用动脉夹夹闭，夹闭即刻观测动脉血压和尿量变化，夹闭30min后观测动脉血压和尿量变化。松开动脉夹，再灌注，同时静脉输入19ml 生理盐水加1ml速尿，再灌注30min后取尿测定尿肌酐浓度。
1.4 尿肌酐测定方法
取样取尿液10μl与2ml蒸馏水按1：200比例稀释。
加样
测定37℃10min水浴，以蒸馏水调零，测510 nm处光密度。
计算肌酐(μmol/L) =（测定管OD -空白管OD）/（标准管OD –空白管OD）x 标准品浓度x 201倍
内生肌酐清除率Ccr (ml/min) = 尿肌酐浓度/ 血肌酐浓度x 尿量
2 结果
2.1 血压记录
输入生理盐水后，血压上升，输入20%葡萄糖后，血压上升不明显，缺血再灌注后血压下降。
2.2 尿量记录
输入生理30ml盐水后，尿量增加，输入20%葡萄糖后，尿量增加更明显；再灌注后尿量又明显减少。
2.3尿肌酐含量测定数据
缺血再灌注后尿肌酐浓度下降。缺血再灌注后的Ccr较缺血再灌注前降低。
3 讨论
3.1 影响尿液生成的因素[2]
实验中我们观察到，静脉输入30ml生理盐水和10ml20%葡萄糖后，家兔尿量增加。由于补充了上述两种液体，血液被稀释，血浆蛋白质浓度降低，血浆胶体渗透压降低，导致肾小球滤过率增加，尿量增加；再者，补液后血流量增大，由于肾血流量的神经-体液调节机制，促使肾动脉扩张，尿液生成增加。
3.2 肾缺血再灌注损伤[3]
实验中我们观察到，肾缺血30min后再灌注，尿肌酐浓度和内生肌酐清除率Ccr都较缺血前的降低了，说明肾小球受到了损伤，导致其滤过作用降低。缺血再灌注的发生机制如下：
1 活性氧损伤作用：线粒体产生活性氧增加；血管内皮细胞黄嘌呤氧化酶形成增加，通过通过黄嘌呤氧化酶途径产生大量活性氧；白细胞呼吸爆发产生大量活性氧，儿茶酚胺的自身氧化，诱导型NOS表达增加，都导致活性氧的大量产生，再加上再灌注后机体清除活性氧的能力下降，更是增加了肾内活性氧含量。这些活性氧攻击细胞膜，造成膜脂质过氧化，使蛋白质分子发生氧化反应，引起DNA损伤，破坏了细胞间基质，造成细胞功能障碍。活性氧是各种损伤机制学说中重要的启动因素。
2 钙超载机制：缺血再灌注后大量产生的活性氧破坏细胞质膜和细胞器膜，造成膜的通透性增加和结构损伤，从而使胞外的钙离子内流增加，胞内肌浆网和内质网钙离子的转运障碍；缺血再灌注后，氧自由基引起了线粒体膜的损伤，抑制了氧化磷酸化作用，使ATP合成减少，ATP依赖性离子泵功能障碍；缺血缺氧时，胞内PH降低（胞内酸中毒），恢复灌注使胞内和胞外形成PH差，钠离子和氢离子交换增加，使胞内钠离子过荷，从而促进钠钙交换反转，使胞外钙离子大量内流；缺血再灌注时儿茶酚胺大量产生，通过α和β受体使钙离子内流增加。细胞内钙超载是细胞不可逆性损伤的共同通路。
3 白细胞的作用：缺血再灌注使肾内趋化因子生成增多，细胞粘附分子表达增多，致使白细胞聚集，大量的白细胞聚集在再灌注区，阻塞微循环，释放活性氧，释放各种颗粒成分，产生各种致炎性细胞因子，总之，白细胞活化后产生的各种趋化物质可以促使更多的白细胞聚集，引起微循环障碍，聚集的白细胞释放活性氧和各种生物活性物质，使炎症反应失控，造成再灌注后肾组织的损伤。白细胞聚集是缺血再灌注损伤引起各脏器功能障碍的关键步骤。
4 补体级联的损伤作用：缺血再灌注时期补体系统被激活，过敏毒素的释放和膜攻击复合物的装配直接或间接地导致缺血组织损伤，包括了补体介导的溶胞作用和补体级联反应释放大量促炎因子两个步骤。补体级联的激活是各种炎症反应发生和放大的主要动力。
【参考文献】
[1] 金春华主编.<< 机能实验学>> 北京：科技出版社2006:102-105
[2] 2006刘先国主编<<生理学>>（第二版）科学出版社2010：178-185
[3] 姜勇主编.<<病理生理学>>. 北京:高等教育出版社2011.06：173-181
机能学实验报告
实验一、小肠平滑肌生理特性的观察与分析 一、实验目的—— 1. 观察温度、乙酰胆碱、肾上腺素等药物对离体家兔小肠平滑肌的作用； 2. 观察消化道平滑肌的一般生理特性及分析理化环境改变对其舒缩活动的影响。 二、实验原理 消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧性收缩，对化学物质、温度变化及牵刺激较敏感等特性。小肠离体后，置于适宜的溶液中，观察其收缩活动及环境变化的影响，观察分析上述生理特性。 三、实验材料—— 1、实验动物：家兔 2、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、力换能器(量程为25g以下)、BL-410生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/L NaOH溶液、lmol/L HCl溶液、2%CaCl2溶液。 四、实验方法和步骤 1、标本制备流程： ①击昏家兔： 用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。 ②剖开腹腔快速取出肠管： 立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长20~30cm的肠管，先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠容物基本洗净。 ③制作离体肠标本： 将肠管分成数段，每段长2-3cm，两端各系一条线，保存于供氧的38℃左右的台氏液中 2、仪器安装与调试实验安装（如图）： 恒温水浴锅控制加热，恒温工作点定在38℃。将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接，将肠段一端系在通气管钩上，另一端与力换能器相连。控制通气量，使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。 仪器调试：BL-410系统的使用，选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置的参考值：时间常数t→DC，高频滤波 F→30Hz，显速→4.00s/div，增益→100g。用鼠标左键单击工具条上的“开始”按钮，调节参数至波形幅度、密度适当，待收缩曲线稳定后，单击记录按钮。 观察项目现象及解释 1．待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。 2．乙酰胆碱的作用用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜温台氏液，由此反复3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。 3．肾上腺素的作用按上述方法将0.01%肾上腺素加入浴槽1~2滴，观察小肠运动的反应。当效果明显后，立即更换台氏液。 4．氯化钙的作用加2%CaC12溶液2~3滴入灌流浴槽，观察其反应，效果明显后迅速冲洗。5．盐酸的作用加1~2滴1mol/L HCl溶液入浴槽，观察其反应。
影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤
影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤第一作者：XXX 学号专业 第二作者：XXX 学号专业 单位：南方医科大学第二临床医学院 地址：广州市广州大道北1838号 [摘要]尿生成包括肾小球的滤过作用、肾小管与集合管的重吸收和分泌作用。影响肾小球滤过的因素包括滤过膜的面积和通透性、有效滤过压、肾小球毛细血管压、血浆胶体渗透压、肾小囊内压、肾血流量（自身调节）。影响肾小管与集合管的重吸收和分泌作用包括小管液中溶质的浓度、肾小球滤过率（管球平衡）、影响肾小管上皮细胞对水对通透性和离子的重吸收作用的体液因子和药物。 [关键词]尿生成肾缺血再灌注 肾是机体主要的排泄器官之一，探究影响肾泌尿功能的因素有助于利尿药等干预肾脏功能药物的研发；肾缺血再灌注损伤是临床上常见的病理过程，在肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中，均可发生不同程度的再灌注损伤，它是急性肾衰最常见的原因，因此探究肾的缺血再灌注这一病理现象具有重要意义。肾缺血再灌注时，内生肌酐清除率（Ccr）明显降低，肾功能受损.本实验通过复制肾脏缺血再灌注损伤的模型，对肾脏缺血再灌注损伤后血肌酐和尿肌酐的含量，以及内生肌酐清除率（Ccr）进行测定，来探究肾脏的缺血再灌注损伤。 1材料与实验动物 主要试剂20%乌拉坦，0.2%肝素，生理盐水，20%葡萄糖溶液，蒸馏水，速尿剂，肌酐测定试剂（含试剂一、试剂三、试剂四）。 仪器医用计算机记录系统（PcLab）及计算机，家兔手术台，哺乳动物手术器械，动脉 静脉输尿管插管，压力换能器，三通管，注射器，兔绳，纱布，剪刀，分光光度计，恒温水浴箱，试管，微量加样枪带枪头，称重称。
实验动物家兔一只，体重2.4kg，由南方医科大学提供 实验前准备 家兔称重2.4kg，用20%乌拉坦12.0ml耳缘静脉麻醉，麻醉后将家兔仰卧位固定在兔台上。家兔颈部备皮，沿甲状软骨下正中剪开皮肤，分离右侧颈总静脉并从右侧颈总静脉插入静脉导管。动脉插管用肝素充盈，分离左侧颈总动脉并左侧颈总动脉插管，连接压力换能器用于记录平均动脉压ABP。家兔耻骨下联合备皮后沿前正中线剪开皮肤，找到输尿管并进行输尿管插管并用有刻度的试管收集尿液。 实验方法 研究尿生成过程影响因素：静脉推注37℃，30ml生理盐水，用有刻度的试管收 集尿液并计算注射后每分钟尿量（ml/分钟）；一段时间后静脉输入37℃，10ml 20%葡萄糖溶液，用有刻度的试管收集尿液并计算注射后每分钟尿量。收集的尿液待测尿肌酐含量。 肾缺血再灌注损伤的实验：将家兔换成右侧卧位，游离左肾动脉，用动脉夹夹 闭，并观测平均动脉压和尿量变化，夹闭30min后观测平均动脉压和尿量变化。松开动脉夹，再灌注，同时静脉输入49ml 生理盐水加1ml速尿，再灌注30min后取尿测定尿肌酐浓度，记录平均动脉压和尿量变化。收集尿液待测尿肌酐含量。 尿肌酐测定方法： 取样：取尿液10μl与2ml蒸馏水按1：200比例稀释。 加样如下： 尿肌酐测定加Array 样量表
不同温度对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的影响
不同温度对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的 影响 作者：张晓丽夏世金严震文肖婧张振兴叶志斌 【摘要】目的探讨不同温度对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤（IRI）的影响及其机制。方法雄性C57BL/6N小鼠随机分为假手术组（sham组）、轻度低温IRI组（LTI）、常温IRI组（NTI）和高温IRI 组（HTI）。采用夹闭双侧肾蒂35 min再灌注48 h制成IRI模型。观察IRI小鼠肾脏组织病理学改变，检测肾功能、肾组织丙二醛（MDA）含量和肾小管上皮细胞凋亡数目。结果与Sham组相比，常温IRI组小鼠发生中等程度肾损伤，其Scr升高〔（237.0±41.2）μmol/L〕，肾组织形态学改变，肾组织中MDA含量升高〔（1.54±0.37）μmol·L-1·mg-1〕，肾小管上皮细胞凋亡数目增加。高温明显加重小鼠的IRI损伤（P＜0.05），轻度低温对小鼠IRI具有保护作用。结论缺血阶段体温的高低明显影响小鼠肾IRI的程度，轻度低温可能通过抑制脂质过氧化反应和细胞凋亡对小鼠发挥保护作用；高温则可能通过促进脂质过氧化反应和细胞凋亡加重肾IRI。 【关键词】高温；肾脏；缺血再灌注；凋亡 肾脏是一高灌注器官，对缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury，IRI）异常敏感，故IRI成为急性
肾损伤的重要损伤环节〔1〕，也是影响肾移植中移植肾早期功能恢复及长期存活的主要因素〔2〕。鉴于肾IRI病理生理学机制复杂〔3〕，涉及此方面的研究一直走在移植学研究的前沿。肾IRI动物模型为急性缺血性肾损伤的发生机制和防治策略研究奠定了基础。制作肾IRI 动物模型的方法包括双侧肾蒂夹闭、双侧肾动脉夹闭、单侧肾切除+对侧肾动脉夹闭等。手术方法不同、血管夹闭的时间长短、手术操作过程中温度的控制均对实验结果有着重要影响，尤其是术中温度在此过程中起着不可忽视的作用。本文通过调控肾缺血过程中小鼠体温，观察不同温度对小鼠肾IRI的影响，以期为临床上辅助治疗IRI的新途径提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物与分组 雄性C57BL/6N小鼠24只，22～26 g（SPF级，中科院上海实验动物中心），随机分假手术（Sham）组、轻度低温IRI组（LTI）、常温IRI组（NTI）和高温IRI组（HTI），每组6只。 1.2 模型制作 2%戊巴比妥钠（50 mg/kg）腹腔注射麻醉小鼠，取腹正中切
脑缺血再灌注损伤机制及治疗进展
脑缺血再灌注损伤机制及治疗进展 西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科710004 薛荣亮 脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR）。 脑缺血再灌注损伤与自由基的生成、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。急性局灶性脑缺血引起的缺血中心区死亡以细胞坏死为主，目前认识的比较清楚，即脑缺血后5-7分钟内，细胞能量耗竭，K+通道受阻，膜电位降低，神经末梢释放谷氨酸，通过兴奋谷氨酸受体（包括NMDA 、AMPA和KA 受体）致使细胞膜上的Ca2+通道开放，引起Ca2+超载，高Ca2+可激活NOS，使NO和氧自由基的形成增加，引发脂质过氧化，引起膜结构和DNA的损伤；Ca2+还可活化各种酶类，加剧细胞损伤和能量障碍，引发缺血级联反应，结果细胞水肿、细胞膜破裂，细胞内酶和炎性介质释放，引起细胞坏死。 近年来认识到半暗带区域于再灌注数天后出现了迟发性神经元死亡(DND)，DND常出现在缺血再灌注后2-4日，主要发生在海马、纹状体及皮质区域，DND需要数日时间、有新蛋白质合成的、需要消耗能量的、为无水肿的细胞自杀过程，称之为细胞凋亡(PCD)。脑缺血再灌注损伤既包括急性细胞坏死也包括细胞凋亡，对于DND的确切机制目前仍不清楚，尚需进一步深入研究。 现对脑缺血再灌注损伤机制的研究进展及保护措施简述如下：1．基因活化 脑缺血再灌注损伤后可出现大量基因表达，大约有374种基因出现
变化，绝大多数基因与凋亡有关，其中57种基因的蛋白表达是缺血前的 1.7倍，而34种基因的表达量出现下降，均发生在4小时到72小时, 包括蛋白质合成，基因突变，促凋亡基因，抑凋亡基因和损伤反应基因变化等，这些基因的相互作用最终决定了DND的发生。 2．兴奋性氨基酸毒性 兴奋性氨基酸毒性是指EAA受体活化而引起的神经元死亡，是脑缺血性损伤的重要触发物和介导物。EAA可活化胞内信号转导通路，触发缺血后致炎基因表达。CA1区神经细胞分布着大量的EAA受体，而抑制性氨基酸受体分布很小，这就为缺血后的兴奋性毒性提供了基础。另外，CA1区较CA3区对缺血损伤敏感是由于其兴奋性氨基酸受体的类型不同，CA1区以NMDA受体为主，CA3区以KA受体为主，而KA 受体对缺血敏感性较差，可能是造成DND发生的重要原因。 3．自由基及脂质过氧化 脑缺血再灌注期间产生大量自由基。其有害作用可概括为：①作用于多价不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化。②诱导DNA、RNA、多糖和氨基酸等大分子物质交联，交联后的大分子则失去原来的活性或功能降低。③促使多糖分子聚合和降解。自由基可广泛攻击富含不饱和脂肪酸的神经膜与血管，引发脂质过氧化瀑布效应(oxygen burst)，蛋白质变性，多核苷酸链断裂，碱基重新修饰，细胞结构的完整性破坏，膜的通透性、离子转运、膜屏障功能均受到严重影响，从而导致细胞死亡。自由基还能导致EAA释放增加，促使脑缺血后DND发生。 4．热休克蛋白表达紊乱 热休克蛋白是在多种应激原的作用下生成的分子量为7-200KD的
机能学实验报告
机能学实验报告 实验一、小肠平滑肌生理特性的观察与分析 一、实验目的—— 1.观察温度、乙酰胆碱、肾上腺素等药物对离体家兔小肠平滑肌的作用； 2.观察消化道平滑肌的一般生理特性及分析理化环境改变对其舒缩活动的影响。 二、实验原理 消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧张性收缩，对化学物质、温度变化
及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后，置于适宜的溶液中，观察其收缩活动及环境变化的影响，观察分析上述生理特性。 三、实验材料--- 1、实验动物：家兔 2、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、张力换能器（量程为25g以下）、BL-410生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/L NaOH溶液、lmol/L HCl 溶液、2%CaCI2溶液。 四、实验方法和步骤 1、标本制备流程： ①击昏家兔： 用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。 ②剖开腹腔快速取出肠管： 立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长20~30cm的肠管，先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠内容物基本洗净。 ③制作离体肠标本： 将肠管分成数段，每段长2-3cm，两端各系一条
线，保存于供氧的38C左右的台氏液中 2、仪器安装与调试实验安装（如图）： 恒温水浴锅控制加热，恒温工作点定在38C。 将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接，将肠段一端系在通气管钩上，另一端与张力换能器相连。控制通气量，使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。 仪器调试：BL-410系统的使用，选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置的参考值：时间常数t -DC 高频滤波 F —30Hz,显速—4.00s/div，增益—100g。用鼠标左键单击工具条上的“开始” 按钮，调节参数至波形幅度、密度适当，待收缩曲线稳定后，单击记录按钮。 观察项目现象及解释 1.待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。 2?乙酰胆碱的作用用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜温台氏液，由此反复3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行
小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型
小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型 缺血再灌注损伤(IRI)是器官移植、休克、动脉搭桥术后等普遍存在的问题。肾脏是发生IRI极为常见的器官之一，尤其肾移植，不可避免的要经历一定程度的IRI,肾脏缺血再灌损伤是急性肾衰的常见原因。对麻醉动物的肾动脉进行阻断和再通后，可引起肾脏缺血再灌注损伤。在缺血再灌注过程中，钙超载、线粒体能量合成障碍、氧自由基的增多等因素导致肾小管内皮细胞脱落，肾脏组织结构的破坏进而使肾脏功能发生障碍。 1.实验动物 SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。 2.实验分组： 实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15只动物。 3.模型周期 24h、72h 4.建模方法 1. 选取20-22g左右小鼠，术前禁食12h，自由饮水。 2. 3％戊巴比妥钠(80mg／kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒备皮。 3. 在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏,小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。 4. 缺血45min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。 5. 分两层缝合开口,待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。 6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。 7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。 5.模型的评价 1 血清生化指标检测： 取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。
机能实验学离体肠实验
机 能 实 验 学 实 验 报 告 课题名称：传出神经药物对离体肠肌的作用院（系）：韶关学院医学院 专业班级：2011级临床医学本科班 学生姓名：符宏展 学号：112 指导教师：梁俊辉 二○一三年六月五日
机能实验报告 实验目录： 1 实验目的 2 实验装置和器材 3 实验药物 4 实验动物 5 实验原理 6 实验方法 7 实验注意事项 8 实验结果 实验数据 实验记录波型及静态测量数据 9 实验结果讨论 10 实验结论 11 实验思考
实验报告 实验次序：九实验项目：传出神经药物对离体肠肌的作用班级：11临本姓名：符宏展学号：112 实验类型（打√）：（基础□综合□设计□） 一、实验预习 实验预习报告内容原则上应包含实验目的、实验原理、实验主要仪器、试剂及实验步骤。 实验目的： 掌握：1.消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对它的影响。 2.哺乳动物离体器官灌流法。 实验装置和器材：RM6240生物信号采集与处理系统、离体器官恒温灌流仪、氧气瓶、张力换能器、烧杯、滴管等。 实验药物：蒂罗德溶液、0.01%肾上腺素、0.01% 乙酰胆碱、0.01%阿托品、0.1%普萘洛尔、0.1%酚妥拉明等。 实验动物：家兔 实验原理： 哺乳动物消化道平滑肌具有收缩性、缓慢而不规则的自动节律性、伸展性和对化学、温度及机械牵张刺激较为敏感等生理特性。 消化道平滑肌常保持微弱的持续收缩状态，即有一定的紧张性。本实验应用不同的化学刺激、神经递质和药品作用于离体平滑肌，以了解其一般生理特性及药物的影响。 家兔小肠平滑肌上存在α、β、Ｍ受体。α、β受体兴奋可使小肠平滑肌抑制而舒张；Ｍ受体兴奋可使小肠平滑肌兴奋而收缩。观察乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素等传出神经系统药物对离体家兔小肠平滑肌的作用并掌握离体平滑肌的实验方法。 实验方法： 1.仪器的准备：恒温浴槽的水箱加入适当的水,设置温度为38℃； 2.动物手术：制备离体肠肌标本； 3.安装实验装置：肠段置于恒温灌流仪的内槽,下端系在钩上,上端与张力换能器相连。氧气袋开口的针头插入标本槽下端的橡皮管内,人工加压控制出气量,使气泡呈单个逸出； 4.观察项目： ⑴观察正常小肠平滑肌运动的节律、波形和幅度； ⑵给予0.01%乙酰胆碱2滴，观察收缩曲线的变化； ⑶给予0.01%阿托品2～4滴，观察收缩曲线的变化。1~2min后再加入乙酰胆碱2滴于浴槽内，观察收缩曲线的变化； ⑷给予0.01%肾上腺素2滴，观察收缩曲线的变化； ⑸给予0.1%普萘洛尔2滴，观察收缩曲线的变化。2min后加入0.01%肾上腺素2滴，观察收缩曲线的变化；1min后加入0.1%普萘洛尔2滴，观察收缩曲线的变化； ⑹给予0.1%酚妥拉明2滴，观察收缩曲线的变化。2min后加入0.01%肾上腺素2滴，观察收缩曲线的变化；1min后加入0.1%酚妥拉明2滴，观察收缩曲线的变化；
第二十三讲缺血再灌注损伤概论修订版
第二十三讲缺血再灌注 损伤概论 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
第二十三章缺血－再灌注损伤 一、基本要求 1. 掌握自由基、活性氧、缺血－再灌注损伤、氧反常、钙反常、pH反常、钙超载、无复流现象和呼吸爆发的概念, 重点掌握缺血－再灌注损伤的发生机制。 2. 熟悉缺血－再灌注损伤的原因和条件, 熟悉缺血－再灌注损伤时机体的功能和代谢变化。 3. 了解防治缺血－再灌注损伤的病理生理基础。 二、知识点纲要 （一）缺血－再灌注损伤的概念 各种原因造成组织血液灌流量减少，可使细胞发生缺血性损伤。再灌注具有两重性，多数情况使缺血组织和器官的功能结构得以修复，患者病情得到控制。但是，部分患者或动物缺血后再灌注，不仅没使组织器官功能恢复，反而使缺血所致功能代谢障碍和结构破坏进一步加重，这种现象称为缺血－再灌注损伤。与之密切相关的概念，还有氧反常、钙反常和pH反常。缺血－再灌注损伤在不同种属和各种组织器官均可发生，具有普遍性。 ( 二 ) 缺血－再灌注损伤的原因和条件 再灌注损伤取决于缺血时间、侧支循环、需氧程度以及电解质浓度。 ( 三 ) 缺血－再灌注损伤的发生机制 1. 自由基的作用 (1) 自由基的概念、特性、类型、体内代谢和生物学意义 (熟悉和了解) (2) 缺血－再灌注时氧自由基生成增多的机制 (掌握) 1) 黄嘌呤氧化酶形成增多； 2) 中性粒细胞的呼吸爆发；3) 线粒体损伤，氧分子单电子还原增多；4) 儿茶酚胺增加，自氧化增强。 (2) 自由基的损伤作用(掌握) 1) 生物膜脂质过氧化增强导致①膜结构破坏──膜的液态性和流动性减弱，通透性增强；②抑制膜蛋白功能──离子泵失灵和细胞内信号传递障碍；③线粒体功能受损──ATP 生成减少。 2) 细胞内Ca2+超载源于自由基引起细胞膜通透性增强，膜上Na+-K+-ATP酶失活和线粒体功能障碍。 3) DNA 断裂和染色体畸变外面无组蛋白保护的线粒体DNA对氧化应激敏感。 4) 蛋白质变性和酶活性降低自由基可引起蛋白质分子肽链断裂，使酶的巯基氧化。 5) 诱导炎症介质产生自由基可导致脂质过氧化和胞内游离钙增加，激活磷脂酶，脂加氧酶及环加氧酶。 2. 钙超载 (1) .细胞内钙稳态调节 (熟悉和了解) (2) 再灌注时细胞内钙超载的机制 (掌握) 1) Na+－Ca2+交换异常；2) 细胞膜通透性增高；3) 线粒体功能障碍；4) 儿茶酚胺增多。 (3) 钙超载引起再灌注损伤的机制 (掌握)
肾脏缺血再灌注损伤机制及其影响因素的研究进展
Journal of Physiology Studies 生理学研究, 2016, 4(3), 19-29 Published Online August 2016 in Hans. https://www.360docs.net/doc/a84420794.html,/journal/jps https://www.360docs.net/doc/a84420794.html,/10.12677/jps.2016.43003 文章引用: 王翔宇, 马云波. 肾脏缺血再灌注损伤机制及其影响因素的研究进展[J]. 生理学研究, 2016, 4(3): 19-29. The Research Progress of Kidney Ischemia-Reperfusion Injury on Mechanism and Its Influencing Factors Xiangyu Wang, Yunbo Ma Department of Urology, Liaocheng People’s Hospital, Liaocheng Shandong Received: Nov. 14th , 2016; accepted: Dec. 24th , 2016; published: Dec. 27th , 2016 Copyright ? 2016 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/a84420794.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when the blood flow to the particular organ is ob-structed, followed by the restoration of blood to the ischemic organ. In the kidney, IRI contributes to pathological conditions called acute kidney injury (AKI) that is a clinical syndrome with rapid kidney dysfunction and high mortality rates. Although the pathophysiology of IRI is very compli-cated and is not completely understood, several important mechanisms resulting in kidney failure have been mentioned. IRI usually is associated with an inflammatory reaction, oxidative stress, intracellular Ca 2+ overload, renin-angiotensin activation and microcirculation disturbance. Better understanding of the cellular pathophysiological mechanisms underlying kidney injury will hope- fully result in the design of more targeted therapies to prevent and treat the injury. In this review, we summarize some important potential mechanisms and therapeutic approaches in renal IRI. Keywords Ischemia-Reperfusion Injury, Kidney Injury, Free Radical, Ca 2+ Overload, Inflammation 肾脏缺血再灌注损伤机制及其影响因素的研究进展 王翔宇，马云波 Open Access
机能实验报告文档
机能实验报告文档 Functional experiment report document 编订：JinTai College
机能实验报告文档 小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。本文档根据实验报告内容要求展开说明，具有实践指导意义，便于学习和使用，本文下载后内容可随意修改调整及打印。 Ach对离体家兔小肠运动作用 摘要 目的：观察乙酰胆碱对离体家兔小肠肠肌的影响和机制。方法：将离体小肠固定在离体小肠灌流装置里，在保证各影响因素不相互干扰的情况下,分别给予家兔离体肠肌标本生理盐水（Nacl）、Ach、阿托品、阿托品+乙酰胆碱刺激，完成每次刺激并出现明显现象后用38℃的台氏液冲洗肠肌标本，观察其收缩活动的特点并记录。结果：结果显示当滴加生理盐水（Nacl）刺激离体肠肌时，张力曲线没什么变化；当用乙酰胆碱刺激离体肠肌时，张力曲线则明显上升，且频率加快；当滴加阿托品刺激时，张力曲线明显下降，且频率减慢；当滴加乙酰胆碱加上阿托品刺激时，张力曲线变化较不规则。结论：乙酰胆碱（Ach）对离体家兔肠肌有增强其运动的作用，且作用
于M受体。中文关键词：离体家兔小肠肠肌；乙酰胆碱；张 力曲线 Abstract： Objective: to observe the acetylcholine on the influence and mechanism of intestinal muscle of rabbit small intestine in vitro. Methods: in vitro small intestine in vitro intestinal perfusion device fixed, in guarantee under the condition of each influence factor does not interfere with each other, in vitro intestinal muscle specimens were given the rabbit saline （Nacl）, Ach, atropine, atropine + acetylcholine stimulation, complete with 38 ℃ after each stimulus and a significant phenomenon of Taiwan's fluid colonics muscle specimens and observe the characteristics of its contraction activities and record. Results: the results showed that when add saline （Nacl） stimulation in vitro intestinal muscle, nothing change tension curve; When using the acetylcholine stimulation in vitro intestinal muscle, tension curves are obvious rise, and the frequency to speed up; When add atropine stimulation, tension curve
缺血-再灌注损伤的发生机制
一、自由基的作用（一）自由基的概念与类型自由基（freeradical）的化学性质极为活泼，易于失去电子（氧化）或获得电子（还原），特别是其氧化作用强，故具有强烈的引发脂质过氧化的作用。生理情况下，细胞内存在的抗氧化物质可以及时清除自由基，使自由基的生成与降解处于动态平衡；对机体并无有害影响。病理情况下，由于活性氧生成过多或机体抗氧化能力不足，则可引发链式脂质过氧化反应损伤细胞膜，进而使细胞死亡。其种类很多，主要包括： 1.氧自由基 2.脂性自由基 3.其它（二）氧自由基生成增多的机制 1.黄嘌呤氧化酶的形成增多黄嘌呤氧化酶（xanthineoxidase，XO）及其前身黄嘌呤脱氢酶（xanthinedehydrogenase，XD）主要存在于毛细血管内皮细胞内。正常情况下，90％以XD的形式存在，XO仅占10％。1）当组织缺血缺氧时，由于ATP含量降低，离子转运功能障碍，Ca2+进入细胞激活Ca2+依赖性蛋白酶，促使XD大量转变为XO. 2）由于ATP 分解，ADP、AMP含量升高，并依次分解生成次黄嘌呤，故缺血组织中次黄嘌呤大量堆积。再灌注时，大量分子氧随血液进入缺血组织，XO在催化次黄嘌呤转变为黄嘌呤并进而催化黄嘌呤转变为尿酸的两步反应中，释放出大量电子，为分子氧接受后产生O-2和H2O2.H2O2在金属离子参与下形成更为活跃的OH.，使组织O-2、OH.、H2O2等活性氧大量增加。 2.中性粒细胞中性粒细胞在吞噬活动时耗氧量增加，其摄人O2的70％-90％在NADPH氧化酶和NADH 氧化酶的催化下，接受电子形成氧自由基，用于杀灭病原微生物。组织缺血可激活补体系统，或经细胞膜分解产生多种具有趋化活性的物质，如C3片段、白三烯等，吸引、激活中性粒细胞。再灌注期组织重新获得O2供应，激活的中性粒细胞耗氧量显著增加，产生大量氧自由基，称为呼吸爆发（respiratoryburst）或氧爆发（oxygenburst），造成细胞损伤。（三）自由基的损伤作用自由基发生剂可使正常及缺血组织细胞受到严重损伤，自由基清除剂则可有效减轻缺血-再灌注损伤。自由基具有极为活泼的反应性，自由基一旦生成，即可经其中间代谢产物不断扩展生成新的自由基，形成连锁反应。自由基可与各种细胞成分，如膜磷脂、蛋白质、核酸等发生反应，造成细胞结构损伤和功能代谢障碍。 1.膜脂质过氧化（1ipidperoxidation）增强：自由基对磷脂膜的损伤作用主要表现在其可与膜内多价不饱和脂肪酸作用使之发生过氧化，造成多种损害：①破坏膜的正常结构。脂质过氧化使膜不饱和脂肪酸减少，不饱和脂肪酸/蛋白质的比例失调，膜的液态性、流动性降低，通透性增加，细胞外内流增加；②间接抑制膜蛋白功能。③促进自由基及其它生物活性物质生成。形成多种生物活性物质，如前列腺素、血栓素、白三烯等，促进再灌注损伤；④减少ATP生成。线粒体膜脂质过氧化，导致线粒体功能抑制，ATP生成减少，细胞能量代谢障碍加重。 2.蛋白质功能抑制自由基可使酶的巯基氧化，形成二硫键；也可使氨基酸残基氧化，胞浆及膜蛋白和某些酶交联形成二聚体或更大的聚合物，直接损伤蛋白质的功能 3.破坏核酸及染色体自由基可使碱基羟化或DNA断裂，从而引起染色体畸变或细胞死亡。
肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明
肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明 ?原型物种人 ?来源缺血再灌注，双侧肾动脉夹闭法 ?模式动物品系SD大鼠，SPF级，雄性，体重220g~250g ?实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组 ?实验周期24h or 72h ?建模方法1. 选取250g左右大鼠，术前禁食12h，自由饮水。 2. 15％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉,大鼠背部去毛，消毒备 皮。 3. 在背部脊椎旁1cm、肋骨下缘1cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏, 小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。 4. 缺血60min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。 5. 分两层缝合开口，待大鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲 养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。 7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。麻 醉大鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。 ?应用疾病模型
1. 血清生化指标检测： 取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。 2. 肾系数检测 摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。 肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g） 3. 肾小管坏死的评分 每张切片×200 倍镜下取外髓质部10 个视野，按0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%) ，2= 轻度损伤(受损肾小管5 %～25 %) ，3 = 中度损伤(受损肾小管25 %～75 %) ，4 = 重度损伤(受损肾小管> 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数 4％多聚甲醛溶液固定48h。常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡切片进行HE染色和PAS染色。 对照组大鼠肾小球、肾小管及肾间质结构基本正常。在模型组，随着再灌注时间的延长呈现不同程度的肾脏病理改变，可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀，出现水样或空泡变性，刷状缘消失，部分肾小管上皮细胞凝固性坏死、脱落，腔内可见管型，并可见间质水肿，间质内灶性炎症细胞浸润，肾小球病变不明显。
肝脏缺血再灌注的损伤机制及和防治
肝脏缺血再灌注的损伤机制及和防治 摘要：缺血再灌注损伤是Jennings第一次提出的，是指组织或器官在缺血后紧接着得到血液供应，但是这时血液的供应不利于缺血的组织、器官的功能的恢复，甚至加重了代谢的障碍、结构的破坏。本文的肝脏缺血再灌注损伤是肝脏术后肝功能异常、原发性肝移植无功能、肝衰竭的重要原因之一【1】。肝脏缺血再灌注损伤的后果往往取决于缺血时间的长短、肝脏储备功能的强弱等【2】。目前。肝脏缺血再灌注损伤是肝脏外科的研究热点，普遍认为其病理机制是多种机制共同作用的结果，防治主要是缺血预处理、药物预处理和缺血后处理。 1.肝脏缺血再灌注损伤的机制 肝脏缺血再灌注损伤的发生可能有部分原因是由于肝脏缺血过程中的损伤，另一部分原因是当缺血的肝脏得到血流再灌注时产生一系列损伤。研究指出，缺血再灌注使得肝细胞和kuffer细胞、中性粒细胞、肝窦状隙内皮细胞、贮脂细胞等细胞之间发生相互作用【3】。另外，血小板、补体也有参与。活化的细胞释放大量的促炎因子、脂质炎性因子，导致炎性介质反应和细胞的凋亡。损伤会使得肝窦状隙内皮细胞被破坏，肝脏微循环障碍，进而加重肝脏微循环的缺血且导致肝细胞再生受阻【4】。 2.肝脏缺血再灌注损伤与氧自由基 研究指出，氧自由基在肝脏缺血再灌注损伤的时候发挥了较为重要的作用，主要来源于kuffer细胞、中性粒细胞和黄嘌呤氧化酶，主要包括超氧化物自由基、氢氧根离子、过氧化氢等。氧自由基造成肝细胞损伤的机制主要是：通过对细胞膜磷脂双分子结构中脂质的氧化，改变细胞膜通透性及流动性，从而直接损伤肝细胞；同时氧自由基损伤肝脏血管内皮细胞，特别是肝窦状隙内皮细胞，引起血液中血小板以及粒细胞等在微血管中聚集，阻碍肝脏微循环，氧自由基还可抑制线粒体氧化磷酸化，使肝细胞供能减少。 3.肝脏缺血与细胞内钙超载
机能实验 肾缺血再灌注
影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤 （南方医科大学广州 510515） 【摘要】目的探究影响肾泌尿功能的因素，探究肾缺血后再灌注对肾的损伤现象。方法静脉分别补充37℃的生理盐水和20%的高渗葡萄糖，观测平均动脉压，尿量；结扎左肾动脉，一段时间后松开动脉夹再灌注，观测平均动脉压，尿量，血肌酐和尿肌酐含量，计算内生肌酐清除率(Ccr)。结果补充37℃的生理盐水和20%的高渗葡萄糖尿生成量增加，缺血再灌注后血肌酐浓度增高，尿肌酐浓度降低,内生肌酐清除率(Ccr)明显降低。结论增加血容量，肾滤过血液增多，尿生成增加；注射高渗溶液增加肾小管内原尿浓度，尿生成量增加；缺血再灌注后肾排泄能力降低，肾的功能受损。 【关键词】尿生成；肾缺血再灌注损伤；尿肌酐；内生肌酐清除率 肾是机体主要的排泄器官之一，探究影响肾泌尿功能的因素有助于利尿药等干预肾脏功能药物的研发；肾缺血再灌注(Ischemic reperfusion，I／R)损伤是临床上常见的病理过程，在肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中，均可发生不同程度的再灌注损伤，它是急性肾衰最常见的原因，因此探究肾的缺血再灌注这一病理现象具有重要意义。肾缺血再灌注时，内生肌酐清除率（Ccr）明显降低，肾功能受损.本实验通过复制肾脏缺血再灌注损伤的模型，对肾脏缺血再灌注损伤后血肌酐和尿肌酐的含量，以及内生肌酐清除率（Ccr）进行测定，来探究肾脏的缺血再灌注损伤。 1 材料与方法 1.1 实验材料 动物：家兔 器材：医用计算机记录系统，家兔手术台，哺乳动物手术器械，压力换能器，动脉静脉插管，三通管，注射器，兔绳，分光光度计，恒温水浴箱。 药品与试剂：20%乌拉坦，0.2%肝素，生理盐水，20%葡萄糖溶液，速尿，肌酐测定试剂。 1.2 探究影响尿生成的因素的方法[1] 家兔称重后用20%乌拉坦耳缘静脉麻醉，麻醉后将家兔仰卧位固定在兔台上。家兔颈部剪毛，沿甲状软骨下正中剪开皮肤5cm，分离右侧颈总静脉和左侧颈总动脉。从右侧颈总静脉插入静脉导管，左侧颈总动脉插管，连接压力换能器用于记录血压。将家兔换成右侧卧位，在左肋弓下缘两指处做一斜形切口，辨认输尿管并进行输尿管插管，用有刻度的试管收集尿液并计算每分钟尿量，取此时的尿液测量尿肌酐。静脉输入30ml生理盐水，用有刻度的试管收集尿液并计算
机能实验学实验报告-缺氧
题目不同类型缺氧成绩 实验者第一作者姓名：xxxxxxx 参与作者姓名：xxxxxxx 年级专业xxxxxxxxxx 一、目的; 1,通过复制不同类型的缺氧模型，了解缺氧的分类原则。 2，观察缺氧时呼吸和皮肤黏膜颜色的变化规律。 3．了解不同类型缺氧的表现特征； 二、动物与器材： １．实验动物：小白鼠 ２．器材：密封广口瓶、一氧化碳发生装置、刻度吸管，酒精灯、注射器与针头、粗剪刀、组织镊、塑料盆、干毛巾、量杯。 ３．药品与试剂：钠石灰、甲酸、浓硫酸、5%亚硝酸钠、1%亚甲蓝、生理盐水 三、方法与步骤： （一）抓取四只小白鼠，观察其的一般状况，呼吸频率、深度和皮肤、粘膜颜色，将观察结果记录于记录表中。 （二）乏氧性缺氧 1．平放装有钠石灰的广口瓶，让小鼠进入，速直立广口瓶，塞紧瓶塞； 2．每3分钟重复观察上述指标1次，如有变化，随时记录，直至动物死亡，记录动物存活时间。 （三）CO中毒性缺氧 1，准备CO发生装置； 1．平放广口瓶，让小鼠进入，速直立广口瓶； 2．用刻度吸管取3ml甲酸，沿事关壁缓慢加入浓硫酸2ml浓硫酸，密封广口瓶； 3．观察瓶中小鼠的上述指标的变化，直至小鼠死亡，并记录，若反应太慢，加用酒精灯。 （四）亚硝酸钠中毒性缺氧 1．给两只小鼠腹腔注射亚0.3ml硝酸钠； 2．迅速给一只小鼠注射0.3ml亚甲蓝，同时给另一只注射0.3ml生理盐水； 3．观察各项指标，比较2只小白鼠的表现及死亡时间。
四、结果 缺氧类型观察指标状况呼吸频 率 呼吸幅度 皮肤粘膜 肝脏颜色 存活时间 乏氧性缺 氧正常良好108次适中粉红 21分钟缺氧 先平静，然后 狂躁，后抽搐， 最后死亡 加快加深青紫 CO中毒性缺氧正常良好120次适中粉红 43秒缺氧 迅速痉挛抽 搐，剧烈挣扎， 后死亡，大小 便失禁 难以观 察到，但 应为减 慢 变浅樱桃红 亚硝酸钠中毒性缺 氧 正常良好120次适中粉红 亚甲蓝 一直比较安 静，最后死亡 变化不 明显 变化不明 显 蓝色17分钟生理盐水 先安静后抽 搐，死亡，大 小便失禁 加快 先加深后 变浅 青紫色12分钟 五、讨论 1.实验中亚硝酸钠部分注射了亚甲蓝的小鼠还是死亡，原因可能是我们小组在对小鼠注射 亚硝酸钠后未立即注射亚甲蓝，导致小鼠的缺氧不可逆转，最终还是死亡。 2.各类型缺氧时，动物呼吸变化形式、动物口唇和皮肤黏膜颜色变化有何不同，为什么？ 乏氧性缺氧中，呼吸加快加深，因为弥散入血的氧气少，导致血液中二氧化碳浓度增加，还原血红蛋白浓度增加，刺激呼吸中枢，促进呼吸，同时皮肤黏膜呈现青紫色。 CO中毒性缺氧中，CO与血红蛋白亲和性强，大量血红蛋白与其结合，碳氧血红蛋白多(HbCO），还原血红蛋白量少，呼吸中枢感受变化抑制呼吸。而HbCO呈樱桃红色，所以皮肤黏膜颜色呈樱桃红。 亚硝酸盐会将血红蛋白中的亚铁氧化（Fe-）成铁（Fe3+），形成大量高铁血红蛋白，丧失携氧能力，血液中氧气含量不足，促进呼吸，形成急促呼吸。而高铁血红蛋白呈青紫色，所以皮肤黏膜颜色呈现青紫色。
机能实验报告 高血钾
机能学实验报告 实验日期：2015年6月10日 带教教师： 小组成员： 专业班级：预防医学一大班 家兔正常心电图及高钾血症的实验治疗Array一、实验目的 1、掌握家兔正常心电图波形的生理意义 2、掌握家兔高钾血症模型的复制方法 3、观察家兔高钾血症心电图波形变化特征 4、掌握高钾血症治疗的方法（4%碳酸氢钠或极化液） 二、实验原理 血清钾高于5.5mmol/L为高钾血症（正常值：3.5～5.5mmol/L）。高钾血症对机体的危害主要表现在心脏，可使心肌动作电位和有效不应期缩短，传导性、自律性、收缩性降低，兴奋性则呈双相变化：轻度高钾血症使心肌兴奋性增高,急性重度高钾血症可使心肌兴奋性降低甚至消失，心脏停搏。高钾血症时的心电图表现为:①P波和QRS 波波幅降低,间期增宽,可出现宽而深的S波；②T波高尖：高钾血症早期即可出现，严重高钾血症时可出现正弦波,此时，已迫近室颤或心室停搏；③多种类型的心律失常。高钾血症的抢救可采用:①注射Na+,Ca2+溶液对抗高血钾的心肌毒性；②注射胰岛素、葡萄糖,以促 进K+移入细胞。本实验通过静脉滴注氯化钾,使血钾浓度短时间内
快速升高造成急性高钾血症,观察心电图变化,测定血钾浓度，了解高钾血症对心脏的毒性作用以及对高钾血症的抢救治疗措施。 三、实验仪器设备 生物信号采集处理系统、离子分析仪、大动物手术器械、气管插管、动脉套管、注射器、头皮针、取血器、电解质测定仪 四、实验方法与步骤 1.称重、麻醉和固定动物：家兔称重后，用3%注射用戊巴比妥钠， 按1ml/kg从耳缘静脉缓慢注入。麻醉时密切注意兔子的状态，当兔子角膜反射敏感度，肌肉紧张性明显降低，立即停止给药。麻醉后，将动物仰卧位固定在实验台上， ２手术与血管插管：颈部剪毛，在喉头下缘沿颈中线切开皮肤4-5cm，分离颈前肌肉暴露气管，做气管插管，并用丝线固定。在右侧按家兔血管常规分离方法分离颈外静脉，插入连接三通管的颈静脉插管以备输液，缓慢注入生理盐水（5-10滴/min）以保持管道通畅。在左侧肌肉深部分离出颈总动脉，插入连接三通管的总动脉插管。 3. 测正常血钾浓度：用EP管通过颈总动脉取血0.5ml，用电解质测量仪测量动物给予钾溶液前的血浆钾度。 4.描记心电图：将针型电极分别插入家兔四肢皮下。导联线按右前肢(红)，左前肢(黄)，左后肢(绿) ，右后肢(黑)的顺序连接，依生物机能实验系统使用方法描记实验前兔子的正常心电图波形。 5.复制高钾血症动物模型：通过输液装置，经颈外动脉从慢到快调滴速滴注3％的KCl溶液6滴/第1min，10滴/第2min，16滴/第3min